长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

血清miR-200a-3p与miR-30a-5p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的分析血清中微小核糖核酸200a-3p(miR-200a-3p)和微小核糖核酸30a-5p(miR-30a-5p)表达在心力衰竭(HF)诊断以及HF患者预后评估中的价值。方法前瞻性选取内蒙古医科大学附属医院2018年4月~2020年4月期间收治的HF患者131例为研究对象(HF组),同时期健康体检志愿者131例为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平;采用Spearman相关分析血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p水平与HF患者病情严重程度的相关性;采用ROC曲线分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p对HF的诊断价值;采用Logistic回归分析HF患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者预后的关系。结果与对照组相比,HF组血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度HF、中度HF和重度HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者病情严重程度呈正相关(r_(s)=0.442,r_(s)=0.564,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-200a-3p和miR-30a-5p联合诊断HF较miR-200a-3p和miR-30a-5p单一指标诊断效果更好(P<0.05);Logistic回归分析结果发现,NT-proBNP、LVEF、LVEDD、miR-200a-3p和miR-30a-5p是HF患者预后的影响因素(Waldχ^(2)=4.321~128.193,P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p高表达患者3年生存率低于miR-200a-3p和miR-30a-5p低表达患者(均P<0.05)。结论HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,二者与HF的发生及患者预后相关。

针刺调控脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织miR-301a-5p的表达

目的:通过制备大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型探讨针刺对大鼠缺血侧海马组织miR-301a-5p表达的影响。方法:线栓法制备大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)大鼠模型,利用针刺进行干预。采用改良Garcia评分法检测大鼠神经功能,TTC染色法检测脑梗死体积比,RT-qPCR检测缺血侧海马区miR-301a-5p的表达,并利用在线网站数据库TargetScan8.0、mi-RDB及miRWalk预测miR-301a-5p的靶基因,DAVID数据库对靶基因进行基因本体(GO)分析,HE染色观察细胞病理改变。结果:与MCAO/R组相比,MCAO/R+AC干预组大鼠Garcia评分升高(P<0.05),脑梗死体积减小(P<0.01),缺血侧海马区miR-301a-5p表达量显著增加(P<0.01)。预测miR-301a-5p有交集的靶基因101个,GO分析在生物进程(BP)中发现miR-301a-5p靶基因富集于白细胞介素-6(IL-6)的调控及糖皮质激素反应等相关炎症因子,且在MCAO/R组观察到细胞坏死,炎性细胞浸润,MCAO/R+AC组可见散在的炎性细胞浸润。结论:针刺可降低CIRI大鼠神经功能缺损症状,减少脑梗死体积,其机制可能与激活miR-301a-5p的表达抑制细胞炎症有关。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

miR-30a-5p靶向E2F7阻滞A549细胞周期并抑制其增殖

目的探究miR-30a-5p靶向E2F7调控非小细胞肺癌细胞周期和增殖的机制。方法通过荧光定量(qRT-PCR)验证miR-30a-5p在非小细胞肺癌A549细胞与人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的相对表达水平。在线软件预测了miR-30a-5p的靶基因及其靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-30a-5p和E2F7 mRNA 3’UTR区域的靶向关系。其次在A549细胞中分别转染miR-30a-5p模拟物(miR-30a-5p mimics)和miR-30a-5p抑制剂(miR-30a-5p inhibitor),应用CCK-8细胞计数试剂盒检测A549细胞增殖情况,流式细胞术检测A549细胞凋亡和细胞周期。qRT-PCR和免疫印迹检测细胞周期相关基因和肺腺癌相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果miR-30a-5p在A549细胞中表达水平低于BEAS-2B,且miR-30a-5p靶向结合与E2F7 mRNA 3’UTR 514-520位点,抑制E2F7表达。转染miR-30a-5p mimics抑制A549细胞增殖,并促进A549凋亡。将A549细胞周期阻滞在G 1期。调控肺腺癌相关基因TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达水平。结论非小细胞肺癌A549细胞中miR-30a-5p通过靶向负调控E2F7的表达,调控TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和细胞周期。

miR-30a-5p通过靶向Runx2基因抑制成骨细胞分化

目的:构建绝经后骨质疏松大鼠模型,分析miR-30a-5p在成骨细胞分化中的功能。方法:将SD大鼠分为雌激素组、假手术组和模型组;取胫骨组织进行miRNA测序并差异表达分析;检测miR-30a-5p在各组大鼠骨中的表达含量;通过qRT-PCR检测miR-30a-5p表达对成骨分化标记相关蛋白胶原Ⅰ、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)表达的影响,同时检测对碱性磷酸酶(ALP)活性的影响;双萤光素酶报告基因检测miR-30a-5p对RUNT相关转录因子2(Runx2)的靶向调控作用。结果:miRNA测序分析结果显示,相对于假手术组、雌激素组,模型组有33种共同miRNA表达上调,选取miR-30a-5p作为本研究对象;qRT-PCR进一步验证miR-30a-5p在模型组骨组织中高表达;miR-30a-5p靶向抑制Runx2的表达,且能够抑制OCN、OPN和胶原Ⅰ的表达,降低ALP活性;而同时过表达Runx2后,OCN、OPN和胶原Ⅰ的表达升高,ALP活性增加,Runx2过表达部分缓解miR-30a-5p对成骨细胞分化的抑制作用。结论:miR-30a-5p在骨质疏松大鼠骨组织中表达上调,并能够靶向抑制Runx2的表达,从而抑制成骨细胞分化,促进骨质疏松进展,为骨质疏松症的诊断提供新的生物标志物。

急性缺血性脑血管病患者血清中miR-342-3p和miR-30a-5p表达及临床意义

目的探讨急性缺血性脑血管病患者血清中miR-342-3p和miR-30a-5p的表达及意义。方法选取2022年3月至2023年3月我院收治的急性缺血性脑血管病患者195例作为急性缺血性脑血管病组,另选取同期103例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-342-3p、miR-30a-5p表达水平;相关性行Spearman法分析诊断价值采用受试者工作特征曲线评估。结果与对照组比较,急性缺血性脑血管病组患者血清的miR-342-3p水平显著升高,miR-30a-5p水平均显著降低(P<0.05);急性缺血性脑血管病组与对照组的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压、舒张压相比,差异有统计学意义(P<0.05);两组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等因素相比,差异无统计学意义(P>0.05)。不同神经功能缺失患者血清miR-342-3p、miR-30a-5p、NIHSS评分差异均有统计学意义(P<0.05),且重度组患者血清miR-342-3p水平、NIHSS评分高于轻度组和中度组,miR-30a-5p低于轻度组和中度组(P<0.05)。血清miR-342-3p水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.601,P<0.05);血清miR-30a-5p水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.695,P<0.05)。血清miR-342-3p和miR-30a-5p水平及其联合在诊断急性缺血性脑血管病患者重度神经功能缺失中的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.817、0.877,敏感度分别为68.12%、73.91%、86.96%,两者联合诊断价值高于单独诊断(Z二者联合-miR-342-3p=2.081,P=0.038;Z二者联合-miR-30a-5p=2.026,P=0.043)。结论急性缺血性脑血管病患者血清miR-342-3p血清表达水平升高,miR-30a-5p表达水平降低,二者对急性缺血性脑血管病患者神经功能缺失程度具有一定的诊断价值。

miR-130a-5p靶向Runx2对牙槽骨成骨细胞增殖和分化的影响及其调控机制研究

目的:探究miR-130a-5p靶向Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)对牙槽骨成骨细胞(Alveolar osteoblast,AOB)增殖、凋亡、成骨分化的影响及其机制。方法:将AOB分为NC组、miR-NC组、miR-130a-5p组、miR-130a-5p+Runx2组和miR-130a-5p+SHH组。双荧光素酶报告验证miR-130a-5p对Runx2、Sonic hedgehog(SHH)的调控关系;CCK-8及EdU染色检测细胞增殖能力;AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡能力;ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨分化能力;RT-qPCR检测miR-130a-5p、Runx2、SHH、神经胶质瘤关联癌基因同源物1(Gli1)mRNA水平;Western Blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、Runx2、SHH、Gil1水平。结果:miR-130a-5p靶向调控Runx2、SHH。过表达miR-130a-5p后,细胞24 h、48 h、72 h OD值及EdU阳性率降低,细胞凋亡率升高,成骨分化能力降低,miR-130a-5p、Bax蛋白水平升高,Runx2、PCNA、Ki67、Bcl-2、ALP、OCN、BMP2蛋白及SHH、Gil1 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。过表达miR-130a-5p和Runx2或过表达miR-130a-5p和SHH可减弱过表达miR-130a-5p对细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响。结论:miR-130a-5p靶向Runx2抑制AOB增殖和成骨分化,并促进AOB凋亡,其可能通过抑制SHH信号通路发挥作用。

LncRNAFEZF1-AS1通过miR-130a-5p/CCND1轴促进非小细胞肺癌发展的分子机制研究

目的探讨FEZF1-AS1通过miR-130a-5p/CCND1轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)发展的分子机制。方法利用TCGA数据库分析FEZF1-AS1在NSCLC中的表达,qRT-PCR检测其在NSCLC癌组织与癌旁组织以及NSCLC细胞系中的表达,并分析其与临床特征的关系。利用数据库预测FEZF1-AS1与hsa-miR-130a-5p的结合位点以及hsa-miR-130a-5p与CCND1的结合位点;应用CCK8、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测FEZF1-AS1、hsa-miR-130a-5p对肺癌细胞系增殖、侵袭、迁移能力的影响;双荧光素酶报告实验验证FEZF1-AS1与hsa-miR-130a-5p以及hsa-miR-130a-5p与CCND1存在结合;将H1299、H358分别分为si-NC组、si-FEZF1-AS1组、si-FEZF1-AS1+NC inhibitor组、si-FEZF1-AS1+hsa-miR-130a-5p inhibitor组,应用Western blot检测CCND1的蛋白表达水平,明确FEZF1-AS1/hsa-miR-130a-5p是否通过ceRNA机制调控了CCND1的表达。结果FEZF1-AS1在NSCLC中呈高表达,且在NSCLC癌组织中的表达量明显增高(P<0.05),高表达与NSCLC的淋巴结转移有关,在H1299、H358细胞系中的表达量也显著增高(P<0.05);敲减FEZF1-AS1降低了NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05);hsa-miR-130a-5p与FEZF1-AS1、CCND1之间存在结合(P<0.05);hsa-miR-130a-5p影响NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05);si-FEZF1-AS1降低了CCND1蛋白表达,hsa-miR-130a-5p inhibitor逆转了si-FEZF1-AS对CCND1的敲减作用(P<0.05)。结论FEZF1-AS1在NSCLC组织中高表达,且与淋巴结转移有关,促进了NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭,并通过miR-130a-5p/CCND1轴促进了非小细胞肺癌的发展。

miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制研究

目的探究miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制。方法体外培养人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃腺癌细胞(AGS)。RT-qPCR检测miR-30a-5p表达水平,Starbase数据库预测miR-30a-5p的表达水平及其与JAK1的潜在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-30a-5p对JAK1基因的靶向调控作用,免疫荧光检测自噬标志物LC3阳性细胞水平,WB检测JAK1和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ和p62)的表达水平。结果与GES-1组相比,AGS组细胞中miR-30a-5p表达水平显著降低;过表达miR-30a-5p后,AGS细胞中自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ)表达水平以及自噬标志物LC3阳性细胞水平显著降低,p62蛋白的表达水平显著升高;miR-30a-5p与JAK1存在结合位点且靶向负调控JAK1;与miR-30a-5p过表达+oe-NC对照处理,miR-30a-5p过表达同时过表达JAK1处理后观察到AGS细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平明显增加,p62蛋白水平明显降低,进一步的免疫荧光也观察到miR-30a-5p过表达+过表达JAK1后LC3荧光强度明显增加。结论miR-30a-5p靶向负调控JAK1蛋白的表达,抑制人胃腺癌AGS细胞自噬。

miR-30a-5p、SOCS-3在复发性口腔溃疡患儿血清中的表达及其对再复发的预测价值

目的探讨微小RNA(miR)-30a-5p与细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)在复发性口腔溃疡(ROU)患儿血清中的表达水平及其对再复发的预测价值。方法选取2020年1月至2022年3月石家庄市第二医院收治的610例ROU患儿作为研究组,同时期在该院进行体检的610例健康儿童为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清SOCS-3表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-30a-5p表达水平。研究组患儿痊愈后进行1年随访,根据其是否复发分为复发组与未复发组。采用多因素Logistic回归分析ROU患儿再复发的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SOCS-3与miR-30a-5p单独及二者联合检测对ROU患儿复发的预测价值。结果与对照组比较,研究组血清SOCS-3表达水平降低,miR-30a-5p表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组ROU患儿随访1年无病例脱落,复发组纳入120例患儿,未复发组纳入490例患儿。复发组有ROU家族史、饮食类型偏荤、牙刷刷毛偏硬、合并消化系统疾病比例及病程、血清TNF-α、IL-2水平均高于未复发组,每天刷牙次数≥2次、每天睡眠时间≥8 h比例及血清SOCS-3表达水平均低于未复发组,miR-30a-5p表达水平高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组性别、年龄、每次刷牙时间、学习压力情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,饮食类型偏荤、牙刷刷毛偏硬、合并消化系统疾病、血清TNF-α、IL-2水平升高、miR-30a-5p表达水平升高均是ROU患儿再复发的危险因素(P<0.05),每天刷牙次数≥2次、每天睡眠时间≥8 h、血清SOCS-3表达水平升高均为ROU患儿再复发的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清SOCS-3、miR-30a-5p表达水平单独及联合预测ROU患儿再复发的曲线下面积(AUC)分别为0.827、0.805、0.900,二者联合预测的AUC高于二者单独预测的AUC(Z=2.067、2.520,P<0.05)。结论ROU患儿血清SOCS-3表达水平降低、miR-30a-5p表达水平升高,且再复发患儿血清SOCS-3表达水平更低,miR-30a-5p表达水平更高,二者均对ROU患儿再复发具有预测效能,且联合预测效果更好。

miR-30e-5p调控细胞自噬基因Beclin1在CI-AKI中的作用机制研究

目的 探讨造影剂泛影葡胺诱导的HK-2造影剂致急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)细胞模型中miR-30e-5p和自噬调控基因Beclin1的表达及意义。方法 处于对数生长期的HK-2细胞分为4组,分别加入0 mgI/mL、25 mgI/mL、75 mgI/mL、100 mgI/mL的复方泛影葡胺处理2 h,利用qRT-PCR检测各组细胞中miR-30e-5p的表达水平。构建pmiGLO/Beclin1-3’UTR wt和pmiGLO/Beclin1-3’UTR mut质粒,经脂质体转染HK-2细胞,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-30e-5p与Beclin1基因的靶向关系。构建Beclin1过表达质粒,采用MTT实验验证Beclin1对CI-AKI细胞活性的影响,TEM法检测细胞自噬。结果 HK-2细胞经不同浓度的复方泛影葡胺处理2 h后miR-30e-5p的表达水平均较空白对照组明显升高(P<0.05)。双荧光报告载体实验表明miR-30e-5p可下调自噬相关基因Beclin1的表达。过表达Beclin1和封闭内源性miR-30e-5p均可降低泛影葡胺对HK-2细胞的毒性作用,明显增加CI-AKI细胞的活性,并促进细胞自噬(P<0.05)。结论 miR-30e-5p在CI-AKI细胞中高表达,miR-30e-5p通过调控靶基因Beclin1,增加细胞活性并促进细胞自噬,降低泛影葡胺对HK-2细胞的毒性作用。

益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠miR-126a-5p及VEGF信号通路的影响

目的探讨益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠微小RNA-126a-5p(miR-126a-5p)及血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法30只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法均分为假手术组、模型组和中药组。模型组、中药组均制备脊髓型颈椎病模型。中药组给予益气活血通络方灌胃,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,均为12周。各组干预结束后进行大鼠行为学测试,测定机械性刺激阈值和热刺激回缩时间。处死大鼠,HE染色观察各组椎间盘软骨终板结构的差异。TUNEL染色观察大鼠椎间盘纤维环细胞变化。实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠椎间盘纤维环组织miR-126a-5p和VEGF mRNA。采用Western blot法检测大鼠椎间盘纤维环组织VEGF蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠椎间盘血管芽数目减少,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏明显、大量凋亡且细胞密度降低;模型组和中药组机械性刺激阈值降低,热刺激回缩时间缩短,miR-126a-5p水平降低,VEGF mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠椎间盘血管芽数目增加,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏减轻,大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡减少且细胞密度增加,机械性刺激阈值升高,热刺激回缩时间延长,miR-126a-5p水平增加,VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论益气活血通络方治疗脊髓型颈椎病的机制可能与上调miR-126a-5p、下调VEGF表达有关。

miR-550a-5p诊断非小细胞肺癌脊柱骨转移的价值

目的探究微小RNA(miR)-550a-5p诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脊柱骨转移的价值,为临床防治提供参考。方法选取2019年1月~2023年1月承德医学院附属医院收治的62例存在脊柱骨转移NSCLC患者,44例无脊柱骨转移NSCLC患者,根据磁共振成像或CT检查证实,分别纳入脊柱骨转移组、无脊柱骨转移组。检测比较两组血清miR-550a-5p、肺肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19可溶性片段(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]、骨代谢标志物[Ⅰ型胶原吡啶交联氨基末端肽(NTx)、骨转异性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、Ⅰ型胶原羧基末端肽(typeⅠcollagen carboxy-terminal cross-linked peptide,ICTP)]水平,比较不同临床特征NSCLC患者血清miR-550a-5p水平,分析NSCLC脊柱骨转移分级与血清miR-550a-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-550a-5p对NSCLC脊柱骨转移的诊断价值。结果脊柱骨转移组血清miR-550a-5p、CEA、NSE、CYFRA21-1、BALP、ICTP、NTx水平均高于无脊柱骨转移组(P<0.05);脊柱骨转移组不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期、骨转移数量、淋巴结转移、骨相关事件、伴骨痛症状等临床特征NSCLC患者miR-550a-5p水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同骨转移分级NSCLC患者血清miR-550a-5p、NSE、BALP、CEA、ICTP、CYFRA21-1、NTx水平比较差异有统计学意义(P<0.05),随骨转移分级增加血清miR-550a-5p水平、肺肿瘤标志物、骨代谢标志物均呈升高趋势。Spearman相关性分析显示,血清miR-550a-5p水平与骨转移分级、CEA、NSE、CYFRA21-1、BALP、ICTP、NTx均呈正相关(P<0.05);血清miR-550a-5p、肺肿瘤标志物、骨代谢标志物联合诊断的AUC值0.941(95%CI:0.878~0.978)(P<0.05),大于肺肿瘤标志物、骨代谢标志物联合诊断的AUC值0.902(95%CI:0.829~0.951)。结论miR-550a-5p应用于NSCLC脊柱骨转移诊断的价值较高,其水平与骨转移分级、肺肿瘤标志物、骨代谢标志物联系密切,加入miR-550a-5p可提高诊断价值。

骨髓间充质干细胞来源的miR-199a-5p通过抑制ZIK1/MAP3K11调节肾细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)来源的外泌体(exsome)中miR-199a-5p对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞增殖和侵袭的影响。方法:分离骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BM-MSCs-Exo),电子显微镜观察外泌体形态,Western blot方法检测外泌体标志蛋白CD9和CD63。CCK-8法检测RCC细胞在不同条件下的增殖速度,Transwell法检测RCC细胞的侵袭能力,q-PCR法检测miR-199a-5p以及ZIK1和MAP3K11的mRNA表达,双荧光素酶实验验证miR-199a-5p以及ZIK1和MAP3K11基因的3’UTR区域靶向结合。结果:BM-MSCs-Exo电镜下呈圆形囊泡状,直径约100 nm,且高表达CD9和CD63,RCC细胞摄取BM-MSCs-Exo后增殖和侵袭能力均被抑制,过表达miR-199a-5p的BM-MSCs-Exo能显著抑制RCC细胞的增殖和侵袭能力,抑制BM-MSCs-Exo中的miR-199a-5p后能缓解BM-MSCs-Exo对RCC的抑制作用,且发现过表达miR-199a-5p的BM-MSCs-Exo能显著降低ZIK1和MAP3K11的mRNA表达,而在BM-MSCs-Exo中抑制miR-199a-5p有相反作用。结论:BM-MSCs-Exo通过向RCC细胞转运miR-199a-5p抑制ZIK1和MAP3K11的表达,进而抑制RCC细胞的增殖和侵袭。

miR-30a-5p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞的影响及分子机制

目的:探讨miR-30a-5p对人口腔鳞状细胞癌(OSCC) CAL-27细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其分子机制。方法:人OSCC CAL-27细胞转染后,设置为miR-30a-5p mimic组(miR-30a-5p的模拟物)、NC mimic组(阴性对照模拟物)、NC inhibitor组(阴性对照抑制剂)及miR-30a-5p inhibitor组(miR-30a-5p的抑制剂),同时设未转染CAL-27细胞为Control组;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-5p基因表达,采用Western blot实验检测各组细胞EMT上皮标志物E-cadherin和间质标记物N-cadherin的蛋白表达,采用3-(4,5二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)法、划痕实验及Transwell实验分别检测各组细胞的细胞活力、迁移能力和侵袭能力。结果:miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞miR-30a-5p表达较NC mimic组明显上调,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组表达明显下降(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞OD值较NC mimic组下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞的迁移率较NC mimic组明显下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞侵袭数较NC mimic组明显下降(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞EMT上皮标志物E-cadherin表达较NC mimic组明显上调、间质标志物N-cadherin的表达较NC mimic组明显下调(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组E-cadherin表达较NC inhibitor组明显下调、N-cadherin表达较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01)。结论:MiR-30a-5p可抑制OSCC CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与miR-30a-5p抑制CAL-27细胞EMT转化有关。

胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的实验研究

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用。方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1000μg/mL)组、miR-NC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增殖能力及SOD、CAT水平和miR-26a-5p表达(P<0.05)。抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论:胡黄连提取物可能通过调控miR-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

miR-30a-5p调节BDNF/TrkB信号对口腔鳞状细胞癌的作用及分子机制

目的探讨miR-30a-5p调节BDNF/Trk B信号对口腔鳞状细胞癌(OSCC)的作用及分子机制。方法人OSCC CAL-27细胞转染后,设置为miR-30a-5p mimic组(miR-30a-5p的模拟物)、NC mimic组(阴性对照模拟物),同时设未转染CAL-27细胞为Control组,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-5p和脑源性神经营养因子(BDNF)基因表达,采用Western blot实验检测各组细胞BDNF、酪氨酸激酶受体(Trk B)及磷酸化酪氨酸激酶受体(p-TrkB)蛋白表达;取CAL-27细胞,建立小鼠皮下移植瘤模型,分为miR-30a-5p agomir(miR-30a-5p激动剂)组及NC agomir(阴性对照激动剂)组,测量干预后第7~28天肿瘤体积和质量的变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time,PCR)检测各组小鼠瘤组织miR-30a-5p和BDNF基因表达,采用Western blot实验检测各组瘤组织BDNF、Trk B及p-TrkB蛋白表达,采用苏木素伊红染色(HE)观察各组瘤组织学变化,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a-5p与BDNF的靶向关系。结果与NC mimic组比较,miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞miR-30a-5p表达明显上调,BDNF mRNA及BDNF、Trk B、p-TrkB蛋白均明显下调(P<0.01);与NC agomir组比较,miR-30a-5p agomir组小鼠第14~28天肿瘤体积和质量降低(P<0.05或P<0.01);HE染色结果显示,NC agomir组小鼠肿瘤组织的肿瘤细胞排列紧密且不规则、可见核大深染、核固缩及病理性核分裂,miR-30a-5p agomir组肿瘤细胞减少、可见部分核分裂、核深染、核固缩、并出现核坏死;与NC agomir组比较,miR-30a-5p agomir组小鼠瘤组织miR-30a-5p表达明显上调,BDNF mRNA及BDNF、Trk B、p-TrkB蛋白均明显下调(P<0.01);双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-30a-5p与BDNF能够靶向结合。结论 miR-30a-5p能够靶向结合BDNF,抑制BDNF/Trk B信号活化,进而抑制OSCC的进展。

黄芪甲苷经由miR-125a-5p/NLRP1轴减轻椎间盘突出髓核细胞损伤

目的在白介素-1β(IL-1β)诱导退变的人髓核细胞中,探究黄芪甲苷对miR-125a-5p及其靶基因介导的信号通路的作用,揭示黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对髓核细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-125a-5p和核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体蛋白1(nucleotide oligomerization domain(NOD)-like receptor protein 1,NLRP1)在椎间盘突出患者髓核组织中的表达,用IL-1β诱导髓核细胞退变,在20、50和80μg·mL^(-1)黄芪甲苷干预浓度下检测miR-125a-5p和NLRP1的表达,在IL-1β和80μg·mL^(-1)黄芪甲苷处理的髓核细胞中单独或共同转染miR-125a-5p模拟物和NLRP1过表达质粒,然后分别检测细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中信号通路相关蛋白p56和p38的磷酸化水平。结果椎间盘突出(lumbar disc herniation,LDH)患者的髓核组织中miR-125a-5p表达下调,NLRP1表达上调。黄芪甲苷促进IL-1β处理的髓核细胞中miR-125a-5p表达,减少NLRP1表达以及p56和p38蛋白的磷酸化水平。黄芪甲苷促进髓核细胞增殖,减少凋亡和炎症反应。结论黄芪甲苷通过上调miR-125a-5p表达,抑制NLRP1的表达和NF-κB/MAPK信号通路,减少IL-1β诱导的髓核细胞损伤。