咪达唑仑通过上调miR-320抑制缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡

目的 为了明确咪达唑仑在缺血性中风中的作用,探讨咪达唑仑对缺氧/复氧(H/R)诱导的PC12细胞增殖和凋亡的影响和潜在机制。方法 体外培养PC12细胞,分为Control组、H/R组、不同剂量咪达唑仑组、10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-NC组、和10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-320组;CCK-8法和流式细胞术分别用于检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测蛋白表达;RT-qPCR检测miR-320表达。结果 与Control组相比,H/R组细胞A值(0.43±0.02)、pro-caspase3水平(0.14±0.01)和miR-320表达(0.15±0.01)显著降低(P<0.05),而凋亡率(26.68±0.81)和Cleaved-caspase3水平(0.70±0.05)显著升高(P<0.05)。与H/R组相比,不同剂量(0.1、1.0、10μmol/L)咪达唑仑组细胞A值(0.43±0.02、0.57±0.03、0.93±0.04)、pro-caspase3水平(0.14±0.01、0.30±0.02、0.52±0.03)和miR-320表达(0.15±0.02、0.42±0.03、0.81±0.05)显著升高(P<0.05),而凋亡率(25.65±0.92、21.74±0.56、15.63±0.50)和Cleaved-caspase3水平(0.70±0.06、0.50±0.04、0.23±0.02)显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-NC组相比,10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-320组细胞A值(0.47±0.02)、pro-caspase3水平(0.24±0.01)和miR-320表达(0.26±0.02)显著降低(P<0.05),而凋亡率(23.52±0.59)和Cleaved-caspase3水平(0.56±0.04)显著升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可以上调miR-320表达,进而促进H/R诱导的PC12细胞增殖,并抑制凋亡。

基于lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路探讨肾炎止血丸治疗IgA肾病的作用机制

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对lncRNA TUG1介导miR-320-5p调控PTEN/Cosmc通路的影响。方法:采用“牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖”联用法构建IgAN大鼠模型,32只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸组[3.6 g/(kg·d)],每组8只,均连续给药6周。留取血液、肠黏膜及肾组织标本,分别应用ELISA法检测血清磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、核心1β1,3半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosmc)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)水平;采用Real-time PCR、Western blot检测肠黏膜组织、肾脏组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA及蛋白表达。结果:①血清PTEN、Cosmc、Gd-IgA1:与模型组比较,各给药组PTEN、Cosmc升高明显(均P<0.01)、Gd-IgA1减少明显(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN、Cosmc升高及Gd-IgA1减少明显(均P<0.01)。②RT-PCR法检测肠黏膜组织、肾组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA表达:与模型组比较,氯沙坦钾片组肠黏膜组织及肾组织TUG1升高明显(均P<0.01),miR-320减少明显(P<0.01);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肠黏膜组织及肾组织TUG1、PTEN升高明显,肠黏膜组织Cosmc升高明显(均P<0.01),肾组织miR-320减少明显(P<0.01)。③Western blot检测肠黏膜组织、肾组织PTEN、Cosmc蛋白表达:与模型组比较,各给药组肠黏膜组织PTEN蛋白表达升高(P<0.05),肾炎止血丸组Cosmc表达升高明显(P<0.05);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高无显著差异(P>0.05)。各给药组肾组织Cosmc表达升高有极显著差异(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肾组织PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高有极显著性差异(P<0.01)。结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠肾损伤;其作用机制可能与参与lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路有关。

膀胱癌患者血清miR-124、miR-320a水平与临床病理特征及生存预后的关系

目的探讨膀胱癌患者血清miR-124、miR-320a水平与临床病理特征及生存预后的关系。方法将该院2018年2月至2020年2月收治的100例膀胱癌患者纳入研究作为研究组,另选取100例同期体检的健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清miR-124和miR-320a水平。比较研究组和对照组血清miR-124和miR-320a水平。对膀胱癌患者随访3年,记录生存情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-124和miR-320a水平对膀胱癌患者生存预后的评估价值。采用Spearman法分析膀胱癌患者血清miR-124和miR-320a水平高低的相关性。采用Kaplan-Meier法分析血清miR-124和miR-320a水平与患者生存预后的关系。采用多因素Cox回归分析膀胱癌患者生存预后的影响因素。结果研究组血清miR-124和miR-320a水平低于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-124和miR-320a联合检测评估膀胱癌患者生存预后的曲线下面积(AUC)大于单独检测(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,膀胱癌患者血清miR-124和miR-320a水平高低呈正相关(r=0.432,P<0.05)。TNM分期为T_(a)+T_(1)期、肿瘤最大径≤3 cm、淋巴结未转移的膀胱癌患者血清miR-124和miR-320a高水平比例分别高于TNM分期为T2~T4期、肿瘤最大径>3 cm、淋巴结转移患者(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析表明,miR-124高水平患者3年累积生存率高于miR-124低水平患者;miR-320a高水平患者3年累积生存率高于miR-320a低水平患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明,miR-124、miR-320a、TNM分期、淋巴结转移是膀胱癌患者生存预后的影响因素(P<0.05)。结论血清miR-124和miR-320a水平在膀胱癌患者中下调,二者联合检测对评估膀胱癌生存预后有重要价值。

血浆miR-320c、miR-126及miR-34c联合检测对慢性阻塞性肺疾病严重程度的预测价值

目的探讨血浆miRNA水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法利用荧光定量PCR(qPCR)检测健康人群(10例)及COPD患者(10例)血浆miRNA的表达水平,筛选与COPD患者密切相关的miRNA。进一步在健康人群(28例)和COPD慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)Ⅰ级(30例)、Ⅱ级(32例)、Ⅲ级(30例)及Ⅳ级(28例)患者中明确候选miRNA单独及联合检测对COPD严重程度的预测价值。结果COPD患者血浆miR-320c、miR-126及miR-34c水平显著高于健康人群(P<0.01)。随着COPD级别的增加,血浆miR-320c、miR-126及miR-34c的表达水平亦增加。miR-320c、miR-126、miR-34c单独及联合检测预测中重度COPD患者的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.822、0.705、0.783及0.892。结论血浆miR-320c、miR-126及miR-34c可预测COPD严重程度,其联合检测的预测效能显著高于单项miRNA。

温阳贴贴敷涌泉穴对慢性心力衰竭病人血清UCP2、外泌体及外泌体内miR-320水平的影响

目的:探讨温阳贴贴敷涌泉穴对慢性心力衰竭(CHF)病人解偶联蛋白-2(UCP2)、血清外泌体及外泌体内miR-320水平的影响,挖掘其作用机制。方法:选取60例CHF病人,随机分为对照组、电针组、穴位贴敷组,每组20例。对照组以西药治疗,电针组、穴位贴敷组分别在西药治疗的基础上加用电针、温阳贴刺激涌泉穴。试剂盒法提取血清外泌体,免疫印迹(Western Blot)法检测CD63、CD81、TSG101、Alix蛋白表达,纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测径粒大小。使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测病人血清中UCP2、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)表达水平及外泌体分泌量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外泌体内miR-320水平。对NT-proBNP、UCP2、外泌体分泌量、miR-320进行相关性分析。结果:CD63、CD81、TSG101、Alix蛋白阳性表达,NTA径粒分析显示符合外泌体径粒大小。穴位贴敷组NT-proBNP、UCP2、miR-320表达水平高于电针组与对照组(P<0.05);穴位贴敷组外泌体分泌量高于电针组与对照组(P<0.05)。NT-proBNP与UCP2、miR-320呈正相关(P<0.01),与外泌体分泌量呈负相关(P<0.01);UCP2与miR-320呈正相关(P<0.01),与外泌体分泌量呈负相关(P<0.01);外泌体分泌量与miR-320呈负相关(P<0.01)。结论:温阳贴的治疗CHF的机制可能与外泌体、miR-320的调控以及UCP2介导的心肌能量代谢相关。

miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌患者临床病理及术后3年生存率的关系

目的:探讨miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理及术后3年生存率的关系。方法:回顾我院肿瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者资料,比较患者肿瘤组织及癌周组织的miR-92b、miR-320a表达水平,比较不同miR-92b、miR-320a表达水平患者的预后,并进行生存分析。结果:肿瘤组织的miR-92b表达水平高于癌周组织,miR-320a表达水平低于癌周组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同miR-92b、miR-320a表达水平患者肿瘤分期、淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-92b低表达组术后3年累积生存率、平均生存时间优于miR-92b高表达组,miR-320a高表达组术后3年生存率、平均生存时间优于miR-320a低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分期、淋巴结转移、miR-92b、miR-320a表达水平为影响NSCLC患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论:miR-92b、miR-320a表达水平与NSCLC患者临床病理及术后3年生存率相关,可作为预后预测指标。

miR-320a-5p靶向Twist抑制肝细胞癌上皮间质转化

目的探讨miR-320a-5p调控肝细胞癌(HCC)侵袭与转移的生物学功能及其作用机制。方法采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测HCC肿瘤组织、相邻正常组织及肝癌细胞系中miR-320a-5p与癌基因Twist的表达。Pearson相关性分析miR-320a-5p与Twist表达的相关性,双荧光素酶实验证明二者靶向关系。通过CCK8增殖实验、细胞集落形成实验、Transwell、划痕实验分别检测miR-320a-5p对HCC细胞的增殖、活力、侵袭和迁移能力的影响;Western印迹检测Twist蛋白及上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达。结果miR-320a-5p在HCC组织和细胞中表达下调。而过表达miR-320a-5p可抑制HCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力及EMT趋势。miR-320a-5p可靶向抑制Twist表达。Twist在HCC肿瘤组织和细胞系中高表达,同时miR-320a-5p可逆转Twist对HCC发展的促进作用。结论miR-320a-5p可通过抑制Twist表达调控HCC细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT趋势,从而抑制HCC的发展及转移。

病毒性心肌炎血清外泌体来源的miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡

目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外泌体情况;使用miR-320抑制剂或模拟物转染心肌细胞,实时荧光定量PCR检测miR-320表达水平;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)表达水平;生物信息学预测miR-320靶基因并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;荧光素酶报告基因检测miR-320与其靶基因磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)的作用关系;Western blot法检测miR-320对蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白的影响。结果病毒性心肌炎血清外泌体促进心肌细胞凋亡并上调BAX水平,同时降低Bcl2水平;病毒性心肌炎小鼠心肌组织中miR-320显著上调,且miR-320成熟体和miR-320前体pri-miR-320表达在心肌细胞均明显上调;病毒性心肌炎血清外泌体处理的心肌细胞中miR-320水平显著上调,而转染miR-320抑制剂逆转了外泌体引起的miR-320上调及凋亡率升高;Pik3r1是miR-320的靶基因,其过表达逆转miR-320上调导致的心肌细胞凋亡;miR-320过表达抑制AKT/mTOR通路激活。结论病毒性心肌炎血清外泌体miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡。

血清miR-134-5p和miR-320a检测联合肺功能指标对煤工尘肺患者的早期诊断价值

目的探讨血清miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标对尘肺患者早期临床诊断价值。方法选取煤工尘肺(CWP)患者(CWP组)、煤矿接尘体检人群(接尘组)以及同期健康体检人群(对照组)各40例;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组血清miR-134-5p和miR-320a水平。检测各组受试者的肺功能指标:最大通气量(MVV)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、第3秒用力呼气容积(FEV3)、1秒率(FEV1/FVC)、3秒率(FEV3/FVC)、最大呼气中期流量(MMEF)、峰流速(PEF)、75%呼气流速(MEF75)、50%呼气流速(MEF50)、25%呼气流速(MEF25)、残气量/肺总量(TLC)、功能残气量(FRC)和肺泡通气量(VA);采用Logistic回归分析煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA联合肺功能指标对CWP患者的早期诊断价值。结果对照组、接尘组和CWP组血清miR-134-5p、miR-320a表达水平,MVV、FEV1、FEV1/FVC、MMEF、MEF50、FRC和VA逐渐降低(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果发现FRC降低是煤矿接尘人群发生CWP的独立危险因素(P<0.05)。miR-134-5p和miR-320a联合肺功能指标FRC预测煤矿接尘相关作业的人群发生CWP的诊断效能较高,AUC为0.975(95%CI:0.948~1.000)。结论血清miR-134-5p、miR-320a和肺功能指标FRC联合对早期CWP的临床诊断具有重要参考价值。

结肠癌患者血清外泌体miR-320的表达及其临床意义

目的分析结肠癌患者血清外泌体miR-320的表达及其临床意义。方法选取2018年4月至2020年4月我院收治的50例结肠癌患者纳入研究,另选取50例体检健康者纳入对照组,收集两组的血清样本,采用RTqPCR法检测血清外泌体中miR-320的表达,并分析其对结肠癌的诊断价值。结果纯化的血清样品中存在大量外泌体颗粒,其特性与其他相关研究报道一致。结肠癌患者血清外泌体中miR-320的相对表达量明显低于健康对照组[(0.69±0.23)vs.(1.53±0.48),t=11.16,P<0.001]。血清外泌体miR-320诊断结肠癌的曲线下面积为0.871(95%CI:0.596~0.925),诊断敏感度为90.73%,特异度为82.43%。结论结肠癌患者血清外泌体中miR-320表达下调,可能作为结肠癌早期诊断的评价指标。

miR-320a通过靶向调控NLRP3对氧糖剥夺诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-320a对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 建立OGD诱导心肌H9C2细胞损伤模型,采用q RT-PCR法检测细胞中miR-320a和NLRP3 m RNA表达水平。双荧光素酶报告系统验证miR-320a与NLRP3的靶向关系。将miR-320a mimics及其阴性对照mimics-NC、NLRP3过表达质粒及其空载质粒分别或同时转染至H9C2细胞中,再进行OGD损伤诱导。采用CCK-8检测细胞增殖活性;比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;ELISA检测细胞IL-1β和IL-18水平;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平。结果 OGD诱导的H9C2细胞中miR-320a表达水平明显降低,而NLRP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。双荧光素酶报告系统验证,miR-320a靶向负调控NLRP3表达。miR-320a过表达可提高OGD暴露下H9C2细胞增殖活性,上调Bcl-2蛋白表达,降低LDH活性、细胞凋亡率、IL-1β和IL-18水平以及细胞中Bax、Cleaved-caspase-3、NLRP3、ASC和caspase-1等蛋白表达水平。然而,NLRP3过表达可逆转miR-320a过表达对OGD暴露下H9C2细胞损伤的改善作用。结论 miR-320a可通过靶向负调控NLRP3表达提高OGD暴露下心肌细胞的增殖活性,降低细胞凋亡和炎症水平,从而减轻OGD诱导的心肌细胞炎症损伤。

miR-320在结直肠癌中的表达及意义

目的:探讨miR-320与结直肠癌临床病理因素间的关系,寻找其下游调控蛋白,及对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响.方法:采用RT-PCR检测83例结直肠癌组织及癌旁组织中miR-320的表达,结合结直肠癌临床病理指标分析其相关性,用miR-320病毒转染HCT-116及ClonA1两株结直肠癌细胞系,Western blot检测其调控蛋白C-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测LV-miR-320细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)化疗的敏感性.结果:83例结直肠癌标本中miR-320的表达明显低于癌旁组织表达(P=0.012).miR-320表达与肿瘤分化程度相关,高分化组织中表达较中低分化组织高,与局部浸润深度及TNM分期相关(P=0.012,P=0.004),但不受患者性别、年龄、肿瘤的大小及位置的影响;获得LV-miR-320稳定转染细胞株及阴性对照株(negative control,NC),Western blot结果显示LV-miR-320组JNK表达明显降低;LV-miR-320组HCT-116及ClonA1半数抑制浓度(IC50值)分别为11.34 g/mL和12.56 g/mL,NC组IC50值分别为24.73 g/mL和25.34 g/mL(P=0.023,P=0.018).结论:miR-320在结直肠癌组织中呈低表达,其在结直肠癌细胞中过表达后,可明显抑制JNK蛋白翻译,而显著增加细胞对5-Fu化疗的敏感性.提示miR-320在结直肠癌的发生发展及治疗中起重要作用.

miR-320在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-320在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应法(RTPCR)检测108例乳腺癌组织和对应癌旁正常组织中miR-320表达,分析miR-320表达与乳腺癌病理特征的相关性。结果乳腺癌组织中miR-320表达水平低于正常乳腺组织[(0.58±0.17)vs(1.05±0.21)](P<0.05)。乳腺癌组织miR-320表达水平与乳腺癌TNM分期及淋巴转移有关(P<0.05);而miR-320表达水平与年龄、绝经、病理类型、肿瘤大小、C-erbB-2表达、增殖细胞核抗原(PCNA)表达、孕激素受体(PR)表达及雌激素受体(ER)表达无关(P>0.05)。结论 miR-320在乳腺癌组织中呈低表达,且其表达水平与乳腺癌发生发展密切相关,miR-320可能是乳腺癌特异性诊断潜在标志物和治疗新靶点。

TPG对HaCaT细胞增殖、凋亡、细胞周期及miR-320/RASA1表达的影响

目的观察赤芍总苷(TPG)对HaCaT细胞增殖、凋亡、细胞周期分布、miR-320和Ras p21蛋白活化子1(RASA1)表达的影响。方法 TPG处理HaCaT细胞后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(Western blot)检测miR-320和RASA1表达。双荧光素酶报告实验和western blot确定miR-320和RASA1之间调控关系。检测抑制miR-320表达后HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期分布情况。结果TPG可降低HaCaT细胞的活力,促进HaCaT细胞凋亡,诱导G0/G1期阻滞,抑制miR-320表达,促进RASA1表达,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-320靶向负性调控RASA1表达。干扰miR-320可抑制HaCaT细胞增殖,诱导细胞凋亡和G0/G1期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPG可抑制HaCaT细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期G0/G1期阻滞,其机制可能与下调miR-320/RASA1通路有关。

miR-320通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻大鼠烧伤后肠道黏膜损伤

目的探讨miR-320在大鼠烧伤后肠道黏膜损伤中的保护作用,及其作用机制是否与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。方法SD大鼠随机分为4组(n=12):假手术组、假手术+miR-320组、烧伤组和烧伤+miR-320组。烧伤组和烧伤+miR-320组建立Walker-Mason烧伤模型。烧伤+miR-320组和假手术+miR-320组在模型建立前1周通过尾静脉注射腺相关病毒(AAV)-miR-320。通过FITC-葡聚糖测定评估肠道通透性。用RT-qPCR评估miR-320基因表达,并通过蛋白质印迹评估Occludin、ZO-1和TLR4/NF-κB信号通路蛋白水平。在LPS处理前,用miR-320模拟物转染NCM460细胞,并测量TNF-α和IL-6细胞因子水平。结果与假手术组相比,烧伤组肠黏膜绒毛水肿、变短、变宽,肠黏膜明显受损,有大量炎性细胞浸润。此外,烧伤会增加DAO和FITC-葡聚糖血清水平(P<0.05)并降低肠道组织中miR-320、Occludin和ZO-1表达(P<0.05)。注射了miR-320模拟物的大鼠从损伤中恢复,并且TLR4、MyD88蛋白的表达和p-NF-κB(p-p65)磷酸化均显著降低(P<0.05)。体外实验证实TLR4是miR-320的潜在靶基因,并且miR-320上调逆转了LPS诱导NCM460细胞的TLR4/NF-κB通路激活(P<0.05),减少了培养基中TNF-α和IL-6的浓度(P<0.05)。结论烧伤诱导的肠屏障功能障碍中miR-320水平降低。miR-320的上调通过抑制TLR4/MyD88//NF-κB信号通路来减少炎症反应并改善肠道屏障功能。

miR-320e促进胰腺癌细胞系耐药

目的研究miR-320e在胰腺癌耐药中的作用及其机制。方法用定量PCR的方法确定miR-320e在胰腺癌耐药细胞系中的表达,进而通过在胰腺癌细胞中过表达miR-320e,检测细胞对5-FU化疗药物敏感性、细胞增殖的影响。同时通过报告基因实验及Western blot法确定miR-320e的靶基因。结果在胰腺癌耐药细胞系(PATU8988/5-FU)中miR-320e表达显著上升(P<0.01)。在胰腺癌细胞PATU8988和PANC-1中过表达miR-320e后,细胞对5-FU化疗药物出现耐受,IC_(50)显著上升(P<0.01),细胞增殖速度加快(P<0.01)。PDCD4是miR-320e的直接靶基因,miR-320e的过表达显著降低了PDCD4蛋白水平。结论 miR-320e的高表达可显著促发胰腺癌细胞化疗耐药,可作为胰腺癌耐药检测的分子标志及新的治疗靶点。

miR-320及下游靶基因survivin在银屑病皮损中的表达

目的检测寻常性银屑病皮损中miR-320及其下游靶基因survivin mRNA的表达水平。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例寻常性银屑病患者皮损及40名健康对照皮肤中miR-320、survivin mRNA的表达水平,运用双荧光素酶报告实验验证survivin是miR-320的靶基因。miR-320和survivin表达水平两组间比较采用t检验,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin表达的相关性采用Pearson相关分析。结果与健康对照皮肤相比,寻常性银屑病皮损中miR-320表达量为对照组的(0.561±0.11)倍,表达明显下调(t=3.06,P<0.05);survivin mRNA表达量为对照组的(2.034±0.26)倍,表达水平明显上调(t=3.35,P<0.05);双荧光素酶报告实验结果提示survivin是miR-320的靶基因,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin mRNA呈负相关(r2=0.634,P<0.05)。结论 miR-320可能通过调控其下游靶基因survivin的异常表达参与寻常性银屑病皮损的形成过程。

LncRNA OCPAT1通过调控miR-320d/YOD1信号通路促进卵巢癌的发生及发展

目的研究lncRNA OCPAT1调控miR-320d/YOD1信号通路在卵巢癌发生发展中的作用及机制。方法2019年1月至2020年12月应用TCGA和GTEX数据库筛选,通过qRT-PCR检测确认lncRNA AC007405.3(OCPAT1)在卵巢癌组织和细胞中的表达;在ES-2细胞中敲减OCPAT1,通过实验验证,OCPAT1与miR-320d/YOD1的靶向调控关系。结果通过GTEX和TCGA数据库及qRT-PCR检测,确认OCPAT1高表达;敲低OCPAT1后,MTT增殖显示敲减后细胞增殖减低,EdU细胞增殖显示,敲减后处于复制期的细胞减少,流式细胞周期显示敲减后细胞停滞在G0/G1期,流式周期显示敲减后细胞凋亡增加,Transwell migration实验显示,敲减后抑制卵巢癌细胞ES-2的迁移能力,Matrigel invasion实验显示敲减后抑制卵巢癌细胞ES-2的侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验证实,OCPAT1可以靶向作用于miR-320d。结论lncRNA OCPAT1可能通过靶向调控miR-320d/YOD1信号通路调控卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭,进而促进卵巢癌的发生及发展。

miR-320c靶向FADD基因抑制肺腺癌细胞凋亡促进癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究miR-320c调控肺腺癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:Real-time PCR方法检测miR-320c在肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中的表达情况。通过质粒转染构建miR-320c过表达和敲低的肺腺癌细胞株,采用Transwell实验检测miR-320c对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。通过流式细胞技术检测肺腺癌细胞的凋亡率,免疫共沉淀检测凋亡通路关键复合体的表达判断细胞发生凋亡的情况。生信分析预测miR-320c的下游靶基因,并通过双荧光素酶实验验证。结果:与正常肺上皮细胞相比,miR-320c在肺腺癌细胞中表达升高。过表达miR-320c能够促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,而敲低miR-320c则抑制细胞的迁移和侵袭。进一步实验证实miR-320c通过抑制肺腺癌细胞凋亡发挥其促进迁移和侵袭的作用。荧光素酶报告基因系统验证了miR-320c直接靶向凋亡通路的关键基因FADD;FADD的上调可以有效逆转miR-320c mimic诱导的促进迁移和侵袭作用。结论:miR-320c通过靶向FADD基因抑制肺腺癌细胞凋亡促进癌细胞的迁移和侵袭。

miR-320c调控KIF14对高糖诱导的足细胞损伤及nephrin、podocin表达的影响

目的:探讨miR-320c靶向驱动蛋白家族成员14(KIF14)对高糖诱导的足细胞损伤以及nephrin、podocin表达的影响。方法:用高糖(25 mmol/L)处理足细胞HPC,构建糖尿病肾病模型。将HPC分为正常糖(Con)组、高渗(HP)组、高糖(HG)组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-320c组、HG+pcDNA3.1组、HG+pcDNA3.1-KIF14组、HG+antimiR-320c+si-NC组、HG+anti-miR-320c+si-KIF14组。实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测miR-320c、肾病蛋白(nephrin)mRNA、肾小球足细胞裂隙膜蛋白(podocin)mRNA、表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶实验和蛋白质印记(Western Blot)验证miR-320c对KIF14的靶向调控关系。结果:与Con组比较,HG组HPC中miR-320c的表达显著升高,KIF14的表达显著降低,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,nephrin和podocin的表达显著降低(P<0.05);与HG+anti-miR-NC组比较,HG+anti-miR-320c组HPC的存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,nephrin和podocin的表达显著升高(P<0.05);miR-320c靶向负性调控KIF14表达。与HG+pcDNA3.1组比较,HG+pcDNA3.1-KIF14组HPC细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,nephrin和podocin的表达显著升高(P<0.05);与HG+anti-miR-320c+si-NC组比较,HG+anti-miR-320c+si-KIF14组HPC的存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,nephrin和podocin的表达显著降低(P<0.05)。结论:抑制miR-320c通过靶向KIF14可促进nephrin、podocin表达,抑制高糖诱导的足细胞损伤。