miR-324-3p/MAGOH分子轴在脑胶质瘤中的功能及作用机制研究

目的探究miR-324-3p/MAGOH分子轴在脑胶质瘤中的功能及作用机制。方法收集2022年6月—2023年6月遵义医科大学附属医院神经外科接受手术治疗的胶质瘤患者(n=50)和非胶质瘤的脑病患者(n=20)样本,体外培养人脑胶质瘤细胞系U87。实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)检测脑胶质瘤细胞(U87)和患者临床标本中miR-324-3p和MAGOH的表达。蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测MAGOH、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和MMP9的表达水平。细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤细胞的增殖能力。Transwell检测胶质瘤细胞的侵袭能力。荧光素酶报告基因检测miR-324-3p和MAGOH的相互作用。免疫组化检测MAGOH在脑胶质瘤组织中的表达。结果胶质瘤患者癌组织中MAGOH的表达较高,差异有统计学意义(P<0.01);且与miR-324-3p的表达呈现显著负相关(r=0.7383,P=0.0002)。过表达MAGOH能促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.01),而过表达miR-324-3p能抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.01)。miR-324-3p和MAGOH的3’-UTR相互作用,且过表达MAGOH能抑制miR-324-3p对胶质瘤细胞的抑制作用(P<0.01)。结论miR-324-3p通过抑制MAGOH的表达来抑制胶质瘤细胞和增殖和侵袭。

持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p和miR-324-3p表达与射频消融术后房颤复发的关系

目的探讨血清miR-133a-3p、miR-324-3p在持续性心房颤动患者血清中的表达以及与射频消融术后房颤复发的关系。方法收集2019年7月~2022年7月于沧州市人民医院住院诊治并接受射频消融术治疗的180例持续性心房颤动患者(持续性心房颤动组)作为研究对象,根据房颤是否复发,分为无复发组(n=116)和复发组(n=64),另选取同期在该院体检的180例健康人作为对照组。比较各组血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达水平;多因素Logistic回归分析持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的影响因素;ROC曲线分析血清miR-133a-3p,miR-324-3p水平对持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的预测价值。结果持续性心房颤动组血清miR-133a-3p(0.76±0.25),miR-324-3p(0.68±0.21)水平显著低于对照组(1.03±0.32,1.05±0.30),差异具有统计学意义(t=8.921,13.556,均P<0.05)。复发组血清miR-133a-3p(0.58±0.19),miR-324-3p水平(0.50±0.16)均显著低于无复发组(0.86±0.27,0.78±0.25),差异具有统计学意义(t=7.349,8.087,均P<0.055)。多因素Logistic回归分析,结果显示,血清miR-133a-3p[OR(95%CI):0.673(0.534~0.848)],miR-324-3p[OR(95%CI):0.756(0.629~0.909)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的保护因素(均P<0.05),心率[OR(95%CI):2.143(1.265~3.631)]、LAD[OR(95%CI):1.756(1.159~2.661)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的独立危险因素(均P<0.05)。miR-133a-3p,miR-324-3p二者联合预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的AUC为0.901,敏感度和特异度分别为82.81%,86.21%,优于各自单独预测(Z=4.210,2.804,均P<0.05)。结论持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达显著降低,二者联合对预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发有较好的参考价值。

基于IncRNA-MIAT/miR-324-3p/Notch通路探究大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的 探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录(lncRNA-MIAT)在大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)模型的表达及其对低氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡及氧化应激的影响。方法 SD大鼠10只,随机分为I/R模型组及假手术组,采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立脑损伤I/R模型。建立大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的细胞系(PC12细胞)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,检测相关指标。采用RT-PCR法检测LncRNA MIAT和miR-324-3p在SD大鼠脑组织和PC12细胞中的表达量。采用黄嘌呤氧化酶法(WST-8V)、硫代巴比妥酸法(TBA test)及5,5’—二硫代双(2—硝基苯甲酸)法(DTNB)分别检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量;酶联免疫吸附法(ELISE)检测PC12细胞的肿瘤坏死因子—α (TNF-α)、白介素—6 (IL-6)及白介素—1β (IL-1β)等炎性因子的含量;流式细胞法检测PC12细胞的凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白Bax(Bcl-2家族促凋亡蛋白)、Bcl-xl(Bcl-2家族抗凋亡蛋白)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤—2),Notch信号通路相关蛋白Notch1 (Notch家族1型跨膜糖蛋白)、Hes1 (多毛增强子1)、Hes5表达量。结果 I/R组大鼠、OGD/R组PC12细胞中LncRNA MIAT水平分别显著低于假手术组、对照组(P<0.05),miR-324-3p水平呈相反变化趋势。过表达LncRNA MIAT显著上调OGD/R组LncRNA MIAT、Bcl-xl、Bcl-2表达量,抑制Bax表达量(P<0.05)。过表达LncRNA MIAT能显著降低Vetor组MDA含量,提高SOD和GSH含量(P<0.05)。ELISA结果显示,过表达LncRNA MIAT组TNF-α、IL-6及IL-1 β含量显著低于Vector组,同时显著高于过表达LncRNA MIAT+过表达miR-324-3p组(P<0.05)。Western-blot检测结果显示,过表达LncRNA MIAT组Notch1、Hes1、Hes5表达量显著低于模型组和过表达LncRNA MIAT+过表达miR-324-3p组(P<0.05)。结论 LncRNA-MIAT的过度表达可抑制OGD/R模型中PC12细胞Notch1、Hes1和Hes5(Notch通路相关蛋白)的表达,降低PC12细胞的氧化损伤和凋亡率,其机制可能与LncRNA-MIAT调节miR-324-3p的表达有关。

血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中的表达水平及与超声诊断监测指标的关系

目的:探究与分析血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中的表达水平及与超声诊断监测指标的关系。方法:选取本院自2018年4月至2021年4月收治的PCOS患者103例作为观察组,另选择同时期来本院接受健康体检的未发生PCOS妇女100例作为对照组,对比两组患者的一般资料,采用实时定量PCR对血清miR-324-3p及miRNA-483-3p水平进行测量,同时采用GE公司生产的彩色多普勒诊断仪对两组的卵巢超声情况进行记录,采用Spearman相关性分析血清miR-324-3p及miRNA-483-3p与PCOS超声指标的关系。结果:观察组与对照组相比卵巢体积较大、卵泡数目较多,血流指数较快,血清miR-324-3p水平较低,miRNA-483-3p水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。行Spearman相关性分析可见,卵巢体积、卵泡数目及血流指数分别与血清miR-324-3p及miRNA-483-3p之间呈现出了明显的负相关性。结论:血清miR-324-3p及miRNA-483-3p在PCOS中呈现出了较低的表达水平,且与其超声诊断指标呈现出了明显的相关性,为PCOS的临床诊断及后续治疗提供了可靠依据。

miR-324-3p通过调控MC1R基因影响黑色素的形成

旨在证明miR-324-3p可以通过调控其预测的靶基因MC1R及其下游基因的表达从而对羊驼皮肤黑色素的合成产生影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中转染miR-324-3p过表达载体,应用qRT-PCR与Western blotting分析比较各试验组中MC1R基因与毛色相关基因小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcription factor,Mitf)、酪氨酸酶(Tyrosinase,Tyr)、酪氨酸相关蛋白2(Tyrosinase related protein 2,Tyrp2)的表达差异性,利用酶标仪检测黑色素产量的变化。结果显示:(1)miR-324-3p在棕色与白色羊驼皮肤中均有表达,且在棕色羊驼皮肤中极显著表达(P<0.01),其相对表达量是白色的1.64倍;(2)黑色素细胞被转染了miR-324-3p过表达载体后,处理组靶基因MC1R及其下游调控基因Mitf、Tyr和Tyrp2的表达量与黑色素产量较空白对照组均有下调,且以Mitf基因表达量极显著下调(P<0.01)。综上表明,羊驼皮肤中miR-324-3p可能通过调控MC1R基因的表达,顺势下调MC1R基因下游调控基因Mitf、Tyr与Tyrp2的表达,最终对羊驼皮肤黑色素细胞中黑色素的类型及合成量产生影响。

MiR-324-3p经上皮-间质转化调控鼻咽癌迁移侵袭的实验分析

目的探讨miR-324-3p对鼻咽癌细胞体外迁移侵袭能力的影响。方法 MiR-324-3p转移上调其在鼻咽癌5-8F和6-10B细胞中的表达,采用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测上调后的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞迁移及侵袭能力;western blot检测上皮-间质转化(EMT)上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物Vimentin的表达。结果 MiR-324-3p成功转移上调了其在鼻咽癌5-8F和6-10B细胞中的表达。过表达miR-324-3p的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞的体外迁移及侵袭能力显著下降,可同时伴随着E-cadherin的表达上调,Vimentin的表达下降。结论 MiR-324-3p可能通过诱导EMT改变调控鼻咽癌细胞的侵袭转移能力。

LncRNA GAS6-AS1靶向miR-324-3p激活Wnt/β-catenin通路调控脑胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的研究

目的研究LncRNA GAS6-AS1对脑胶质瘤T98G细胞增殖及其放疗敏感性的影响。方法RT-qPCR技术分析脑胶质瘤组织、癌旁组织和X射线照射的T98G细胞中LncRNA GAS6-AS1、miR-324-3p基因表达。分别下调T98G细胞中GAS6-AS1或miR-324-3p的表达后,利用X射线照射细胞,分析GAS6-AS1表达下调对T98G细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。miRcode和双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA GAS6-AS1和miR-324-3p之间的相互关系。同时上调LncRNA GAS6-AS1与miR-324-3p在T98G细胞中的表达,进一步分析T98G细胞增殖、侵袭和放疗敏感性。Western blot检测miR-324-3p对Wnt/β-catenin通路的影响。分析miR-153-3p通过Wnt/β-catenin通路对T98G细胞增殖、侵袭和放疗敏感性的影响。结果与癌旁正常组织比较,脑胶质瘤组织中LncRNA GAS6-AS1 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。2、4、6 Gy X射线照射T98G细胞后中GAS6-AS1 mRNA表达低于0 Gy剂量X射线照射(P<0.05)。下调LncRNA GAS6-AS1表达后,GAS6-AS1 mRNA表达明显降低(P<0.01)。下调GAS6-AS1表达后,T98G细胞活力降低(P<0.01),细胞侵袭数目减少。6 Gy X射线照射细胞后活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高;下调GAS6-AS1表达后并用6 Gy X射线照射细胞,活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高。GAS6-AS1 wt+miR-324-3p mimics组荧光素酶活性显著低于mimics NC+GAS6-AS1 wt组(P<0.01)。与癌旁正常组织比较,脑胶质瘤组织中miR-324-3p mRNA表达显著降低(P<0.01)。2、4、6 Gy X射线照射T98G细胞后中miR-324-3p mRNA表达高于0 Gy剂量X射线照射(P<0.05)。上调GAS6-AS1和miR-324-3p表达后,GAS6-AS1、miR-324-3p mRNA表达明显升高(P<0.01)。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC组比较,pcDNA-GAS6-AS1+mimics NC组T98G细胞活力和侵袭数目显著升高(P<0.05),pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics组细胞活力和侵袭数目显著降低(P<0.05);与pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics组比较,pcDNA-GAS6-AS1+miR-324-3p mimics组细胞活力和侵袭数目显著升高(P<0.05)。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC+6 Gy组比较,pcDNA-GAS6-AS1+mimics NC+6 Gy组细胞活力明显上升,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics+6 Gy组细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);与pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics+6 Gy组比较,pcDNA-GAS6-AS1+miR-324-3p mimics+6 Gy组细胞活力明显上升,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与mimics NC组比较,miR-324-3p mimics组细胞内β-catenin和CyclinD1蛋白表达显著降低,β-catenin/GAPDH、CyclinD1/GAPDH比值显著降低(P<0.01)。与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor组细胞内β-catenin和CyclinD1蛋白表达显著升高,β-catenin/GAPDH、CyclinD1/GAPDH比值显著升高(P<0.01)。与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor转染T98G细胞48 h后增殖活力显著上调(P<0.05),细胞侵袭数目明显增加(P<0.01);与miR-324-3p inhibitor组比较,miR-324-3p inhibitor+XAV939组细胞增殖活力显著降低(P<0.05),细胞侵袭数目明显减少(P<0.01)。用6 Gy X射线照射T98G细胞后,与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor组细胞增殖活力显著上调(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),与miR-153-3p inhibitor组相比,miR-153-3p inhibitor+XAV939组细胞增殖活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论LncRNA GAS6-AS1靶向miR-324-3p激活Wnt/β-catenin通路促进了T98G细胞增殖,降低了放疗敏感性。

miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制研究

背景miR-324-3P在多种恶性肿瘤中发挥着重要作用,调控Wnt/β-catenin信号通路可能是其参与肿瘤进展的重要途径,miR-324-3P在宫颈癌中的具体作用尚不清楚。目的研究miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制。方法收集入住我院宫颈癌患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织各40例,TargetScan7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-324-3P对WNT3a基因的靶向调控作用。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-324-3P、WNT3a mRNA的表达水平。Pearson法分析宫颈癌组织中miR-324-3P与WNT3a表达的相关性。常规培养宫颈癌细胞(HeLa细胞),将其分为对照组(NC组)、miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组,采用Lipofectamine 2000转染试剂进行各组质粒的转染。四唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Western-blot法检测各组细胞中WNT3a和β-catenin的表达。结果宫颈癌组织中miR-324-3P、WNT3a的相对表达量分别为0.79±0.39、1.46±0.53,与正常宫颈组织相比,miR-324-3P表达降低、WNT3a表达升高。Targetscan7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验及qRT-PCR表明miR-324-3P靶向调控WNT3a,且Pearson分析显示二者呈负相关。与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力降低。与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力增加,WNT3a削弱miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力的抑制作用。与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组细胞中WNT3a和β-catenin表达降低。而与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组WNT3a和β-catenin蛋白表达增加。WNT3a削弱miR-324-3P对β-catenin的抑制作用。结论miR-324-3P靶向调控WNT3a表达,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

血清miR-296-3p和miR-324-3p表达与肾癌患者临床病理特征及预后的关系

目的:分析血清微小核糖核酸-296-3p(microribonucleic acid-296-3p,miR-296-3p)和微小核糖核酸-324-3p(microribonucleic acid-324-3p,miR-324-3p)表达水平与肾癌患者临床病理特征及预后的关系。方法:选择2017年1月—2020年12月广安市人民医院收治的90例肾癌患者(肾癌组),另选择同时期本院收治的90例肾良性病变患者(良性组),同时期来院接受体检的90例健康体检者(健康组);采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测血清中miR-296-3p和miR-324-3p的相对表达量;采用Cox回归分析影响肾癌患者预后的因素;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-296-3p、miR-324-3p水平与肾癌患者预后的关系。结果:健康组、良性组、肾癌组血清miR-296-3p水平依次升高(P<0.05),miR-324-3p水平依次降低(P<0.05)。miR-296-3p高表达患者TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的例数显著高于miR-296-3p低表达患者(P<0.05);miR-324-3p低表达患者TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的例数显著高于miR-324-3p高表达患者(P<0.05)。生存组miR-296-3p水平显著低于死亡组,miR-324-3p水平显著高于死亡组(P<0.05)。TNM分期、miR-296-3p、miR-324-3p是影响肾癌患者生存或死亡的因素(P<0.05)。miR-296-3p高表达患者3年总生存率(43.75%,21/48)显著低于miR-296-3p低表达患者(95.24%,40/42)(χ^(2)=28.471,P<0.001);miR-324-3p低表达患者3年总生存率(43.48%,20/46)显著低于miR-324-3p高表达患者(93.18%,41/44)(χ^(2)=27.768,P<0.001)。结论:肾癌患者血清miR-296-3p水平显著升高,miR-324-3p水平显著降低,且与肾癌患者临床病理特征以及预后相关。

miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

lncRNA MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN介导慢性阻塞性肺疾病发展的分子机制研究

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MEG8通过调控miR-367-3p/磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)介导慢性阻塞性肺疾病(COPD)发展的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测16HBE细胞和COPD组织lncRNA MEG8表达水平;在香烟烟雾提取物(CSE)刺激后的16HBE细胞中过表达lncRNA MEG8及加入miR-367-3p inhibitor后同时敲减lncRNA MEG8或PTEN,采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测细胞凋亡、细胞增殖和炎症因子水平的变化;利用双荧光素酶报告系统对lncRNA MEG8、miR-367-3p、PTEN的靶向关系进行验证。结果 MEG8在CSE刺激的16HBE细胞和COPD临床组织样本中表达降低(P<0.05)。相比于CSE组,过表达MEG8后CSE刺激的16HBE细胞凋亡和炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平降低(P<0.05),促凋亡蛋白Bax、Caspase3和Cleaved-caspase3表达水平降低(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证了MEG8可靶向抑制miR-367-3p(P<0.05),同时miR-367-3p可靶向抑制PTEN的表达(P<0.05),进而抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应(P<0.05)。在CSE刺激下,相较于Control组,加入miR-367-3p inhibitor可显著上调16HBE细胞中PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),增强细胞增殖活性(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),显著下调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3和Cleaved-caspase3的表达水平(P<0.05),上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(P<0.05),抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05),随后敲降MEG8或PTEN可恢复PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞增殖活性(P<0.05),逆转miR-367-3p inhibitor导致的细胞凋亡(P<0.05)以及对凋亡相关蛋白的调控作用(P<0.05),增强炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN轴抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应,并可能为临床COPD的治疗提供新的治疗策略。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18、PD-L1蛋白及其mRNA表达水平高于HNEpC细胞,miR-140-3p表达水平低于HNEpC细胞(P <0.05)。上调lncRNA HCG18或下调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力增强,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平升高(P <0.05);下调lncRNA HCG18或上调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力降低,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平降低(P <0.05)。miR-140-3p与lncRNA HCG18、PD-L1均有靶向关系。上调miR-140-3p表达可逆转上调lncRNA HCG18对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用;沉默PD-L1可逆转下调miR-140-3p对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用。结论 过表达lncRNA HCG18可通过海绵化miR-140-3p,上调PD-L1表达,促进CNE2细胞增殖、迁移与侵袭。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

冠心病患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系研究

目的探究冠心病(CHD)患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系。方法以2021年3月至2023年7月在青岛大学附属心血管病医院进行治疗的80例CHD患者为研究对象(CHD组),根据Gensini评分将CHD患者分为轻度组(n=27)、中度组(n=33)和重度组(n=20),另选取同期在本院进行体检的健康者80例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分之间的关系采用Spearman相关性分析;发生CHD的影响因素采用Logistic多因素模型分析;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平对CHD的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果CHD组患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均高于对照组(P<0.05),且随着病情程度的增加,CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平逐渐升高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分均呈正相关(r_(1)=0.411,r_(2)=0.431,P<0.001)。Logistic回归分析结果显示,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)、miR-3129-5p、miR-6870-3p升高均为发生CHD的危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL-C)升高为发生CHD的保护因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p诊断CHD的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.852,敏感度分别为78.8%、83.8%,特异度分别为65.1%、56.3%,二者联合预测CHD的AUC为0.927,敏感度为77.5%、特异度为73.8%。结论CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均升高,且血清miR-3129-5p、miR-6870-3p与CHD患者疾病严重程度密切相关。miR-3129-5p、miR-6870-3p联合检测可作为诊断CHD的重要辅助参考指标。

miR-495-3p靶向BUB1调控STAT3信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-495-3p靶向苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)调控信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响。方法 使用cDNA芯片技术筛选出食管癌组织和正常组织差异表达基因,并用生物信息学方法进行分析。运用TargetScan数据库对miRNA的靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告基因检测技术进行验证。将KYSE150细胞分为空白对照组、NC mimics组和miR-495-3p mimics组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活力。用流式细胞术测定细胞周期和凋亡。通过定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定BUB1 mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法(Western blot)测量BUB1、STAT3、磷酸化(p)-STAT3、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白水平。用划痕和Transwell小室实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 差异表达基因参与生物学过程、信号通路和网络构建主要与细胞周期相关,BUB1是关键的核心(Hub)基因,miR-495-3p靶向调控BUB1。体外实验表明,过表达miR-495-3p能显着抑制食管癌细胞的生长、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞。过表达miR-495-3p处理后,食管癌细胞中Caspase-3、Caspase-9表达量升高(P<0.01),而Bcl-2、BUB1、CCNB1、CDK1、p-STAT3表达量降低(P<0.01)。STAT3信号通路也被发现在此过程中发挥着重要作用。结论 miR-495-3p可能通过下调BUB1介导STAT3信号通路影响食管癌细胞的生物学行为。

lncRNA HCP5靶向miR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨lncRNA HCP5靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞。将抑制HCP5表达的质粒si-HCP5及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测SCC13细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5和miR-409-3p的靶向关系。结果:SCC13细胞中HCP5表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05)。抑制HCP5表达后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-409-3p后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示lncRNA HCP5和miR-409-3p存在靶向关系。抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5低表达对SCC13细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:抑制HCP5可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。