吉马酮通过调控miR-297表达对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响

目的:探讨吉马酮对H_(2)O_(2)诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响及分子机制。方法:分离培养小鼠海马神经元,将其分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吉马酮低、中、高(50,100,200μmol·L^(-1))浓度组、H_(2)O_(2)+miR-NC组、H_(2)O_(2)+miR-297组、H_(2)O_(2)+吉马酮(200μmol·L^(-1))+anti-miR-NC组、H_(2)O_(2)+吉马酮(200μmol·L^(-1))+anti-miR-297组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-297表达水平。结果:吉马酮低、中、高浓度处理后,H_(2)O_(2)诱导的小鼠海马神经元中细胞凋亡率、Bax表达水平和MDA含量降低,Bcl-2表达水平、SOD活性和miR-297表达水平升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。miR-297过表达可降低H_(2)O_(2)诱导的海马神经元细胞凋亡率和MDA含量,提高SOD活性(P<0.05)。抑制miR-297表达逆转了吉马酮对H_(2)O_(2)诱导的海马神经元细胞凋亡和氧化应激的作用。结论:吉马酮可能通过上调miR-297表达抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激。

高血压患者血管内皮功能障碍的影响因素分析及血清miR-297a、miR-143水平对其的预测价值

目的探讨高血压患者血管内皮功能障碍的发生情况及影响因素,以及血清微小RNA(miR)-297a、miR-143水平用于预测高血压患者发生血管内皮功能障碍的价值。方法将2018年3月至2020年1月于该院接受治疗的69例高血压患者纳入研究,依据治疗期间是否发生血管内皮功能障碍分为发生组与未发生组。调查纳入研究者的基线资料,于开始接受治疗当天早晨检测血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、miR-297a、miR-143水平,分析上述指标与高血压患者发生血管内皮功能障碍的关系。结果全部69例高血压患者血管内皮功能障碍的发生率为26.09%(18/69)。两组间年龄、性别、高血压家族史、吸烟史、合并糖尿病情况、酗酒史、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿酸(UA)、纤维蛋白原(FIB)、脂蛋白a(Lp-a)、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)、磷脂(PLIP)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);发生组血清FGF23、MMP-14水平高于未发生组,miR-297a、miR-143水平低于未发生组,差异均有统计学意义(P<0.05);高血压患者血清miR-297a水平与miR-143水平呈正相关(r=0.548,P<0.05);Logistic回归分析显示,血清FGF23、MMP-14是高血压患者发生血管内皮功能障碍的危险因素(OR>1,P<0.05),血清miR-297a、miR-143是高血压患者发生血管内皮功能障碍的保护因素(OR<1,P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-297a、miR-143水平单独及联合检测用于预测高血压患者发生血管内皮功能障碍的曲线下面积(AUC)均大于0.80,预测价值较理想,血清miR-297a、miR-143的cut-off值分别为0.585、1.045。结论高血压患者发生血管内皮功能障碍可能与治疗前血清miR-297a、miR-143低水平有关,可考虑把检测高血压患者血清miR-297a、miR-143水平作为预测患者血管内皮功能障碍发生的方法。

LINC01018通过miR-297调控胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡及放射敏感性

目的:探讨长基因间非编码RNA(long intergene non-coding RNA,LINC)01018是否通过抑制miR-297调控胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡及放射敏感性。方法:收集于青海省第五人民医院接受手术的胃癌患者(21例)及化疗抵抗胃癌患者(19例)的癌组织和癌旁组织,以q PCR检测胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018、miR-297的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01018与miR-297之间的靶向关系。在HGC-27细胞中转染LINC01018过表达质粒pcDNALINC01018或miR-297抑制剂,或共转染pcDNA-LINC01018和miR-297模拟物,以qPCR检测验证细胞转染效果。MTT和克隆形成实验检测转染后HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力,流式细胞术检测转染后HGC-27细胞的凋亡率,克隆形成实验检测各组转染后HGC-27细胞的放射敏感性,WB实验检测细胞中Ki67、cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白的表达。结果:与癌旁组织或胃正常黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018呈低表达、miR-297呈高表达(均P<0.01)。LINC01018与miR-297存在靶向结合关系,LINC01018负向调控miR-297的表达。过表达LINC01018或敲减miR-297可抑制HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力、降低细胞存活率,促进细胞的凋亡、下调Ki67和pro-caspase3蛋白表达水平、上调cleaved-caspase3蛋白表达水平、提高HGC-27细胞的放射敏感性(均P<0.01)。共转染pcDNA-LINC01018和miR-297模拟物可逆转过表达LINC01018对HGC-27细胞的所有上述作用,尤其可逆转其对HGC-27细胞的放射增敏作用(P<0.05或P<0.01)。结论:LINC01018通过下调miR-297表达抑制胃癌HGC-27细胞增殖而促进凋亡和增强细胞的放射敏感性,该作用与Ki67和caspase3的表达变化有关。

ZEB1-AS1靶向微RNA-297调控脂多糖诱导的人牙周膜细胞损伤

目的探讨ZEB1-AS1对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞损伤的影响和可能机制。方法体外培养人牙周膜细胞,分为对照组(Con组)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-ZEB1-AS1组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-297组、LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组和LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-297组,RT-PCR法检测细胞中ZEB1-AS1和miR-297表达水平,酶联免疫吸附法检测TNF-α和IL-1β表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZEB1-AS1和miR-297调控关系。结果与Con组比较,LPS组ZEB1-AS1(3.65±0.24比1.00±0.07)、TNF-α[(8.87±0.73)ng/ml比(3.26±0.31)ng/ml]和IL-1β[(6.06±0.47)ng/ml比(1.96±0.14)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(23.58±2.04)%比(7.69±0.45)%]和Bax蛋白水平(0.78±0.05比0.30±0.02)均升高(P<0.05),miR-297(0.49±0.05比1.00±0.05)和Bcl-2蛋白水平(0.21±0.02比0.63±0.04)均降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-ZEB1-AS1组TNF-α[(5.05±0.41)ng/ml比(8.95±0.58)ng/ml]和IL-1β[(3.35±0.27)ng/ml比(6.11±0.57)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(11.53±1.07)%比(24.08±2.33)%]和Bax蛋白水平(0.39±0.04比0.79±0.07)降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(0.56±0.04比0.20±0.02,P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-297组TNF-α[(6.11±0.56)ng/ml比(9.14±0.62)ng/ml]和IL-1β[(3.93±0.27)ng/ml比(6.53±0.32)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(14.04±1.05)%比(25.45±2.34)%]和Bax蛋白水平(0.43±0.03比0.80±0.05)降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(0.52±0.05比0.19±0.02,P<0.05)。ZEB1-AS1在人牙周膜细胞中负调控miR-297表达。与LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较,LPS+si-ZEB1-AS1+anti-miR-297组TNF-α[(7.56±0.54)ng/ml比(4.94±0.35)ng/ml]和IL-1β[(5.25±0.32)ng/ml比(3.04±0.23)ng/ml]水平、细胞凋亡率[(19.92±1.05)%比(10.64±1.02)%]和Bax蛋白水平(0.67±0.04比0.39±0.03)升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(0.30±0.02比0.58±0.04,P<0.05)。结论下调ZEB1-AS1可能通过靶向负调控miR-297降低LPS诱导的人牙周膜细胞炎症反应和凋亡,减轻细胞损伤。