人参皂苷Rg1上调miR-298抑制胰腺癌肿瘤生长

目的探讨人参皂苷Rg1对胰腺癌的影响及调控机制。方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)检测0、2.5、5、10、20μmol/L人参皂苷Rg1对人胰腺癌细胞PANC-1细胞活力的影响,流式细胞术检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞凋亡的影响,Western blot检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞BCL-2相关X蛋白(BAX)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(BCL2)表达的影响,Transwell实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人参皂苷Rg1对PANC-1细胞miR-298水平的影响;将胰腺癌细胞分为三组:对照组、人参皂苷Rg1组和人参皂苷Rg1+miR-298 inhibitor组,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测BAX和BCL2蛋白的表达;构建胰腺癌荷瘤小鼠,进行人参皂苷Rg1处理,观察瘤体组织大小和重量变化,Western blot检测瘤体组织中BAX和BCL2蛋白的表达,qRT-PCR检测瘤体组织miR-298水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L人参皂苷Rg1处理的胰腺癌PANC-1细胞活力下降[(60.63±3.66)%、(38.53±3.36)%、(31.57±2.90)%比(100.00±6.34)%,P<0.01],细胞凋亡比例升高,细胞迁移能力下降,miR-298水平升高[(3.42±0.73)比(1.00±0.12),P<0.01];miR-298抑制剂可逆转人参皂苷Rg1处理后的细胞增殖[(69.37±4.02)%比(40.10±3.79)%,P<0.01]、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,下调细胞BAX蛋白表达,上调BCL2蛋白表达。与对照组比较,人参皂苷Rg1处理的胰腺癌荷瘤小鼠瘤体生长减缓,小鼠皮下瘤组织中miR-298[(4.42±0.73)比(1.00±0.13),P<0.01]表达上升。结论人参皂苷Rg1通过上调miR-298抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,在胰腺癌中发挥抑癌作用。

miR-298通过靶向结合CHN1抑制胃腺癌细胞增殖

目的 探讨miR-298靶向结合α-嵌合蛋白(CHN1)对胃腺癌细胞增殖的影响及潜在作用机制。方法 采用生物信息学分析CHN1在胃腺癌中的表达及其与临床表型的关系、miR-298与CHN1的靶向关系,并通过双荧光素酶报告实验验证miR-298对靶基因CHN1的直接靶向调控作用。通过细胞转染构建稳定敲低CHN1的SGC-7901和BGC-823细胞系,利用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术、LDH释放检测、体内移植瘤实验、免疫组化、qRT-PCR、Western-blot实验检测CHN1低表达对胃腺癌SGC-7901、BGC-823细胞增殖、凋亡及细胞周期等的影响。结果 CHN1在胃腺癌中高表达,且与AJCC临床分期、AJCC T分期、分化程度、AJCC N分期、AJCC M分期、预后有关(P<0.05),CHN1高表达者的总生存率、无病生存率均低于CHN1低表达者(P<0.05)。敲低CHN1表达后细胞OD值、克隆形成率、处于G0/G1期的细胞比例及Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2蛋白表达水平均下降(P<0.05),处于S期的细胞比例、LDH释放、细胞凋亡率、BAX蛋白表达水平均升高(P<0.05)。敲低CHN1的小鼠瘤体体积、质量及CHN1蛋白表达水平下降(P<0.05)。miR-298能靶向CHN1影响胃腺癌细胞增殖、克隆形成率、处于G0/G1期的细胞比例、Ki67蛋白表达水平(P<0.05)。结论 miR-298在胃腺癌中低表达,其可能通过靶向结合CHN1影响胃腺癌细胞周期,抑制癌细胞的增殖,并促进其凋亡,可为胃腺癌的诊断及治疗提供参考。

miR-298通过抑制TAZ改善耐药肺癌细胞株的耐药性

目的:寻找在肺癌耐药性生成中起到调节作用的miRNA,研究miR-298在肺癌耐药细胞株中的表达规律及作用,探讨miR-298通过靶向TAZ调节耐药肺癌细胞株的作用,为肺癌寻找新的治疗靶点。方法:利用生物信息学技术分析顺铂耐药与敏感的肺癌病人中差异表达的miRNA,通过建立顺铂耐药的肺癌细胞株模型,验证miR-298表达下调。利用miR-298 mimics转染,验证miR-298对耐药肺癌细胞株的作用,通过转染WB,RT-PCR、双荧光素酶报告实验验证miR-298对TAZ的靶向调控作用,通过转染TAZ-siRNA检测TAZ在肺癌耐药株中的作用。结果:我们通过生物信息学技术发现miR-298在顺铂耐药的肺癌病人标本中低表达,在顺铂耐药肺癌细胞呈低表达,通过miR-298 mimics转染可以增高miR-298的表达量,可以在一定程度上改善顺铂的耐药性,同时抑制细胞的克隆形成。TAZ在肺癌耐药细胞中表达增高,miR-298可以靶向下调TAZ的表达,而敲低顺铂耐药细胞株中的TAZ,可以改善顺铂耐药,抑制细胞克隆形成。结论:miR-298在肺癌耐药中发挥重要的调节作用,通过上调miR-298可以改善肺癌的耐药性,miR-298可能是通过靶向抑制TAZ发挥作用的。

LncRNA 01287靶向miR-298介导STAT3通路增强胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的探讨长链非编码RNA 01287(LncRNA 01287)通过靶向调节微小RNA(miR-298)对胃癌细胞生物活性的影响,以及对信号传导和转录激活因子3(STAT3)通路的调节作用。方法胃癌SGC-7901细胞随机分为对照组、模拟物阴性对照组(mimic-NC组)、模拟物组(mimic组)、抑制剂阴性对照组(inhibitor-NC组)以及抑制剂组(inhibitor组),除对照组外,其余组分别转染mimic NC、mimic、inhibitor NC以及inhibitor,qRT-PCR检测LncRNA 01287和miR-298的表达水平,MTT法检测细胞存活率、划痕实验检测细胞迁移能力、侵袭实验检测细胞侵袭能力,双荧光素酶报告基因法检测LncRNA 01287和miR-298以及miR-298和STAT3的靶向关系,蛋白印迹法检测p-STAT3、上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vimentin)相对表达量。结果LncRNA 01287靶向作用于miR-298,miR-298靶向作用于STAT3;与mimic-NC组比较,mimic组LncRNA 01287表达水平、划痕愈合率、侵袭细胞数以及p-STAT3、N-cad和Vimentin蛋白相对表达量升高,miR-298表达水平以及E-cad蛋白相对表达量降低(P<0.05);与inhibitor-NC组比较,inhibitor组LncRNA 01287表达水平、细胞存活率、划痕愈合率、侵袭细胞数以及p-STAT3、N-cad和Vimentin蛋白相对表达量降低,miR-298表达水平以及E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论LncRNA 01287通过靶向调节miR-298表达激活STAT3信号通路,促进胃癌细胞生物活性。

miR-298调控Notch1对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-298对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响及其可能的机制。方法通过q PCR检测不同骨肉瘤细胞株中miR-298及Notch1的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-298的靶基因,并使用荧光光素酶报告基因及免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;将miR-298 mimics转染至骨肉瘤143B细胞中构建miR-298过表达模型,同时将Notch1 siRNA转染至骨肉瘤143B细胞中构建Notch1低表达模型,通过甲基噻唑基四唑(MTT)实验检测细胞的增殖能力、划痕实验检测细胞的迁移能力、Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 miR-298在骨肉瘤细胞株呈低表达水平,而Notch1在骨肉瘤细胞中呈过表达状态,增强miR-298的表达,骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著减弱(P <0. 05)。双荧光素酶报告基因结果显示增强miR-298的表达后,Notch1的表达及活性相应下调,Notch1蛋白表达水平降低(P <0. 05)。抑制Notch1的表达,骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著减弱(P <0. 05)。结论 miR-298可负向调控Notch1的表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。