草苁蓉多糖下调miR-302a-3p表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨草苁蓉多糖(boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,不同剂量的BRPS处理H9c2细胞;酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;流式细胞术检测凋亡率;qRT-PCR检测miR-302a-3p的表达量;anti-miR-NC、anti-miR-302a-3p分别转染至H9c2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-302a-3p mimics分别转染至H9c2细胞后加入100 mg·L^(-1)BRPS处理24 h,进行H/R处理;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达;线软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-302a-3p和LRP8的靶向关系;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)的表达量。结果BRPS降低H/R诱导的H9c2细胞中MDA的水平、miR-302a-3p的表达量、细胞凋亡率、Bax表达(P<0.05),提高SOD、GSH-Px、Bcl-2(P<0.05);转染anti-miR-302a-3p后,MDA的水平、细胞凋亡率、Bax表达下调(P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2上调(P<0.05);转染miR-302a-3p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和Bcl-2降低(P<0.05)。miR-302a-3p靶向调节LRP8,且BRPS通过下调miR-302a-3p上调LRP8基因的表达。结论BRPS通过调节miR-302a-3p/LRP8轴减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调(P<0.001)。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。

胃癌患者组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a的表达及其与胃癌的相关性研究

目的探讨转化生长因子-α(TGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β1)和微小RNA-302a(miR-302a)在胃癌患者组织中的表达及其与胃癌的相关性。方法选取2016年6月至2018年6月唐山市人民医院收治的92例胃癌患者作为研究对象,患者均接受手术治疗,手术过程中取病灶组织,设为胃癌组;选择癌旁组织(距离病灶≥3 cm),设为对照组。采用实时荧光PCR检测技术测定92组织样本中miR-302a的表达量,同时采用免疫组化法检测组织样本中TGF-α和TGF-β1的表达水平;并分析其与胃癌分级、淋巴转移和TNM分期等的相关性。结果胃癌组织中TGF-β1呈强阳性表达,在胃癌组织旁增殖区域及旺盛增殖区域呈现弱阳性表达,在正常黏膜中呈现弱阳性或阴性表达。胃癌组中TGF-α和TGF-β1表达水平明显高于对照组(P<0.01),胃癌组miR-302a表达水平明显低于对照组(P<0.01)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与年龄、性别无统计意义(P>0.05);胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关(P>0.05)。胃癌组织中TGF-α、TGF-β1和miR-302a表达水平与患者临床分期呈正相关性(P<0.05)。结论TGF-α、TGF-β1和miR-302a在胃癌组织中表达量显著改变,且与肿瘤细胞的TNM分期、分化程度和淋巴结转移相关,提示TGF-α、TGF-β1和miR-302a可能在胃癌的发生、分化和转移过程中起一定作用。

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞(mESC)增殖和凋亡的影响。方法 mESC分为完全培养基组(对照组),无叶酸培养基组(无叶酸组),无叶酸培养基+miR-302amimic组(miR-302a组),通过RT-PCR进行检测miR-302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR-302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR-302a mimic对mESC活力的影响,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR-302amimic对mESC细胞周期的影响;Western blot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27表达的影响。结果 RT-PCR证实无叶酸组中miR-302a表达量下降(P<0.01)。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无叶酸组比较,miR-302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

miR-302a-3p在食管鳞癌中的表达及临床意义

为探讨miR-302a-3p在食管鳞癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学特征和食管鳞癌患者临床病理特征的影响,qRT-PCR检测食管鳞癌组织和对应癌旁组织,以及食管鳞癌细胞ECA109和正常食管上皮细胞HEEC中miR-302a-3p的表达;ECA109细胞处理后分为NC组、miR-NC组和miR-302a-3p mimic组,MTT检测各组细胞的活力,Transwell试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力;TUNEL试验检测各组细胞的凋亡情况;卡方检验分析miR-302a-3p与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果表明:miR-302a-3p在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞ECA109中低表达;与miR-NC组相比,miR-302a-3p mimic组ECA109细胞增殖能力和迁移能力明显减弱(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。临床数据分析显示,miR-302a-3p表达与食管鳞癌的分化程度、临床分期、TNM分期和转归(P<0.01)相关。这一研究提示miR-302a-3p通过抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在食管鳞癌的发展中起到肿瘤抑制作用,其低表达有望成为预测食管鳞癌患者不良预后的潜在生物标志物。

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。

lncRNA XIST靶向miR-302a-3p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的调控机制

目的 探讨lncRNA X染色体失活特异转录因子(XIST)靶向miR-302a-3p对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的调控机制。方法 SW1353细胞分为Control组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-XIST组、IL-1β+si-PDK1组、IL-1β+si-XIST+miR-NC inhibitor组、IL-1β+si-XIST+miR-302a-3p inhibitor组。检测XIST、miR-302a-3p以及3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)mRNA表达;噻唑蓝(MTT)实验测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10)水平;双荧光素酶报告基因检测实验证实miR-302a-3p与XIST或PDK1的靶向关系;免疫印迹法检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)及PDK1蛋白表达。结果 与IL-1β组相比,IL-1β+si-XIST组XIST表达下调,细胞活力升高,凋亡率降低,Bax表达及TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降,Bcl-2表达及IL-4、IL-10水平升高(P<0.05)。XIST直接靶向下调miR-302a-3p表达,miR-302a-3p下调可恢复si-XIST介导的促增殖、抗凋亡和炎症反应作用(P<0.05)。PDK1是miR-302a-3p的靶基因,沉默PDK1可抑制细胞的炎症反应(P<0.05)。结论 敲低XIST可提高IL-1β诱导软骨细胞的细胞活力,减轻OA样软骨细胞损伤,其作用机制与靶向上调miR-302a-3p进而抑制PDK1表达有关。

miR-302a-3p靶向调节FGF19/GSK-3β/Nrf2通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨miR-302a-3p靶向调节成纤维细胞生长因子19(FGF19)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:将H9C2细胞分为Ctrl组、H/R组、inhibitorNC组、miR-302a-3pinhibitor组、miR-302a-3pinhibitor+si-NC组、miR-302a-3pinhibitor+si-FGF19组,检测miR-302a-3p表达、细胞增殖(OD450)、凋亡、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及FGF19、p-GSK-3β、核Nrf2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达变化并探究miR-302a-3p与FGF19的关系。结果:与Ctrl组比较,H/R组H9C2细胞中miR-302a-3p、细胞凋亡率、ROS、MDA水平、Bax、caspase-3、p-GSK-3β蛋白表达升高,FGF19、核Nrf2蛋白表达、OD450值、SOD水平降低(P<0.05);与inhibitor NC组比较,miR-302a-3p inhibitor组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);si-FGF19减弱了下调miR-302a-3p对H/R诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论:下调miR-302a-3p可通过靶向激活FGF19/GSK-3β/Nrf2通路减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

Ang-2、miR-302b、IL-6在心肌梗死伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值

目的:探讨促血管生成素2(Ang-2)、微小RNA-302b(miR-302b)、白细胞介素-6(IL-6)在急性心肌梗死(AMI)伴肺部感染患者早期诊断及心肌损伤评估中的价值。方法:选取2019年1月~2021年12月中山大学附属第三医院粤东医院AMI伴肺部感染患者49例作为感染组,同期选取62例AMI患者作为未感染组。统计两组入院时、入院48 h后、出院时Ang-2、miR-302b、IL-6水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及ROC曲线下面积(AUC),分析血液各指标单一或联合诊断AMI伴肺部感染价值,并根据是否发生心肌损伤分为中重度心肌损伤(n=26)和轻度心肌损伤(n=23),比较入院时、入院48 h后、出院时血液各指标及心肌酶谱指标[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、谷草转氨酸(AST)],分析两者相关性。结果:入院48 h后两组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,感染组血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05);联合诊断AMI伴肺部感染价值的AUC>入院48 h后Ang-2>入院48 h后miR-302b>入院48 h后IL-6,差异有统计学意义(P<0.05);入院48 h后中重度心肌损伤及轻度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平达到峰值,中重度心肌损伤患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于轻度心肌损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05);Ang-2、miR-302b、IL-6均与CK-MB、cTnI、AST呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ang-2、miR-302b、IL-6在AMI伴肺部感染患者中呈高表达,具有较高的疾病诊断价值,且与心肌损伤呈显著正相关。

miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染MT+mi R-302d组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

LncRNA LINC01194在非小细胞肺癌中对miR-302e的影响及机制研究

目的:初步探索长链非编码RNA(lncRNA LINC01194)在非小细胞肺癌(NSCLC)中对miR-302e的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测NSCLC组织、癌旁组织和人肺正常上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞株中lncRNA LINC01194、miR-302e表达,筛选最佳干预细胞系;将NCI-H1975细胞分为:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01194组(转染si-LINC01194)、si-LINC01194+anti-miR-NC组(si-LINC01194和anti-miR-NC共转染)、si-LINC01194+anti-miR-302e组(si-LINC01194和anti-miR-302e共转染);qRT-PCR检测细胞中lncRNA LINC01194、miR-302e的表达;MTT法、平板克隆实验、Transwell小室、流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移及侵袭、凋亡;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC01194与miR-302e靶向调控关系。结果:在NSCLC组织和细胞中,lncRNA LINC01194表达水平升高,miR-302e表达水平降低(P<0.05);抑制lncRNA LINC01194表达可显著抑制NCI-H1975细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-302e表达可逆转抑制lncRNA LINC01194表达对NCI-H1975细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA LINC01194与miR-302e存在靶向调控关系。结论:在NSCLC组织和细胞中lncRNA LINC01194上调表达,miR-302e下调表达,抑制lncRNA LINC01194可通过上调miR-302e表达,从而抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。

结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值探究

背景越来越多的长非编码RNA与微小RNA被发现在肿瘤的发生和发展中表达量变化显著,能够影响抑癌基因或者癌基因的表达,在癌细胞的增殖、转移中发挥了重要的作用.目的探究结肠癌组织长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA(miR)-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值.方法选取2017-01/2022-03金华市中医医院97例结肠癌患者,观察比较不同组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达,分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床病理特征的相关性;比较不同LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达患者复发情况,分析结肠癌术后复发影响因素,并分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p交互作用对结肠癌复发的影响,评价LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达对结肠癌术后复发的预测价值.结果结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均低于癌旁组织(P<0.05);结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);结肠癌组织中LncRNA MEG3、miR-302b-3p高表达组1年内复发率低于LncRNA MEG3、miR-302b-3p低表达组(P<0.05);分化程度、临床分期、淋巴结转移均为结肠癌复发危险因素,癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均为结肠癌复发保护因素(P<0.05);交互作用分析显示,LncRNA MEG3、miR-302b-3p同时暴露的协同效应是LncRNA MEG3或miR-302b-3p单纯暴露产生效应的15.888倍,且二者同时暴露时,结肠癌复发风险中有56.98%归因于二者协同作用;LncRNA MEG3、miR-302b-3p预测结肠癌患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)(95%CI)分别为0.720(0.620-0.807)、0.767(0.670-0.847),二者联合预测AUC(95%CI)为0.892(0.813-0.946),明显高于LncRNA MEG3、miR-302b-3p单独预测,最佳敏感度及特异度分别为92.31%、83.33%.结论结肠癌患者癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达下调,与临床分期有关,临床检测其表达可用于明确肿瘤恶性程度、预测手术治疗预后,为临床后续治疗方案调整提供参考依据.

miR-302c调控CXCL8表达抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨miR-302c调控CXC趋化因子配体8(CXCL8)表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响。方法:收集行手术治疗的ESCC病人ESCC组织和其对应的癌旁组织,以及人ESCC细胞系Eca109、Ec9706、TE-11、TE-10、食管正常上皮细胞系Het-1A为研究对象,qRT-PCR检测miR-302c表达;利用LipofectamineTM2000转染试剂盒对Eca109细胞进行转染,分组为:空白组(细胞未转染)、miR-NC组、miR-302c mimics组、si-CXCL8组、si-NC组、miR-302c mimics+OE-NC组、miR-302c mimics+OE-CXCL8组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-302c表达;MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测各组细胞侵袭情况;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-302c与CXCL8靶向关系;Western blotting检测CXCL8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:miR-302c在ESCC组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05),与人食管正常上皮细胞系Het-1A比较,人ESCC细胞系Eca109、Ec9706、TE-11、TE-10中miR-302c表达水平降低(P<0.05),且Eca109细胞中miR-302c表达水平最低,因此,选择Eca109细胞进行后续研究;miR-302c靶向负调控CXCL8表达;上调miR-302c和沉默CXCL8均能抑制Eca109细胞的增殖与侵袭,并降低Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);过表达CXCL8可逆转上调miR-302c对Eca109细胞增殖与侵袭的影响。结论:上调miR-302c表达可通过靶向抑制CXCL8表达,抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

吸入糖皮质激素对毛细支气管炎患儿血miR-302e、NF-κB RNA表达的治疗观察

目的观察毛细支气管炎患儿miR-302e、NF-κB RNA的表达水平及雾化吸入糖皮质激素对其的治疗作用。方法收集毛支患儿分为激素组、非激素组各30例,急性期、恢复期各采集血标本,收集门诊体检健康儿31例为对照组,采集血标本。采用RT-PCR法检测各组血miR-302e、NF-κB RNA的表达水平。结果急性期毛支激素组、非激素组患儿血miR-302e的表达水平[(1.21±0.07)pg/ml,(1.22±0.09)pg/ml]均显著低于对照组[(1.51±0.09)pg/ml],而NF-κB RNA的表达水平[(0.63±0.13)pg/ml,(0.66±0.12)pg/ml]显著高于对照组[(0.43±0.09)pg/ml]。经吸入糖皮质激素治疗后,恢复期毛支激素组患儿血miR-302e的表达水平[(1.48±0.11)pg/ml]显著高于非激素组[(1.36±0.09)pg/ml],而NF-κB RNA的表达水平[(0.39±0.09)pg/ml]显著低于非激素组[(0.47±0.11)pg/ml]。经Pearson等级相关分析,毛支患儿血miR-302e的表达水平与NF-κB RNA的表达水平呈显著负相关(r=-0.727,P<0.01),miR-302e的表达水平与入院临床症状评分呈负相关(r=-0.845,P<0.01)。结论吸入糖皮质激素能上调毛支血miR-302e的表达,抑制NF-κB RNA的表达从而发挥抗炎作用。

猴头菇多糖联合转化生长因子-β1对胃癌细胞增殖及微小RNA-302a的影响

目的研究猴头菇多糖联合不同剂量转化生长因子-β1(TGF-β1)对胃癌细胞增殖及微小RNA-302a(miR-302a)的影响。方法培养胃腺癌细胞(低分化:BGC-823、SGC7901);设TGF-β1组、猴头菇多糖+TGF-β1组。并根据TGF-β1的剂量分为0 g/L对照组、1 g/L组、5 g/L组、10 g/L组。噻唑蓝(MTT)法检测两组不同剂量TGF-β1培养6 h、12 h、24 h、48 h和72 h肿瘤细胞的作用后细胞增殖情况;实时荧光定量RT-PCR检测细胞mi R-302a的表达;蛋白印迹法检测磷酸化AKT(p-AKT)、3-羧基磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)蛋白的表达;分别将TGF-β1转染到BGC-823、SGC7901细胞,记录TGF-β1和阴性对照(NC)组。结果两组BGC-823、SGC790细胞随着作用时间的延长和TGF-β1剂量的增大,增殖抑制率也逐渐增加,猴头菇多糖+TGF-β1组增殖抑制率均高于TGF-β1组(P<0.05)。且5、10 g/L TGF-β1组作用48~72 h后对胃癌SGC790细胞的抑制作用相当,较其他作用时间比较均具有统计学意义(P<0.05);与0 g/L比较,两组1、5、10 g/L剂量细胞克隆数量均逐渐降低,10 g/L剂量组细胞克隆数量降低最明显(P<0.05);两组对胃癌细胞BGC-823、SGC7901作用48 h后与0 g/L比较,1、5、10 g/L剂量TGF-β1对胃癌细胞BGC-823、SGC7901凋亡率逐渐增长(P<0.05);猴头菇多糖各剂量组mi R-302a的表达均高于TGF-β1组(P<0.05);各组对p-AKT、p-PI3K的表达随着TGF-β1计量的增加而降低,猴头菇多糖+TGF-β1组降低更显著(P<0.05);蛋白印迹法表明mi R-302a的表达可能受到TGF-β1通过p-AKT、p-PI3K的负调控。结论猴头菇多糖+TGF-β1可更有效地抑制胃腺癌细胞BGC-823、SGC7901的增殖,抑制细胞克隆数量。mi R-302a的表达可能受到TGF-β1通过p-AKT、p-PI3K的负调控。

miR-302a在胃癌中表达及其对胃癌细胞凋亡与细胞周期影响

目的研究微小RNA-302a(miRNA-302a)在胃癌标本中的表达水平与临床病理特征的关系,以及其对胃癌细胞的凋亡和细胞周期调控作用,以探讨将miR-302a用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法采用实时PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中miR-302a的相对表达水平,并分析其与对应患者的临床病理资料的相关性。同时,采用RTPCR方法检测miR-302a在胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1中的表达情况;选取miR-302a表达水平最低者为癌细胞,并转染过表达miR-302a的真核重组质粒p CDNA3.1-miR-302a;转染后,采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和PI单染法检测miR-302a对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果胃癌组织中miR-302a的相对表达水平显著低于癌旁正常胃癌黏膜组织(P<0.05),且其表达与临床分期、病理分级和转移均有密切关系(P<0.05)。同时,在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823中miR-302a的相对表达水平显著低于正常细胞GES-1中的表达(P<0.05),且在BGC-823中表达水平最低。p CDNA3.1-miR-302a质粒转染组与空白组和p CDNA3.1质粒转染组比较,miR-302a质粒转染后48 h后细胞凋亡水平显著升高,且G2/M期细胞数显著增高(P<0.05)。结论在胃癌组织和细胞中miR-302a均呈现低水平表达,当miR-302a过表达后,能显著增高胃癌细胞的凋亡水平并使细胞出现G2/M期阻滞,可能成为胃癌治疗的新靶点。

炎症相关细胞因子对食管癌细胞株miR-302b表达的影响

目的:研究食管癌细胞在炎症相关细胞因子作用下miR-302b表达情况,以明确miR-302b的表达水平是否与食管癌肿瘤相关性炎症有关。方法:选择4株食管癌细胞及1株永生化食管上皮细胞株作为对照。用含LPS、IL-6、IFN-γ、TGF-β的RPMI 1640培养基以及普通RPMI 1640培养基培养细胞。于刺激0h、12h、24h、48h提取总RNA,qRT-PCR检测miR-302b表达水平。结果:食管癌细胞miR-302b的表达水平较永生化食管上皮细胞的表达水平低;炎症相关细胞因子可以抑制食管癌细胞miR-302b的表达水平,而且随着刺激时间的延长,对miR-302b的抑制率逐渐升高;而永生化食管上皮细胞miR-302b的表达无明显变化。结论:miR-302b的表达与食管癌肿瘤相关性炎症具有相关性。

血清miR-302b在老年急性心肌梗死中的表达及其临床意义

目的探讨血清miR-302b在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的表达及其临床意义。方法选取本院收治的138例老年AMI患者和65例老年体检者,比较两组血清miR-302b、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平变化。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平对老年AMI的诊断价值。采用Pearson相关性分析,分析老年AMI患者miR-302b水平与cTnI、CK-MB的相关性。结果 AMI组血清miR-302b(4.25±1.30 vs. 0.51±0.16)、cTnI(ng/mL:3.17±1.36 vs. 0.04±0.01)及CK-MB(U/L:73.50±19.36 vs. 11.70±2.25)水平均明显高于对照组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.73、1.52 ng/mL、61.30 U/L,三项联合诊断老年AMI的AUC最大为0.935,95%CI(0.872~0.985),其敏感度和特异度分别为94.8%和89.2%。相关分析显示,老年AMI患者血清miR-302b水平与cTnI、CK-MB均呈正相关(r=0.826、r=0.745,P<0.01)。结论血清miR-302b在老年AMI患者中呈高表达,与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的准确性。

miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用

目的研究miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用。方法通过qRT-PCR检测ESCC癌症组织与癌旁组织中miR-302b的表达量,并在炎症刺激后观察食管鳞癌TE-10细胞的增殖与侵袭能力,以及miR-302b与癌症相关性炎症(cancer related inflammation,CRI)相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量变化;通过转染改变miR-302b的表达水平,观察TE-10细胞的增殖与侵袭能力以及IRF2、ERBB4、CXCR4蛋白的表达量。结论 ESCC组织中miR-302b表达量显著减少;miR-302b可以通过减少肿瘤相关性验证CRI相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量来抑制TE-10细胞的增殖与侵袭,从而抑制ESCC的发生与发展。

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。