miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡(均P<0.05);与pmirGLO-MUT 3'UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3'UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进(均P<0.05),与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转(均P<0.05)。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。

MiR-3200-3p调控Wnt/β-catenin通路影响肝癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-3200-3p对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法采用RT-qPCR方法检测miR-3200-3p在正常肝细胞系HL-7702与肝癌细胞系Bel-7402中的表达;构建miR-3200-3p的慢病毒低表达载体,转染Bel-7402细胞,倒置荧光显微镜及RT-qPCR检测敲低效果;根据转染病毒质粒的不同将Bel-7402细胞分为2组:LV-control组及LV-inhibitor组。Transwell迁移和侵袭实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法检测2组细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白的表达水平。结果与HL-7702细胞比较,Bel-7402细胞中miR-3200-3p的相对表达量显著升高(P<0.001);成功建立miR-3200-3p低表达的Bel-7402稳转细胞系;与LV-control组比较,LV-inhibitor组肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显受到抑制(均P<0.001),β-catenin(总、胞核和胞质)和MMP2蛋白表达均显著下调,E-cadherin的表达明显上调(均P<0.05)。结论miR-3200-3p在肝癌细胞中发挥促癌作用,敲低其表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能是通过影响Wnt/β-catenin通路的活化而下调MMP2表达,上调E-cadherin而实现的。

circMTO1表达与miR-3200/PEBP1轴的关系及其预测内镜黏膜下剥离术后复发的价值

目的研究circMTO1表达与miR-3200/磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(PEBP1)轴的关系及其预测内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的价值。方法选择2015年1月-2018年7月在陆军军医大学第一附属医院(西南医院)接受ESD治疗的早期胃癌患者作为研究对象(早期胃癌组),另取同期经胃黏膜活检明确为正常胃黏膜的受试者作为对照组。检测两组circMTO1、miR-3200和PEBP1的表达水平,随访早期胃癌患者的无复发生存情况,并采用Kaplan-Meier曲线分析无复发生存率的差异。结果早期胃癌组circMTO1和PEBP1表达水平明显低于对照组,miR-3200表达水平明显高于对照组(P<0.05),且circMTO1与miR-3200呈负相关、与PEBP1呈正相关,miR-3200与PEBP1呈负相关;早期胃癌组中不同肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移情况和脉管癌栓情况的circMTO1、miR-3200和PEBP1表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier曲线分析显示,circMTO1高表达的早期胃癌患者无复发生存率高于circMTO1低表达患者,miR-3200高表达的早期胃癌患者无复发生存率低于miR-3200低表达患者,PEBP1高表达的早期胃癌患者无复发生存率高于PEBP1低表达患者。结论早期胃癌中circMTO1低表达与病情恶化和ESD术后无复发生存时间缩短有关,靶向miR-3200/PEBP1轴可能是circMTO1参与早期胃癌发生发展的分子机制。