miR-346通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖

胶质瘤是最常见的肿瘤之一,预后较差。有研究表明,microRNAs(miRNAs)与包括胶质瘤在内的多种肿瘤有密切联系。然而,miR-346通过靶向调控丝氨酸/精氨酸剪接因子10(serine/arginine splicing factor 10,SRSF10)抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力的分子机制目前仍不明确。对GSE165137与GSE139031芯片进行差异表达分析结果显示,miR-346在两个数据集中共同下调,运用CGGA数据库分析显示,miR-346高表达的患者总生存期明显提高(P<0.0001),miR-346的表达随胶质瘤WHO分级升高而降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-346在胶质瘤细胞U251中的表达显著降低(P<0.05),且miR-346过表达质粒转染成功(P<0.05)。Transwell实验,5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)增殖实验和细胞克隆形成结果显示,与对照组相比,过表达miR-346后U251细胞的迁移、侵袭和增殖能力下降(P<0.05)。生物信息学方法预测miR-346的靶基因为SRSF10;双荧光素酶结果证实,miR-346与SRSF10mRNA的3′-UTR存在靶向结合关系(P<0.05);Western印迹结果显示,过表达miR-346后SRSF10蛋白表达水平下降(P<0.05)。Transwell实验、EdU实验及细胞克隆形成结果显示,与miR-346+Vector组相比,miR-346+SRSF10组的迁移、侵袭和增殖能力显著增加(P<0.05)。综上所述,miR-346在胶质瘤细胞和组织中表达普遍下调,且miR-346可通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭和增殖。

miR-346在鼻咽癌中的表达及生物学功能

目的:探讨miR-346在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能。方法:收集63例鼻咽癌组织以及34例鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR检测组织和6株人鼻咽癌细胞系及1株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-346表达量,选取人鼻咽癌细胞系中表达量居中的两种细胞系,并转染miR-346 inhibitor,设置对照组(NC组)并转染阴性对照质粒,Real-time PCR检测两种细胞系转染miR-346 inhibitor和对照组miR-346表达量,细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA和流式细胞术检测,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与鼻咽非癌组织比较,鼻咽癌组织中miR-346表达量显著升高(P=0.000);以正常人鼻咽部上皮细胞NP69比较,各鼻咽癌细胞株中miR-346相对表达量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。选择6种鼻咽癌细胞株中miR-346表达量居中的两种,分别为CNE-1和CNE-2,转染miR-346 inhibitor后,两种鼻咽癌细胞株miR-346相对表达量均显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两种鼻咽癌细胞转染miR-346inhibitor下调miR-346表达后鼻咽癌细胞的增殖受到抑制,均在转染第3天差异具有统计学意义(P<0.05)。下调miR-346表达后鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的凋亡显著增加,迁移细胞数和侵袭细胞数显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-346在鼻咽癌中高表达,下调miR-346表达会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-346可能作为一种癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要的作用。

不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221 miR-222 miR-197和miR-346的表达研究

目的探讨不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221、miR-222、miR-197和miR-346的表达水平,为临床手术方式选择及术后治疗提供参考。方法选取2013年6月～2017年8月行甲状腺手术的40例甲状腺癌(乳头状癌、滤泡癌各20例)及癌旁正常甲状腺组织、20例良性甲状腺疾病组织,术中取材后,立即放入液氮中保存后转入-70℃保存。采用定量RT-PCR检测miR-221、miR-222、miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平。结果对甲状腺癌,miR-221与miR-222的表达与患者的年龄、性别、最大肿瘤灶等无明显相关性(P>0.05),与TNM分期及淋巴转移情况相关(P<0.05);miR-197和miR-346的表达在20例甲状腺滤泡癌中均有明显升高(P<0.05),乳头状癌组织中未见显著变化(P>0.05)。miR-221与miR-222在良性甲状腺疾病组织表达量变化均不明显(P>0.05);但在甲状腺癌组织中的表达变化显著,差异均有统计学意义(P<0.05);对miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平进行比较结果显示,良性甲状腺疾病组织中miR-197和miR-346表达没有明显变化(P>0.05);在20例滤泡癌组织中明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);在乳头状癌组织及癌旁正常组织中的均无明显变化(P>0.05)。结论不同病理类型及分期甲状腺癌中miRNA的表达可作为甲状腺癌早期诊断、淋巴结转移、复发及远处转移密切相关的预警分子,为甲状腺癌手术方式选择及术后指导治疗提供了重要依据。

IRE1a与miR-346相互调节维持内质网应激强度促进宫颈癌细胞顺铂耐药

目的研究IRE1a和miR-346相互调节维持内质网应激(edoplasmic reticulum stress,ERS)强度,在宫颈癌细胞顺铂耐药中的作用。方法通过逐渐增加药物浓度的方法筛选顺铂耐药的宫颈癌细胞,通过基因芯片技术、实时荧光定量PCR技术、流式细胞术和双荧光素酶报告基因等方法检测顺铂耐药宫颈癌细胞miR-346、IRE1a的表达情况,并验证IRE1a-miR-346相互调控及其在宫颈癌细胞顺铂耐药中的作用。结果相对亲本细胞,在顺铂耐药的宫颈癌细胞中存在基础水平的ERS,ERS通过IRE1a依赖的途径促进miR-346的表达,miR-346参与宫颈癌细胞顺铂耐药;miR-346通过靶定并下调IRE1a的表达维持顺铂耐药细胞ERS强度,抑制IRE1a对miR-125b初始转录本的剪切,促进顺铂耐药细胞的存活。结论IRE1a和miR-346相互调节,维持顺铂耐药细胞中ERS强度,促进宫颈癌细胞顺铂耐药。

miR-346靶向调控SFRP4介导5-FU诱导的结肠癌细胞毒性

目的观察miR-346及SFRP4对5-FU诱导的结肠癌细胞毒性的影响,为结肠癌化疗增效提供新的靶基因。方法构建pcDNA3.1-SFRP4上调SFRP4表达,以pcDNA3.1-SFRP4、NC、Con-miR、miR-346、miR-346+Vector、miR-346+SFRP4等转染SW480和HT-29细胞,Western blot法观察miR-346上调或下调后对SFRP4蛋白水平的影响,MTT观察不同转染条件下5-FU细胞存活率变化,流式细胞术观察细胞凋亡变化。结果 SFRP4可增加5-FU诱导的SW480、HT-29细胞毒性及细胞凋亡,miR-346能够降低5-FU诱导的SW480、HT-29细胞毒性及细胞凋亡。miR-346对SFRP4表达具有负向调控作用。结论 miR-346通过负向调控SFRP4表达降低5-FU诱导的结肠癌细胞毒性。

miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用

目的检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制。方法选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用。转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4mRNA和蛋白的表达。结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P<0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P<0.001;t=20.892,P<0.001)。miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P<0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P<0.001;F=16.25,P<0.001)。结肠癌组织中miR-346与SFRP4mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95%CI:-0.757～-0.230,P=0.001 8)。与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346mimics后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P<0.05;t=5.868,P<0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P<0.05;t=5.889,P<0.01);给予miR-346inhibitor后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P<0.001;t=3.591,P<0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P<0.01;t=7.130,P<0.01)。结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖。

丝胶通过调节miR-346表达对高糖致足细胞损伤的保护作用

目的探讨丝胶通过调节miR-346表达对高糖致足细胞损伤的保护作用。方法以条件永生化小鼠足细胞为研究对象,实验分为正常(NG)组、高渗(MG)组、高糖(HG)组、丝胶低剂量(LS)组、丝胶中剂量(MS)组及丝胶高剂量(HS)组,分别采用5.5 mmol/L葡萄糖、5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇、30 mmol/L葡萄糖、30 mmol/L葡萄糖+150μg/ml丝胶、30 mmol/L葡萄糖+300μg/ml丝胶、30 mmol/L葡萄糖+600μg/ml丝胶的含血清及双抗培养液培养足细胞48 h。采用免疫印迹法检测各组足细胞Nephrin蛋白表达,以确定高糖致足细胞损伤模型是否成功建立;采用Real time PCR法检测各组足细胞miR-346及白细胞介素(IL)-18 mRNA表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组足细胞IL-18蛋白表达,以确定丝胶的最佳作用浓度。采用miR-346抑制剂(MicrOFF mmu-miR-346-5p inhibitor)转染足细胞抑制miR-346的表达后,给予最佳浓度的丝胶进行干预,观察足细胞IL-18表达。结果与NG组比较,HG组足细胞Nephrin蛋白表达明显降低(P<0.05)。丝胶各处理组足细胞miR-346 mRNA表达较HG组明显升高,其中HS组最高(P<0.05);IL-18表达较HG组明显降低,其中HS组最低(P<0.05)。特异性抑制足细胞miR-346表达,足细胞IL-18表达明显升高(P<0.05);给予600μg/ml的丝胶进行干预,被抑制miR-346表达的足细胞中IL-18表达明显降低(P<0.05)。结论丝胶可通过提高miR-346表达来减轻炎症反应,进而对高糖所致的足细胞损伤起保护作用。

miR-346缓解心肌缺血再灌注大鼠心肌氧化应激损伤

目的分析miR-346缓解心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠心脏功能受损和氧化应激的作用。方法将48只大鼠随机分为对照组、I/R组、I/R+agomiR-NC组和I/R+agomiR-346组,采用结扎左冠状动脉前降支法复制I/R模型,尾静脉注射重组腺相关病毒miR-346进行过表达干预。再灌注120 min后,检测心率(HR)、左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)和左心室壁厚度(LVWT),检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡,Western blot检测心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因、Bcl相关蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Cas)-3、Cas-9表达。结果I/R组大鼠HR、LVEF、FS和LVWT低于对照组,血清CK-MB、LDH、Mb和cTnI水平高于对照组,心肌组织MDA、Bax/Bcl-2、cleaved Cas-3/Cas-3和cleaved Cas-9/Cas-9蛋白表达高于对照组,SOD和GSH-px水平低于对照组,心肌组织细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);I/R+agomiR-346组大鼠HR、LVEF、FS和LVWT高于I/R+agomiR-NC组,血清CK-MB、LDH、Mb和cTnI低于I/R+agomiR-NC组,心肌组织MDA、Bax/Bcl-2、cleaved Cas-3/Cas-3和cleaved Cas-9/Cas-9蛋白表达低于I/R+agomiR-NC组,SOD和GSH-px水平高于I/R+agomiR-NC组,心肌组织细胞凋亡率低于I/R+agomiR-NC组(P<0.05)。结论miR-346过表达可以降低I/R大鼠的氧化应激水平,减轻心肌组织损伤,改善心功能。

miR-346及L1细胞黏附因子在结肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨miR-346及L1细胞黏附因子(L1CAM)在结肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法选取2016年5月至2017年5月中国医科大学肿瘤医院病理标本库保存的手术切除结肠癌手术标本68例,包括结肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应及免疫组织化学法检测组织中miR-346、L1CAM信使RNA(mRNA)的表达及L1CAM蛋白表达,观察miR-346及L1CAM mRNA与肿瘤部位、直径、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数的关系,分析miR-346与L1CAM的相关性。结果结肠癌组织miR-346表达高于癌旁组织及正常结肠组织(1. 272±0. 501比0. 621±0. 168、0. 201±0. 078)(P <0. 01),癌旁组织与正常结肠组织比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结肠癌组织L1CAM mRNA表达高于癌旁组织及正常结肠组织(1. 035±0. 592比0. 452±0. 122、0. 246±0. 085)(P <0. 01),癌旁组织与正常结肠组织比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。L1CAM蛋白表达于结肠癌细胞膜,在癌旁组织及正常结肠组织中无表达。结肠癌组织中miR-346与L1CAM mRNA表达量呈正相关(r=0. 864,P <0. 05)。结肠癌组织中miR-346及L1CAM蛋白在肿瘤浸润T_3～T_4、远处转移M_1、淋巴结转移阳性、血管浸润阳性、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期及肿瘤分化程度低分化中表达更高(均P <0. 05)。结论 miR-346及L1CAM mRNA在结肠癌组织中高表达,可能共同调控结肠癌侵袭及转移。

下调miR-346表达增强奥沙利铂对结肠癌SW620细胞杀伤作用

目的观察miR-346表达对奥沙利铂(Oxaliplatin,OHP)诱导的结肠癌细胞杀伤作用的影响,并探讨其机制。方法给予miR-346 mimic及miR-346 inhibitor转染SW620细胞,采用MTT法观察miR-346 mimic组、miR-346 inhibitor组、MOCK组(空白对照)、OHP组及OHP+miR-346 inhibitor组细胞增殖率;给予0、0.5、5、50、500μmol/L的OHP,或以上浓度OHP+miR-346mimics共同培养SW620细胞72 h,比较细胞存活率。DAPI染色法观察OHP处理的转染miR-346 inhibitor的SW620细胞核固缩及破碎比例;Western blot法检测不同干预下SW620细胞中凋亡相关蛋白表达。结果miR-346 mimic对SW620细胞增殖具有促进作用。miR-346 inhibitor对SW620细胞增殖具有抑制作用。OHP+miR-346 inhibitor对SW620细胞增殖具有抑制作用,与MOCK组及OHP组比较,在72 h和96 h时差异有统计学意义(P<0.05)。OHP(50μmol/L或500μmol/L)+miR-346 inhibitor组SW620细胞存活率低于OHP组(P<0.05)。SW620细胞给予不同干预措施培养48 h后,OHP(50μmol/L)+miR-346 inhibitor共同处理SW620细胞凋亡率高于MOCK组、miR-346 inhibitor组或OHP组(P<0.05)。OHP+miR-346 inhibitor组的SW620细胞核固缩及破碎比例高于OHP组或MOCK组(P<0.05)。与MOCK组比较,miR-346 mimics组caspase-9及Bcl-2蛋白水平升高,Apaf-1及Bax蛋白水平下降(P<0.05);OHP+miR-346 inhibitor组caspase-9及Bcl-2蛋白水平下降,Apaf-1及Bax蛋白水平升高(P<0.05);与miR-346 inhibitor或OHP组比较,OHP+miR-346 inhibitor组caspase-9及Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05)。结论下调miR-346表达通过调控凋亡相关蛋白增强奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用。

miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的细胞增殖的调控

目的研究miR-346/DKK3信号轴在结肠癌中的调控作用和机制.方法 RT-PCR实验检测miR-346在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达水平,随后检测其在结肠癌组织和对应的癌旁组织中的表达水平. MTT实验检测miR-346对结肠癌细胞增殖能力的影响.流式细胞周期检测miR-346对结肠癌细胞周期的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-346和DKK3之间的结合关系.利用siR NA和pcD NA-DKK3转染结肠癌细胞研究DKK3对结肠癌细胞功能的影响.结果 miR-346在结肠癌细胞中的表达水平显著上调.过表达miR-346后,结肠癌细胞的增殖能力变强, G1期细胞比例降低, S期和G2/M期细胞比例增加.双荧光素酶报告基因实验显示miR-346能够和DKK3直接结合.转染siRNA抑制DKK3的表达后,结肠癌细胞增殖能力变强, G1期细胞比例降低, S期和G2/M期细胞比例增加.过表达DKK3后,能够部分抵消miR-346对结肠癌细胞的促增殖作用.结论 miR-346通过靶向结合并抑制DKK3进而促进结肠癌细胞的增殖.

血浆外泌体miR-346与耐多药肺结核病患者治疗结果的关系

目的探讨血浆外泌体microRNA(miRNA)-346与耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者治疗结果的关系,为治疗MDR-TB患者提供更多的参考依据。方法选择2018年1月—2021年5月在陕西省结核病防治院结核病门诊收治的406例MDR-TB患者作为研究对象,收集并分析患者一般临床资料。使用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血浆外泌体miR-346表达水平,使用受试者操作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线分析血浆外泌体miR-346对治疗结果的预测价值,并用多因素Logistic回归模型分析血浆外泌体miR-346表达与治疗结果的关系。标准治疗后根据治疗结局将患者分为治疗结果良好组和治疗结果不良组。结果透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。治疗结果不良组更多的患者合并糖尿病或HIV感染,肺空洞、抗酸杆菌涂片阳性度>1+、既往治疗史和氟喹诺酮类耐药的患者比例也明显高于治疗结果良好组,且白细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数水平显著升高,白蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与治疗结果良好组[0.61(0.46,0.74)]相比,治疗结果不良组[1.23(0.60,2.02)]血浆外泌体miR-346表达水平明显升高(Z=-13.185,P<0.001)。经ROC曲线分析,血浆外泌体miR-346预测MDR-TB治疗结果不良的曲线下面积为0.881(95%CI:0.846~0.915),灵敏度和特异度分别为78.3%和86.7%,对应的截断值为0.81。经多元Logistic回归分析,糖尿病、艾滋病病毒感染、肺空洞、抗酸杆菌涂片阳性度>1+、既往治疗史、氟喹诺酮类耐药和血浆外泌体miR-346高表达是MDR-TB治疗结果不良的独立影响因子(P<0.05)。结论血浆外泌体miR-346高表达与MDR-TB治疗结果不良高风险有关,有希望作为MDR-TB治疗结局预测的有用标志物。

miR-346在糖尿病肾病TGF-β介导的Smad信号通路中的作用

目的:观察miR-346在高糖环境下小鼠肾小球系膜细胞TGF-β介导Smad信号通路中的作用,探讨miR-346参与糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法:体外高糖(25 mmol/L)下培养小鼠肾小球系膜细胞(MC),p Genesil-miR-346和重组TGF-β药物作为干预因素,分别设TGF-β药物刺激组(10、30 ng/m L)、TGF-β药物刺激+shRNA P53干扰组、阴性对照组。细胞免疫荧光检测细胞表型;Western法检测P53蛋白和Smad3/4蛋白的表达;实时荧光定量RT-PCR法检测mRNA表达。结果:⑴miR-346的表达可由P53通过调节miR-346基因中启动子来调节;⑵miR-346可调节Smad3/4的表达,其过程是TGF-β通过P53、miR-346通路从上游来调节的。结论:miR-346通过TGF-β/Smad信号通路调控糖尿病肾病相关基因表达,二者形成正反馈效应,在DN的发生和发展中起到非常重要的作用。

miR-346在结肠癌细胞中的表达及功能研究

目的检测结肠癌细胞中miR-346表达及侵袭转移的关系,为结肠癌预测及治疗靶点提供试验依据。方法采用qRT-PCR法(quantificational real-time polymerase chain reaction)检测结肠癌细胞株(HCT116、COLO205、SW620)及正常结肠上皮细胞(NCM460)中miR-346的表达。采用miR-346拟似剂(mimic)或抑制剂(inhibitor)对miR-346表达进行上调或下调并转染HCT116细胞,qRT-PCR检测转染效率,Transwell观察转染后HCT116细胞转移及浸润行为变化。结果miR-346在结肠癌细胞株HCT116、COLO205、SW620中相对表达量分别为0.372±0.068、1.284±0.253、1.105±0.203,在正常结肠上皮细胞(NCM460)中相对表达量为0.126±0.004,差异有统计学意义(F值=4.563,P<0.05),与HCT116组比较,COLO205组及SW620组差异有统计学意义(t值分别为7.256、5.419,P均<0.01)。与NCM460组比较,COLO205组及SW620组差异有统计学意义(t值分别为9.652、7.753,P均<0.01)。miR-346表达上调后HCT116细胞侵袭及转移能力增强(t值分别为2.458、2.194,P均<0.05),miR-346表达下调后HCT116细胞侵袭及转移能力减弱(t值分别为2.247、2.065,P均<0.05)。结论miR-346在结肠癌细胞中表达高,调控结肠癌细胞侵袭及转移。

circ0003204靶向miR-346对高糖诱导肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:探讨circ_0003204对高糖(HG)诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞(HK-2细胞),经30 mmol·LHG处理24 h后,qRT-PCR法检测细胞中circ_0003204和miR-346表达量。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0003204和miR-346的调控关系。分别转染circ_0003204小干扰RNA、miR-346模拟物或共转染circ_0003204小干扰RNA和miR-346抑制剂至HK-2细胞中,然后用30 mmol·LHG处理24 h, CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-6和IL-10水平及细胞中活性氧(ROS)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果:HK-2细胞经HG处理后,细胞中circ_0003204表达量升高(P<0.05),miR-346表达量降低(P<0.05)。circ_0003204在HK-2细胞中靶向负调控miR-346。干扰circ_0003204或过表达miR-346的HK-2细胞经HG处理后,细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P<0.05),培养上清液中LDH、IL-6水平及细胞中ROS活性、MDA含量降低(P<0.05),培养上清液中IL-10水平和细胞中SOD活性升高(P<0.05)。干扰miR-346逆转了干扰circ_0003204对HG诱导的HK-2细胞凋亡、氧化应激和炎症因子表达的影响。结论:干扰circ_0003204可能通过靶向上调miR-346抑制HG诱导的HK-2细胞凋亡、氧化应激和炎症反应。

microRNA-346对脂肪源性间充质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨microRNA-346(miR-346)对脂肪源性间充质干细胞(h ADSCs)成骨分化的影响。方法:离体培养大鼠脂肪源性间充质干细胞,通过转染过表达或者抑制miR-346,qRT-PCR检测各组成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Osterix mRNA的表达。结果:miR-346在h ADSCs的表达随着成骨诱导时间延长逐渐升高(P <0. 05)。转染miR-346 mimics后的h ADSCs内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著升高。相反,细胞转染miR-346 inhibitors后,其成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著降低,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:miR-346通过正向调控h ADSCs细胞内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix表达进而影响h ADSCs细胞的成骨分化进程。

hsa_circ_087631在原发性胆汁性胆管炎中的表达和作用机制

目的:探讨环状RNA hsa_circ_087631在原发性胆汁性胆管炎(PBC)中的表达及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测PBC患者和健康对照者外周血hsa_circ_087631的表达。构建hsa-miR-346过表达慢病毒载体pLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS,转染人急性T细胞白血病Jurkat细胞使之过表达hsa-miR-346;RT-qPCR检测hsa-miR-346潜在上游因子hsa_circ_087631表达以及下游因子Bcl-6和白细胞介素21(IL-21)mRNA表达的变化;双萤光素酶报告基因实验验证hsa_circ_087631与hsa-miR-346的结合作用。结果:PBC患者外周血hsa_circ_087631的表达较健康对照者显著升高(P<0.05)。成功构建hsa-miR-346过表达慢病毒载体,转染Jurkat细胞后,hsa-miR-346表达显著升高(P<0.01),hsa_circ_0087631、Bcl-6 mRNA和IL-21 mRNA表达均显著降低(P<0.05);将hsa_circ_087631野生型及双突变质粒分别与hsa-miR-346 mimics共转染至293T细胞,双萤光素酶报告基因实验结果显示hsa-miR-346可显著降低野生型hsa_circ_087631的萤光素酶活性(P<0.01),而将预测结合位点突变后,这种调控关系仍然存在(P<0.01)。结论:hsa_circ_087631在PBC患者外周血表达升高。人T细胞中存在hsa_circ_087631/hsa-miR-346/Bcl-6功能关联的调控;hsa-miR-346可显著降低hsa_circ_087631的表达;hsa_circ_087631/hsamiR-346/Bcl-6可能参与了PBC的发病机制。