CircACAP2靶向miR-29a-3p/CCNT2轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的:探讨CircACAP2靶向miR-29a-3p/细胞周期蛋白T2(CCNT2)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:将H9c2细胞分为Control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、Model组(建立H/R模型)、si-CircACAP2组(转染si-CircACAP2)、si-CircACAP2+inhibitor-NC组(si-CircACAP2和inhibitor-NC共转染)、si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组(si-CircACAP2和miR-29a-3p inhibitor共转染);实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测H9c2细胞中CircACAP2、miR-29a-3p的表达水平;四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测H9c2细胞自噬;乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测H9c2细胞上清中LDH、MDA、SOD水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白(Beclin-1、P62)及CCNT2的表达;双荧光素酶报告检测CircACAP2对miR-29a-3p的靶向关系和miR-29a-3p对CCNT2的靶向关系。结果:与Control组比较,Model组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);与Model组比较,si-CircACAP2组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达降低,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达升高(P<0.05);与si-CircACAP2组比较,si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组H9c2细胞中CircACAP2表达差异无统计学意义(P>0.05),凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);CircACAP2靶向调控miR-29a-3p的表达,miR-29a-3p靶向负调控CCNT2的表达。结论:敲低CircACAP2可能通过靶向miR-29a-3p来下调CCNT2表达,进而抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡、自噬能力及氧化应激,促进细胞增殖,发挥保护作用。