miR-222-3p在鹅肥肝形成中的作用及靶基因验证

为了检测miR-222-3p在填饲鹅不同组织中的表达情况,并对其靶基因进行预测和验证,探讨miR-222-3p在鹅肥肝形成中的功能。运用实时荧光定量PCR技术检测miR-222-3p在填饲鹅肝脏、胸肌和腹脂中的表达量;采用生物信息学方法对鹅miR-222-3p的靶基因进行预测,荧光定量PCR技术检测预测靶基因在肝脏中的表达量,并利用双荧光素酶基因报告系统验证其靶向关系。结果显示:相比对照组,miR-222-3p在填饲鹅肝脏和腹脂中的表达量均显著升高;生物信息学预测结果显示MARF1和B4GALNT3基因在3’UTR区域存在miR-222-3p的潜在结合位点,且这两个基因在鹅肥肝中均显著下调,而双荧光素酶基因报告系统显示只有MARF1基因与鹅miR-222-3p存在靶向关系。结果表明,miR-222-3p在鹅肥肝中表达量显著上调,且可能通过其靶基因MARF1对鹅肥肝的形成发挥调控作用。

PGC-1α、miR-222-3p在妊娠糖尿病易感性中的交互作用及预测价值研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活因子-1α(PGC-1α)、微小RNA-222-3p(miR-222-3p)在妊娠糖尿病(GDM)易感性中的交互作用及预测价值。方法选取2021年1月—2022年5月在贵州中医药大学第二附属医院建档的GDM高危孕妇136例作为研究对象。孕12~13周检测血清PGC-1α、miR-222-3p水平,孕24周~28周时进行75 g葡萄糖糖耐量试验(OGTT),并检测空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂4项等指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。根据OGTT结果分为正常组、GDM组,对比2组临床资料、糖脂代谢指标、血清PGC-1α、miR-222-3p水平,Pearson相关系数分析血清PGC-1α、miR-222-3p水平与糖脂代谢指标相关性。分析PGC-1α、miR-222-3p与GDM发生的独立关系及在GDM易感性中的交互作用,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估血清PGC-1α、miR-222-3p水平对GDM的预测价值。结果GDM组年龄、孕前体质量指数、GDM史、孕前有多囊卵巢综合征比例、空腹血糖(FPG)、餐后1 h血糖(1h PG)、餐后2 h血糖界值(2h PG)、FINS、HOMA-IR、HbA1c、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、miR-222-3p高于正常组,PGC-1α低于对照组(P<0.05);血清PGC-1α水平与FPG、FINS、HOMA-IR呈负相关,miR-222-3p水平与FPG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05);PGC-1α、miR-222-3p联合评估GDM的AUC值高于二者单独评估的AUC值(Z统计/P=3.504/0.001,2.467/0.014);调整混杂因素后,PGC-1α、miR-222-3p仍与GDM的发生独立相关(P<0.05);PGC-1α与miR-222-3p对GDM易感性存在拮抗作用,在PGC-1α与miR-222-3p共存的GDM易感性中,有41.0%是由两者交互作用引起的。结论PGC-1α、miR-222-3p在GDM易感性中存在拮抗作用,二者联合对提高GDM预测价值具有重要意义。

miR-222-3p对人乳头瘤病毒感染的宫颈癌细胞活性及糖酵解的作用及其机制

目的:探讨miR-222-3p对人乳头瘤病毒(HPV)感染阳性宫颈癌细胞活性及糖酵解的作用及其机制。方法:将Siha细胞分为宫颈癌组(未转染的HPV感染Siha细胞)、miR-222-3p-NC组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p-NC)、miR-222-3p mimics组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p mimics)及miR-222-3p siRNA组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p siRNA)。qPCR检测各组Siha细胞miR-222-3p相对表达;CCK-8检测各组Siha细胞活性;流式细胞仪检测各组Siha细胞凋亡率;Transwell小室检测各组Siha细胞侵袭数目;划痕实验检测各组Siha细胞迁移距离;试剂盒检测各组Siha细胞葡萄糖及乳酸水平;免疫印迹检测各组丙酮酸激酶M2型(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达;荧光素酶证实miR-222-3p对PI3K、AKT的调控作用。结果:宫颈癌组、miR-222-3p-NC组、miR-222-3p mimics组及miR-222-3p siRNA组的Siha细胞中miR-222-3p的相对表达分别为1.00±0.00、0.96±0.02、1.33±0.09及0.60±0.04,差异有统计学意义。与miR-222-3p-NC组相比,miR-222-3p mimics组细胞增殖、侵袭及迁移、乳酸、葡萄糖、PKM2、LDHA、PI3K、AKT升高,凋亡率减少;与miR-222-3p mimics组相比,miR-222-3p siRNA组增殖、侵袭、迁移、乳酸、葡萄糖、PKM2、LDHA、PI3K、AKT均降低,凋亡率升高。荧光素酶证实抑制miR-222-3可抑制野生型PI3K、AKT表达。结论:抑制miR-222-3p可显著降低HPV感染的宫颈癌细胞增殖、迁移及恶性侵袭,促进凋亡,抑制肿瘤细胞糖酵解,作用机制可能与降低PI3K/AKT活性相关。

miR-222-3p靶向SOCS5促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的明确miR-222-3p对宫颈癌细胞的生物学影响。方法采用qRT-PCR检测宫颈癌患者血清和宫颈癌细胞系miR-222-3p的表达水平,通过CCK-8检测miR-222-3p对宫颈癌细胞增殖能力的影响;进一步采用划痕实验和Transwell实验明确miR-222-3p对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用在线数据库预测miR-22-3p的潜在靶点,并验证其对宫颈癌细胞恶性表型的影响。结果miR-222-3p在宫颈癌患者血清和宫颈癌细胞系SiHa中表达上调,miR-31-5p促进Siha细胞增殖、迁移和侵袭能力。荧光素酶报告基因实验证实SOCS5是miR-222-3p的直接靶点,SOCS5过表达质粒会部分抑制miR-222-3p对SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。结论上调表达的miR-222-3p通过抑制SOCS5增强宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,可能参与宫颈癌的发病。

敲降miR-222-3p靶向PTEN对甲状腺癌^(131)Ⅰ放疗抵抗的影响及其机制

目的:探讨miR-222-3p通过人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白合同源基因(PTEN)对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-222-3p在甲状腺癌131Ⅰ放疗抵抗中的作用及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人甲状腺癌细胞和人正常甲状腺滤泡上皮Nth-ori 3-1细胞中miR-222-3p表达水平。以人甲状腺癌K1细胞和放射抗性K1(K1R)细胞为研究对象,实验分为空白对照组、131Ⅰ处理组、131Ⅰ+miR-222-3p敲降组、131Ⅰ+PTEN过表达组和131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组。空白对照组K1和K1R细胞不经任何处理,131Ⅰ处理组K1和K1R细胞经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞转染miR-222-3p inhibitor后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达组K1和K1R细胞转染PTEN过表达载体后再经1和3 Gy131Ⅰ处理,131Ⅰ+PTEN过表达+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞同时转染PTEN过表达载体和miR-222-3p mimic后再经1和3 Gy131Ⅰ处理。克隆形成实验检测K1和K1R细胞克隆形成数,CCK-8实验检测K1和K1R细胞增殖活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测K1和K1R细胞凋亡率,Western blotting检测K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-222-3p与PTEN的靶向关系。结果:与Nth-ori 3-1细胞比较,甲状腺癌细胞中miR-222-3p表达水平升高(P<0.01);且甲状腺癌K1R细胞中miR-222-3p表达水平高于甲状腺癌K1细胞(P<0.01)。与131Ⅰ处理组比较,131Ⅰ+miR-222-3p敲降组K1和K1R细胞克隆形成数减少(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01)。与miR-NC-PTEN-WT组比较,miR-222-3p-PTEN-WT组HEK-293细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01)。与敲降前比较,敲降miR-222-3p后K1和K1R细胞中PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与131Ⅰ+PTEN过表达组比较,131Ⅰ+PTEN+miR-222-3p过表达组K1和K1R细胞克隆形成数增加(P<0.01),细胞增殖活性升高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲降miR-222-3p靶向PTEN并上调其表达水平可以缓解甲状腺癌131Ⅰ的放疗抵抗。

miR-222-3p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞和正常口腔角质细胞株(hNOK)中miR-222-3p的表达,培养CAL-27细胞并分为对照组(NC组)、inhibitor NC组(转染阴性对照质粒)和miR-222-3p inhibitor组(转染miR-222-3p inhibitor)。分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化,蛋白质印迹法检测BAX、Bcl-2、MMP-2、N-cadherin及E-cadherin的表达。结果CAL-27细胞中miR-222-3p的表达水平显著高于hNOK细胞(P<0.05)。与inhibitor NC组和NC组相比,miR-222-3p inhibitor组CAL-27细胞的凋亡率显著升高,增殖、侵袭能力显著降低(P<0.05),且Bcl-2、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平显著降低,BAX和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-222-3p在CAL-27细胞中高表达,下调miR-222-3p可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

GAS5靶向miR-222-3p对牙周膜干细胞成骨分化的影响机制

成骨诱导hPDLSCs后,茜素红染色显示矿化增强GAS5表达升高(P<0.05),Runx2、ALP和OCN mRNA表达降低,miR-222-3p表达升高(P<0.05);miR-222-3p抑制剂可逆转GAS5低表达对hPDLSCs的作用(P<0.05)。提示hPDLSCs成骨分化后GAS5表达上调,下调GAS5可通过靶向调控miR-222-3p,抑制hPDLSCs成骨分化。

miR-222-3p通过靶向调节Bim蛋白表达参与肾细胞癌的发生发展

目的:检测miR-222-3p在肾细胞癌组织中的表达,探讨其参与肾细胞癌发生发展的分子机制。方法:运用qRT-PCR检测15对肾细胞癌组织和对应癌旁组织miR-222-3p的表达水平。生物信息学预测miR-222-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证其靶向调控作用。运用免疫组化和蛋白质印迹技术检测癌组织中靶基因蛋白表达水平。进一步通过脂质体瞬时转染技术实现肾细胞癌细胞株769-P中miR-222-3p过表达,采用流式细胞术检测miR-222-3p对细胞凋亡的影响。结果:qRT-PCR结果显示,miR-222-3p在肾细胞癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。生物信息学预测显示,抗凋亡蛋白Bim是miR-222-3p潜在的靶基因。荧光素酶报告实验证实,过表达miR-222-3p可抑制含有Bim 3’-UTR的荧光素酶报告基因的荧光素酶活性,但对Bim 3’-UTR突变体的荧光素酶活性没有影响。免疫组化结果显示,肾细胞癌组织中Bim蛋白免疫组化阳性反应程度明显低于相应的癌旁组织(P<0.01);蛋白质印迹结果进一步证实Bim蛋白在肾细胞癌组织中的表达较癌旁组织明显下调(P<0.01)。进一步在769-P细胞中瞬时过表达miR-222-3p后,发现Bim蛋白水平明显下调(P<0.01),但Bim mRNA水平无明显变化。流式细胞术检测结果显示,过表达miR-222-3p可显著抑制769-P细胞的凋亡(P<0.01)。结论:miR-222-3p可通过靶向作用于抑癌基因Bim表达抑制肾癌细胞的凋亡,在肾癌的发生发展中起重要作用,miR-222-3p/Bim轴为肾细胞癌治疗提供新的途径。

miR-222-3p在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌血清外泌体中的表达及临床意义

目的探讨miR-222-3p在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)血清外泌体中的表达及其与临床特征和预后的相关性。方法收集我院收治的604例HCC患者的临床病理资料,包括391例HBV-HCC患者(HBV-HCC组)和213例非HBV-HCC患者(非HBV-HCC组)。另选取288例慢性乙肝患者作为HBV组。采用实时荧光定量PCR法检测血清外泌体miR-222-3p表达水平,分析miR-222-3p表达与HBV-HCC患者不同临床特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体miR-222-3p对HBV-HCC的诊断价值;采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验分析miR-222-3p表达水平与患者预后的相关性;采用Cox比例回归风险模型分析影响HBV-HCC患者预后的危险因素。结果HBV-HCC组患者血清外泌体miR-222-3p水平显著高于非HBV-HCC组和HBV组(P<0.001)。经ROC曲线分析,血清外泌体miR-222-3p用于HBV-HCC诊断(HBV-HCC组vs.HBV组、HBV-HCC组vs.非HBV-HCC组)的曲线下面积(AUC)分别为0.900(95%CI:0.878~0.922)、0.731(95%CI:0.692~0.771)。血清外泌体miR-222-3p的表达与患者HBV-DNA拷贝、天冬氨酸转氨酶(AST)、异常凝血酶原(DCP)、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期有关(P<0.05)。HBV-HCC患者血清外泌体miR-222-3p高表达组和低表达组中位生存时间分别为2.66年、4.14年,总生存率分别为32.8%、35.7%(Log-rankχ^(2)=15.078,P<0.001)。经Cox比例风险回归模型分析,血清外泌体miR-222-3p表达水平升高是影响HBV-HCC患者预后的独立危险因素之一(P<0.05)。结论血清外泌体miR-222-3p与HBV-HCC的发生发展密切相关,其表达水平升高是影响HBV-HCC患者预后的独立危险因素。

lncCASC2通过miR-222-3p/CDK19轴调控胃癌NK细胞杀伤敏感性

目的:探究CDK19对胃癌NK细胞杀伤敏感性的影响及作用机制。方法:TCGA数据库分析胃癌患者及细胞系中CDK19表达及其与生存期的关联。CCK-8法检测敲低CDK19后MGC-803、NCI-N87细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡。LDH法检测sh-CDK19、sh-CASC2、miR-222-3p inhibitor、IL-6、IL-8、anti-IL-6、anti-IL-8对胃癌NK细胞杀伤敏感性的影响。Antibody Chip检测敲低CDK19后NCI-N87细胞中细胞因子表达。qPCR检测CDK19、IL-6、IL-8 mRNA表达,Western blot检测CDK19蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测miR-222-3p和CDK19的靶向关系。结果:CDK19在胃癌患者及细胞系中高表达。低表达CDK19的胃癌患者总生存期更长,在MGC-803、NCI-N87细胞中敲低CDK19,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制IL-6、IL-8表达,增强NK细胞杀伤敏感性。NCI-N87细胞中lncCASC2通过miR-222-3p正向调控CDK19表达,进而抑制NK细胞杀伤敏感性。结论:胃癌细胞中CDK19呈高表达,受lncCASC2/miR-222-3p调控,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,且促进IL-6、IL-8表达,抑制胃癌NK细胞杀伤敏感性。

炎症条件下miR-222-3p靶向CD4对肺泡巨噬细胞IL-6分泌水平的影响

目的研究miR-222-3p靶向CD4对肺泡巨噬细胞炎症因子分泌水平的影响,探讨其具体作用机制。方法 CCK8法检测0、1、2、4、8μg/mL的炎症诱导剂LAMPS对MH-S细胞的毒性影响。LAMPS处理MH-S细胞0、30、60、90、120 min后,RT-qPCR检测miR-222-3p和IL-6的表达水平的变化,Western blot检测CD4的蛋白表达水平。miRDB软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-222-3p对CD4基因的靶向作用。siR-222-3p转入MH-S细胞后,Western blot检测CD4的表达水平变化,RT-qPCR检测细胞内的IL-6的mRNA表达水平。结果 LAMPS对MH-S细胞的生长具有抑制作用,具有浓度依赖性。2μg/mL的LAMPS作用于MH-S细胞后,miR-222-3p和IL-6上调表达,CD4下调表达,具有时间依赖性。miRDB软件预测CD4为miR-222-3p的靶基因,双荧光素酶实验验证了靶向关系。siR-222-3p能够促进CD4的表达,降低IL-6的表达水平。结论 miR-222-3p可通过靶向CD4来调控肺泡巨噬细胞炎症因子的分泌水平。

上皮性卵巢癌患者血清miR-222-3p、HE4及CA125的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清miR-222-3p、血清人附睾蛋白4(HE4)及糖类抗原125(CA125)的表达及其临床意义。方法选取本院收治的118例EOC患者,105例上皮性卵巢良性肿瘤患者和60例健康女性作为研究对象,采用实时定量PCR法检测miR-222-3p表达水平,化学发光法测定血清HE4及CA125水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-222-3p、HE4及CA125水平对EOC的诊断价值。Pearson相关分析EOC患者血清miR-222-3p表达水平与HE4及CA125的相关性。结果EOC组血清miR-222-3p(1.62±0.74 vs 0.84±0.35,0.73±0.24)、HE4(346.20±58.72 pmol/L vs 53.46±11.63 pmol/L,48.60±9.75 pmol/L)及CA125(307.60±94.25 U/mL vs 26.83±11.56 U/mL,20.72±9.40 U/mL)水平均明显高于良性组和对照组(均P<0.001)。EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01)。ROC曲线显示,血清miR-222-3p、HE4及CA125水平诊断EOC的最佳截断值分别为1.16、187.50 pmol/L、162.80 U/mL,三项联合诊断EOC的曲线下面积(0.948,95%CI:0.887~0.995)最大,其敏感度和特异度为96.8%和89.5%。相关分析显示,EOC患者血清miR-222-3p表达水平与HE4及CA125均呈正相关(r=0.847,P<0.001,r=0.793,P<0.001)。结论EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125水平明显升高,三项联合检测对EOC的诊断具有较高的价值。

miR-222-3p在肺炎支原体感染小鼠免疫机制中的作用

目的分析miR-222-3p在肺炎支原体感染小鼠免疫机制中的作用。方法将小鼠分为对照组、模型组(肺炎支原体感染)、miR-NC组(肺炎支原体感染,miR-222-3p agomir阴性对照处理)、miR-222-3p组(肺炎支原体感染,miR-222-3p agomir处理)、Anti-miR-NC组(肺炎支原体感染,miR-222-3p antagomir阴性对照处理)、Anti-miR-222-3p组(肺炎支原体感染,miR-222-3p antagomir处理),Realtime PCR方法检测肺组织中miR-222-3p表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)G含量,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,血细胞计数器计数炎性细胞,苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理学变化。结果模型组与对照组miR-222-3p表达量、IFN-γ、IgG、T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+水平、炎性细胞数目、肺组织病理学评分差异有统计学意义(P<0.05);miR-222-3p组与miR-NC组差异有统计学意义(P<0.05);Anti-miR-222-3p组与Anti-miR-NC组差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-222-3p在肺炎支原体感染小鼠免疫机制中发挥促进作用。

乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B诱导肿瘤相关成纤维细胞的形成

目的探究乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B对肿瘤相关成纤维细胞形成的影响及机制。方法HKF细胞分为MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组、MCF10A exo组和PBS组(HKF细胞分别与10μg/mL的MCF7 exo、MDA-MB-231 exo、MCF10A exo以及等体积的PBS共孵育72 h),miR-NC组、miR-222-3p mimic组和miR-222-3p inhibitor组(HKF细胞分别转染Negative Control、miR-222-3p mimic、miR-222-3p inhibitor),miR-NC exo组和miR-222-3p mimic exo组(HKF细胞分别与10μg/mL的miR-NC exo和miR-222-3p mimic exo共孵育72 h),miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组(HKF细胞与miR-222-3p mimic exo共孵育72 h后转染CDKN1B质粒)。提取乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-231、乳腺上皮细胞MCF10A所分泌的外泌体(MCF7 exo、MDA-MB-231 exo和MCF10A exo),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测上述外泌体中miR-222-3p的表达。蛋白质印迹法检测上述各组HKF细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP)-9、MMP-2、MMP-14、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、纤连蛋白(fibronectin)、波形纤维蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),双荧光素酶报告基因实验检测miR-222-3p和周期蛋白依赖激酶抑制因子1B(CDKN1B)结合。结果与PBS组相比,MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001)。与miR-NC组细胞相比,miR-222-3p mimic组细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001),miR-222-3p inhibitor组细胞上述标志物表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示CDKN1B为miR-222-3p的靶基因。MCF7 exo组(4.00±0.31)、MDA-MB-231 exo组(5.94±0.14)中miR-222-3p表达显著高于MCF10A exo组(1.00±0.00),差异有统计学意义(P<0.001)。与miR-NC exo组相比,miR-222-3p mimic exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001);与miR-222-3p mimic exo组相比,miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著减少,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论乳腺癌外泌体miR-222-3p通过抑制CDKN1B表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的形成。

LncRNA TUG1靶向miR-222-3p对肺炎链球菌诱导的人肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对微小RNA(miRNA)-222-3p的靶向调控,以及对肺炎链球菌诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC细胞)损伤的影响。方法72株HPAEpiC细胞分为对照(NC)组、肺炎链球菌组(1×10^(8) CFU/mL肺炎链球菌)、肺炎链球菌+Si-NC组、肺炎链球菌+Si-TUG1组、肺炎链球菌+miR-NC组、肺炎链球菌+miR-222-3p组、肺炎链球菌+Si-TUG1+anti-miR-NC组、肺炎链球菌+Si-TUG1+anti-miR-222-3p组,并做相应的感染及转染。实时定量PCR、流式细胞术Western blotting分别检测TUG1、miR-222-3p表达,细胞凋亡,B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl2蛋白)、Bcl2相关X蛋白(Bax蛋白)表达。双荧光素酶报告实验分析TUG1与miR-222-3p的靶向调控。结果肺炎链球菌组HPAEpiC细胞中TUG1表达量、Bcl2蛋白表达量比NC组低,miR-222-3p、凋亡率、Bax蛋白表达量比NC组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺炎链球菌+Si-TUG1组HPAEpiC细胞的凋亡率、Bax蛋白表达量均高于肺炎链球菌+Si-NC组,Bcl2蛋白表达量低于肺炎链球菌+Si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUG1靶向调控miR-222-3p的表达。肺炎链球菌+miR-222-3p组HPAEpiC细胞的凋亡率、Bax蛋白表达量比肺炎链球菌+miR-NC组高,Bcl2蛋白表达量比肺炎链球菌+miR-NC组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与肺炎链球菌Si-TUG1+anti-miR-NC组比较,肺炎链球菌+Si-TUG1+anti-miR-222-3p组HPAEpiC细胞凋亡率和Bax蛋白表达量减少,Bcl2蛋白表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TUG1在肺炎链球菌感染的HPAEpiC细胞中低表达,TUG1通过靶向miR-222-3p,抑制HPAEpiC细胞凋亡。

急性冠脉综合征患者术后血清TP53、miR-222-3p与预后的关系

目的探究血清肿瘤蛋白P53(TP53)、微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月于驻马店市中心医院心血管内科行PCI手术的ACS患者96例为研究对象,对ACS患者PCI术后随访12个月,统计12个月内发生MACE情况,将患者分为MACE组(22例)和非MACE组(74例)。收集所有患者一般资料,采用实时荧光定量PCR法检测血清中mi R-222-3p水平,采用双抗夹心法测定血清TP53水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清TP53、mi R-222-3p水平预测ACS患者PCI术后MACE的价值。结果与非MACE组相比,MACE组血清miR-222-3p水平、TP53水平、肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平较高(P<0.05),ROC曲线显示,血清中miR-222-3p、TP53水平预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.787,两者联合预测ACS患者PCI术后MACE预后的AUC为0.926,其敏感度、特异性分别为92.60%、83.80%。miR-222-3p高水平组MACE发生率明显高于miR-222-3p低水平组(P<0.05);TP53高水平组MACE发生率明显高于TP53低水平组(P<0.05)。结论急性冠脉综合征PCI术后MACE患者血清TP53、miR-222-3p呈高表达,可预估ACS患者PCI术后MACE,二者联合预测价值较好。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

miR-222-5p靶向WNK2基因促进肝细胞癌生长

目的 探讨miR-222-5p对肝细胞癌(HCC)生长的影响及其分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-222-5p和WNK2 mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝细胞系L02、不同HCC细胞系Hep3B、HepG2、HuH-7中表达;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-222-5p和WNK2靶向关系;取生长密度达50%~60%的HepG2癌细胞,分为miR-222-5p NC组、miR-222-5p mimics组、miR-222-5p inhibitor组、miR-222-5p NC+pSUPER-si NC组、miR-222-5p NC+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si NC组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p NC+pcDNA组、miR-222-5p NC+pcDNA-WNK2组、miR-222-5p mimics+pcDNA组、miR-222-5p mimics+pcDNA-WNK2组,另取未转染L02正常肝细胞和HepG2癌细胞。24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率;平板克隆法检测克隆形成能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;Western印迹法检测WNK2蛋白表达水平。结果 与癌旁组织及正常肝细胞相比,HCC组织及各细胞系中miR-222-5p表达水平明显升高,WNK2 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-222-5p NC组相比,miR-222-5p mimics组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05),miR-222-5p inhibitor组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低,WNK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-222-5p和WNK2存在靶向关系。与miR-222-5p NC+pcDNA组相比,miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05);miR-222-5p mimics+pcDNA组增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p mimics+pcDNA组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 过表达miR-222-5p可能通过靶向抑制WNK2表达促进肝癌HepG2细胞的增殖、克隆形成和成瘤能力,促进HCC生长。