miR-338-5p过表达对胃癌细胞进展及耐药基因表达的影响

目的探讨miR-338-5p过表达对胃癌细胞侵袭和耐药性的影响。方法人胃癌细胞MKN-45分为mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组,分别转染miR-338-5p-mimics、miR-338-5p-inhibitor及其NC质粒,未行转染的人胃癌细胞MKN-45为对照组。在转染培育24 h后,用CCK-8检测细胞的增殖活性,体外侵袭实验测定细胞的迁移及侵袭能力;使用qRT-PCR检测各组细胞中的耐药基因P-糖蛋白(PGP)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白B2(ATP-binding cassette transporter B2,ABCB2)和G2(ABCG2)相关mRNA的表达;Western blot测定各组细胞中的第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化蛋白激酶B(phosphoprotein kinases B,p-AKT)蛋白表达。结果与对照组和mimics-NC组相比,mimics组细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞的迁移侵袭能力、耐药性相关PGP、ABCB2、ABCG2的mRNA表达下降(P<0.05);细胞中PTEN表达量上升(P<0.05),p-AKT蛋白表达量下降(P<0.05),AKT蛋白无显著变化(P>0.05)。与对照组和inhibitor-NC组相比,inhibitor组细胞抑制率下降(P<0.05),细胞迁移侵袭能力、PGP、ABCB2、ABCG2的mRNA表达上升(P<0.05),PTEN表达量下降(P<0.05),p-AKT蛋白表达量上升(P<0.05),AKT蛋白无显著变化(P>0.05)。结论miR-338-5p影响PTEN/AKT通路的表达,抑制耐药基因表达和胃癌细胞的侵袭迁移,从而抑制胃癌细胞的增殖。

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果miR-338-5p在膀胱癌中表达上调(P<0.05);过表达miR-338-5p提高了膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),转染miR-338-5p inhibitor则降低了膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);生物信息学分析和双萤光素酶报告基因实验表明,miR-338-5p和TSHZ3存在靶向关系;挽救实验表明,同时过表达miR-338-5p和TSHZ3部分消除了过表达miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示,与mimics-NC组比较,过表达miR-338-5p降低了TSHZ3蛋白表达水平,提高了Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平(P<0.05);过表达TSHZ3降低了Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平(P<0.05)。结论miR-338-5p在膀胱癌中表达上调,通过靶向抑制TSHZ3的表达促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭,该机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

外周血miR-338-5p、miR-140-5p在HBV相关肝细胞癌患者中表达水平及临床意义

目的 探讨外周血血清中微小RNA(microRNA, miR)-338-5p、miR-140-5p在HBV相关肝细胞癌患者中表达水平及临床意义。方法 选取2017年11月—2020年11月我院收治的HBV相关肝细胞癌患者95例作为肝细胞癌组,另选取同时期HBV相关良性肝病患者100例作为良性组,及健康体检者100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p表达水平及HBV DNA载量,采用Pearson相关分析分析HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p表达水平与HBV DNA载量的关系,采用多因素Logistic回归模型分析影响HBV相关肝细胞癌发生的危险因素;ROC曲线分析miR-338-5p、miR-140-5p、异常凝血酶原-Ⅱ(abnormal prothrombin-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)表达对HBV相关肝细胞癌的诊断价值。结果 外周血血清中miR-338-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平从高至低依次为肝细胞癌组[(2.73±0.88)、(103.14,319.19)mAU/ml]、良性组[(1.48±0.40)、(32.70,87.15)mAU/ml]、对照组[(1.00±0.27)、(10.36,16.82)mAU/ml],外周血血清中miR-140-5p表达水平从高至低依次为对照组(1.00±0.25)、良性组(0.72±0.20)、肝细胞癌组(0.38±0.12),两两比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);肝细胞癌组患者HBVDNA载量(144.97±47.32)明显高于良性组(75.66±21.91)(P <0.05)。不同TNM分期患者间比较,外周血血清中miR-338-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平及HBV DNA载量从高至低依次为TNMⅣ期、Ⅲ期、Ⅱ期、Ⅰ期,外周血血清中miR-140-5p表达水平从高至低依次为TNMⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p表达水平与HBVDNA载量呈正相关(P <0.05),而miR-140-5p表达水平与HBV DNA载量呈负相关(P <0.05)。HBV相关肝细胞癌发生与患者有无糖尿病史、有无长期饮酒史、HBV DNA载量及外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平有关(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示外周血血清中PIVKA-Ⅱ> 40 mAU/ml、miR-338-5p高表达、miR-140-5p低表达是影响HBV相关肝细胞癌发生的独立危险因素(P <0.05)。外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平联合诊断HBV相关肝细胞癌的AUC为0.930,明显高于3指标单独诊断的AUC(P均<0.05),联合诊断的敏感度为98.90%,特异度为87.00%。结论 HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p高表达,miR-140-5p低表达,2者可作为评估HBV相关肝细胞癌发生的血清指标,2者联合PIVKA-Ⅱ更有利于诊断HBV相关肝细胞癌。

miR-338-5p在肾移植患者的表达及其意义

目的:研究肾移植受者血清中miR-338-5p的表达特点,及其与B细胞活化因子(BAFF)信号的相关性,进而探讨其在抗体介导肾移植排斥中的潜在意义。方法:收集肾移植患者的血清(健康志愿者为对照),应用荧光定量PCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异;ELISA法检测血清可溶性BAFF(sBAFF)水平;液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验;相关性分析采用Spearman法及Pearson法。P<0.05被认为具有统计学意义。结果:与健康对照组比较,肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平显著增高(P<0.01)。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者(P<0.01);移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者(P<0.01)。对全部研究对象进行统计分析显示,血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);术后3年内者,血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);术后3年以上者,血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLA&MICA抗体均呈显著正相关,相关系数分别为0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01)。结论:miR-338-5p直接或间接地对BAFF信号发挥调控作用;miR-338-5p可能通过对靶基因的调控参与肾移植术后抗体介导的免疫反应过程,影响移植肾长期存活。

miR-338-5p通过靶向核因子κB1调控B细胞生物学功能

目的验证miR-338-5p对核因子κB1(NF-κB1)水平的影响,研究其对B细胞生物学功能的调控作用。方法利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p靶基因的验证;采用抗Ig M抗体和/或重组人B细胞活化因子(rh BAFF)蛋白刺激的B细胞培养体系,将miR-338-5p激动剂、miR-338-5p拮抗剂、NF-κB1小干扰RNA(si NF-κB1)及其对应的阴性对照制剂转染CD20+B淋巴细胞,利用实时定量PCR法检测各转染组NF-κB1 mRNA水平,Western blot法检测NF-κB1蛋白(p105、p50)的水平,ELISA检测培养上清中Ig G含量。结果靶基因验证实验显示,miR-338-5p模拟物与报告载体共转染组的hRluc/h Luc萤光素酶活力比值显著升高;体外培养实验结果显示,在抗Ig M抗体与rh BAFF蛋白共培养体系,miR-338-5p激动剂转染组NF-κB1 mRNA、p105蛋白、p50蛋白、Ig G水平均显著升高,si NF-κB1的作用与miR-338-5p激动剂相反;miR-338-5p拮抗剂转染组NF-κB1 mRNA、Ig G水平均显著降低;相关性分析结果表明,NF-κB1 mRNA水平与Ig G水平呈显著正相关。结论 miR-338-5p靶向正调控NF-κB1、间接作用于BAFF信号参与调控B细胞生物学功能。

miR-338-5p调控TRPC1对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨miR-338-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成的影响以及对TRPC1的调控作用。方法体外分离培养正常皮肤成纤维细胞NFB与瘢痕疙瘩成纤维细胞KFB,miR-NC、miR-338-5p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-TRPC1、miR-338-5p mimics与pcDNA-NC、miR-338-5p mimics与pcDNA-TRPC1转染入KFB细胞;采用qRT-PCR实验与Western blot实验分别检测miR-338-5p、TRPC1的表达量;采用MTT实验检测细胞活力;双荧光素报告基因实验检测miR-338-5p与TRPC1的靶向关系;Western blot实验检测CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达量。结果与NFB细胞比较,KFB细胞中miR-338-5p的表达水平降低(P<0.05),TRPC1的表达水平升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-338-5p组细胞活力降低(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平降低(P<0.05);与pcDNA-NC组比较,pcDNA-TRPC1组细胞活力升高(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平升高(P<0.05);双荧光素报告基因实验证实TRPC1是miR-338-5p的靶基因;与miR-338-5p+pcDNA-NC组比较,miR-338-5p+pcDNA-TRPC1组细胞活力升高(P<0.05),CyclinD1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白水平升高(P<0.05)。结论miR-338-5p过表达可通过负向调控TRPC1的表达而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成从而抑制瘢痕疙瘩的形成。

肾移植患者血清miR-338-5p水平表达及其临床意义研究

目的:观察血清miR-338-5p水平在肾移植患者中的表达情况,并分析血清miR-338-5p水平在肾移植患者中表达的临床意义。方法:选取2017年7月—2019年8月河南中医药大学第一附属医院收治的100例接受肾移植手术患者作为研究对象,依据肾移植术后是否出现排斥反应进行分组,将出现排斥反应的36例患者的临床资料归为观察组,将未出现排斥反应的64例患者的临床资料归为对照组。测定并比较两组研究对象的血清miR-338-5p水平、可溶性B细胞活化因子(sBAFF)水平,调查并记录肾移植患者的临床资料,并重点分析血清miR-338-5p水平与sBAFF水平的相关性。结果:观察组血清miR-338-5p水平低于对照组,sBAFF水平高于对照组,差异有统计学意义(t=13.337、43.472,P<0.05)。经Pearson分析,血清miR-338-5p与sBAFF呈负相关,差异有统计学意义(r=-0.677,P=0.000)。结论:肾移植患者血清miR-338-5p可通过调节BAFF信号来参与肾移植术后免疫介导的反应过程,临床上可通过检测miR-338-5p水平,来预测肾移植患者术后排斥反应发生的风险性。

循环miR-338-5p、miR-15b-5p和miR-21-5p作为肝细胞癌的潜在肿瘤标记物

目的筛查血浆中能作为肝细胞癌肿瘤标记物的miRNA。方法分为4个阶段：1miRNA芯片筛查肝细胞癌组织中异常表达的miRNA,并根据文献和miRNA芯片结果确定候选miRNA。213对术前和术后7~10 d肝细胞癌患者血浆用定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR）检测候选miRNA的表达水平,术后表达水平下降的miRNA定为目的miRNA。339例肝细胞癌患者、32例肝硬化患者、25例健康人员血浆进行qRT-PCR,验证目的miRNA在3组人群中的表达差异。4分析目的 miRNA作为肝细胞癌肿瘤标记物的诊断价值,绘制受试者工作曲线并分析其与临床参数的相关性。结果癌组织中40种miRNA表达量增加（〉2倍）,52种miRNA表达量明显下降（〈0.5倍）。结合文献,选取miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p作为候选miRNA。术后3种miRNA表达水平下降,定为目的 miRNA。3组人群测量结果显示miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p在肝细胞癌患者血浆中表达水平明显高于肝硬化患者和健康对照人群。其中miR-338-5p在肝细胞癌与肝硬化、健康人群鉴别时,曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.762 4（灵敏度：64.10%,特异度：87.50%）和0.906 4（灵敏度：89.74%,特异度：84.00%）。miR-21-5p和miR-338-5p进行联合诊断,特异度可达92.98%。即使在甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）判定为阴性的肝细胞癌患者,3种miRNA判定为肝细胞癌的灵敏度都比较高。相关性分析结果显示,血浆miR-338-5p水平与AFP水平呈负相关（r=-0.344,P=0.032）。结论循环miR-338-5p、miR-15b-5p、miR-21-5p具有作为肝细胞癌的肿瘤标记物的潜力。

獐芽菜苦苷通过调控miR-338-5p表达影响高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨獐芽菜苦苷(STM)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及分子机制。方法:肾小管上皮细胞HK-2分为对照(Con)组、高糖(HG)组、不同浓度獐芽菜苦苷组、HG+miR-NC组、HG+miR-338-5p组、HG+STM+anti-miR-NC组、HG+STM+anti-miR-338-5p组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-10水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-338-5p表达水平。结果:高糖诱导的肾小管上皮细胞中IL-6、TNF-α水平升高,细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,miR-338-5p表达水平降低(P<0.05)。不同浓度獐芽菜苦苷处理后,肾小管上皮细胞中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低,cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平降低,miR-338-5p表达水平升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。miR-338-5p过表达后,IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低,cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平降低(P<0.05)。干扰miR-338-5p表达逆转了獐芽菜苦苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤的作用。结论:獐芽菜苦苷通过调控miR-338-5p表达抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

miR-222-5p靶向WNK2基因促进肝细胞癌生长

目的 探讨miR-222-5p对肝细胞癌(HCC)生长的影响及其分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-222-5p和WNK2 mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝细胞系L02、不同HCC细胞系Hep3B、HepG2、HuH-7中表达;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-222-5p和WNK2靶向关系;取生长密度达50%~60%的HepG2癌细胞,分为miR-222-5p NC组、miR-222-5p mimics组、miR-222-5p inhibitor组、miR-222-5p NC+pSUPER-si NC组、miR-222-5p NC+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si NC组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p NC+pcDNA组、miR-222-5p NC+pcDNA-WNK2组、miR-222-5p mimics+pcDNA组、miR-222-5p mimics+pcDNA-WNK2组,另取未转染L02正常肝细胞和HepG2癌细胞。24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率;平板克隆法检测克隆形成能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;Western印迹法检测WNK2蛋白表达水平。结果 与癌旁组织及正常肝细胞相比,HCC组织及各细胞系中miR-222-5p表达水平明显升高,WNK2 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-222-5p NC组相比,miR-222-5p mimics组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05),miR-222-5p inhibitor组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低,WNK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-222-5p和WNK2存在靶向关系。与miR-222-5p NC+pcDNA组相比,miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05);miR-222-5p mimics+pcDNA组增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p mimics+pcDNA组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 过表达miR-222-5p可能通过靶向抑制WNK2表达促进肝癌HepG2细胞的增殖、克隆形成和成瘤能力,促进HCC生长。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

miR-340-5p靶向调控ARID1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平。通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化。双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系。最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展。结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P<0.05)。通过抑制BCPAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平。miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系。敲降ARID1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

LncRNA DGUOK-AS1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)脱氧鸟苷激酶反义RNA(DGUOK-AS)1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析肝癌组织中DGUOK-AS1和miR-204-5p表达量。双荧光素酶报告实验确定DGUOK-AS1与miR-204-5p靶向关系,RT-qPCR检测干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞miR-204-5p表达量。集落形成实验分析DGUOK-AS1和miR-204-5p表达对MHCC97-H细胞增殖的影响。流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡。Transwell实验分析细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织比较,肝癌组织中DGUOK-AS1表达量明显上调,而miR-204-5p表达量明显下调(P<0.05)。miR-204-5p是DGUOK-AS1的靶基因。干扰DGUOK-AS1表达后miR-204-5p表达量显著升高(P<0.05)。干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与干扰DGUOK-AS1表达比较,同时干扰DGUOK-AS1和miR-204-5p表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 干扰DGUOK-AS1通过靶向miR-204-5p可抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

HDP患者血清circACTR2、miR-525-5p水平与不良妊娠结局的相关性

目的:探讨妊娠期高血压疾病(HDP)患者血清circACTR2、miR-525-5p水平与不良妊娠结局的相关性。方法:选取2020年1月-2022年6月在本院建档并定期产前检查的HDP患者148例为HDP组,产前检查正常并分娩的100例孕妇作为对照组,收集临床资料,根据是否发生不良妊娠结局将HDP患者分为正常妊娠结局组98例、不良妊娠结局组50例。采用实时荧光定量PCR法检测孕妇血清circACTR2和miR-525-5p表达水平;分析HDP患者妊娠结局与临床病理特征关系;采用Spearman法分析HDP患者血清circACTR2和miR-525-5p表达与不良妊娠结局的相关性;采用logisitic回归分析HDP患者不良妊娠结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HDP患者血清circACTR2、miR-525-5p表达预测不良妊娠结局价值。结果:HDP组血清circACTR2(1.33±0.35)高于对照组(1.08±0.27),miR-525-5p(0.76±0.21)低于对照组(1.02±0.30)(P<0.05);HDP不良妊娠结局患者血清胱抑素C(CysC)、D-二聚体(D-D)、C反应蛋白(CRP)和circACTR2水平高于HDP正常妊娠结局患者,miR-525-5p水平低于HDP正常妊娠结局患者(P<0.05);血清circACTR2水平与不良妊娠结局呈正相关,血清miR-525-5p水平与不良妊娠结局呈负相关(均P<0.05);CysC、D-D、CRP、circACTR2和miR-525-5p异常均为HDP患者不良妊娠结局的影响因素(P<0.05);circACTR2联合miR-525-5p预测HDP患者不良妊娠结局的曲线下面积为0.877,敏感度76.0%,特异度86.7%。结论:HDP患者血清circACTR2表达上调,miR-525-5p表达下调,二者与HDP不良妊娠结局密切相关,二者联合检测对预测HDP患者不良妊娠结局有较好效能。