miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义

目的探讨miR-23a-3p与miR-182在结直肠癌患者外周血中的异常表达及其临床意义。方法选取2021年6月至2022年6月我院收治的30例结直肠癌患者为观察A组,30例结直肠良性肿瘤患者为观察B组,同期30名健康体检者为对照组。采集观察A组、观察B组治疗前空腹静脉血以及对照组体检时空腹静脉血,使用实时荧光定量PCR仪测定miR-23a-3p、miR-182水平;比较miR-23a-3p、miR-182单独及联合检测对结直肠癌的诊断效能;分析结直肠癌临床因素与miR-23a-3p、miR-182的关系。结果观察A组、观察B组的miR-23a-3p、miR-182水平高于对照组(P<0.05);观察A组的miR-23a-3p、miR-182水平高于观察B组(P<0.05)。miR-23a-3p、miR-182联合检测诊断结直肠癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、曲线下面积(AUC)大于miR-23a-3p、miR-182单独检测。不同家族史、淋巴结转移、病灶大小、临床分期的结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论家族史、淋巴结转移、病灶大小及临床分期与结直肠癌患者miR-23a-3p、miR-182水平有密切联系,且miR-23a-3p与miR-182检测在结直肠癌临床诊断中均具备一定价值,二者联合应用可提高结直肠癌早期诊断的准确性。

结直肠癌组织中METTL3、miR-23a-3p表达与病理参数及术后肝转移的关系

目的探讨结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织中甲基转移样酶3(Methyltransferase-like protein 3,METTL3)、微小核糖核酸-23a-3p(miRNA-23a-3p,miR-23a-3p)表达与病理参数及CRC术后肝转移的关系。方法选取2018年3月至2021年6月中国医科大学附属盛京医院收治的145例CRC患者,患者均进行CRC根治术,术中取患者CRC组织及癌旁组织样本,采用荧光定量聚合酶链反应法检测METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平,分析不同病理参数的CRC组织METTL3 mRNA、miR-23a-3p表达情况。收集患者临床病理资料,采用Cox比例风险模型对预后因素进行单变量和多变量分析。术后随访2年,统计患者术后肝转移发生情况,并采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p对CRC术后肝转移的预测价值。结果CRC组织中METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平均高于癌旁组织(P<0.05);国际抗癌联盟肿瘤通用分期(Tumor node metastasis,TNM)Ⅲ期CRC患者METTL3 mRNA水平高于Ⅱ期,低分化CRC患者METTL3 mRNA水平高于中-高分化(P<0.05);TNMⅢ期CRC患者miR-23a-3p水平高于Ⅱ期,发生淋巴转移CRC患者METTL3 mRNA水平高于未发生淋巴转移CRC患者(P<0.05);单因素及多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅲ期、低分化、淋巴转移、METTL3 mRNA及miR-23a-3p高水平是CRC术后肝转移的独立危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p单独及联合预测CRC术后肝转移的曲线下面积(Area under the curve,AUC)分别为0.748(0.669~0.816)、0.778(0.701~0.842)、0.882(0.818~0.930),二者联合检测预测CRC术后肝转移的效能高于单独检测(Z=2.387、2.027,P均<0.05)。结论CRC组织中METTL3、miR-23a-3p表达均异常升高,METTL3与TNM分期、分化程度相关,miR-23a-3p与TNM分期、淋巴转移相关,METTL3、miR-23a-3p联合对预测CRC术后肝转移具有更高价值。

miR-23a-3p、ZNF395水平与妊娠期高血压病人胎儿生长受限的关系

目的:探讨妊娠期高血压病人胎盘组织微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)、锌指蛋白395(ZNF395)水平与胎儿生长受限的关系。方法:选取120例妊娠期高血压病人作为研究对象,根据孕期胎儿生长状况将其分为正常对照组(95例)和胎儿生长受限组(25例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测胎盘组织中miR-23a-3p表达水平,免疫组化法检测ZNF395蛋白表达水平,收集新生儿体重、胎盘重量等一般资料;采用Pearson法及Spearman法分析胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p、ZNF395水平与新生儿体重、胎盘重量的相关性;采用单因素及多因素Logistic回归分析胎儿生长受限的影响因素。结果:胎儿生长受限组胎盘组织ZNF395蛋白阳性率、新生儿体重、胎盘重量低于正常对照组,miR-23a-3p水平高于正常对照组(P<0.05)。胎儿生长受限病人胎盘组织miR-23a-3p与ZNF395水平呈负相关(P<0.05);新生儿体重、胎盘重量与miR-23a-3p呈负相关(P<0.05),与ZNF395呈正相关(P<0.05)。miR-23a-3p是胎儿生长受限的独立危险因素(P<0.05),ZNF395是胎儿生长受限的保护因素(P<0.05)。结论:胎儿生长受限病人胎盘组织中miR-23a-3p高表达,ZNF395低表达,miR-23a-3p可能通过下调ZNF395表达影响胎儿生长发育。

川芎提取物通过miR-23a-3p/SNCA轴对帕金森综合征模型MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞的影响

目的探究川芎提取物对MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞和帕金森综合征的影响。方法1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP^(+))干预SH-SY5Y建立帕金森综合征细胞模型(SH-SY5Y-MPP^(+)),川芎提取物干预后检测细胞增殖、凋亡以及miR-23a-3p、SNCA的表达情况。另观察调控miR-23a-3p、SNCA表达后SH-SY5Y-MPP^(+)的变化,双荧光素报告酶验证miR-23a-3p与SNCA的关系。结果SH-SY5Y-MPP^(+)的细胞增殖能力明显低于SH-SY5Y,而凋亡率则高于SH-SY5Y(P<0.05)。川芎提取物干预下,SH-SY5Y-MPP^(+)的增殖能力、Bcl-2、SNCA蛋白升高,凋亡率与miR-23a-3p、Bax蛋白降低(P<0.05)。沉默miR-23a-3p与升高SNCA均可以促进SH-SY5Y-MPP^(+)的增殖能力,抑制凋亡;而升高miR-23a-3p与沉默SNCA则反之(P<0.05)。在线靶基因预测网站发现,miR-23a-3p与SNCA存在可结合的互补位点,双荧光素报告酶显示SNCA-wt的萤火活性在转染了miR-23a-3p模拟物序列后受到了明显的抑制(P<0.05)。在升高miR-23a-3p后,SH-SY5Y-MPP^(+)中SNCA蛋白表达降低,而沉默miR-23a-3p则反之(P<0.05)。拯救实验显示,川芎提取物对SH-SY5Y-MPP^(+)的干预效果被升高miR-23a-3p或沉默SNCA完全逆转(P>0.05);升高miR-23a-3p对SH-SY5Y-MPP^(+)产生的影响则升高SNCA逆转(P>0.05)。结论川芎提取物通过调控miR-23a-3p/SNCA轴影响MPP^(+)诱导的SH-SY5Y生物学行为改变,未来可能是治疗帕金森综合征的新方向。

miR-23a-3p调控痛风性关节炎细胞自噬的作用机制

目的探究miR-23a-3p对痛风性关节炎(GA)滑膜细胞自噬的影响。方法电镜观察滑膜细胞的变化,自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬流,Western Blot检测LC3B和p62蛋白的表达量。结果电镜结果显示,模型组和对照组相比线粒体明显减少,线粒体模糊不清,粗面内质网、糖原颗粒明显减少,自噬体明显增多;而和模型组相比,模型+miR-23a-3p mimics组线粒体明显皱缩,线粒体膜模糊不清,内质网减少,自噬体大量存在。自噬双标腺病毒实验结果显示,与对照组相比,图像中黄色斑点、红色斑点显著增多,即自噬小体、自噬溶酶体显著增多(P<0.05);而和模型组相比,模型+miR-23a-3p mimics组黄色斑点、红色斑点显著增多,即自噬小体、自噬溶酶体增加(P<0.05)。WB结果显示,与模型组比较,对照组中LC3B的蛋白表达显著降低(P<0.05),P62的蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型+miR-23a-3p mimics组比较,对照组、模型组、模型+miR-23a-3p NC组中LC3B的蛋白表达显著降低(P<0.05),P62的蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论miR-23a-3p可以促进GA滑膜细胞的自噬反应,升高LC3B表达,降低P62表达。

肺结核患者外周血miR-23a-3p的表达及其对患者诊断及预后评估的价值分析

目的:探究miR-23a-3p在肺结核(PTB)患者中的表达及其对PTB患者的诊断和预后的价值。方法:将2020年6月至2021年6月本院传染病科收治的98例PTB患者设为PTB组,同期另选取92例健康志愿者作为健康组。采用qRT-PCR法检测受试者外周血miR-23a-3p、核转录因子SP1(SP1)和干扰素调节因子1(IRF1)的表达;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-23a-3p对PTB的诊断价值和预后价值;采用Pearson相关系数分析PTB患者外周血miR-23a-3p与SP1、IPF1之间的相关性;对PTB患者完成6个月随访,采用Kaplan-Meier法分析miR-23a-3p与PTB患者预后关系;Cox回归分析影响PTB患者预后的危险因素。结果:与健康组相比,PTB组患者miR-23a-3p水平显著降低,SP1和IPF1表达显著升高(P<0.05);ROC曲线显示,外周血miR-23a-3p诊断PTB的曲线下面积(AUC)为0.861(95%CI:0.809~0.913),灵敏度和特异度分别为85.70%和70.70%;Pearson相关系数分析显示,PTB患者外周血miR-23a-3p的表达与SP1表达和IPF1表达均呈负相关(r值分别为-0.570、-0.435,均P<0.05),PTB患者SP1表达与IPF1表达呈正相关(r=0.524,P<0.05);随访期间,患者预后良好87例,预后不良11例;ROC曲线显示,miR-23a-3p预测PTB患者预后的AUC为0.881(95%CI:0.790~0.971),灵敏度和特异度分别为72.70%和92.00%;与预后良好组相比,预后不良组miR-23a-3p水平显著降低,SP1和IPF1表达显著升高(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,miR-23a-3p高表达PTB患者复发率明显低于miR-23a-3p低表达患者;Cox回归分析显示,肺部空洞、痰液MTB培养阳性、miR-23a-3p低表达、SP1高表达、IPF1高表达是影响PTB患者预后的危险因素。结论:PTB患者外周血miR-23a-3p表达明显降低,其低表达是影响PTB患者预后的危险因素,对PTB诊断和预后判断均具有良好的价值。

黄芩苷通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症反应机制探究

目的:探究黄芩苷(baicalin)通过微RNA-23a-3p/磷酸酶与紧张素同源物/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR)抑制痛风性关节炎(GA)成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症反应的机制。方法:提取GA患者和正常人外周血辅助性T淋巴细胞(CD4^(+)T),购买正常人FLS,应用单钠尿酸盐结晶液刺激正常人FLS构建GA-FLS模型,细胞迁移(transwell)进行CD4^(+)T细胞与GA-FLS共培养,构建miR-23a-3p模拟物(miR-23a-3p mimics)转染至GA-FLS中;黄芩苷作用24 h、48 h和72 h后,细胞计数8(CCK8)检测细胞活力并选取最佳作用浓度和时间;实验分为正常组(GA-FLS)、对照组(CD4^(+)T+GA-FLS)、模型组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS)、黄芩苷组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+100μg/ml Baicalin)、miR-23a-3p-NC组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+miR-23a-3p-NC)、miR-23a-3p mimics组(GA-CD4^(+)T+GA-FLS+miR-23a-3p mimics)、黄芩苷miR-23a-3p mimics组(GA-CD4^(+)T+GAFLS+miR-23a-3p mimics+100μg/ml Baicalin);实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和免疫印迹(WB)检测miR-23a3p、PTEN、PI3K、AKT、mTOR的表达,酶联免疫吸附(ELISA)测定检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的表达。结果:CCK8检测结果显示黄芩苷最佳作用浓度和时间为100μg/ml、48 h。RT-qPCR和WB检测结果显示:模型组miR-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达较正常组、对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);而PTEN mRNA组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miRNA-23a-3p-NC组相比,miR-23a-3p mimics组miRNA-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达明显上升,PTEN mRNA的表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miR-23a3p mimics组相比,黄芩苷miR-23a-3p mimics组miRNA-23a-3p mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA的表达明显下调,PTEN mRNA的表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。ELISA检测结果显示:模型组TNF-α、IL1β、IL-6的表达较正常组、对照组明显升高,而IL-10表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与miRNA-23a3p-NC组相比,miRNA-23a-3p mimics组TNF-α、IL-1β、IL-6的表达明显上升,IL-10表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与miR-23a-3p mimics组相比,黄芩苷miR-23a-3p mimics组TNF-α、IL-1β、IL-6的表达明显下调,IL-10表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芩苷可通过下调miR-23a-3p,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,降低痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症反应。

CircSERPINE2靶向miR-23a-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨CircSERPINE2对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:选取于武汉市第四医院就诊的44例RA患者和健康体检者的外周血,培养滑膜成纤维细胞(FLSs)和RA滑膜成纤维细胞(RA-FLSs),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CircSERPINE2和miR-23a-3p表达水平;将RA-FLSs随机分为NC组、pcDNACircSERPINE2组、pcDNA组、anti-miR-23a-3p组、anti-miR-NC组、miR-23a-3p+pcDNA-CircSERPINE2组、miR-NC+pcDNA-CircSERPINE2组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移数和侵袭数;双荧光素酶报告实验检测CircSERPINE2和miR-23a-3p的靶向关系。结果:RA患者外周血中CircSERPINE2表达水平低于健康体检者,而miR-23a-3p表达水平高于健康体检者(P<0.05)。与FLSs比较,RA-FLSs中CircSERPINE2表达水平降低,而miR-23a-3p表达水平升高(P<0.05)。过表达CircSERPINE2或抑制miR-23a-3p表达,细胞活性降低,迁移和侵袭细胞数减少(P<0.05)。CircSERPINE2靶向调控miR-23a-3p。miR-23a-3p过表达可逆转CircSERPINE2过表达对RA-FLSs的影响。结论:CircSERPINE2过表达可通过靶向调控miR-23a-3p抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。

miR-182、miR-23a-3p联合cTnI、CK-MB、Myo在急性心肌梗死早期诊断中的应用价值

目的探讨微小RNA(miR)-182、miR-23a-3p联合肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(Myo)在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的应用价值。方法选取80例AMI病人作为AMI组,40名健康体检者作为对照组。采集AMI组发病后1~2 h、2~4 h、4~8 h、8~12 h空腹静脉血,对照组体检时采集空腹静脉血,使用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-182、miR-23a-3p表达,采用胶体金免疫层析法测定cTnI、CK-MB、Myo含量。结果AMI组不同时间血清miR-182、miR-23a-3p表达均低于对照组,AMI组不同时间cTnI、CK-MB、Myo含量均高于对照组(P<0.05)。AMI组不同时间miR-182、miR-23a-3p、cTnI、CK-MB、Myo阳性检出率均高于对照组(P<0.05)。AMI病人发病后1~2 h血清miR-182、miR-23a-3p、cTnI灵敏度均高于80%,其中miR-23-3p灵敏度最高,为92.5%,cTnI特异度最高,为87.5%;miR-182与miR-23a-3p联合检测灵敏度和特异度分别为90.0%和85.0%,均高于cTnI、CK-MB、Myo三者联合诊断的88.8%和82.5%,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-182、miR-23a-3p可作为AMI早期诊断的新型标志物,联合cTnI、CK-MB、Myo有利于提高AMI病人早期诊断的准确度。

七氟醚通过lncRNA MEG3调控miR-23a-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究七氟醚对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用七氟醚处理肺癌A549细胞,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。实时定量PCR(qRT-PCR)检测长链非编码RNA(lncRNA)MEG3和微小RNA(miR)-23a-3p的表达。qRT-PCR分析人正常肺粘膜GES-1细胞和肺癌A549细胞中MEG3和miR-23a-3p表达。生物信息学预测与双荧光素酶活性实验检测肺癌细胞A549中MEG3与miR-23a-3p的靶向关系。在A549细胞中转染si-MEG3或miR-23a-3p,并分别给予七氟醚处理,采用上述方法进行细胞增殖与凋亡检测。结果七氟醚明显降低细胞A549的活力、Bcl-2蛋白水平和miR-23a-3p表达量,显著提高细胞的凋亡率、Bax蛋白表达量和MEG3表达量(P<0.05)。与GES-1细胞比较,A549细胞MEG3表达量明显减少,miR-23a-3p表达量显著增加(P<0.05)。MEG3靶向调控miR-23a-3p的表达。七氟醚通过MEG3抑制miR-23a-3p的表达。敲减MEG3或过表达miR-23a-3p后,七氟醚对A549细胞增殖和Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡和Bax蛋白表达的促进作用被逆转。并且,七氟醚对A549细胞miR-23a-3p表达的抑制作用被敲减MEG3所逆转。结论七氟醚通过lncRNA MEG3调控miR-23a-3p的表达,抑制肺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。

抑制miR-23a-3p表达对人白血病细胞株HL-60侵袭和迁移的调节作用

目的探讨抑制miR-23a-3p表达对人白血病细胞株HL-60侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法转染miR-23a inhibitor到HL-60细胞抑制miR-23a-3p的表达。HL-60细胞分为3组:HL-60组(阴性对照组)、scramble组(转染对照组)和miR-23a inhibitor组。qRT-PCR技术检测MMP-9和VEGF mRNA水平,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。Western blot法检测MMP-9和VEGF蛋白表达。结果转染scramble后HL-60细胞miR-23a-3p表达无明显变化。转染miR-23a inhibitor后HL-60细胞miR-23a-3p表达显著下降(P<0.01)。scramble组与阴性对照组每个视野下的侵袭细胞数目差异无统计学意义。miR-23a inhibitor组每个视野下的侵袭细胞数目显著低于阴性对照组(P<0.01)。scramble组与阴性对照组细胞迁移无明显差异。与阴性对照组相比,miR-23a inhibitor组细胞迁移显著降低(P<0.01)。转染scramble不会影响MMP-9和VEGF的表达。miR-23a inhibitor组MMP-9和VEGF的mRNA水平显著低于阴性对照组(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-23a inhibitor组MMP-9和VEGF的蛋白水平显著下降(P<0.001)。结论抑制miR-23a-3p表达可减弱人白血病细胞株HL-60的侵袭和迁移。

miR-23a-3p对MPP +诱导的帕金森病细胞模型的功能机制

目的探讨微小RNA-23a-3p(miRNA-23a-3p)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导帕金森病细胞模型增殖及凋亡的影响。方法用不同浓度的MPP+诱导SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型,采用CCK-8法检测SH-SY5Y细胞存活率,筛选MPP+适宜作用浓度。采用qRT-PCR法检测细胞中miRNA-23a-3p的表达。将SH-SY5Y细胞分为control组MPP++miR-23a-3p组、MPP++miR-con组、MPP++miR-23a-3p+pcDNA-control组、MPP++miR-23a-3p+pcDNA-SNCA组,采用qRT-PCR法检测转染效果。流式细胞术检测miRNA-23a-3p对SH-SY5Y细胞凋亡的影响;双荧光素酶报告实验检测miRNA-23a-3p与SNCA的靶向关系;Western印迹法检测Bax、Bcl-2、SNCA蛋白表达。检测细胞中ROS水平及LDH活力。结果MPP+处理后SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.05),miRNA-23a-3p的表达水平显著降低(P<0.05),选取4 mmol/L MPP+进行后续研究;与control组相比,MPP+组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),ROS水平与Bax表达水平显著升高(P<0.05),LDH活性明显增强(P<0.05),而Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05);上调SH-SY5Y细胞中miRNA-23a-3p表达可明显提高细胞存活率及Bcl-2表达水平(P<0.05),而明显降低ROS水平、Bax表达水平、LDH活性及细胞凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实SNCA是miRNA-23a-3p的靶基因;SNCA过表达可逆转miR-23a-3p对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞存活率、凋亡率、细胞毒性的作用。结论上调miR-23a-3p表达可通过靶向抑制SNCA的表达进而对MPP+诱导的帕金森病细胞模型发挥保护作用。

hsa-miR-23a-3p靶向TGFβ2对急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响

目的:探究hsa-miR-23a-3p靶向转化生长因子β2(TGFβ2)对急性淋巴细胞白血病细胞株CEM/C1增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响。方法:将CEM/C1细胞随机分为4组:Control组、mimic组、pcDNA-TGFβ2组和mimic+TGFβ2组,采用Lipofectamine 2000分别转染mimic对照、miR-23a-3p mimic、TGFβ2过表达质粒及共转染miR-23a-3p mimic+TGFβ2过表达质粒。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-23a-3p、TGFβ2表达;荧光素酶报告实验验证miR-23a-3p与TGFβ2的靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭;微管形成实验检测细胞微管形成的结节数;Western blotting法检测Ki67、Survivin、Caspase-3、Bax、Bcl-2、VEGF蛋白表达。结果:与Control组相比,mimic组miR-23a-3p表达、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量和Bax/Bcl-2比值升高,TGFβ2 mRNA表达、克隆形成率、微管形成结节数及Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,侵袭细胞数减少(均P<0.05),pcDNA-TGFβ2组与mimic组各指标变化相反(均P<0.05);与pcDNA-TGFβ2组比较,mimic+TGFβ2组克隆形成率、微管形成结节数和Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2比值升高,侵袭细胞数减少(均P<0.05)。荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p和TGFβ2存在靶向关系。结论:hsa-miR-23a-3p通过靶向下调TGFβ2表达抑制人白血病细胞增殖、侵袭、细胞骨架重组,促进细胞凋亡。

mir-23a-3p及CXCL12在艾滋病患者血清中的表达水平及临床意义

目的探讨mir-23a-3p及CXCL12在艾滋病患者血清中的表达水平及临床意义。方法选取2015年1月至2016年12月该院收治的艾滋病患者70例为研究组,选取同期健康体检人员70例为对照组,对比两组研究对象血清中mir-23a-3p及CXCL12表达情况。结果研究组患者mir-23a-3p过表达情况显著高于对照组研究对象,差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者CXCL12过表达情况显著高于对照组研究对象,差异有统计学意义(P<0.05)。结论艾滋病患者血清当中普遍存在着mir-23a-3p及CXCL12的过表达,临床上可以作为病情诊断及预后评估的重要指标,需要引起医务人员的重视。

miR-23a-3p通过调控靶基因Gja1参与调控大鼠卵泡闭锁及颗粒细胞凋亡

目的探讨miR-23a-3p在大鼠卵泡闭锁及卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用机制。方法分别在SD大鼠卵巢囊中注射miR-23a-3p模拟物/抑制剂,转染72 h后,采用HE染色法检测大鼠卵巢组织形态变化及闭锁卵泡数变化情况;采用生物信息学及荧光素酶报告系统预测并验证miR-23a-3p的靶基因及其结合位点;体外分离培养大鼠卵巢颗粒细胞,并分别转染miR-23a-3p模拟物及抑制剂,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测转染72 h后颗粒细胞中miR-23a-3p及其靶基因缝隙连接蛋白43(Gja1)的表达情况;Gja1干扰慢病毒转染大鼠颗粒细胞,转染72 h后,采用RT-PCR和Western blot检测大鼠卵巢颗粒细胞中Gja1在mRNA和蛋白水平的表达情况;用流式细胞术检测转染miR-23a-3p模拟物/抑制剂、Gja1干扰慢病毒后卵巢颗粒细胞的凋亡情况。结果HE染色结果显示,大鼠卵巢囊注射miR-23a-3p模拟物后卵巢中的闭锁卵泡数量显著增高于模拟物对照组(P<0.05);双荧光素酶报告实验发现,转染miR-23a-3p模拟物组显著降低了荧光素酶活性(P<0.05);RT-PCR结果显示,转染miR-23a-3p模拟物后卵巢颗粒细胞中miR-23a-3p的表达显著增加,Gja1则显著降低(P<0.05),而转染miR-23a-3p抑制剂后对内源性miR-23a-3p和Gja1的表达无显著影响(P>0.05);用Gja1慢病毒干扰载体/对照载体分别转染大鼠卵巢颗粒细胞72 h后,RT-PCR和Western blot结果显示,Gja1干扰组Gja1在mRNA水平及蛋白水平均显著低于对照组(P<0.05);Western blot检测结果显示,转染miR-23a-3p模拟物后卵巢颗粒细胞中Gja1的表达显著降低(P<0.05);流式细胞术检测发现,转染miR-23a-3p模拟物后显著促进了卵巢颗粒细胞凋亡,下调Gja1后卵巢颗粒细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论miR-23a-3p通过调控靶基因Gja1参与调节大鼠卵泡闭锁及卵巢颗粒细胞的凋亡。

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4^(+)T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的观察新风胶囊(XFC)含药血清通过调控miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎(OA)CD4^(+)T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法选取30例OA患者(OA组)及30例正常人(NC组)检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,观察临床指标:红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、IgA、IgG、IgM、补体C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察30例OA患者经XFC治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取OA-CD4^(+)T细胞,transwell小室培养OA-CD4^(+)T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA的表达;采用ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调(P<0.01);相关性分析表明:miR-23a-3p与IL-6呈正相关(P<0.01),PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关(P<0.01或P<0.05);加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高(P<0.01);Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低(P<0.01);miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05);XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调(P<0.01或P<0.05)。结论XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。

LncRNA SNHG5调控miR-23a-3p影响恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的作用机制

目的探讨长链非编码RNA SNHG5(LncRNA SNHG5)对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人黑色素瘤细胞株A375、G361、M14、WM115与人类皮肤黑色素细胞(NHEM)。实验将A375细胞随机分为NC组、si-con组、si-SNHG5组、si-SNHG5+anti-miR-con组、si-SNHG5+anti-miR-23a-3p组。采用qRT-PCR法检测细胞SNHG5与miR-23a-3p表达。MTT法与Annexin V/PI染色法检测转染后各组A375细胞增殖活性及凋亡率。采用双荧光素酶报告实验证实SNHG5的靶作用位点。Western blotting法检测Bcl-2、Bax及AKT信号通路相关蛋白表达。结果与NHEM相比,不同黑色素瘤细胞中SNHG5表达水平显著上调(P<0.05),而miR-23a-3p表达水平显著下调(P<0.05);沉默SNHG5表达可显著抑制黑色素瘤A375细胞增殖并促进细胞凋亡;双荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p是SNHG5的直接靶点;干扰miR-23a-3p可部分逆转沉默SNHG5对A375细胞的抑制作用;沉默SNHG5表达可促进Bax表达,抑制Bcl-2与p-AKT表达,但沉默miR-23a-3p后Bcl-2与p-AKT表达上调,而Bax表达下调。结论沉默SNHG5通过调控miR-23a-3p表达进而抑制黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。

急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆miR-23a-3p、miR-30d与心功能和心肌损伤的关系

目的探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆微小RNA(miR)-23a-3p、miR-30d与心功能和心肌损伤的关系,分析其预测价值。方法选择2018年10月至2020年4月收治的STEMI患者62例为STEMI组,稳定型心绞痛74例为稳定型心绞痛组(SAP组),同期医院体检的健康人60例为健康对照组。比较3组血浆miR-23a-3p、miR-30d、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、氨基末端脑钠肽前体(NTpro-BNP)和左心室射血分数(LVEF)水平,比较不同美国心脏病协会(NYHA)分级STEMI患者血浆miR-23a-3p、miR-30d水平,分析STEMI患者血浆miR-23a-3p、miR-30d与心功能和心肌损伤指标的关系及对STEMI的预测价值。结果STEMI组血浆miR-23a-3p水平和LVEF低于SAP组和健康对照组(P<0.05),血浆miR-30d、LDH、CK、CK-MB、cTnI、NTpro-BNP水平高于SAP组和健康对照组(P<0.05);SAP组血浆miR-23a-3p水平低于健康对照组,miR-30d和NTpro-BNP水平高于健康对照组(P<0.05)。随NYHA分级的增加,STEMI患者血浆miR-23a-3p水平逐渐降低,miR-30d水平逐渐升高(P<0.05)。Pearson相关分析显示STEMI患者血浆miR-23a-3p水平与LDH、CK、CK-MB、cTnI、NT-proBNP呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05);miR-30d水平与LDH、CK、CK-MB、cTnI、NT-proBNP呈正相关,LVEF呈负相关(P<0.05)。ROC分析显示:miR-23a-3p、miR-30d两指标均具有较高的对STEMI的预测价值,ROC-AUC分别为0.771(0.693~0.858)、0.754(0.614~0.926),联合应用价值更高:AUC为0.843(0.739~0.962)。结论STEMI患者血浆miR-23a-3p、miR-30d水平与心功能和心肌损伤密切相关,miR-23a-3p、miR-30d对STEMI诊断和评估具有一定价值。

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的 探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法 使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型,用CCK-8法检测细胞活力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组:正常对照组、LPS+空白对照(NC)组和LPS+miR-23a-3p模拟物(mimic)组,采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果 LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平,同时,miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比,LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平,而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论 miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平,其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。