miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

艾滋病患者血清中miR-210-5p和miR-296-5p的表达及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨miR-296-5p、miR-210-5p在艾滋病(AIDS)患者血清中的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2018年8月至2021年8月四川省泸州市人民医院收治的165例AIDS患者作为研究组,同时选取165例健康体检者作为对照组。检测miR-296-5p、miR-210-5p水平;评价miR-210-5p、miR-296-5p水平对AIDS患者预后不良的诊断价值;采用多因素Logistic回归风险模型分析AIDS患者的预后影响因素。结果 miR-210-5p在AIDS患者血清中的表达较对照组升高,miR-296-5p表达较对照组降低,二者表达呈负相关(r=-0.487,P<0.05);预后不良组患者miR-296-5p表达水平低于预后良好组,miR-210-5p水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);AIDS患者血清中miR-210-5p、miR-296-5p表达与有无生殖器疱疹、有无淋巴瘤、人类免疫缺陷病毒(HIV)载量有关(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,血清miR-296-5p、miR-210-5p水平预测AIDS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.911(95%CI:0.858~0.949)、0.780(95%CI:0.710~0.840),对应的灵敏度分别为94.87%、60.26%,特异度分别为78.26%、85.87%,二者联合预测的AUC为0.940(95%CI:0.892~0.970),灵敏度为89.74%,特异度为86.96%;Logistic回归分析结果显示,有无淋巴瘤、白蛋白、C反应蛋白、miR-210-5p、miR-296-5p均为AIDS患者预后的影响因素(P<0.05)。结论 AIDS患者血清中miR-296-5p呈低表达,miR-210-5p呈高表达,二者表达呈负相关,且与AIDS患者病情及预后关系密切。

miR-210-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的调控作用及其分子机制

目的观察miR-210-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的调控作用并分析其分子机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、脓毒症组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组、脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,每组10只。除对照组外均采用盲肠结扎穿孔术建立小鼠脓毒症模型,对照组小鼠采用不结扎、不穿刺的剖腹手术进行对照。脓毒症+miR-210-5p激动剂组、脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组小鼠在建模前1 d及建模术后即刻分别经尾静脉注射miR-210-5p激动剂agomir及miR-210-5p拮抗剂antagomir,对照组和脓毒症组在相同时间经尾静脉注射等体积生理盐水。比较各组心功能指标左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS),心肌组织病理改变,血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI),细胞凋亡率,凋亡蛋白剪切半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)表达,髓过氧化物酶(MPO)活性,炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达,抗氧化物超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物丙二醛(MDA)表达及超氧化物阴离子荧光探针(DHE)荧光强度,沉默调节蛋白1(SIRT1)通路相关蛋白SIRT1、叉头框蛋白O1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)、核因子κB亚基p65(NF-κB p65)、乙酰化NF-κB p65(Ac-NF-κB p65),计算Ac-FOXO1/FOXO1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65。结果小鼠LVEF、LVFS对照组>脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.01)。HE染色显示,小鼠心肌组织病理损伤对照组<脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组。小鼠血清CK-MB、cTnI水平对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05)。小鼠心肌细胞凋亡率对照组<脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,cleaved Caspase-3蛋白表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05)。小鼠心肌组织MPO活性及TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05)。小鼠心肌组织SOD、GSH、GSH-Px表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,心肌组织MDA、DHE荧光强度对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05)。小鼠心肌组织SIRT1蛋白表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,AcFOXO1/FOXO1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05)。结论miR-210-5p可通过抑制心肌组织炎症反应和氧化应激减轻脓毒症诱导的小鼠心肌损伤,其分子机制可能与激活SIRT1信号通路、减轻SIRT1下游分子NF-κB p65及FOXO1乙酰化程度有关。

miR-210-5p靶向ING4调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制

目的研究miR-210-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤M23、人正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-210-5p、生长抑制因子(ING)4的表达;将anti-miR-210-5p组(转染anti-miR-210-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-ING4组(转染pcDNA-ING4)、anti-miR-210-5p+si-con组(共转染anti-miR-210-5p和si-con)、anti-miR-210-5p+si-ING4组(共转染anti-miR-210-5p和si-ING4)均用脂质体法转染至M23细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19相比,葡萄膜黑色素瘤M23中miR-210-5p表达显著升高,ING4表达显著降低(P<0.05);抑制miR-210-5p、过表达ING4均可明显抑制ING4细胞增殖、迁移、侵袭;miR-204-5p可靶向负调控ING4的表达;抑制ING4可逆转抑制miR-210-5p对M23细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论miR-210-5p可促进葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向ING4有关,将可为葡萄膜黑色素瘤的靶向治疗提供新靶点。

miR-210-5p修饰间充质干细胞源外泌体促进大鼠脊髓损伤修复的机制

目的探索miR-210-5p修饰间充质干细胞(MSCs)源外泌体对脊髓损伤(SCI)大鼠的治疗作用。方法分离、培养SD大鼠MSCs,利用miRNA-210-5p mimic或NC mimic转染MSCs。随后,将60只成年雄性SD大鼠随机分为五组,假手术组、SCI组、MSCs组、MSCs-NC mimic组和miR-210-5p外泌体组,每组12只。用中度挫伤诱导SD大鼠SCI模型[8]。造模成功后,每天尾静脉注射200μL的MSCs外泌体或NC mimic外泌体或miR-210-5p外泌体;假手术组和SCI模型组每天尾静脉注射200μL的生理盐水溶液,连续7 d。采用BBB量表评估大鼠后肢运动功能;Western blot检测生长关联蛋白(GAP)-43、神经丝蛋白(NF)、Keap1和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达;RT-qPCR检测血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)的mRNA水平。结果与SCI模型组相比,miR-210-5p分泌体组大鼠的BBB评分显著升高(P<0.05)。进一步的研究发现,miR-210-5p分泌体组大鼠中GAP-43的表达被显著抑制(P<0.05),HO-1、NF、NQO1的表达则被增强(P<0.05),而Nrf2的抑制剂ML385逆转了miR-210-5p分泌体在SCI大鼠中的作用。结论miR-210-5p修饰MSCs源外泌体通过活化Keap1-Nrf-2通路促进大鼠的脊髓损伤修复。

Hsa-miR-210-5p靶基因预测及其相关信号通路的生物信息学分析

为深入研究miR-210-5p的调控机制及生物学功能提供理论机制,应用生物信息学方法分析miR-210-5p序列,预测其靶基因,用Veney2.1.0绘制韦恩图得到靶基因集合,并对其靶基因集合进行蛋白质互作分析,GO功能注释分析和KEGG Pathway分析。结果发现,已知的成熟miR-210-5p序列在各物种间高度保守。蛋白质互作分析显示,miR-210-5p预测靶基因所编码蛋白质间相互作用关系较复杂,尤其是靶基因CDK8、MED18、MED13等编码的蛋白质,在互作中起关键作用。GO分析发现其靶基因集合可能参与细胞组分、分子功能、生物调节等生物学过程;KEGG pathway分析发现其靶基因集合主要富集在MAPK、VEGF、癌症、甲状腺激素信号通路等信号通路。miR-210-5p调控靶基因参与多种重要的生物学过程,为后续研究提供了线索。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

miR-222-5p靶向WNK2基因促进肝细胞癌生长

目的 探讨miR-222-5p对肝细胞癌(HCC)生长的影响及其分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-222-5p和WNK2 mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝细胞系L02、不同HCC细胞系Hep3B、HepG2、HuH-7中表达;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-222-5p和WNK2靶向关系;取生长密度达50%~60%的HepG2癌细胞,分为miR-222-5p NC组、miR-222-5p mimics组、miR-222-5p inhibitor组、miR-222-5p NC+pSUPER-si NC组、miR-222-5p NC+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si NC组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p NC+pcDNA组、miR-222-5p NC+pcDNA-WNK2组、miR-222-5p mimics+pcDNA组、miR-222-5p mimics+pcDNA-WNK2组,另取未转染L02正常肝细胞和HepG2癌细胞。24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率;平板克隆法检测克隆形成能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;Western印迹法检测WNK2蛋白表达水平。结果 与癌旁组织及正常肝细胞相比,HCC组织及各细胞系中miR-222-5p表达水平明显升高,WNK2 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-222-5p NC组相比,miR-222-5p mimics组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05),miR-222-5p inhibitor组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低,WNK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-222-5p和WNK2存在靶向关系。与miR-222-5p NC+pcDNA组相比,miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05);miR-222-5p mimics+pcDNA组增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p mimics+pcDNA组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 过表达miR-222-5p可能通过靶向抑制WNK2表达促进肝癌HepG2细胞的增殖、克隆形成和成瘤能力,促进HCC生长。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

miR-340-5p靶向调控ARID1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平。通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化。双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系。最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展。结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P<0.05)。通过抑制BCPAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平。miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系。敲降ARID1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

LncRNA DGUOK-AS1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)脱氧鸟苷激酶反义RNA(DGUOK-AS)1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析肝癌组织中DGUOK-AS1和miR-204-5p表达量。双荧光素酶报告实验确定DGUOK-AS1与miR-204-5p靶向关系,RT-qPCR检测干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞miR-204-5p表达量。集落形成实验分析DGUOK-AS1和miR-204-5p表达对MHCC97-H细胞增殖的影响。流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡。Transwell实验分析细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织比较,肝癌组织中DGUOK-AS1表达量明显上调,而miR-204-5p表达量明显下调(P<0.05)。miR-204-5p是DGUOK-AS1的靶基因。干扰DGUOK-AS1表达后miR-204-5p表达量显著升高(P<0.05)。干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与干扰DGUOK-AS1表达比较,同时干扰DGUOK-AS1和miR-204-5p表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 干扰DGUOK-AS1通过靶向miR-204-5p可抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

HDP患者血清circACTR2、miR-525-5p水平与不良妊娠结局的相关性

目的:探讨妊娠期高血压疾病(HDP)患者血清circACTR2、miR-525-5p水平与不良妊娠结局的相关性。方法:选取2020年1月-2022年6月在本院建档并定期产前检查的HDP患者148例为HDP组,产前检查正常并分娩的100例孕妇作为对照组,收集临床资料,根据是否发生不良妊娠结局将HDP患者分为正常妊娠结局组98例、不良妊娠结局组50例。采用实时荧光定量PCR法检测孕妇血清circACTR2和miR-525-5p表达水平;分析HDP患者妊娠结局与临床病理特征关系;采用Spearman法分析HDP患者血清circACTR2和miR-525-5p表达与不良妊娠结局的相关性;采用logisitic回归分析HDP患者不良妊娠结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HDP患者血清circACTR2、miR-525-5p表达预测不良妊娠结局价值。结果:HDP组血清circACTR2(1.33±0.35)高于对照组(1.08±0.27),miR-525-5p(0.76±0.21)低于对照组(1.02±0.30)(P<0.05);HDP不良妊娠结局患者血清胱抑素C(CysC)、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)和circACTR2水平高于HDP正常妊娠结局患者,miR-525-5p水平低于HDP正常妊娠结局患者(P<0.05);血清circACTR2水平与不良妊娠结局呈正相关,血清miR-525-5p水平与不良妊娠结局呈负相关(均P<0.05);CysC、D-D、CRP、circACTR2和miR-525-5p异常均为HDP患者不良妊娠结局的影响因素(P<0.05);circACTR2联合miR-525-5p预测HDP患者不良妊娠结局的曲线下面积为0.877,敏感度76.0%,特异度86.7%。结论:HDP患者血清circACTR2表达上调,miR-525-5p表达下调,二者与HDP不良妊娠结局密切相关,二者联合检测对预测HDP患者不良妊娠结局有较好效能。

补骨脂异黄酮通过miR-497-5p调控对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移的机制研究

目的:探讨补骨脂异黄酮通过调控miR-497-5p抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移的机制研究。方法:体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用浓度为0、9、18、36μg/ml补骨脂异黄酮处理细胞,记为Con组、低剂量组、中剂量组、高剂量组;按照脂质体法miR-NC、miR-497-5p转染细胞,记为miR-NC组、miR-497-5p组;按照脂质体法anti-miR-NC、anti-miR-497-5p转染细胞后,使用36μg/ml补骨脂异黄酮处理细胞,记为高剂量组+anti-miR-NC组、高剂量组+anti-miR-497-5p组。CCK8、克隆实验检测细胞增殖;伤口愈合实验检测细胞迁移;Western blot实验检测Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平;qRT-PCR实验检测miR-497-5p表达水平。结果:补骨脂异黄酮呈剂量关系降低瘢痕疙瘩成纤维细胞活性、迁移率(P<0.05),减少克隆细胞数(P<0.05),降低Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平(P<0.05),增加miR-497-5p表达水平。与miR-NC组相比,miR-497-5p组细胞活性、迁移率降低(P<0.05),克隆细胞数减少(P<0.05),Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。抑制miR-497-5p可以逆转补骨脂异黄酮对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移的影响。结论:补骨脂异黄酮可能通过上调miR-497-5p抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

miR-93-5p/FOXJ2轴介导胃癌细胞的生物学功能

目的:评估miR-93-5p对胃癌细胞的调节和功能。方法:采用qPCR检测miR-93-5p在胃癌组织、胃癌细胞系中表达,MTT、克隆形成、Transwell实验检测miR-93-5p对胃癌细胞增殖、侵袭的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-93-5p与FOXJ2的靶向关系。结果:miR-93-5p在胃癌细胞系和胃癌组织中表达升高,抑制miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖和侵袭能力受抑。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-93-5p mimic显著降低MKN28和MKN45细胞Wt-FOXJ2相对荧光素酶活性,FOXJ2为胃癌细胞中miR-93-5p的直接靶基因。结论:miR-93-5p靶向FOXJ2促进胃癌细胞的增殖和侵袭,miR-93-5p/FOXJ2轴可能是判断胃癌预后的生物标志物和治疗靶点。