Circular RNA hsa_circ_0078767通过miR-330-3p/p53轴调控肺癌细胞铁死亡

目的:探讨Circular RNAs(hsa_circ_0078767)通过调控miR-330-3p/p53信号通路,对肺癌细胞铁死亡的影响。方法:用qRT-PCR法检测四种人类肺癌细胞系(HCC827、A-549、Calu-3和H1975)和一种正常肺上皮细胞系BEAS-2B中hsa_circ_0078767的表达;转染hsa_circ_0078767的过表达载体(oe-circ)于A-549和H1975细胞内;RNA FISH确定hsa_circ_0078767的胞质定位;CCK-8、集落形成、EdU染色、FACS分析和流式细胞仪分别检测A-549和H1975细胞的活性、增殖、凋亡和ROS情况;铁测定试剂盒检测细胞铁含量;Western blot检测细胞中miR-330-3p、cleaved Caspase3和cleaved PARP的表达;RNA pull-down实验分析hsa_circ_0078767与miR-330-3p的结合位点的结合效率;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测hsa_circ_0078767和miR-330-3p的mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0078767与miR-330-3p的靶向关系;皮下注射A-549-vector和A549-oe-circ细胞(1×10~6个)到六周大的雄性裸鼠腹部,建立活体异种移植动物模型。结果:我们发现hsa_circ_0078767在肺癌细胞中低表达以及hsa_circ_0078767在肺癌恶性发展过程中对铁死亡的调控功能。在过表达hsa_circ_0078767的肺癌细胞中发现铁、Fe2+和ROS水平升高。铁死亡诱导剂erastin会降低细胞活力,而过表达hsa_circ_0078767会加强erastin对肺癌细胞的抑制作用。在机制方面,hsa_circ_0078767可通过海绵吸附miR-330-3p来影响p53的表达。上调miR-330-3p及敲降p53可逆转hsa_circ_0078767过表达对肺癌细胞的作用。结论:hsa_circ_0078767可能通过miR-330-3p/p53轴促进肺癌细胞铁死亡从而抑制肺癌进展。

清肾颗粒通过调控外泌体、miR-330-3p以及CREBBP表达抑制小鼠肾纤维化

目的探讨清肾颗粒对腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型及尿酸刺激下NRK-49F细胞的作用及其调控外泌体、miR-330-3p和CREBBP的机制。方法动物实验:构建腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型,分为正常组、模型组和清肾颗粒组(8.0 g·kg^(-1)·d^(-1)),6只/组,灌胃12周。采用尾静脉注射腺相关病毒载体,实验结束后收集双侧肾组织。观察小鼠肾组织外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测小鼠肾组织Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理学变化。细胞实验:构建尿酸刺激下的NRK-49F细胞模型(尿酸400μmol/L),SD大鼠灌胃制备清肾颗粒含药血清用于细胞实验,分为正常组、模型组和清肾颗粒含药血清组。观察NRK-49F细胞中外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测NRK-49F细胞中Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;双荧光素酶报告基因检测miR-330-3p与CREBBP靶向关系;RT-qPCR和Western blotting检测NRK-49F细胞中miR-330-3p与CREBBP表达变化。结果动物实验中,Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平降低(P<0.05)。Western blotting及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组Col-III、α-SMA、FN表达增加,E-cad表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组Col-III、α-SMA、FN表达减少,E-cad表达增加(P<0.05)。肾脏病理检查显示,清肾颗粒可以明显减轻小鼠肾组织纤维化(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,尾静脉注射腺相关病毒病毒载体抑制miR-330-3p表达,增加CREBBP水平,减轻肾纤维化(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,CREBBP是miR-330-3p的靶点(P<0.05)。RT-qPCR和Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组miR-330-3p表达增加,CREBBP表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组miR-330-3p表达减少,CREBBP表达增加(P<0.05)。细胞实验结果与动物实验结果趋势一致。结论清肾颗粒通过干预外泌体,降低miR-330-3p水平,增加CREBBP表达抑制肾纤维化。

miR-330-5p通过抑制MAPK通路发挥对心肌缺血再灌注的保护作用

目的:探究miR-330-5p保护心肌缺再灌注的分子机制及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养人心肌细胞AC16,转染miR-330-5p模拟剂(mimic),在1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2)条件下构建心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,以模拟心肌缺血再灌注。采用流式细胞技术检测细胞凋亡;采用ELISA法检测心肌细胞中4-羟基壬烯醛(4-HNE)、丙二醛(MDA)的含量;采用WesternBlot法检测凋亡相关因子Bcl-2相关的X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达、乙醛脱氢酶2(ALDH2)和MAPK信号通路相关因子脯氨酸导向的细胞外调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达。结果:在OGD/R模型中,心肌细胞凋亡率增加,4-HNE、MDA含量均显著升高,而ALDH2则显著降低;凋亡标志Bax显著升高,而Bcl-2显著降低。转染miR-330-5p mimic后,心肌细胞中4-HNE、MDA显著降低,ALDH2可见显著升高,且细胞凋亡显著抑制。对于MAPK信号通路,在转染miR-330-5pmimic后,ERK1/2、JNK1、p38MAPK蛋白表达均显著降低。结论:miR-330-5p通过抑制MAPK信号通路,调控ALDH2表达,抑制心肌缺血再灌注过程中心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡,从而保护心肌细胞。

CircFOXK2调节miR-330-5p/SLC1A5轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircFOXK2对卵巢癌(ovarian cancer, OC)细胞恶性生物学行为的影响以及在此过程中对miR-330-5p/SLC1A5轴的调节机制。方法:将人OC细胞系的SKOV3细胞分为NC组(未转染)、 si-CircFOXK2-NC组(转染si-CircFOXK2-NC)、si-CircFOXK2组(转染si-CircFOXK2)、 si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p-NC组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p-NC)、si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p)。qRT-PCR检测细胞中CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5 mRNA的表达;Western blot检测细胞中SLC1A5蛋白表达水平;CCK-8检测SKOV3细胞增殖;克隆形成实验检测SKOV3细胞克隆数量;流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况;Transwell小室实验测定SKOV3细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5三者的靶向关系。结果:与NC组和si-CircFOXK2-NC组相比,转染si-CircFOXK2组OC细胞中CircFOXK2、SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05),miR-330-5p的表达、细胞凋亡率均升高(P<0.05);anti-miR-330-5p回补实验结果显示,si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组细胞中SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达升高,细胞增殖活性及迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论:敲低CircFOXK2能够上调miR-330-5p表达,下调SLC1A5的表达,抑制OC细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。

miR-330联合MORC2检测在宫颈癌预后评估中的临床价值

目的:研究miR-330联合MORC2检测在宫颈癌病情及预后评估中的临床价值。方法:选择2018年01月至2022年01月诊治的81例宫颈癌患者(CVC组)及宫颈良性疾病患者(对照组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测miR-330及MORC2表达并分析其与临床病理因素的关系。采用ROC曲线分析miR-330联合MORC2预测宫颈癌2年预后不良的敏感度及特异度。多因素Logistics回归分析宫颈癌死亡的危险因素。Kaplan-Meier法分析miR-330和MORC2表达与生存期的关系。结果:CVC组宫颈癌患者肿瘤组织miR-330、MORC2表达显著高于癌旁组织和对照组(P<0.05)。低分化、有恶性腹水、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移、有远处转移及Ⅲ-Ⅳ期宫颈癌患者miR-330、MORC2表达显著高于中-高分化、无恶性腹水、肌层浸润深度<1/2、无淋巴结转移、无远处转移及Ⅰ-Ⅱ期患者。MORC2联合miR-330预测宫颈癌2年预后不良敏感度、特异度及AUC均高于miR-330、MORC2、肿瘤分化程度、恶性腹水、肌层浸润深度、淋巴结转移、远处转移及FIGO分期(P<0.05)。miR-330≥0.89、MORC2≥0.72、低分化、有恶性腹水、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期为宫颈癌死亡的独立危险因素(P<0.05)。CVC组中miR-330≥0.89且MORC2≥0.72宫颈癌患者中位生存期显著低于其它患者(miR-330<0.89或MORC2<0.72)[中位生存期(24.1±4.5)个月比(38.7±6.2)个月,LogRank=21.462,P<0.05]。结论:宫颈癌患者miR-330及MORC2表达显著升高,在宫颈癌病情及预后评估中具有重要临床价值,两者检测时可显著提高预测宫颈癌预后不良的敏感度及特异度。

LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

circ_0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨circ_0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织;A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ_0081666组(转染si-circ_0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ_0081666组(转染pcDNA-circ_0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ_0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ_0081666和anti-miR-con)、si-circ_0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ_0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ_0081666和miR-330-5p表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ_0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果非小细胞肺癌组织和A549细胞中circ_0081666表达水平显著升高,miR-330-5p表达水平显著降低(P<0.05)。敲低circ_0081666或过表达miR-330-5p后,A549细胞活性显著降低,迁移、侵袭细胞数显著减少(P<0.05)。circ_0081666靶向调控miR-330-5p;敲低miR-330-5p逆转了抑制circ_0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论敲低circ_0081666可能通过上调miR-330-5p抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

circ_0003221/miR-330-3p在骨肉瘤组织中的表达及对U2-OS增殖迁移的影响

目的探讨circ_0003221在骨肉瘤组织中的表达及对U2-OS增殖迁移的影响和分子机制。方法选择37例骨肉瘤患者瘤组织及瘤旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0003221和miR-330-3p的表达水平,Pearson进行相关性分析。双荧光素酶报告实验检测circ_0003221和miR-330-3p的靶向关系。将骨肉瘤细胞U2-OS分为si-NC组、si-circ_0003221组、miR-NC组、miR-330-3p mimic组、si-circ_0003221+anti-miR-NC组、si-circ_0003221+miR-330-3p Inhibitor组;MTT法检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Transwell检测细胞迁移数;划痕实验检测划痕愈合率。结果与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中circ_0003221表达水平升高,miR-330-3p表达水平降低(P<0.05);circ_0003221与miR-330-3p的表达呈负相关。circ_0003221靶向调控miR-330-3p。干扰circ_0003221或过表达miR-330-3p,U2-OS增殖抑制率升高,克隆形成数和迁移细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05)。抑制miR-330-3p表达可逆转干扰circ_0003221对U2-OS细胞增殖和迁移的影响。结论circ_0003221再骨肉瘤组织中高表达,干扰circ_0003221可通过上调miR-330-3p抑制骨肉瘤细胞U2-OS增殖、迁移。

circ_POLA2靶向miR-330-5p对脑胶质瘤细胞生长及转移能力的影响

目的探讨circ_POLA2对脑胶质瘤细胞生长及转移能力的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测脑胶质瘤组织与癌旁组织中circ_POLA2、miR-330-5p的表达量;Pearson法分析脑胶质瘤组织中circ_POLA2、miR-330-5p表达量的相关性;体外培养人脑胶质瘤细胞T98G,si-NC、si-circ_POLA2、miR-NC、miR-330-5p mimics、si-circ_POLA2与anti-miR-NC、si-circ_POLA2与anti-miR-330-5p分别转染至T98G细胞(si-NC组、si-circ_POLA2组、miR-NC组、miR-330-5p组、si-circ_POLA2+anti-miR-NC组、si-circ_POLA2+anti-miR-330-5p组);CCK-8实验检测细胞增殖;氧化酶法检测葡萄糖消耗量;比色测定法检测乳酸生成量;划痕实验、Transwell小室实验别检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验检测circ_POLA2与miR-330-5p的靶向关系;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中circ_POLA2表达量明显升高,miR-330-5p表达量明显降低(P<0.05);circ_POLA2与miR-330-5p呈负相关(r=-0.8964,P<0.001);与si-NC组比较,si-circ_POLA2组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05);circ_POLA2能够靶向结合miR-330-5p;与miR-NC组比较,miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与si-circ_POLA2+anti-miR-NC组比较,si-circ_POLA2+anti-miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显升高,侵袭细胞数明显增多(P<0.05)。结论干扰circ_POLA2表达可能通过靶向miR-330-5p而降低糖酵解水平进而抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭。

NSCLC脑转移患者血清S100B、外泌体miR-330表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移患者血清S100B、外泌体miR-330表达变化以及与调强放疗近期疗效和远期疗效的关系。方法选择2017年1月至2019年12月在河北医科大学第四医院接受治疗的局部晚期NSCLC术后脑转移患者60例,所有患者完成计划放疗。分别于放疗前后采集血液样本,检测血清S100B和外泌体miR-330表达。结果放疗结束后,临床有效率为80.0%(48/60),作为临床有效组;另12例患者为临床无效组。随访期间共46例患者死亡。接受放疗前后,临床有效组患者血清S100B水平均低于无效组[(50.60±8.45)μg/ml vs.(60.21±7.00)μg/ml,(64.94±8.10)μg/ml vs.(75.87±11.32)μg/ml],同时血清外泌体miR-330水平高于无效组[(0.52±0.18)vs.(0.39±0.17),(0.54±0.19)vs.(0.40±0.19)],差异具有统计学意义(P<0.05);此外存活组患者血清S100B水平均低于死亡组[(45.48±7.01)μg/ml vs.(54.67±8.48)μg/ml,(59.11±4.88)μg/ml vs.(69.57±9.61)μg/ml],同时血清外泌体miR-330水平高于死亡组[(0.62±0.14)vs.(0.45±0.17),(0.67±0.15)vs.(0.46±0.18)],差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox风险比例回归模型结果显示,治疗前血清S100B和外泌体miR-330、治疗后血清外泌体miR-330是影响患者预后的独立因素(P<0.05);且预测患者死亡的ROC曲线下面积分别为0.804(95%CI:0.763~0.895)、0.771(95%CI:0.728~0.845)、0.811(95%CI:0.745~0.898)。结论对于局部晚期NSCLC术后脑转移患者,血清S100B水平升高和外泌体miR-330水平降低与放疗近期疗效和远期生存预后密切相关。

miR-330-3p靶向丙酮酸激酶M2型对胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程调控机制研究

目的探讨miR-330-3p靶向丙酮酸激酶M2型(PKM2)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程的影响及机制。方法采用反转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞SGC-7901、胃粘膜上皮细胞PKM2-NC、miR-330-3p-inhibitor+PKM2-shRNA、miR-330-3p-mimcs+LV-NC、miR-330-3p-mimcs+LV-PKM2转染至胃癌细胞中,采用CCK8法、Transwell实验、Annexin V/PI法分别检测细胞增殖、侵袭、凋亡情况,检测葡萄糖利用率、乳酸生成量、己糖激酶(HK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性等糖酵解指标,采用Western Blot法检测PKM2、GLUT1、HK2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-330-3p与PKM2的靶向关系。结果 (1)胃癌细胞系miR-330-3p表达量高于胃粘膜上皮细胞,PKM2表达量低于胃粘膜上皮细胞(P <0.05)。(2)生物信息学显示,miR-330-3p与PKM2存在结合位点;荧光素酶报告基因检测结果显示,与miR-NC组比较,miR-330-3p PKM2野生型荧光素酶活性降低(P <0.05)。(3)与miR-NC组比较,miR-330-3p-inhibitor组吸光度值、侵袭细胞数增多,凋亡细胞数减少,细胞葡萄糖消耗量、乳酸生成量、HK活性、LDH活性降低,PKM2、GLUT1、HK2表达升高,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达量降低(P <0.05),miR-330-3p-inhibitor+PKM2-shRNA组升高或降低幅度低于miR-330-3p-inhibitor组(P <0.05)。(4)与miR-NC组比较,miR-330-3p-mimcs组miR-330-3p表达量升高(P <0.05),吸光度值、侵袭细胞数减少,凋亡细胞增多,细胞葡萄糖消耗量、乳酸生成量、HK活性、LDH活性升高,PKM2、GLUT1、HK2表达降低,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达量升高(P <0.05);miR-330-3p-mimcs+LV-PKM2组升高或降低趋势低于miR-330-3pmimcs组(P <0.05)。结论 miR-330-3p表达与胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程相关,可能通过靶向PKM2实现。

食管癌患者血清miR-3653-3p和miR-330-3p的作用及临床意义

目的观察血清miR-3653-3p和miR-330-3p表达水平对食管癌诊断和预后预测的临床价值。方法选取2015年1月至2017年6月在该院行手术治疗的食管癌患者109例作为食管癌组,同期在该院行手术治疗的食管良性病变患者(65例)和体检健康者(30例)分别作为食管良性病变组和对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌的诊断效能和预后预测价值。结果食管癌组患者血清miR-3653-3p水平低于食管良性病变组和对照组(P<0.01),食管良性病变组血清miR-3653-3p水平低于对照组(P<0.01);食管癌组患者血清miR-330-3p水平高于食管良性病变组和对照组(P<0.01),食管良性病变组miR-330-3p水平高于对照组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌有较高的诊断效能,联合检测的曲线下面积(AUC)高于miR-365403-13p、miR-330-3p单独检测。3年随访存活组血清miR-3653-3p水平明显高于死亡组(P<0.01),而血清miR-330-3p水平明显低于死亡组(P<0.01)。血清miR-3653-3p和miR-330-3p水平对食管癌患者3年内出现死亡具有较高的预测价值,且联合检测的AUC高于miR-3653-3p、miR-330-3p单独检测。结论miR-3653-3p和miR-330-3p在食管癌中的作用类似抑癌基因和促癌基因,血清miR-3653-3p和miR-330-3p联合检测在食管癌诊断和预测3年内死亡方面有重要价值。

过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体中miR-330-3p的时-量变化

背景:前期实验已经证明过表达GATA-4骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosomes)可以通过抑制心肌细胞凋亡,有效修复心肌梗死引起的心肌损伤,进一步发现在其外泌体中miRNA-330-3p明显高表达且功能涉及抗凋亡,提示miRNA-330-3p可能是外泌体修复心肌损伤的关键分子。目的:探讨过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌的外泌体(BMSCs^GATA-4-exosomes)中miR-330-3p的时-量变化。方法:在过表达GATA-4小鼠BMSCs培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)及抑制剂(miR-330-3p-inhibitor)作为BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-mimic组及BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-inhibitor组,将BMSCs^GATA-4组、BMSCs^GATA-4-空载体组、BMSCs组、BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-mimic-空载体组及BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-inhibitor-空载体组作为混杂因素对照组。上述各组与基因开启剂强力霉素共培养24,48h,提取各组细胞分泌的外泌体。采用RT-PCR检测各组细胞及其外泌体内miR-330-3p的表达量。采用光镜评估BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-mimic组、BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-inhibitor组与BMSCs组细胞在24,48h的形态变化。结果与结论:①BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-mimic,组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最高,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐增多;②BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-inhibitor组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最低,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐减少;③BMSCsz^GATA-4-miR-330-3p-mimic组、BMSCs^GATA-4-miR-330-3p-inhibitor组与BMSCs组在24,48h的形态无变化;④结果表明,BMSCs内miR-330-3p表达与外泌体内miR-330-3p表达正相关,BMSCs过表达miR-330-3p可以有效提高外泌体中miR-330-3p的表达,而静默miR-330-3p可以有效减少外泌体中miR-330-3p的表达。

竹黄颗粒介导IL-22/miR-330调控角质形成细胞增殖的机制研究

目的研究竹黄颗粒干预IL-22/miR-330调控角质形成细胞增殖的分子机制。方法 IL-22处理Ha Ca T和HKCs细胞,应用QPCR技术检测细胞中miR-330的表达变化;之后慢病毒感染Ha Ca T和HKCs细胞,实现miR-330的过表达和干扰,通过CCK8和Brd U技术检测细胞增殖情况;采用CCK8、Western blot、QPCR、ELISA实验分别检测不同浓度竹黄颗粒处理Ha Ca T、HKCs后细胞增殖能力,IL-22蛋白表达水平,miR-330表达水平及细胞分泌IL-22含量的变化。结果 IL-22处理后的Ha Ca T和HKCs细胞中miR-330的表达水平显著下调(P<0.01),而细胞增殖能力显著提升(P<0.01);过表达miR-330后Ha Ca T和HKCs细胞增殖能力显著下降(P<0.05),干扰miR-330后Ha Ca T和HKCs细胞增殖能力显著上升(P<0.05);竹黄颗粒处理Ha Ca T、HKCs后,细胞增殖能力下降(P<0.01),IL-22蛋白表达水平显著下降(P<0.01),miR-330表达水平显著上升(P<0.01),细胞分泌IL-22含量显著下降(P<0.01)。结论竹黄颗粒可以通过抑制IL-22的表达,促进miR-330的表达,从而抑制角质形成细胞增殖。

miR-330调控TAp73α介导的结直肠癌细胞HCT116对顺铂的敏感性

microRNA调控靶向基因的表达,影响其细胞周期进程、凋亡等过程的进行.采用双荧光素酶报告基因的方法,发现miR-330可以降低结合P73-3′UTR的荧光活性,同时在HCT116细胞中,慢病毒过表达miR-330可以抑制内源性TAp73蛋白的表达,在此基础上,用cisplatin处理细胞后,过表达miR-330的细胞加速凋亡,而这一过程在恢复TAp73的表达后,细胞凋亡活动又被减弱.另一方面,包装慢病毒shRNA-P73感染HCT116细胞所引起的生物学效应与miR-330一致.而且这种作用不依赖于p53.所以,在结肠癌细胞HCT116中,过表达miR-330可下调P73的表达并增强细胞对治疗药物顺铂的敏感性,为治疗顺铂抗性的肿瘤细胞提供了一条新途径.

结直肠癌中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤增殖、凋亡的影响。方法分析Oncomine数据库中结直肠癌RUVBL1 mRNA的表达情况;利用Kaplan-Meier生存曲线分析RUVBL1 mRNA表达水平与CRC患者生存预后之间的相关性;免疫组化法检测临床CRC标本癌组织和正常结直肠组织RUVBL1蛋白的表达情况。荧光素酶报告基因实验分析RUVBL1与miR-330-3p的靶向关系;荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CRC临床标本癌组织和正常结直肠组织miR-330-3p的表达情况;利用脂质体转染结直肠癌HT-29细胞,过表达或沉默miR-330-3p的表达;运用CCK-8法检测过表达miR-330-3p对HT-29细胞活力的影响和对顺铂敏感性变化,利用流式细胞仪检测过表达miR-330-3p对HT-29凋亡的影响;利用Western blot检测转染miR-330-3p后HT-29细胞中RUVBL1蛋白的表达情况和细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果数据库分析结果显示RUVBL1 mRNA在CRC中高表达;RUVBL1基因的表达水平与结直肠癌患者生存预后之间存在相关性,RUVBL1高表达患者的总体生存率明显低于低表达RUVBL1的患者(P=0.0077);免疫组化结果显示RUVBL1在CRC组织中的表达水平较正常结直肠组织明显增高;qRT-PCR结果显示CRC临床标本癌组织中miR-330-3p的表达水平明显低于正常结直肠组织(P<0.01);过表达miR-330-3p的HT-29细胞中RUVBL1的表达明显下调,细胞内促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平均上调,而Bcl-2表达水平下降;过表达miR-330-3p的HT-29细胞凋亡增加,且对顺铂的敏感性增强。结论RUVBL1在CRC中高表达,其表达水平与CRC患者生存预后相关;RUVBL1是miR-330-3p的潜在靶点,miR-330-3p可能通过抑制RUVBL1表达促进结直肠癌细胞凋亡。

circ_0001785与miR-330-5p在结直肠癌中的表达及其生物学意义

背景结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发病机制尚未cular RNA,circRNA)在CRC等肿瘤中表达异常并可调控细胞增殖、迁移及侵袭等生物学过程,但关于其具体作用机制尚未完全阐明,因而探寻新型circRNA分子并探究其可能作用机制对进一步揭示CRC发病机制具有重要意义.目的探讨circ_0001785与miR-330-5p在CRC中的表达及其生物学意义.方法采用qRT-PCR法检测CRC组织、癌旁组织中circ_0001785、miR-330-5p的表达量;采用Pearson法检测CRC中circ_0001785与miR-330-5p的相关性;根据circ_0001785、miR-330-5p表达量的平均值将患者分为circ_0001785高表达组41例、circ_0001785低表达组39例与miR-330-5p高表达组45例、miR-330-5p低表达组35例,观察circ_0001785、miR-330-5p表达量与CRC患者临床病理参数的相关性;体外培养人CRC细胞SW480,分别将si-NC、si-circ_0001785、sicirc_0001785与anti-miR-NC、si-circ_0001785与antimiR-330-5p转染至SW480细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中circ_0001785、miR-330-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ_0001785与miR-330-5p的靶向关系;Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量.结果circ_0001785在CRC组织及细胞系中表达水平显著升高(P<0.05),miR-330-5p的表达水平显著降低(P<0.05);circ_0001785与miR-330-5p呈负相关(r=-0.985,P<0.0001);circ_0001785、miR-330-5p表达量与分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期密切相关(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ_0001785组细胞活力及MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数显著减少(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circ_0001785可靶向结合miR-330-5p;下调miR-330-5p表达可降低干扰circ_0001785表达对CRC细胞SW480增殖、迁移及侵袭的作用.结论circ_0001785在CRC中表达上调,而miR-330-5p表达下调,干扰circ_0001785表达可通过上调miR-330-5p的表达从而抑制CRC细胞增殖、迁移及侵袭.

miR-330抑制乳腺癌细胞增殖及其临床病理学意义

目的探讨miR-330对乳腺癌细胞增殖功能的影响,验证miR-330调节HER-2基因的表达,分析乳腺癌患者组织中miR-330表达与临床病理特征的关系。方法采用细胞计数、MTT、软琼脂克隆形成实验验证miR-330对乳腺癌细胞增殖功能的影响;Western blot、qRT-PCR实验验证miR-330调节HER-2基因的表达;qRT-PCR法检测临床48例乳腺癌组织样本miR-330的表达水平,分析其与各临床病理特征的关系。结果细胞计数实验、MTT实验、软琼脂克隆形成实验证明miR-330抑制乳腺癌细胞BT474的生长、增殖和软琼脂克隆形成;Western blot、qRT-PCR实验证明miR-330能够显著抑制HER-2基因的表达;乳腺癌组织中miR-330的低表达与肿瘤直径(P=0.004)、HER-2表达水平(P=0.010)具有显著相关性,与其他病理参数包括患者年龄、淋巴结转移、组织学分级、临床分期、ER、PR水平等无显著相关性(P>0.05)。结论 miR-330能抑制乳腺癌增殖、生长,乳腺癌组织中miR-330的表达水平与肿瘤大小、HER-2表达呈明显负相关,miR-330抑制HER-2基因的表达,HER-2很可能介导miR-330对乳腺癌细胞的抑制作用。

山慈菇提取物调控circ_0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ_0003998和miR-330-5p表达有关。方法采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ_0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ_0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ_0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ_0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ_0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ_0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ_0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ_0003998/miR-330-5p分子轴有关。

miR-330-3p在颞下颌关节骨关节炎软骨退变中的作用机制研究

目的:探讨miR-330-3p在颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)软骨退变中的作用机制。方法:对SW1353软骨细胞系进行炎症及加压刺激,建立大鼠单侧前牙反(牙合)(unilateral anterior crossbite,UAC)TMJOA模型,通过RT-qPCR检测体外及体内软骨OA情况下miR-330-3p的表达变化。miR-330-3p过表达或抑制后,利用EDU荧光染色以及蛋白免疫印迹(WB)检测SW1353软骨细胞的增殖及合成分解代谢变化。生物信息学分析预测并筛选miR-330-3p的下游靶点,并在炎症及加压刺激下通过RT-qPCR和WB明确miR-330-3p对其调控作用。在miR-330-3p大鼠UAC TMJOA模型的关节腔内注射后,采用免疫组织化学方法检测靶分子的表达及软骨代谢的变化,明确miR-330-3p对TMJOA的治疗作用。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在体外炎症和加压刺激下,以及大鼠UAC的TMJOA模型中,miR-330-3p在软骨中的表达均下降。抑制miR-330-3p可导致软骨细胞增殖能力下降,SOX9合成降低,MMP13表达增加,而过表达的结果则相反。生物信息学分析发现CTNNB1为可能的下游靶点之一,其在体外炎症和加压刺激后表达升高。过表达CTNNB1后,软骨细胞SOX9蛋白表达下降,MMP13蛋白表达升高,抑制CTNNB1的结果则相反。miR-330-3p与CTNNB1在mRNA及蛋白表达水平上存在负相关关系。大鼠UAC TMJOA模型关节腔内注射miR-330-3p模拟物后,CTNNB1的表达减少,软骨退变减轻。结论:miR-330-3p通过抑制CTNNB1的表达,减轻TMJOA的软骨退变。