miR-320b激动剂对心肌梗死大鼠心室重塑的影响

目的:探讨miR-320b激动剂对心肌梗死大鼠心室重塑的影响。方法:建立心肌梗死大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、阴性对照组、miR-320b过表达组。RT-PCR检测miR-320b、MHC-α、MHC-βmRNA水平;TTC染色检测心肌梗死面积;超声心动图检测左心室收缩压峰值(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF);H-E染色检测心肌组织形态学;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠miR-320b、MHC-αmRNA水平降低,MHC-βmRNA水平和心肌梗死面积升高,LVEF、LVFS、LVSP降低,LVEDP升高,心肌组织细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9比值升高,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,差异均有统计学意义。与模型组比较,miR-320b过表达组大鼠miR-320b、MHC-αmRNA水平升高,MHC-βmRNA水平和心肌梗死面积降低,LVEF、LVFS、LVSP升高,LVEDP降低,心肌组织病理损伤程度明显改善,心肌组织细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9比值降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,差异均有统计学意义。结论:miR-320b过表达可改善心肌梗死大鼠模型心室重塑。

miR-320b通过靶向调控c-myc抑制人结直肠癌细胞增殖的实验研究

目的探讨miR-320b对人结直肠癌细胞增殖的影响及其与c-myc的靶向关系。方法选取30例结肠癌组织及其相应癌旁组织,人结直肠癌细胞株HCT-116、SW-480、SW-620、LOVO和HEK293,正常结肠上皮细胞NCM460,将miR-NC、miR-320b-mimics、pGL3、pGL3-c-myc分别转染到HCT-116和SW-480细胞内。采用实时荧光定量PCR法检测细胞、组织中miR-320b表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞c-myc表达水平;荧光素酶实验验证miR-320b与c-myc的靶向关系;免疫组织化学法检测组织中c-myc、Ki-67表达;裸鼠成瘤实验检测细胞的体外成瘤能力。结果与正常结直肠组织比较,CRC组织中miR-320b水平显著降低(P<0.01);与NCM460比较,4种CRC细胞株细胞miR-320b水平降低(P<0.05)。与正常结直肠组织比较,CRC组织中c-myc mRNA、蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。miR-320b组细胞株细胞增值率低于NC组;miR-320b组2种细胞株G1期细胞百分率高于NC组,S期细胞百分率低于NC组(P均<0.05)。miR-320b组细胞第3、4周形成的肿瘤体积明显小于NC组(P<0.001,<0.001);miR-320b组肿瘤组织Ki-67阳性率明显低于NC组。转染miR-320b-mimic+WT-c-myc的两种细胞荧光素酶活性低于转染miR-NC+WT-c-myc组(P<0.05);miR-320b组两种细胞c-myc蛋白表达水平低于NC组(P<0.05)。miR-320b+pGL3-c-myc组两种细胞72h时细胞增殖活性高于miR-320b组,低于pGL3-c-myc组(P<0.01)。结论miR-320b可负性调控c-myc抑制结直肠癌HCT-116和SW-480细胞增殖能力。

2型糖尿病患者血浆miR-320b表达变化及其与糖代谢指标的相关性

目的观察2型糖尿病(T2DM)患者血浆miR-320b的表达变化,并分析其与糖代谢指标的相关性。方法T2DM患者(T2DM组)30例、T2DM前期患者(T2DM前期组)29例和体检健康者(健康对照组)30例,采用qRT-PCR法检测三组受检者血浆中miR-320b。取三组受检者清晨空腹静脉血浆,采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FPG),采用高效液相离子交换色谱法检测糖化血红蛋白(HbA1c),采用化学发光方法检测空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)。结果T2DM组、T2DM前期组、健康对照组血浆中miR-320b相对表达量分别为0.148(0.076,0.394)、0.447(0.080,0.926)、3.820(1.894,6.720),两两比较,P均<0.05。T2DM组、T2DM前期组受检者血浆中FPG、HbA1c水平及HOMA-IR均高于健康对照组(P均<0.05),FINS水平及HOMA-β均低于健康对照组(P均<0.05);且T2DM组受检者血浆中FPG、HbA1c水平均高于T2DM前期组(P均<0.05),FINS水平低于T2DM前期组(P<0.05)。三组受检者血浆中miR-320b相对表达量与HOMA-IR负相关(r=-0.263,95%CI为-0.448~-0.0567,P=0.0133),与HOMA-β正相关(r=0.494,95%CI为0.317~0.638,P<0.01),与FPG、HbA1c、FINS均无关(P均>0.05)。结论与体检健康者和T2DM前期患者相比,T2DM患者血浆中miR-320b相对表达量降低;血浆中miR-320b相对表达量与糖代谢指标HOMA-IR、HOMA-β相关。

雷公藤甲素通过miR-320bAR轴对前列腺癌细胞的抑制作用

目的观察雷公藤甲素(triptolide,TPL)对前列腺癌细胞恶性生物学行为的作用,探究其作用机制。方法用实时荧光PCR(real-time fluorescence PCR,RT-PCR)检测LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞、RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-320b和雄激素受体(androgen receptor,AR)mRNA的表达水平。用不同剂量的TPL处理PC-3细胞,用MTT法检测细胞的增殖活力。用RT-PCR检测miR-320b和AR的表达水平。用6.25 nmol·L^(-1) TPL处理细胞,在TPL处理的基础上转染miR-320b NC/mimics,用Transwell和平板克隆形成实验检测细胞的侵袭和克隆能力。用Western blot检测AR及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用荧光素酶实验验证miR-320b与AR的靶向关系。结果与RWPE-1人正常前列腺上皮细胞比较,miR-320b和AR分别在前列腺癌细胞中呈低表达和高表达状态(P<0.01)。与Control组比较,TPL可上调PC-3细胞miR-320b的表达水平、下调AR的表达水平,抑制细胞的增殖、侵袭能力,抑制AR、N-cadherin和vimentin的表达、上调E-cadherin的表达水平(P<0.05)。与TPL组比较,miR-320b可提高TPL对PC-3细胞侵袭和增殖能力的抑制作用,抑制AR、N-cadherin和vimentin的表达、上调E-cadherin的表达(P<0.05)。荧光素酶实验显示,AR是miR-320b的潜在靶基因,miR-320b对AR存在显著调控作用(P<0.01)。结论TPL可能通过miR-320b/AR轴抑制前列腺癌细胞的恶性生物学行为。

miR-320b靶基因预测与鉴定

目的寻找miR-320b靶基因,探讨其参与T2DM发生发展的分子机制。方法4种在线软件Target Scan、MIRDB、DIANA TOOLS和miRmap预测miR-320b靶基因。采用在线软件VENNY2.1选取4种预测结果交集。在线数据库String查询靶基因编码蛋白质间的相关性,筛选其候选靶基因。采取全基因合成方式合成野生型及突变型靶基因双荧光素酶重组Psicheck-2质粒载体,Sanger测序鉴定重组质粒是否构建成功。选取对数生长期293T细胞分为6组:野生型质粒+miRNA阴性对照组(Psicheck2-PTEN-WT+NC)和野生型质粒+miR-320b mimic组(Psicheck2-PTEN-WT+mimic);突变型质粒+miRNA阴性对照组(Psicheck2-PTEN-Mut+NC)和突变型质粒+miR-320b mimic组(Psicheck2-PTEN-Mut+mimic);空质粒载体+miRNA阴性对照组(Psicheck2-NC+NC)和空质粒载体+miR-320b mimic组(Psicheck2-NC+mimic)。各组进行相应质粒和miRNAs共转染,检测双荧光素酶活性。结果4种在线软件Target Scan、MIRDB、DIANA TOOLS和miRmap预测miR-320b靶基因数分别为847、1045、806和6208,VENNY2.1取交集后得到66个共同靶基因。在线数据库String显示,66个靶蛋白之间的相关性主要集中在以人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)为核心的蛋白。双荧光素酶报告基因实验显示,Psicheck2-PTEN-WT+miR320b组荧光素酶活性比值低于Psicheck2-PTEN-WT+NC组(P<0.05)。结论miR-320b作用于靶基因PTEN的3’UTR,为探讨miR-320b参与T2DM发生发展提供依据。

外周血miR-320b表达水平对颈动脉粥样硬化斑块性质的评价研究

目的探讨外周血miR-320b表达水平对颈动脉粥样硬化斑块性质的评价价值。方法选取亳州市人民医院神经内科自2020年5月至2021年9月收治的108例颈动脉粥样硬化患者设为研究组,另选取同时期的105例健康志愿者设为对照组。测定并比较2组受试者外周血miR-320b表达水平。根据颈动脉超声检查结果将研究组患者分为无斑块组和斑块组,对比miR-320b表达水平。另根据高分辨率磁共振成像检查将斑块组患者分为不稳定斑块组与稳定斑块组,对比miR-320b表达水平,分析颈动脉粥样硬化斑块性质的影响因素及miR-320b水平对颈动脉粥样硬化不稳定斑块的评价作用。结果研究组外周血miR-320b表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无斑块组相比,斑块组患者外周血miR-320b表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血miR-320b水平评估颈动脉粥样硬化斑块的受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,曲线下面积(AUC)为0.948,敏感度、特异度分别为88.24%、97.30%。美国心脏病协会(AHA)颈动脉斑块Ⅳ~Ⅴ型、Ⅵ型患者外周血miR-320b表达水平均低于Ⅰ~Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅶ型、Ⅷ型患者,且Ⅵ型患者miR-320b表达水平低于Ⅳ~Ⅴ型患者,差异有统计学意义(P<0.05)。和稳定组斑块相比,不稳定斑块组外周血中的miR-320b表达水平显著降低(P<0.05)。多因素Logistic回归性分析显示,总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均是颈动脉粥样硬化不稳定斑块的危险因素(OR=1.979、2.217,P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇、外周血miR-320b表达水平是其保护因素(OR=0.641、0.548,P<0.05)。外周血miR-320b表达水平评估颈动脉粥样硬化不稳定斑块的ROC结果显示,AUC为0.915,敏感度76.47%,特异度92.50%。结论外周血miR-320b表达水平可能和颈动脉粥样硬化斑块性质存在一定的关系,可较好地评估斑块不稳定性。