miR-339-5p通过靶向调节p53表达影响脑胶质瘤细胞的转移活性分析

目的研究miR-339-5p对脑胶质瘤U87细胞的影响,并探讨相关机制。方法将U87细胞分为4组:空白组、miR-339-5p mimic组、si-p53组、miR-339-5p mimic+si-p53组。通过MTT实验检测细胞增殖率;通过Transwell实验检测U87细胞侵袭能力;通过流式细胞术检测细胞凋亡率;通过荧光素酶报告基因实验检测miR-339-5p与p53的靶向关系;通过实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析miR-339-5p和p53的表达水平。结果miR-339-5p mimic组和miR-339-5p mimic+si-p53组细胞的miR-339-5p表达水平高于空白组和si-p53组,miR-339-5p mimic组细胞的p53 mRNA和蛋白水平均高于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组(P<0.05)。miR-339-5p mimic和p53-WT共转染的细胞荧光素酶活性明显增加(P<0.05)。miR-339-5p mimic组细胞增殖率和细胞侵袭数量低于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组,同时miR-339-5p mimic组细胞凋亡率高于空白组、si-p53组和miR-339-5p mimic+si-p53组(P<0.05)。结论miR-339-5p能够抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭,并促进胶质瘤U87细胞凋亡,同时这一过程与靶向激活p53相关。

miR-339-5p调控EMT影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制

目的分析miR-339-5p调控上皮细胞-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制。方法于2023年2月至2024年2月体外培养正常乳腺上皮细胞系(MCF10A)及乳腺癌细胞系MCF-7,构建乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇,将MCF-7/紫杉醇细胞分别转染miR-339-5p模拟物(miR-339-5p mimics组)、miR-339-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-339-5p抑制剂(miR-339-5p inhibitor组)及miR-339-5p抑制剂对照(NC组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对miR-339-5p水平予以检测,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,经流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测EMT相关蛋白[E-cadhesin(E-cad)、Vimentin(Vim)]的表达。采用独立样本t检验、ONE-WAY ANOVA分析及LSD-t检验对所获得的数据进行统计学分析。结果miR-339-5p在MCF-7细胞的表达水平低于MCF10A细胞[(0.36±0.07)比(0.73±0.08),P<0.05];转染48 h后,miR-339-5p mimics组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率高于miR-NC组[(45.86±4.92)%比(20.44±2.16)%、(16.54±1.67)%比(4.23±0.45)%,均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率低于NC组[(9.74±1.05)%比(17.18±1.84)%、(2.28±0.46)%比(5.43±0.59)%,均P<0.05];miR-339-5p mimics组E-cad水平高于miR-NC组,Vim低于miR-NC组[(0.78±0.07)比(0.42±0.05)、(0.42±0.05)比(0.61±0.07),均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组E-cad低于NC组,Vim高于NC组[(0.23±0.04)比(0.34±0.05)、(0.84±0.09)比(0.69±0.08),均P<0.05]。结论miR-339-5p可降低乳腺癌细胞化疗耐药性,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能是通过调控EMT相关蛋白E-cad、Vim而抑制EMT。

miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠疼痛缓解的机制

目的探究miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛缓解机制。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,分别将48只大鼠分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各12只,模型组、过表达组、沉默组构建带状疱疹后遗神经痛模型,做miR-339-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-339-5p基因表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠5-羟色胺(HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α,采用电子测痛仪进行测定机械痛阈,采用Western印迹检测大鼠同源性磷酸张力蛋白诱导激酶1/帕金森蛋白(PINK1/Parkin)信号通路基因表达量。结果与模型组相比,过表达组miR-339-5p基因表达量、不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF、PINK1/Parkin信号通路表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。结论miR-339-5p过表达基因通过作用于PINK1/Parkin信号通路,调控PINK1、Parkin表达量,显著减轻了带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛程度。

乳腺癌细胞中miR-339-5p对BCL-6表达的调节

目的预测和验证miR-339-5p下游直接靶基因。方法利用生物信息学方法预测miR-339-5p潜在靶基因;克隆目标基因3’UTR,将其与含荧光素酶报告基因的质粒psiCHECK-2连接后,与miR-339-5p mimics共转染乳腺癌细胞株T47D,做荧光素酶报告实验验证miR-339-5p靶基因;人乳腺癌细胞株T47D转染miR-339-5p mimics(模拟物)后,行Western blot法检测靶基因蛋白表达。结果生物信息学方法预测结果显示BCL-6为miR-339-5p潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验显示,miR-339-5p可直接调节BCL-6基因3’UTR;Western blot法检测结果显示T47D细胞转染miR-339-5p mimics后,BCL-6蛋白表达水平明显下调。结论 miR-339-5p可以调节下游靶基因BCL-6的表达。

LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法:采用qRT-PCR和Western免疫印迹检测25例人舌鳞状细胞癌组织、与其对应的癌旁组织、人正常口腔黏膜细胞株HOK和人舌鳞状细胞癌细胞株Tscca、CAL27、SCC15、HN13中NEAT1、miR-339-5p、ITGA3 mRNA和ITGA3蛋白的表达.分别构建抑制NEAT1和过表达miR-339-5p的CAL27细胞株.利用MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western免疫印迹检测CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.采用双荧光素酶报告基因验证NEAT1、miR-339-5p和ITGA3的靶向关系,通过Western免疫印迹和qRT-PCR检测其调控关系.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与人正常口腔黏膜细胞株HOK相比,人舌鳞状细胞癌细胞株中NEAT1和ITGA3表达上调,miR-339-5p表达下调.抑制NEAT1或过表达miR-339-5p均可显著抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭,显著抑制CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.双荧光素酶报告基因证实NEAT1靶向作用miR-339-5p并下调其表达水平,miR-339-5p可靶向负调控ITGA3的表达.抑制NEAT1可逆转抑制miR-339-5p表达对CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论:LncRNA NEAT1通过下调miR-339-5p/ITGA3轴,进而促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭.

芪藤消浊颗粒介导miR-339-5p对慢性肾小球肾炎大鼠炎症指标的影响

目的:探讨芪藤消浊颗粒通过miR-339-5p对慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis,CGN)大鼠炎症指标的影响。方法:大鼠尾静脉注射阿霉素制备CGN模型,用芪藤消浊颗粒(21.6、10.8、5.4 g/kg)连续灌胃30 d,通过HE染色和电镜观察CGN大鼠肾脏组织中的病理变化情况,qRT-PCR、ELISA、Western blot检测大鼠血清及肾脏组织中的IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量,Western blot检测miR-339-5p、Syk、p-Syk蛋白相对表达量,qRT-PCR检测miR-339-5p mRNA及Syk mRNA的相对表达量。结果:模型组大鼠出现基底膜增厚,肾小球萎缩等病变,与正常组相比,模型组大鼠的miR-339-5p和IL-10表达明显下调,IL-1β、IL-6、TNF-α、Syk的表达显著上调,芪藤消浊颗粒组可显著降低肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、Syk的蛋白及mRNA的表达水平。结论:芪藤消浊颗粒治疗CGN大鼠的炎症症状可能是通过miR-339-5p下调炎症因子的表达水平。

miR-339-3P靶向IP6K2基因调控前列腺癌EMT发生的功能研究

目的 探讨mi R-339-3P靶向六磷酸肌醇激酶2(IP6K2)对前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间充质转化(Epithelial Mesenchymal Transition EMT)的作用及其机制。方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测前列腺癌组织和癌旁组织中mi R-339-3P和IP6K2的表达水平。利用细胞转染技术向人前列腺癌细胞PC-3分别转染mi R-339-3P-mimics、mi R-339-3P inhibitors、si-IP6K2(抑制表达)和PcDNA-3.1(+)-IP6K2(过表达),CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况,细胞划痕检测细胞迁移能力,Western blot检测靶基因IP6K2和EMT相关因子的蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-339-3P和IP6K2的靶向结合关系。结果qRT-PCR的结果显示,前列腺癌组织中mi R-339-3P表达水平低于癌旁组织,IP6K2表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-339-3P-mimics抑制IP6K2表达可以显著抑制PC-3细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡,Twist1、N-cadherin和Fibronectin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加。miR-339-3P inhibitors过表达IP6K2可以显著促进PC-3细胞增殖、迁移和EMT,并抑制细胞凋亡。结论 过表达mi R-339-3P通过靶向抑制IP6K2基因表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖和迁移能力,抑制EMT发生并促进细胞凋亡。

弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-339-5p的表达及意义

目的检测miR-339-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达,探讨miR-339-5p表达与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用显色原位杂交技术检测123例DLBCL和20例淋巴结反应性增生(reactive lymphoid hyperplasia,RH)组织中miR-339-5p的表达,并采用免疫组化En Vision两步法检测DLBCL组织中Ki-67和BCL-6蛋白的表达,分析miR-339-5p与BCL-6表达的相关性及二者表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果 DLBCL组织中miR-339-5p的阳性率(39.8%,49/123)显著低于RH组织(90.0%,18/20)。活化的B细胞型(ABC型)DLBCL组织中miR-339-5p阳性率(31.0%,22/71)明显低于生发中心的次级B细胞型(GCB型)(51.9%,27/52)。miR-339-5p在DLBCL中表达降低与Ann Arbor分期晚以及国际预后指数IPI评分高有关(P均<0.05)。ABC型、GCB型DLBCL中miR-339-5p阴性患者生存率均明显低于miR-339-5p阳性患者(P均<0.01)。DLBCL中miR-339-5p与BCL-6蛋白表达呈显著负相关(P<0.01)。结论 miR-339-5p低表达可能与DLBCL进展和预后不良相关。

miR-339-5p通过抑制NUDT5增强肺癌A549细胞的放射敏感性

目的:探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5(Nudix hydrolase 5,NUDT5)的表达对肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法:体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株(RA549),qPCR检测miR-339-5p在人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌细胞系(A549、L78、H1299、H460和RA549细胞)中的表达水平。根据对RA549细胞的处理,实验分为NC组、5 Gy组(5 Gy X射线处理RA549细胞)、5 Gy+miR-339-5p mimic组、5 Gy+si-NUDT5组和5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及NUDT5、γ-H2AX和H2AX蛋白表达的变化,双荧光素酶报告基因系统验证miR-339-5p和NUDT5的靶向关系。结果:miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞(均P<0.05),其中RA549细胞表达水平最低。验证显示NUDT5是miR-339-5p的靶基因。与NC组相比,5 Gy组RA549细胞增殖活力和NUDT5表达显著降低(均P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);与5 Gy组相比,5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低(P<0.05)、凋亡率([12.97±1.48)%vs(5.21±0.62)%,P<0.01]和γ-H2AX的表达水平(P<0.05)显著升高,5 Gy+si-NUDT5组RA549细胞中NUDT5的表达水平(P<0.01)和细胞增殖活力(P<0.01)均显著降低,凋亡率([11.21±1.06)%vs(5.54±0.44)%,P<0.01]和γ-H2AX表达水平(P<0.01)均显著升高,而5 Gy+siNUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平。结论:过表达miR-339-5p通过靶向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性。

肺腺癌患者血清中mi R-498,miR-339-5p和miR-210-3p水平表达的临床诊断价值

目的研究肺腺癌(lung adenocarcinoma,LA)患者血清中微核糖核酸(miRNA)在肺腺癌患者及正常人群组血清中的表达水平,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法收集60例肺腺癌及40例正常人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time PCR,qRT PCR)检测各组血清miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的表达情况。统计分析各组miRNA的表达差异以及单个miRNA在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析三者联合检测的诊断价值。结果相比正常人群,肺腺癌患者血清中miR-210-3p表达增加(6.41±1.85 vs 4.52±1.45),miR-498(2.09±0.88vs 3.01±0.69)和miR-339-5p(0.8±0.53 vs 1.24±0.58)表达下降,差异有统计学意义(t=4.72,1.34,2.75,均P<0.05)。受试者工作特征曲线下面积(AUC)分析结果显示,miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的AUC分别为0.788(95%CI0.695~0.864),0.715(95%CI 0.616~0.801)和0.799(95%CI 0.707~0.872);三者联合检测在肺腺癌诊断中AUC值为0.902(95%CI 0.826~0.952),三者联合检测优于单个miRNA的检测,差异有统计学意义(t=14.09~18.65,均P<0.05)。结论miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p在肺腺癌患者血清中的表达情况改变,对肺腺癌具有一定的临床诊断价值。

hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌进展

目的:研究hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路调控前列腺癌的进展的分子机制。方法:核质分离检测hsa_circ_0005221和miR-339-5p在细胞中的表达定位;Pulldown检测hsa_circ_0005221结合的miRNA;软件预测结合荧光素酶报告基因确定与hsa_circ_0005221结合的RNA是miR-339-5p;定量PCR检测hsa_circ_0005221在前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞的表达量;在前列腺癌细胞分别转染hsa_circ_0005221过表达质粒和siRNA测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及上皮间质转化(EMT)和凋亡水平;在敲低hsa_circ_0005221基础上,转染miR-339-5P mimics和inhibitor测DU145和LNCaP增殖、侵袭和迁移能力及EMT标志性蛋白、STAT5A和凋亡水平。结果:hsa_circ_0005221在前列腺癌细胞的表达水平明显高于前列腺上皮细胞。核质分离实验表明hsa_circ_0005221、miR-339-5P均主要在胞质中表达。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221,其增殖、侵袭、迁移及EMT能力明显下降;凋亡水平增加。过表达hsa_circ_0005221则结果相反。在软件预测排名前5的miRNA中,Pulldown实验结果显示与hsa_circ_0005221结合的有miR-339-5P、miR-17、miR-520H;敲低或过表达hsa_circ_0005221,miR-339-5P变化最明显。荧光素酶报告基因结果显示hsa_circ_0005221与miR-339-5P结合。在DU145和LNCaP敲低hsa_circ_0005221基础上转染miR-339-5P mimics,其增殖、侵袭和迁移能力明显下降,凋亡水平增加,E-cad水平增加,N-cad水平下降,STAT5A表达水平增加。敲低hsa_circ_0005221基础上上转染miR-339-5P mimics则结果相反。结论:hsa_circ_0005221通过miR-339-5p/STAT5A通路促进前列腺癌的进展。

干扰lncRNA RHPN1-AS1表达通过靶向miR-339-5p对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA PCNA1(lncRNA RHPN1)反义AS1(RHPN1-AS1)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将si-NC(lncRNA RHPN1-AS1阴性对照组)、si-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1组)、pcDNA(真核表达载体组)、pcDNA-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1真核表达载体组)、miR-NC(微小RNA-339-5p阴性对照组)及miR-339-5p(微小RNA-339-5p组)分别转染至肝癌细胞Huh7中,记为si-NC组、si-RHPN1-AS1组、pcDNA组、pcDNA-RHPN1-AS1组、miR-NC组和miR-339-5p组;将si-RHPN1-AS1质粒分别与anti-miRNC(微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照)、anti-miR-339-5p(微小RNA-339-5p抗结剂)共转染至Huh7细胞中,记为si-RHPN1-AS1+anti-miR-NC组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照组)、si-RHPN1-AS1+anti-miR-339-5p组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂组);转染均采用脂质体法。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(RT-qPCR)检测正常肝细胞(THLE-2)、肝癌细胞株(Huh7、MHCCLM3、MHCC97H)中miR-339-5p和RHPN1-AS1表达水平;双荧光素酶报告实验检测RHPN1-AS1和miR-339-5p的靶向关系;用蛋白质印迹法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白、P21蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活性。结果:与正常肝细胞THLE-2相比,肝癌细胞株Huh7、MHCCLM3、MHCC97H中RHPN1-AS1高表达,miR-339-5p低表达。RHPN1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达。干扰RHPN1-AS1表达和miR-339-5p过表达的肝癌细胞Huh7中P21蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Cyclin D1、Bcl-2水平显著降低,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高。下调miR-339-5p表达逆转了干扰RHPN1-AS1表达对肝癌细胞Huh7的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:干扰RHPN1-AS1表达可抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-339-5p表达有关,将可为肝癌的靶向治疗提供新靶点。

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

目的:探讨微小RNA(miRNA)-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2(IGF2),影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定1×10^(8)CFU·ml^(-1)肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×10^(8)CFU·ml^(-1)肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和活化转录因子6(ATF6)蛋白表达,比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。

LncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p调控人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡

目的旨在研究lncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549;将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-339-5p mimics、si-UNC5B-AS1与anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1与anti-miR-339-5p分别转染至A549细胞。RT-qPCR检测肺癌组织和癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-339-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测UNC5B-AS1与miR-339-5p的靶向调控关系;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中UNC5B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),miR-339-5p表达水平显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-UNC5B-AS1组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-339-5p组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与(si-UNC5B-AS1+anti-miR-NC)组比较,(si-UNC5B-AS1+anti-miR-339-5p)组细胞活力显著升高(P<0.05);细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论通过干扰UNC5B-AS1上调人肺腺癌细胞系A549的miR-339-5p表达,促进其凋亡、抑制其增殖。

lncRNA SNHG1和miR-339-3p在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探究lncRNA SNHG1和miR-339-3p在肝细胞癌(HCC)组织中的表达水平及临床意义。方法收集2016年9月至2018年9月于太和医院进行手术切除治疗的108例HCC患者的肿瘤组织及癌旁组织(距肿瘤边缘>3 cm处)标本。采用实时荧光定量PCR法检测lncRNA SNHG1和miR-339-3p的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系,并探讨其与患者预后生存的关系。结果与癌旁组织比较,HCC组织中lncRNA SNHG1的表达水平较高,miR-339-3p的表达水平较低,2组差异均有统计学意义(P均<0.05)。lncRNA SNHG1高表达组中Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有乙型肝炎病史、有淋巴结转移的患者占比显著高于lncRNA SNHG1低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。miR-339-3p高表达组中Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有乙型肝炎病史、有淋巴结转移的患者占比显著低于miR-339-3p低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。lncRNA SNHG1高表达组的3年总生存率显著低于lncRNA SNHG1低表达组,而miR-339-3p低表达组的3年总生存率显著低于miR-339-3p高表达组,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。高Edmondson分级、高TNM分期、乙型肝炎病史、淋巴结转移、lncRNA SNHG1高表达及miR-339-3p低表达均是影响患者预后生存的独立危险因素(P均<0.05)。结论HCC组织中lncRNA SNHG1的表达水平较高,miR-339-3p的表达水平较低,且两者的表达水平与患者预后相关。

LncRNA ZBED3-AS1/miR-339-5p/Notch 1轴调控骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化

目的探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法构建假手术(Sham)组和模型(Model)组大鼠模型,对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞,qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sham组和Model组大鼠成骨细胞进行分组后转染。CCK8、茜素红(AR-S)染色、碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞增殖分化能力。FISH实验测定ZBED3-AS1在细胞中的分布。双荧光素酶报告证实ZBED3-AS1与miR-339-5p及miR-339-5p和Notch 1之间的关系。Western blot检测Notch通路相关因子的表达。结果检测股骨骨密度发现,Model组大鼠骨密度明显低于Sham组大鼠(P=0.0 057)。与Sham组大鼠比较,Model组大鼠成骨细胞中ZBED3-AS1呈低表达,而miR-339-5p呈高表达(均P<0.05)。过表达ZBED3-AS1能促进成骨细胞的增殖分化;而敲减ZBED3-AS1则能抑制成骨细胞增殖分化(均P<0.05)。ZBED3-AS1作为ceRNA调控miR-339-5p(均P<0.05)。过表达miR-339-5p能抑制成骨细胞的增殖分化能力,而该作用可被ZBED3-AS1过表达部分挽救。Notch 1被证实为miR-339-5p的作用靶点,且干预ZBED3-AS1/miR-339-5p的表达能影响Notch 1的蛋白表达,ZBED3-AS1/miR-339-5p对成骨细胞的调控可能是通过Notch通路实现的。结论 ZBED3-AS1能作为ceRNA调控miR-339-5p,进而影响骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化。

miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义

目的观察人胃癌细胞株及正常人胃黏膜上皮细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平,通过功能获得型(gain of function)实验验证miR-339-3p和miR-339-5p与胃癌的相关性,并阐明二者在肿瘤发生中的意义。方法采用SYBR GreenⅠ嵌合荧光法实时定量PCR技术分别检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,胃癌MKN-45、SGC-7901及BGC-823细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平;将外源性miR-339-3p mimics和miR-339-5p mimics转染胃癌MKN-45细胞株,采用RT-PCR法检测其转染率,并应用流式细胞术和CCK-8法分别检测转染72 h后MKN-45细胞的凋亡及增殖能力的变化。结果 miR-339-3p和miR-339-5p在胃癌MKN-45、SGC-7901及BGC-823细胞株中的表达均下调;与对照组相比,转染miR-339-3p mimics及miR-339-5p mimics后,MKN-45细胞株的凋亡率明显增高(P<0.05),而增殖能力明显减弱(P<0.01)。结论 miR-339-3p和miR-339-5p在3种胃癌细胞株中均呈低表达。miR-339-3p和miR-339-5p可能参与了胃癌细胞的增殖与凋亡机理。

长链非编码RNA FBXL19-AS1靶向miR-339-3p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FBXL19-AS1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,明确lncRNA FBXL19-AS1与微小RNA-339-3p(miR-339-3p)的靶向关系。方法收集2017年1月至2019至8月间烟台市烟台山医院73例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的癌组织及匹配的癌旁正常胰腺组织,体外培养正常胰腺上皮细胞(hTERT-HPNE)和3株胰腺癌细胞(Capan-1、SW1990、PaTu8988),采用实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p表达。将胰腺癌Capan-1细胞分为NC组(正常对照组)、si-NC组(转染无意义阴性序列)、si-FBXL19-AS1组(转染FBXL19-AS1小干扰RNA),miR-NC组(转染空质粒对照)、miR-339-3p组(转染miR-339-3p过表达慢病毒载体),si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p NC组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂阴性对照序列)、si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,采用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白质免疫印迹法检测细胞cyclinD1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p的靶向关系。结果胰腺癌组织lncRNA FBXL19-AS1表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.96±0.21比1.00±0.13,P<0.05),miR-339-3p表达量显著低于癌旁正常胰腺组织(0.37±0.05比1.00±0.11,P<0.05)。Capan-1、SW1990及PaTu8988细胞lncRNA FBXL19-AS1表达量分别为2.43±0.18、1.97±0.13和1.73±0.14,均显著高于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.07,miR-339-3p表达量分别为0.42±0.03、0.54±0.03和0.57±0.04,均显著低于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.05。其中以Capan-1细胞的lncRNA FBXL 19-AS1表达量最高,miR-339-3p表达量最低。与si-NC组比较,si-FBXL19-AS1组Capan-1细胞450nm处吸光度值(A450值)、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.47±0.03比0.94±0.06、(81.00±7.41)个比(187.00±16.13)个、(67.00±5.41)个比(141.00±9.24)个],cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著降低(0.44±0.03比0.83±0.05、0.48±0.03比0.92±0.07、0.38±0.02比0.73±0.05)。与miR-NC组比较,miR-339-3p组Capan-1细胞A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.54±0.04比0.94±0.05、(98.00±6.53)个比(193.00±10.02)个、(83.00±6.58)个比(146.00±7.11)个],cyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(0.47±0.03比0.81±0.07、0.43±0.03比0.94±0.06、0.32±0.02比0.71±0.06)。与si-FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较,si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组细胞A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著上升[0.96±0.07比0.48±0.03、(204.00±11.25)个比(83.00±5.11)个、(157.00±8.76)个比(64.00±4.12)个],cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著升高(0.84±0.06比0.42±0.03、0.96±0.08比0.47±0.08、0.74±0.06比0.37±0.02)。上述差异均有统计学意义(P值均<0.05)。共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组Capan-1细胞的荧光素酶活性显著低于共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组(0.47±0.04比1.00±0.10),差异有统计学意义(P<0.05),而共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组与共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组Capan-1细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义。结论LncRNA FBXL19-AS1在胰腺癌组织及胰腺癌Capan-1细胞株中呈高表达,敲减lncRNA FBXL19-AS1可靶向结合miR-339-3p调节胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进胰腺癌的发生和发展。

LEF1-AS1靶向miR-339-5p对MPP^(+)诱导的SK-N-SH损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(Long noncoding RNA,LncRNA)LEF1反义RNA1(LEF1 antisense RNA 1,LEF1-AS1)是否通过靶向微小RNA-339-5p(MicroRNA-339-5p, miR-339-5p)来影响1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl-pyridinium, MPP^(+))诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞损伤。方法定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LEF1-AS1和miR-339-5p在帕金森病患者中的表达水平;将SK-N-SH细胞分为con(对照)组、MPP^(+)组(0.3 mmol/L MPP^(+))、MPP^(+)+小干扰RNA对照(Small interfering RNA-NC,si-NC)组(MPP^(+)处理前转染si-NC)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1组(MPP^(+)处理前转染si-LEF1-AS1)、MPP^(+)+微小RNA对照(MicroRNA-NC,miR-NC)组(MPP^(+)处理前转染miR-NC)、MPP^(+)+miR-339-5p组(MPP^(+)处理前转染miR-339-5p)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1+抗微小RNA对照(anti-MicroRNA-NC,anti-miR-NC)组(MPP^(+)处理前共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-NC)、MPP^(+)+si-LEF1-AS1+anti-miR-339-5p组(MPP^(+)处理前共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p);运用噻唑基蓝四唑溴化物(Thiazolyl blue tetrazolium bromide, MTT)法、比色法、流式细胞仪和Western Blotting检测细胞活力、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、细胞凋亡和B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 related X protein, Bax)、Bcl-2蛋白表达水平;荧光素酶测定分析LEF1-AS1和miR-339-5p之间的靶向结合。结果与正常人比较,帕金森病患者中LEF1-AS1表达水平升高,miR-339-5p表达水平降低(P<0.05);MPP^(+)诱导SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、LEF1-AS1表达水平和MDA水平增高,Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性(48、72 h)、miR-339-5p表达水平、SOD活性降低(P<0.05);干扰LEF1-AS1或过表达miR-339-5p后MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、MDA水平降低,Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性(48、72 h)、miR-339-5p表达水平和SOD活性升高(P<0.05);LEF1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达;抑制miR-339-5p可逆转干扰LEF1-AS1对MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞损伤和氧化应激的影响。结论干扰LEF1-AS1通过靶向miR-339-5p来减轻MPP^(+)诱导的SK-N-SH细胞损伤。

uc.339经miR-95/K-RAS通路促进肾癌的生长

目的 探讨uc.339经miR-95/K-RAS促进肾癌细胞增殖、凋亡和迁移的机制。方法 收集76例肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织,应用RNA原位杂交技术检测uc.339表达情况,并分析其与肾透明细胞癌患者病理参数的相关性。CCK-8法检测肾癌细胞增殖活性;Annexin V/PI法检测细胞凋亡;Transwell小室检测肾癌细胞的迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-95对靶基因K-RAS的调控;Western blot方法分析uc.339下游基因蛋白的表达。结果 uc.339在肾透明细胞癌组织中呈阳性表达,占77.63%(59/76),其阳性表达与肿瘤大小、肿瘤TNM分期均密切相关(P<0.05)。uc.339对肾癌细胞迁移能力无影响。过表达uc.339促进肾癌增殖活性、抑制细胞凋亡,而降低uc.339表达则抑制肾癌增殖活性、促进细胞凋亡(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证uc.339下游靶基因是微小RNA-95(miR-95);双荧光素酶报告基因实验表明miR-95与K-RAS的结合具有特异性,K-RAS是miR-95的直接靶基因。Western blot和Rescue实验表明无论uc.339和miR-95如何变化,K-RAS都能受到uc.339的调控。结论 在肾癌中,uc.339抑制了miR-95的表达,进而升高K-RAS蛋白水平,促进肾癌生长。本研究为今后诊断和治疗肾癌提供有力的理论依据。