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补肾止颤方调控miR-296-5p/GSDMD通路抑制帕金森病大鼠神经元焦亡机制研究
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作者 胡玉英 李伦甘 +6 位作者 刘永辉 宋曦 钟洁 张志伟 王晋平 罗荣卿 黄羽 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第4期114-119,I0032,共7页
目的从焦亡角度探讨补肾止颤方保护帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经元的作用以及可能机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,补肾止颤方低(15 g·kg-1)、中(30 g·kg-1)、高(60 g·kg-1... 目的从焦亡角度探讨补肾止颤方保护帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经元的作用以及可能机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,补肾止颤方低(15 g·kg-1)、中(30 g·kg-1)、高(60 g·kg-1)剂量组,美多芭组(0.2 g·kg-1)。除正常组外,余各组予背部皮下注射蛋白酶体抑制因子I(proteasome inhibitors I,PSI)溶液构建慢性PD模型。模型组与正常组予等体积生理盐水灌胃,余各组予对应药物剂量灌胃,连续干预3周。采用行为学观察爬杆实验评估各组大鼠行为学改变,予透射电镜观察大鼠中脑黑质区神经元细胞结构变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative PCR,RT-PCR)检测大鼠中脑黑质区miR-296-5P及Gasdermin D(GSDMD)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达;双荧光素酶报告基因技术测定miR-296-5p与GSDMD上的靶向调控作用。结果与正常组比较,余各组大鼠出现自主活动减少、全身不自主震颤、行走迟缓等症状,悬挂实验评分下降(P<0.05);电镜下可见神经元细胞呈不同程度的水肿,部分细胞膜结构模糊,细胞核呈不规则形,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达明显升高(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,补肾止颤方低、中、高剂量组大鼠全身不自主震颤、行走迟缓等症状改善,悬挂实验评分升高(P<0.05),细胞水肿减轻,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达呈不同程度下降(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平升高(P<0.05),以补肾止颤方高剂量组改变显著;荧光素酶报告显示miR-296-5p可靶向调控GSDMD的表达。结论补肾止颤方能改善PD大鼠的运动协调能力及受损的神经元细胞,其机制可能与调控miR-296-5p/GSDMD通路,下调Caspase-1蛋白及炎性因子水平,减轻神经炎症反应,从而抑制PD大鼠神经元细胞焦亡有关。 展开更多
关键词 补肾止颤方 帕金森病 mir-296-5p/gsdmd 细胞焦亡 神经保护
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miR-296-5p靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化 被引量:1
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作者 孟爱霞 官秀梅 +1 位作者 李桂芝 孙风祥 《医学分子生物学杂志》 CAS 2022年第4期287-294,共8页
目的 探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调... 目的 探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调控;细胞转染构建miR-296-5p过表达和干扰细胞,CCK-8、克隆形成、Transwell小室、流式、蛋白免疫印迹实验检测miR-296-5p的不同表达对U2OS细胞中PTBP1表达水平及细胞增殖、侵袭、凋亡、自噬及EMT的影响.结果 与对照组比较,miR-296-5p在OS中表达降低,而PLK1则升高(P<0.05);与miR-NC组比较,mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05);与PLK1组比较,PLK1+mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05).结论 miR-296-5p可能能够靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导OS细胞中的自噬并抑制EMT. 展开更多
关键词 骨肉瘤 mir-296-5p pLK1 pI3K/AKT通路 细胞自噬 上皮-间质转化
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沉默circAMOTL1对结直肠癌Caco-2细胞生物学行为影响的体外实验研究
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作者 于曦 王楠 +1 位作者 金飞 支宇 《联勤军事医学》 CAS 2023年第2期89-95,共7页
目的探讨沉默circAMOTL1对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测结直肠癌组织与癌旁组织中circAMOTL... 目的探讨沉默circAMOTL1对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测结直肠癌组织与癌旁组织中circAMOTL1、miR-296-5p的表达量。Pearson相关分析探讨结直肠癌组织中circAMOTL1、miR-296-5p表达量的相关性。体外培养人结直肠癌细胞Caco-2,sh-NC、sh-circAMOTL1、miR-NC、miR-296-5p mimic分别转染至Caco-2细胞(sh-NC组、sh-circAMOTL1组、miR-NC组、miR-296-5p mimic组),sh-circAMOTL1与miR-296-5p inhibor共转染至Caco-2细胞(sh-circAMOTL1+miR-296-5p inhibor组)。流式细胞术、Transwell实验、Western blot法分别检测细胞凋亡、迁移及侵袭、Cleaved-caspase 3蛋白表达。双荧光素酶报告实验检测circAMOTL1和miR-296-5p靶向调控作用。结果结直肠癌组织中circAMOTL1表达量高于癌旁组织(2.79±0.30 vs.0.89±0.15,P<0.05),miR-296-5p表达量低于癌旁组织(0.42±0.09 vs.1.12±0.14,P<0.05)。circAMOTL1与miR-296-5p呈负相关(r=-0.8125,P<0.0001)。转染sh-circAMOTL1或miR-296-5p mimic后,迁移及侵袭细胞数减少(P均<0.05),细胞凋亡率、Cleaved-caspase 3蛋白水平升高(P均<0.05)。circAMOTL1可靶向调控miR-296-5p的表达。共转染sh-circAMOTL1和miR-296-5p inhibor后,迁移及侵袭细胞数增多(P均<0.05),细胞凋亡率、Cleaved-caspase 3蛋白水平降低(P均<0.05)。结论沉默circAMOTL1可通过靶向调控miR-296-5p表达而抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 结直肠癌 circAMOTL1 mir-296-5p 迁移 侵袭 凋亡
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miRNA-296-5p functions as a potential tumor suppressor in human osteosarcoma by targeting SND1 被引量:8
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作者 Ya-Zeng Huang Jun Zhang +2 位作者 Jian-Jian Shen Ting-Xiao Zhao You-Jia Xu 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2021年第5期564-572,共9页
Background:The pathogenesis of osteosarcoma(OS)is still unclear,and it is still necessary to find new targets and drugs for anti-OS.This study aimed to investigate the role and mechanism of the anti-OS effects of miR-... Background:The pathogenesis of osteosarcoma(OS)is still unclear,and it is still necessary to find new targets and drugs for anti-OS.This study aimed to investigate the role and mechanism of the anti-OS effects of miR-296-5p.Methods:We measured the expression of miR-296-5p in human OS cell lines and tissues.The effect of miR-296-5p and its target gene staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1 on proliferation,migration,and invasion of human OS lines was examined.The Student's t test was used for statistical analysis.Results:We found that microRNA(miR)-296-5p was significantly downregulated in OS cell lines and tissues(control vs.OS,1.802±0.313 i/s.0.618±0.235,f=6.402,P<0.01).Overexpression of miR-296-5p suppressed proliferation,migration,and invasion of OA cells.SND1 was identified as a target of miR-296-5p by bioinformatic analysis and dual-luciferase reporter assay.Overexpression oiSNDl abrogated the effects induced by miR-296-5p upregulation(miRNA-296-5p vs.miRNA-296-5p+SND1,0.294±0.159 t/s.2.300±0.277,t=12.68,P=0.003).Conclusion:Our study indicates that miR-296-5p may function as a tumor suppressor by targeting SND1 in OS. 展开更多
关键词 mir-296-5p OSTEOSARCOMA SND1 Tumor suppressor MIRNA
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