miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制分析

目的探讨miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制。方法进行人心脏瓣膜间质细胞培养与钙化诱导,设置对照组(Control)、钙化模型组(Model)、模型组+miR-302b-3p mimics NC组(miR-302b-3p mimics NC)、模型组+miR-302b-3p mimics组(miR-302b-3p mimics)、模型组+miR-302b-3p inhibitor NC组(miR-302b-3p inhibitor NC)、模型组+miR-302b-3p inhibitor组(miR-302b-3p inhibitor),共6组。通过细胞转染、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、MTT检测细胞活性、实时荧光定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测实验,检测相关分子的表达水平与活性变化。结果与Control组比较,Model组中miR-302b-3p、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平升高(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力升高,N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GALNT3)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)蛋白的表达水平降低(P均<0.05)。与Model组比较,miR-302b-3p mimics组miR-302b-3p和FGF23蛋白的表达水平升高(P均<0.05),OPN、OCN、RUNX2、GALNT3、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平降低(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力降低。miR-302b-3p inhibitor组则呈现相反的变化。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,与miR-302b-3p mimics+wt组相比,miR-302b-3p mimics NC+wt组相对荧光素酶活性升高(P<0.05),miR-302b-3p mimics+mut组与miR-302b-3p mimics NC+mut组相比,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-302b-3p可抑制细胞钙化及增殖,通过负向调控GALNT3的表达水平,调控FGF23/PI3K/AKT通路来影响主动脉瓣膜的钙化过程。

Ang-2、miR-302b、IL-6在心肌梗死伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值

目的:探讨促血管生成素2(Ang-2)、微小RNA-302b(miR-302b)、白细胞介素-6(IL-6)在急性心肌梗死(AMI)伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值。方法:选取2019年1月~2021年12月中山大学附属第三医院粤东医院AMI伴肺部感染患者49例作为感染组,同期选取62例AMI患者作为未感染组。统计两组入院时、入院48 h后、出院时Ang-2、miR-302b、IL-6水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及ROC曲线下面积(AUC),分析血液各指标单一或联合诊断AMI伴肺部感染价值,并根据是否发生心肌损伤分为中重度心肌损伤(n=26)和轻度心肌损伤(n=23),比较入院时、入院48 h后、出院时血液各指标及心肌酶谱指标[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、谷草转氨酸(AST)],分析两者相关性。结果:入院48 h后两组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,感染组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05);联合诊断AMI伴肺部感染价值的AUC>入院48 h后Ang-2>入院48 h后miR-302b>入院48 h后IL-6,差异有统计学意义(P<0.05);入院48 h后中重度心肌损伤及轻度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,中重度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于轻度心肌损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05);Ang-2、miR-302b、IL-6均与CK-MB、cTnI、AST呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ang-2、miR-302b、IL-6在AMI伴肺部感染患者中呈高表达,具有较高的疾病诊断价值,且与心肌损伤呈显著正相关。

草苁蓉多糖下调miR-302a-3p表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨草苁蓉多糖(boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,不同剂量的BRPS处理H9c2细胞;酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;流式细胞术检测凋亡率;qRT-PCR检测miR-302a-3p的表达量;anti-miR-NC、anti-miR-302a-3p分别转染至H9c2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-302a-3p mimics分别转染至H9c2细胞后加入100 mg·L^(-1)BRPS处理24 h,进行H/R处理;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达;线软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-302a-3p和LRP8的靶向关系;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)的表达量。结果BRPS降低H/R诱导的H9c2细胞中MDA的水平、miR-302a-3p的表达量、细胞凋亡率、Bax表达(P<0.05),提高SOD、GSH-Px、Bcl-2(P<0.05);转染anti-miR-302a-3p后,MDA的水平、细胞凋亡率、Bax表达下调(P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2上调(P<0.05);转染miR-302a-3p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和Bcl-2降低(P<0.05)。miR-302a-3p靶向调节LRP8,且BRPS通过下调miR-302a-3p上调LRP8基因的表达。结论BRPS通过调节miR-302a-3p/LRP8轴减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染MT+mi R-302d组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

LncRNA LINC01194在非小细胞肺癌中对miR-302e的影响及机制研究

目的:初步探索长链非编码RNA(lncRNA LINC01194)在非小细胞肺癌(NSCLC)中对miR-302e的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测NSCLC组织、癌旁组织和人肺正常上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞株中lncRNA LINC01194、miR-302e表达,筛选最佳干预细胞系;将NCI-H1975细胞分为:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01194组(转染si-LINC01194)、si-LINC01194+anti-miR-NC组(si-LINC01194和anti-miR-NC共转染)、si-LINC01194+anti-miR-302e组(si-LINC01194和anti-miR-302e共转染);qRT-PCR检测细胞中lncRNA LINC01194、miR-302e的表达;MTT法、平板克隆实验、Transwell小室、流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移及侵袭、凋亡;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC01194与miR-302e靶向调控关系。结果:在NSCLC组织和细胞中,lncRNA LINC01194表达水平升高,miR-302e表达水平降低(P<0.05);抑制lncRNA LINC01194表达可显著抑制NCI-H1975细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-302e表达可逆转抑制lncRNA LINC01194表达对NCI-H1975细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA LINC01194与miR-302e存在靶向调控关系。结论:在NSCLC组织和细胞中lncRNA LINC01194上调表达,miR-302e下调表达,抑制lncRNA LINC01194可通过上调miR-302e表达,从而抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。

吸入糖皮质激素对毛细支气管炎患儿血miR-302e、NF-κB RNA表达的治疗观察

目的观察毛细支气管炎患儿miR-302e、NF-κB RNA的表达水平及雾化吸入糖皮质激素对其的治疗作用。方法收集毛支患儿分为激素组、非激素组各30例,急性期、恢复期各采集血标本,收集门诊体检健康儿31例为对照组,采集血标本。采用RT-PCR法检测各组血miR-302e、NF-κB RNA的表达水平。结果急性期毛支激素组、非激素组患儿血miR-302e的表达水平[(1.21±0.07)pg/ml,(1.22±0.09)pg/ml]均显著低于对照组[(1.51±0.09)pg/ml],而NF-κB RNA的表达水平[(0.63±0.13)pg/ml,(0.66±0.12)pg/ml]显著高于对照组[(0.43±0.09)pg/ml]。经吸入糖皮质激素治疗后,恢复期毛支激素组患儿血miR-302e的表达水平[(1.48±0.11)pg/ml]显著高于非激素组[(1.36±0.09)pg/ml],而NF-κB RNA的表达水平[(0.39±0.09)pg/ml]显著低于非激素组[(0.47±0.11)pg/ml]。经Pearson等级相关分析,毛支患儿血miR-302e的表达水平与NF-κB RNA的表达水平呈显著负相关(r=-0.727,P<0.01),miR-302e的表达水平与入院临床症状评分呈负相关(r=-0.845,P<0.01)。结论吸入糖皮质激素能上调毛支血miR-302e的表达,抑制NF-κB RNA的表达从而发挥抗炎作用。

结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值探究

背景越来越多的长非编码RNA与微小RNA被发现在肿瘤的发生和发展中表达量变化显著,能够影响抑癌基因或者癌基因的表达,在癌细胞的增殖、转移中发挥了重要的作用.目的探究结肠癌组织长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA(miR)-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值.方法选取2017-01/2022-03金华市中医医院97例结肠癌患者,观察比较不同组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达,分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床病理特征的相关性;比较不同LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达患者复发情况,分析结肠癌术后复发影响因素,并分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p交互作用对结肠癌复发的影响,评价LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达对结肠癌术后复发的预测价值.结果结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均低于癌旁组织(P<0.05);结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);结肠癌组织中LncRNA MEG3、miR-302b-3p高表达组1年内复发率低于LncRNA MEG3、miR-302b-3p低表达组(P<0.05);分化程度、临床分期、淋巴结转移均为结肠癌复发危险因素,癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均为结肠癌复发保护因素(P<0.05);交互作用分析显示,LncRNA MEG3、miR-302b-3p同时暴露的协同效应是LncRNA MEG3或miR-302b-3p单纯暴露产生效应的15.888倍,且二者同时暴露时,结肠癌复发风险中有56.98%归因于二者协同作用;LncRNA MEG3、miR-302b-3p预测结肠癌患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)(95%CI)分别为0.720(0.620-0.807)、0.767(0.670-0.847),二者联合预测AUC(95%CI)为0.892(0.813-0.946),明显高于LncRNA MEG3、miR-302b-3p单独预测,最佳敏感度及特异度分别为92.31%、83.33%.结论结肠癌患者癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达下调,与临床分期有关,临床检测其表达可用于明确肿瘤恶性程度、预测手术治疗预后,为临床后续治疗方案调整提供参考依据.

miR-302c调控CXCL8表达抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨miR-302c调控CXC趋化因子配体8(CXCL8)表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响。方法:收集行手术治疗的ESCC病人ESCC组织和其对应的癌旁组织,以及人ESCC细胞系Eca109、Ec9706、TE-11、TE-10、食管正常上皮细胞系Het-1A为研究对象,qRT-PCR检测miR-302c表达;利用LipofectamineTM2000转染试剂盒对Eca109细胞进行转染,分组为:空白组(细胞未转染)、miR-NC组、miR-302c mimics组、si-CXCL8组、si-NC组、miR-302c mimics+OE-NC组、miR-302c mimics+OE-CXCL8组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-302c表达;MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测各组细胞侵袭情况;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-302c与CXCL8靶向关系;Western blotting检测CXCL8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:miR-302c在ESCC组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05),与人食管正常上皮细胞系Het-1A比较,人ESCC细胞系Eca109、Ec9706、TE-11、TE-10中miR-302c表达水平降低(P<0.05),且Eca109细胞中miR-302c表达水平最低,因此,选择Eca109细胞进行后续研究;miR-302c靶向负调控CXCL8表达;上调miR-302c和沉默CXCL8均能抑制Eca109细胞的增殖与侵袭,并降低Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);过表达CXCL8可逆转上调miR-302c对Eca109细胞增殖与侵袭的影响。结论:上调miR-302c表达可通过靶向抑制CXCL8表达,抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

12个物种miR-302基因簇的生物信息学分析

很多microRNA(miRNA)基因在基因组上聚集排列形成miRNA基因簇。miRNA基因簇在进化上较为保守,有其特殊的生物学意义。miR-302基因簇在胚胎干细胞中特异表达,对胚胎干细胞的自我更新和多潜能维持有重要的作用。本文采用miRBase数据库查询和BLAST同源搜索方法共搜寻并分析了12个物种的miR-302基因簇。生物信息学分析表明,这些物种miR-302基因簇均位于LARP7蛋白基因的内含子区,但转录方向与LARP7基因转录方向相反。序列相似性分析显示,同一物种miR-302簇成员间以及不同物种相应miR-302簇成员间相似性均较高。进化分析表明,基因复制可能是miR-302基因簇进化的主要驱动力。

胃癌患者组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a的表达及其与胃癌的相关性研究

目的探讨转化生长因子-α(TGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β1)和微小RNA-302a(miR-302a)在胃癌患者组织中的表达及其与胃癌的相关性。方法选取2016年6月至2018年6月唐山市人民医院收治的92例胃癌患者作为研究对象,患者均接受手术治疗,手术过程中取病灶组织,设为胃癌组;选择癌旁组织(距离病灶≥3 cm),设为对照组。采用实时荧光PCR检测技术测定92组织样本中miR-302a的表达量,同时采用免疫组化法检测组织样本中TGF-α和TGF-β1的表达水平;并分析其与胃癌分级、淋巴转移和TNM分期等的相关性。结果胃癌组织中TGF-β1呈强阳性表达,在胃癌组织旁增殖区域及旺盛增殖区域呈现弱阳性表达,在正常黏膜中呈现弱阳性或阴性表达。胃癌组中TGF-α和TGF-β1表达水平明显高于对照组(P<0.01),胃癌组miR-302a表达水平明显低于对照组(P<0.01)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与年龄、性别无统计意义(P>0.05);胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关(P>0.05)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与患者临床分期呈正相关性(P<0.05)。结论TGF-α、TGF-β1和miR-302a在胃癌组织中表达量显著改变,且与肿瘤细胞的TNM分期、分化程度和淋巴结转移相关,提示TGF-α、TGF-β1和miR-302a可能在胃癌的发生、分化和转移过程中起一定作用。

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调(P<0.001)。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。

血清miR-302b在老年急性心肌梗死中的表达及其临床意义

目的探讨血清miR-302b在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的表达及其临床意义。方法选取本院收治的138例老年AMI患者和65例老年体检者,比较两组血清miR-302b、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平变化。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平对老年AMI的诊断价值。采用Pearson相关性分析,分析老年AMI患者miR-302b水平与cTnI、CK-MB的相关性。结果 AMI组血清miR-302b(4.25±1.30 vs. 0.51±0.16)、cTnI(ng/mL:3.17±1.36 vs. 0.04±0.01)及CK-MB(U/L:73.50±19.36 vs. 11.70±2.25)水平均明显高于对照组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.73、1.52 ng/mL、61.30 U/L,三项联合诊断老年AMI的AUC最大为0.935,95%CI(0.872~0.985),其敏感度和特异度分别为94.8%和89.2%。相关分析显示,老年AMI患者血清miR-302b水平与cTnI、CK-MB均呈正相关(r=0.826、r=0.745,P<0.01)。结论血清miR-302b在老年AMI患者中呈高表达,与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的准确性。

炎症相关细胞因子对食管癌细胞株miR-302b表达的影响

目的:研究食管癌细胞在炎症相关细胞因子作用下miR-302b表达情况,以明确miR-302b的表达水平是否与食管癌肿瘤相关性炎症有关。方法:选择4株食管癌细胞及1株永生化食管上皮细胞株作为对照。用含LPS、IL-6、IFN-γ、TGF-β的RPMI 1640培养基以及普通RPMI 1640培养基培养细胞。于刺激0h、12h、24h、48h提取总RNA,qRT-PCR检测miR-302b表达水平。结果:食管癌细胞miR-302b的表达水平较永生化食管上皮细胞的表达水平低;炎症相关细胞因子可以抑制食管癌细胞miR-302b的表达水平,而且随着刺激时间的延长,对miR-302b的抑制率逐渐升高;而永生化食管上皮细胞miR-302b的表达无明显变化。结论:miR-302b的表达与食管癌肿瘤相关性炎症具有相关性。

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞(mESC)增殖和凋亡的影响。方法 mESC分为完全培养基组(对照组),无叶酸培养基组(无叶酸组),无叶酸培养基+miR-302amimic组(miR-302a组),通过RT-PCR进行检测miR-302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR-302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR-302a mimic对mESC活力的影响,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞周期的影响;Western blot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27表达的影响。结果 RT-PCR证实无叶酸组中miR-302a表达量下降(P<0.01)。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无叶酸组比较,miR-302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用

目的研究miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用。方法通过qRT-PCR检测ESCC癌症组织与癌旁组织中miR-302b的表达量,并在炎症刺激后观察食管鳞癌TE-10细胞的增殖与侵袭能力,以及miR-302b与癌症相关性炎症(cancer related inflammation,CRI)相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量变化;通过转染改变miR-302b的表达水平,观察TE-10细胞的增殖与侵袭能力以及IRF2、ERBB4、CXCR4蛋白的表达量。结论 ESCC组织中miR-302b表达量显著减少;miR-302b可以通过减少肿瘤相关性验证CRI相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量来抑制TE-10细胞的增殖与侵袭,从而抑制ESCC的发生与发展。

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。

miR-302b过表达对人舌癌细胞株TSCCa增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-302b过表达对人舌癌细胞株TSCCa增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法用miR-302b-NC和miR-302b mimic转染舌癌细胞TSCCa,命名为miR-302b-NC组和miR-302b mimic组,以未转染的细胞为对照,转染48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TSCCa细胞中miR-302b的表达情况,分别采用MTT实验、划痕实验和Transwell小室检测TSCCa细胞增殖、迁移和侵袭能力,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测TSCCa细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达情况。结果流式细胞仪检测结果显示转染效率达85%以上;转染后,miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa中miR-302b的表达水平明显高于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05); miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa增殖率、迁移能力和侵袭能力显著低于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05); miR-302b mimic组人舌癌细胞TSCCa中PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平明显低于对照组和miR-302b-NC组(P <0. 05)。结论 miR-302b过表达能够抑制人舌癌细胞TSCCa增殖、迁移和侵袭,推测这一作用是通过调控PCNA、MMP-2、MMP-9的表达水平实现的,为舌癌的靶向治疗提供一定的理论依据。

miR-302b在结肠癌组织中的表达及意义

目的:检测不同结肠组织(结肠癌、癌旁组织、结肠腺瘤性息肉组织)中miR-302b的表达差异,明确其与结肠癌临床病理参数的关系.方法:采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测30例结肠腺瘤组织和60对结肠癌及其癌旁组织中miR-302b的表达,分析结肠癌中miR-302b表达与临床病理特征之间的关系.结果:miR-302b在结肠癌组织、腺瘤性息肉、癌旁组织的表达依次升高,且各组间表达的差异有统计学意义(P<0.05).在结肠癌中,miR-302b在不同肿瘤分化程度、淋巴结是否转移、有无远处转移组间表达有显著差异(P<0.05).结论:miR-302b在结肠癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能.

miR-302b在糖尿病肾病中抑制高糖诱导上皮间质细胞转化的研究

目的糖尿病肾病(DN)是一种糖尿病血管并发症,其发病机制仍然复杂。本研究旨在探讨糖尿病肾病发展过程中,miR-302b在高糖诱导上皮间质细胞转化(EMT)过程中的潜在作用,并揭示其可能的分子机制。方法用高糖(30 mM)处理足细胞与上皮细胞,构建糖尿病肾病模型。用病毒包装法打包miR-302b中的过表达载体,然后转染到足细胞与上皮细胞中。结果在miR-302b的过表达影响下,与上皮间质细胞转化相关的蛋白分子,包括Slug蛋白、Snail蛋白、波形蛋白和纤连蛋白都显著降低,而E-钙黏蛋白、β-连环蛋白、α-连环蛋白显著增加。结论研究结果表明,miR-302b的过表达是通过抑制高糖诱导上皮间质细胞转化过程,从而在糖尿病肾病中起保护作用。