miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低(P<0.05),而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB13′UTR表达载体的荧光素酶活性,CREB1是miR-26b-3p下游靶基因。抑制miR-26b-3p表达可上调CERB1的表达,进而抑制细胞凋亡,促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。过表达miR-26b-3p可下调CERB1的表达,促进细胞凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论miR-26b-3p可靶向调控CREB1的表达调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖、迁移和侵袭,进而参与胶质瘤的发生发展。

miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞及人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响

背景:microRNA-26b(miR-26b)对干细胞的多种功能具有重要的调节作用,但其对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞生物学特性的影响尚不清楚。目的:探讨miR-26b对人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:培养及鉴定人脱落乳牙牙髓干细胞和人脐带间充质干细胞;用miR-26 mimics(实验组)和miRNAs mimics对照(对照组)转染2种细胞,构建过表达模型用于后续实验。CCK-8法检测过表达miR-26b细胞的增殖能力;Transwell和划痕实验分析过表达miR-26b细胞的迁移能力;RT-qPCR法检测过表达miR-26b细胞成骨诱导后成骨标志物的表达。结果与结论:①转染miR-26b模拟物可提高2种细胞中miR-26b表达量,促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖,对人脐带间充质干细胞的扩增无明显影响;②相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后迁移能力增强;③miR-26b在2种细胞成骨分化过程中表达水平降低;④相较于对照组,2种细胞过表达miR-26b后,成骨相关基因骨钙素、骨桥素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平均下调。结果表明,过表达miR-26b能促进人脱落乳牙牙髓干细胞增殖、迁移,抑制其成骨分化;也促进人脐带间充质干细胞迁移,抑制其成骨分化,但对其增殖无明显影响。

妊娠期糖尿病患者血清miR-26b、TMAO表达变化及与产后糖代谢异常的相关性

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小RNA(miR)-26b、氧化三甲胺(TMAO)表达变化及与产后糖代谢异常间的关系。方法选取海口市妇幼保健院接诊的GDM患者186例作为研究对象。孕24~28周进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),并检测miR-26b、TMAO表达。根据产后6~8周OGTT结果分为异常组(n=52)和正常组(n=134)。Logistic多因素分析miR-26b、TMAO表达与产后糖代谢异常的关系。Pearson相关系数分析24~28周miR-26b、TMAO与产后空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性。结果调整混杂因素后血清miR-26b、TMAO水平仍与产后糖代谢异常独立相关(P<0.05);异常组产后FPG、FINS、HOMA-IR高于正常组(P<0.05);异常组24~28周miR-26b与产后FPG、FINS、HOMA-IR呈负相关,TMAO与产后FPG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。结论GDM患者血清miR-26b、TMAO表达异常,其与产后糖代谢异常关系密切。

LncRNA-HAGLROS调控miR-26b/JAK2/STAT3通路对肝癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)HAGLR互补链LncRNA(HAGLROS)调控微小RNA((miRNA,miR)-26b/非受体型酪氨酸蛋白激酶(janus kinase 2,JAK2)/信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)通路对肝癌细胞上皮间质转化的影响。方法获取正常肝细胞系及肝癌细胞系,依据转染情况分组,即si-NC组、si-HAGLROS组、miR-26 inhibitor组、si-HAGLROS+miR-26 inhibitor组。MTT实验检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况,细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,qPCR法检测HAGLROS、miR-26b、上皮钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、N-钙黏素(N-cadherin)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达,双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA-HAGLROS与miR-26b的靶向关系。结果肝癌细胞系Hep3B、MHCC-LM3、Huh7、SMMC-7721中HAGLROS表达均显著高于LO2细胞(P<0.05),miR-26b表达与之相反。生物信息学软件显示,HAGLROS可与miR-26b靶向结合。肝癌细胞功能实验显示,与si-NC组比较,si-HAGLROS组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3表达均更低,E-Cadherin表达更高;而miR-26b inhibitor组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3表达均更高,E-Cadherin表达更低;si-NC组与si-HAGLROS+miR-26b inhibitor组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA-HAGLROS可通过靶向下调miR-26b促进肝癌细胞生物行为,如迁移、侵袭及EMT过程,同时可调控JAK2/STAT3通路活性,LncRNA-HAGLROS可作为肝癌治疗靶点。

超声弹性成像联合血清miR-26b-5p及环氧化酶-2检测对早期子宫肌瘤的临床诊断价值

目的:探讨超声弹性成像联合血清微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)、环氧化酶-2(COX-2)检测对早期子宫肌瘤的诊断价值。方法:选取2020年10月至2022年9月在无锡联勤保障中心第九〇〇医院诊断的228例疑似子宫肌瘤患者,以病理切片检查结果为“金标准”,将其分为阳性组(124例)和阴性组(104例),两组均行超声弹性成像检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-26b-5p表达水平,酶联免疫吸附法检测血清COX-2水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值,采用四表格法分析超声弹性成像以及超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值。结果:经病理切片检查,228例患者中子宫肌瘤阳性124例,阴性104例;超声弹性成像结果显示阳性117例,阴性111例,超声弹性成像检查诊断的灵敏度为74.19%,特异度为75.96%,准确率为75.00%。阳性组患者血清miR-26b-5p水平明显低于阴性组,COX-2水平明显高于阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=4.519、5.601,P<0.05)。血清miR-26b-5p诊断子宫肌瘤的AUC为0.749,灵敏度为95.97%,特异度为46.15%,最佳截断值为1.10;血清COX-2诊断子宫肌瘤的AUC为0.835,灵敏度为66.13%,特异度为84.62%,最佳截断值为40.58 mg/L;超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断的灵敏度为93.55%,特异度为86.54%,准确率为90.35%,与单独诊断比较差异有统计学意义(χ^(2)=23.158、17.169,P<0.05)。结论:超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断早期子宫肌瘤具有较高的效能。

病毒性心肌炎患者外周血心肌酶谱和miR-26b miR-19b表达变化分析及与预后的关系

目的:探讨病毒性心肌炎患者外周血心肌酶学指标、血清微小RNA-26b(miR-26b)、微小RNA-19b(miR-19b)的变化及与患者预后结局的关系。方法:选取我院2020年11月至2022年8月收治的116例病毒性心肌炎患者作为心肌炎组、另外选取同期健康体检的非心肌炎志愿者60例作为对照组,对比两组的心肌酶学指标、血清miR-26b、miR-19b水平,并根据患者随访6个月的预后结局进行分组,对比两组的各项一般资料及研究指标,采用Logistic回归分析影响病毒性心肌炎患者预后结局的相关指标。结果:心肌炎组患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);心肌炎组患者的miR-26b相对表达强度低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);根据6个月随访,预后不良患者36例,其中死亡2例、再次出现心力衰竭入院18例、心律失常入院9例、心肌炎复发7例;预后良好组和预后不良组患者的年龄、BMI、性别、胸痛情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);预后不良组的收缩压、舒张压低于预后良好组,预后不良组患者的心率频率、胸闷、心肌、乏力、呼吸频率、房扑/房颤、房室传导阻滞、束支阻滞均高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表达水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的miR-26b相对表达强度低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示:房扑/房颤、房室传导阻滞、束支阻滞、ALT增高、AST增高、LDH增高、cTnI增高、CK-MB增高、CK增高、miR-19b增高、miR-26b降低是心肌炎患者不良预后结局的独立危险因素(P<0.05)。结论:病毒性心肌炎患者外周血心肌酶学指标及miR-19b表达显著增高、miR-26b表达显著降低,并且与患者不良的预后结局具有密切关系。

miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与妊娠期高血压血管内皮功能关系及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的ROC曲线分析

目的 探讨微小RNA-26b(microRNA-26b, miR-26b)、miR-1233-3p、miR-206与妊娠期高血压(hypertensive disorders complicating pregnancy, HDCP)血管内皮功能关系及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的价值。方法 选取2019-04/2021-04月作者医院收治的104例HDCP患者的病历资料进行分析。根据是否发生不良妊娠结局分为发生组(n=25)和未发生组(n=79)。比较两组基线资料、肱动脉内皮依赖性舒张功能(flow mediated dilation, FMD)、miR-26b、miR-1233-3p、miR-206。应用Pearson相关分析探讨miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与FMD关系。采用多因素Logistic回归分析探讨不良妊娠结局的相关影响因素。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线及曲线下面积(area under the curve, AUC)分析miR-26b、miR-1233-3p、miR-206预测HDCP不良妊娠结局的价值。结果 发生组患者病情阶段与未发生组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。发生组患者FMD、miR-206低于未发生组,miR-26b、miR-1233-3p高于未发生组(P均<0.05)。miR-26b、miR-1233-3p与FMD呈负相关(r=-0.538、-0.588,P均<0.001),miR-206与FMD呈正相关(r=0.653,P<0.001)。调整病情阶段、FMD后,miR-26b、miR-1233-3p、miR-206仍与HDCP不良妊娠结局相关(P<0.05)。miR-26b、miR-1233-3p、miR-206及三者联合预测HDCP不良妊娠结局的AUC分别为0.771(95%CI:0.658~0.884)、0.790(95%CI:0.673~0.907)、0.772(95%CI:0.678~0.856)、0.840(95%CI:0.743~0.936),三者联合预测价值最大。结论 miR-26b、miR-1233-3p、miR-206与HDCP血管内皮功能、不良妊娠结局有关,三者联合检测可作为HDCP不良妊娠结局的一个有效预测方案。

老年白内障患者血清miR-26a和miR-26b表达水平及意义

目的探讨血清微小RNA(miR)-26a、miR-26b的表达水平与老年人白内障易感的相关性。方法选择2018年2月至2021年12月该院收治的137例老年白内障患者作为白内障组,另选择同期到该院进行健康体检的107例体检志愿者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清miR-26a、miR-26b的表达水平,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清纤维化相关指标[转换生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)]水平。分析miR-26a、miR-26b的表达水平与白内障晶状体浑浊分级(LOCSⅢ分级)、血清纤维化指标相关性,收集临床资料,分析老年人白内障的易感因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-26a、miR-26b诊断白内障的价值。结果白内障组血清miR-26a(1.35±0.64 vs.3.07±0.92)、miR-26b表达水平(1.16±0.62 vs.3.21±0.83)低于对照组,差异有统计学意义(t=17.198、22.082,P<0.05),血清TGF-β_(2)、HA、Ⅳ-C、LN、PCⅢ表达水平[(35.12±9.56)ng/L vs.(12.06±3.41)ng/L、(322.02±32.16)μg/L vs.(80.14±16.35)μg/L、(201.32±30.07)μg/L vs.(75.15±14.33)μg/L、(136.26±28.65)μg/L vs.(62.35±14.77)μg/L、(163.26±21.18)μg/L vs.(42.16±10.52)μg/L]高于对照组,差异有统计学意义(t=23.788、70.940、39.988、24.277、54.141,P<0.05)。miR-26a、miR-26b表达水平与LOCSⅢ分级(NC、C、P)评分、TGF-β_(2)、HA、Ⅳ-C、LN、PCⅢ均呈负相关(r=-0.912~-0.514,P<0.05)。miR-26a(OR=0.436,95%CI:0.302~0.619)和miR-26b(OR=0.411,95%CI:0.295~0.603)是老年白内障易感的保护因素(P<0.05)。miR-26a、miR-26b诊断白内障的曲线下面积为0.689,0.775,联合miR-26a、miR-26b、HA、Ⅳ-C、LN、PCⅢ诊断白内障的曲线下面积为0.954,高于单独miR-26a、miR-26b、HA、Ⅳ-C、LN、PCⅢ(P<0.05)。结论老年人白内障患者血清miR-26a、miR-26b表达水平均降低,miR-26a、miR-26b低表达与血清纤维化指标升高和白内障晶状体浑浊程度有关,可能与老年人白内障发病有关,miR-26a、miR-26b可作为白内障辅助诊断的生物学指标。

miR-26b在肝癌组织中的表达及与肝癌患者预后的关系

目的探讨miR-26b在原发性肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及其与HCC患者预后的关系。方法应用real-time PCR方法检测133例HCC患者中miR-26b的表达,Kaplan-Meier法分析miR-26b与HCC患者预后的关系,2检验分析miR-26b与临床病理参数的相关性,CCK-8增殖实验检测miR-26b对HCC细胞增殖能力的影响。结果 miR-26b在HCC组织中低表达,miR-26b低表达的HCC患者预后较差,miR-26b高表达的HCC患者预后较好。miR-26b的表达与HCC门脉癌栓(P<0.01)、肿瘤个数(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)、远处转移(P=0.022)、巴塞罗那分期(P<0.01)等密切相关。CCK-8结果显示miR-26b抑制HCC细胞的增殖。结论 miR-26b在HCC中低表达并抑制HCC细胞增殖,其可以成为预测HCC患者预后的分子靶标。

过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖

目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。

miR-26b调控Wnt/β-catenin信号通路促进成肝样分化MSCs迁移研究

目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunnchamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响。结果随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调。Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布。Transwell及Dunncham-ber实验表明MSCs诱导分化至7d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21d。高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05)。结论miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移。

miR-26b-3p对乳腺癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究

背景与目的:miRNA是一类长度为21~23个核苷酸的单链非编码RNA分子,其作用机制主要为靶向于mRNA的3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)从而抑制其靶基因的表达。miRNA在肿瘤的发生、发展过程中发挥着关键作用,探讨miR-26b-3p对乳腺癌生物学行为的影响及作用机制。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-26b-3p在三种乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-453中的表达,选取miR-26b-3p表达水平最低的乳腺癌细胞转染miR-26b-3p mimics后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的增殖,采用transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过小动物活体成像及裸鼠移植瘤模型检测miR-26b-3p对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长和转移的影响,采用双荧光素酶报告基因分析检测miR-26b-3p与锌指E盒结合同源盒基因1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的相互作用,采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB1的表达。结果:乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-26b-3p表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-26b-3p mimics后,miR-26b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞的迁移(P<0.001)和侵袭能力(P<0.01)显著降低。过表达miR-26b-3p可抑制裸鼠体内乳腺癌移植瘤的生长和转移。miR-26b-3p可与ZEB1的3’UTR结合,抑制ZEB1的表达。结论:miR-26b-3p可靶向于ZEB1,抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制乳腺癌的生长和转移。

miR-26b通过信号通路Wnt调控肝癌细胞分化、增殖、凋亡

目的探讨miR-26b对肝癌细胞分化增殖凋亡的影响及机制。方法以qRT-PCR方法检测肝癌细胞SMMC-7721、HuH-7、HepG2和正常肝细胞HL-7702中miR-26b的表达水平。在肝癌细胞中转染miR-26b mimic、mimic control,qRT-PCR测定转染后细胞中miR-26b水平。CCK-8测定细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western印迹测定细胞中β-连环蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果 HL-7702细胞中miR-26b表达水平显著高于SMMC-7721、HuH-7、HepG2细胞(P<0.05)。SMMC-7721细胞中miR-26b表达水平显著低于HuH-7、HepG2细胞(P<0.05)。选用SMMC-7721细胞作为研究对象。转染miR-26b mimic后的细胞中miR-26b水平显著升高(P<0.05)。高表达miR-26b后的肝癌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞中促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Bax水平也显著升高,细胞中Wnt关键蛋白β-catenin、CyclinD1水平显著降低(均P<0.05)。结论 miR-26b诱导肝癌肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制与抑制Wnt信号通路有关。

miR-26b在卵巢癌组织中的表达水平及其与预后的关系

目的探讨miR-26b在卵巢癌组织中的表达水平及其与卵巢癌预后之间的关系。方法搜集2011年7月至2013年7月行手术治疗的86例卵巢癌患者为研究对象(卵巢癌组),同期选取52例良性上皮性卵巢肿瘤患者(良性上皮性卵巢肿瘤组)及30例子宫肌瘤患者(正常组)作为对照。采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测患者卵巢组织miR-26b的表达水平,分析miR-26b表达与卵巢癌组织病理特征及患者预后之间的关系。结果卵巢癌组miR-26b表达水平明显低于良性上皮性卵巢肿瘤组及正常组,差异有统计学意义(t=43.719,39.018,P=0.000),良性上皮性卵巢肿瘤组与正常组miR-26b表达水平比较,差异无统计学意义(t=1.063,P=0.291);miR-26b表达与卵巢癌患者临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关(t=8.432,5.031,6.798,P=0.000),与卵巢癌患者年龄、组织类型无明显相关性(t=0.958,0.490,P=0.341,0.626);绘制ROC曲线,结果显示,ROC曲线下面积为0.812,诊断卵巢癌的灵敏度为86.57%,特异度为85.26%,对应诊断临界值为0.73;miR-26b低表达者5年总生存率为54.13%,明显低于miR-26b高表达者5年总生存率78.49%,差异有统计学意义(χ~2=6.576,P<0.05)。结论 miR-26b在卵巢癌组织中明显低表达,有望成为卵巢癌早期诊断及判断预后的有效标志物。

miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响

目的探讨miR-26b过表达在人脂肪细胞分化过程中对各种脂因子分泌的影响。方法以miR-26b过表达病毒感染人脂肪前体细胞并诱导分化;收集不同时间点的细胞培养基上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各个时间点的脂因子(白介素-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α)分泌量。结果与对照组比较,在miR-26b过表达病毒感染的人脂肪前体细胞分化过程中,白介素-6、瘦素分泌量降低,而抵抗素分泌量升高;两组均未检测到肿瘤坏死因子-α。结论 miR-26b在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及改善胰岛素抵抗,为肥胖治疗提供潜在靶点。

生物信息学预测hsa-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。

miR-26b和miR-224在梅山与杜洛克猪卵泡中的差异表达分析

为了探讨miRNAs在猪卵泡和繁殖相关组织中的表达,采用荧光定量RT-PCR法和组织表达谱分析法,对miR-26b和miR-224在梅山和杜洛克猪卵泡及其他繁殖相关组织中的表达进行了研究。组织表达谱分析结果表明:miR-26b和miR-224在下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢、子宫角、黄体组织中均有表达。RT-PCR结果表明:miR-26b在L卵泡中的表达量梅山猪是杜洛克猪的2倍(P<0.01);而在S卵泡中的表达量杜洛克是梅山猪的10倍(P<0.01);两品种在M1和M2卵泡中的表达量差异不显著。miR-224在S卵泡中的表达量杜洛克是梅山的7.79倍(P<0.01);而在M2卵泡中表达量梅山是杜洛克的1.84倍(P<0.05);两品种在M1和L卵泡中的表达量差异不显著。在猪种内大卵泡L、中等卵泡M2、中等卵泡M1、小卵泡S的相对表达量也有不同程度的差异。此研究表明,miR-26b和miR-224在梅山和杜洛克猪中表达趋势相似,它们的表达差异可能影响卵泡发育和成熟,为深入了解miR-26b和miR-224在卵泡发育中的作用奠定了基础。

miR-26b靶向GSK-3β发挥抗乳腺癌细胞干性的作用研究

目的探讨miR-26b对乳腺癌细胞增殖、凋亡及干性的影响并探讨其相关机制。方法采用无血清悬浮培养法培养MCF-7细胞以获得MCF-7干细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测MCF-7及其干细胞中的miR-26b水平,根据实验将MCF-7干细胞分为3组:对照组、空转染组(转染con-mimics)和miR-26b过表达组(转染miR-26b mimics),MTT法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,流式细胞仪检测各组转染后的凋亡水平及侧群(SP)细胞数量,体外干细胞成球培养实验检测各组转染后的成球率情况,qRT-PCR检测转染后各组干细胞标记物CD44、ALDH-1、BMI-1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平,生物信息学及Western blotting法分析验证miR-26b对靶基因糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的调控机制。结果MCF-7干细胞的miR-26b水平低于MCF-7细胞(P<0.05),且转染miR-26b mimics可升高MCF-7干细胞的miR-26b水平(P<0.05);与对照组相比,过表达组转染后增殖抑制率和凋亡率均升高,SP细胞数量和成球率均降低(P<0.05);转染miR-26b mimics可导致CD44、ALDH-1、BMI-1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平降低(P<0.05)。生物信息学软件预测GSK-3β是miR-26b的潜在靶基因,转染miR-26b mimics可显著降低GSK-3β的表达,双荧光素酶报告基因检测证明miR-26b可作用于GSK-3β基因mRNA的3’-UTR区预测靶位。结论 MCF-7干细胞中miR-26b呈低表达,过表达miR-26b可抑制细胞增殖、诱导凋亡并负性参与了乳腺癌细胞的干性调节,可能与其下调GSK-3β表达有关。

miR-26b对口腔鳞癌细胞SCC15肿瘤干性的抑制作用

目的分析miR-26b对人口腔鳞癌细胞SCC15肿瘤干性的影响及潜在机制。方法比较5例口腔癌患者癌组织和癌旁组织miR-26b表达差异;以miR-26b模拟物及抑制物瞬染SCC15细胞,Sphere实验检测癌细胞体外成球能力、real-time PCR检测干性基因(Nanog/OCT4)表达,Western Blot检测上皮间质转化标志物E-钙粘蛋白水平。结果 5例患者癌组织miR-26b水平均低于癌旁组织(P <0.05)。过表达miR-26b使SCC15细胞成球率下降(P <0.05),Nanog及OCT4表达下调(P <0.05),E-钙粘蛋白水平升高(P <0.05);反之抑表达miR-26b后,SCC15成球率上升(P <0.05),Nanog及OCT4表达上升(P <0.05),E-钙粘蛋白水平下降(P <0.05)。结论 miR-26b能降低SCC15细胞的肿瘤干性,其机制可能与miR-26b抑制细胞的上皮间质转化有关。