miR-320e促进胰腺癌细胞系耐药

目的研究miR-320e在胰腺癌耐药中的作用及其机制。方法用定量PCR的方法确定miR-320e在胰腺癌耐药细胞系中的表达,进而通过在胰腺癌细胞中过表达miR-320e,检测细胞对5-FU化疗药物敏感性、细胞增殖的影响。同时通过报告基因实验及Western blot法确定miR-320e的靶基因。结果在胰腺癌耐药细胞系(PATU8988/5-FU)中miR-320e表达显著上升(P<0.01)。在胰腺癌细胞PATU8988和PANC-1中过表达miR-320e后,细胞对5-FU化疗药物出现耐受,IC_(50)显著上升(P<0.01),细胞增殖速度加快(P<0.01)。PDCD4是miR-320e的直接靶基因,miR-320e的过表达显著降低了PDCD4蛋白水平。结论 miR-320e的高表达可显著促发胰腺癌细胞化疗耐药,可作为胰腺癌耐药检测的分子标志及新的治疗靶点。

miR-320e靶向调控FHIT对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-320e(miR-320e)在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用及其分子机制。方法利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测前列腺癌细胞DU145和前列腺正常上皮细胞RWPE-1中miR-320e表达。在DU145细胞中转染anti-miR-320e或pcDNA3.1-FHIT,评估其对DU145细胞增殖和凋亡的影响。TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验分析miR-320e和脆性组氨酸三联体(FHIT)之间的靶向关系。噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、FHIT蛋白表达。将anti-miR-320e与si-FHIT共转染,观察抑制FHIT表达对抑制miR-320e诱导的DU145细胞增殖和凋亡的影响。结果与前列腺正常上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞DU145内miR-320e表达量明显上调(P<0.05)。抑制miR-320e表达或过表达FHIT明显降低24h、48h、72h时的DU145细胞活性、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05),显著提高细胞凋亡率、P21、Bax蛋白水平(P<0.05)。miR-320e靶向调控FHIT表达。抑制FHIT能逆转抑制miR-320e对细胞DU145增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,并逆转其对细胞凋亡、P21、Bax蛋白表达的促进作用。结论miR-320e通过靶向调控FHIT影响前列腺癌细胞增殖、凋亡。

过表达miR-320e抑制呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞炎症反应的机制研究

目的:探讨过表达miR-320e抑制呼吸道合胞病毒(RSV)感染支气管上皮细胞炎症反应的机制。方法:体外培养人支气管上皮细胞16HBE,用RSV感染,将细胞分为Con组、RSV组、RSV^(+)miR-NC组、RSV^(+)miR-320e组、RSV^(+)miR-320e^(+)vector组、RSV^(+)miR-320e^(+)TLR4组。RT-qPCR检测miR-320e、TLR4 mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、TLR4、IκBα、p-IκBα、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-α、IFN-β表达;双荧光素酶实验验证miR-320e和TLR4的靶向关系。结果:与Con组相比,RSV组miR-320e表达水平、存活率、Bcl-2和IκBα蛋白表达明显降低,凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-α、IFN-β表达、TLR4 mRNA和蛋白表达,以及p-IκBα蛋白表达和p-NF-κB/NF-κB明显增加。与RSV^(+)miR-NC组相比,RSV^(+)miR-320e组miR-320e表达水平、存活率、IFN-α、IFN-β表达、Bcl-2和IκBα蛋白表达明显增加,凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β表达、TLR4 mRNA和蛋白表达,以及p-IκBα蛋白表达和p-NF-κB/NF-κB明显降低。miR-320e靶向负调控TLR4表达,上调TLR4可部分回复过表达miR-320e对RSV感染支气管上皮细胞16HBE凋亡和炎症反应的影响。结论:miR-320e通过靶向负调控TLR4表达抑制RSV感染支气管上皮细胞16HBE凋亡和炎症反应。