miR-186-5p通过抑制HMGB1信号通路改善脊髓损伤后神经修复

目的探究miR-186-5p在脊髓损伤(SCI)中的变化及对神经修复的影响。方法①将小胶质细胞分为对照组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(1μg/ml LPS刺激24 h)、LPS+miR-186-5p-mimic组(转染miR-186-5p-mimic后1μg/ml LPS刺激24 h)和LPS+miR-186-5p-inhibitor组(转染miR-186-5p-inhibitor后1μg/ml LPS刺激24 h)。通过RT-PCR检测细胞中miR-186-5p水平,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)mRNA和蛋白表达水平,通过ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。②将大鼠分为假手术组、SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5p组,每组10只大鼠,假手术组大鼠仅行椎板切除术,其余组采用脊髓打击器建立SCI模型。建模后,假手术组大鼠正常饲养,SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5组大鼠分别脊髓注射空载体慢病毒和过表达miR-186-5p的重组慢病毒。通过RT-PCR检测脊髓组织中miR-186-5p水平。通过Western blot检测脊髓组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、p-p65、total p65、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD-1)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。ELISA检测脊髓组织中的TNF-α和IL-6的水平;免疫荧光检测脊髓组织中的离子钙结合接头蛋白分子1(IBA-1)、iNOS、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经丝蛋白-200(NF-200)的表达;通过BBB评分评价大鼠的运动功能;通过尼氏染色测定脊髓前角运动神经元数量。结果①与对照组相比,LPS组miR-186-5p表达降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-mimic组miR-186-5p表达升高(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-inhibitor组miR-186-5p水平降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。②与假手术组相比,SCI+LV-NC组大鼠脊髓出现明显损伤,iNOS/IBA-1比例升高(P<0.05),TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、HO-1和SOD-1蛋白表达下调(P<0.05),GFAP和IBA-1的阳性染色比例增加(P<0.05),HMGB1和TLR4的蛋白水平及NF-κB p65的磷酸化水平增加(P<0.05),BBB评分降低(P<0.05),脊髓前角运动神经元数量减少(P<0.05)。与SCI+LV-NC组相比,SCI+LV-miR-186-5p组脊髓损伤区域减少,iNOS/IBA-1比例降低(P<0.05),TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05),Bax蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2、HO-1和SOD-1蛋白表达上调(P<0.05),GFAP和IBA-1的阳性染色比例降低(P<0.05),HMGB1和TLR4的蛋白水平及NF-κB p65的磷酸化水平降低(P<0.05),BBB评分升高(P<0.05),脊髓前角运动神经元数量增多(P<0.05)。结论上调miR-186-5p通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路提高了脊髓损伤大鼠的运动功能和神经修复。

miR-34a/SIRT1通路在七氟醚麻醉致老年大鼠神经损伤中的作用

目的:探讨miR-34a/沉默信息调节蛋白1(miR-34a/SIRT1)通路在七氟醚麻醉致老年大鼠神经损伤中的作用。方法:将24只雄性老年大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a抑制剂(antagomiR)组及antagomiR-NC组,每组6只;造模前,antagomiR组及antagomiR-NC组分别注射20μmol/L的miR-34a antagomiR或miR-34a antagomiR-NC试剂(5ml/kg),对照组和模型组注射等体积的生理盐水,连续注射5d;除对照组外其余组均建立七氟醚麻醉致神经损伤大鼠模型;采用Morris水迷宫测定大鼠认知功能,qRT-PCR检测海马组织中miR-34a、SIRT1表达水平,Western blot检测相关蛋白表达。结果:与对照组比,模型组的逃避潜伏期、miR-34a、p53、caspase-3、Bax水平均显著增加(P<0.05),穿越平台次数、Bcl-2及SIRT1水平均显著降低(P<0.05);与模型组比,antagomiR组的逃避潜伏期、miR-34a、p53、caspase-3、Bax水平均明显降低(P<0.05),穿越平台次数、Bcl-2与SIRT1水平明显增加(P<0.05),而antagomiR-NC组以上指标无显著变化(P>0.05)。结论:七氟醚可通过激活miR-34a/SIRT1通路,促进大鼠神经组织损伤,通过靶向调控SIRT1的表达水平可能是七氟醚麻醉致老年大鼠神经损伤的作用机制。

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

目的探讨四味土木香散(STP)对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法第一部分:将Wistar大鼠按随机数表法分为假手术(sham)组,模型(Mod)组,Mod+STP高、中、低剂量(STP-H、STP-M、STP-L)组,Mod+阳性药卡托普利(CAP)组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分:将Wistar大鼠按随机数表法分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂(agomir)组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂(DAPT)组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果第一部分:STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8周、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。第二部分:与Mod组比,STP-H组TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论STP可抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。

miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制

背景:已有报道证实mi R-34a对肺癌干细胞有一定的抑制作用,但是其作用机制目前还不清楚。目的:探索mi R-34a对肺癌干细胞的抑制作用及机制。方法:应用免疫磁珠分选细胞技术从肺腺癌A549细胞系中分离出CD133+肺癌干细胞;脂质体转染技术构建miR-34a过表达的肺癌干细胞;双荧光素酶报告基因分析miR-34a与Notch1的靶向关系;基因敲除Notch1并检测其对肺癌干细胞的影响。结果与结论:(1)经过免疫磁珠分选和流式细胞术检测得到高比率的CD133+肺癌干细胞;(2)qR T-PCR检测发现miR-34a在CD133+肺癌干细胞中的表达明显低于CD133-肺癌细胞;(3)成功构建miR-34a过表达的肺癌干细胞,发现miR-34a能够抑制肺癌干细胞的增殖,诱导细胞凋亡;(4)双荧光素酶报告基因分析证明Notch1与miR-34a具有靶向关系;(5)基因敲除Notch1显著抑制肺癌干细胞的增殖,诱导细胞凋亡;(6)结果提示,miR-34a可能通过抑制Notch1信号通路来抑制肺癌干细胞的生长。

miR-34a-Sirt1-NRF2信号通路对脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖的影响

目的探讨miR-34a-Sirt1-NRF2信号通路对脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖的影响。方法制备改良局灶性大脑中动脉栓塞(MCAO)脑缺血损伤模型大鼠,分别设为脑缺血1 d组(n=10)、脑缺血3 d组(n=10)、脑缺血7 d组(n=10)、白藜芦醇组(n=10),另设不作缺血处理的大鼠为对照组(n=10),应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠室管膜下区miR-34a、沉默信息调节因子1(Sirt1)、核因子E2相关因子2(NRF2)的表达水平。结果与对照组比较,白藜芦醇组、脑缺血1 d组、脑缺血3 d组、脑缺血7 d组miR-34a mRNA相对表达量升高,Sirt1、NRF2蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与白藜芦醇组比较,脑缺血1 d组、脑缺血3 d组、脑缺血7 d组miR-34a mRNA相对表达量升高,Sirt1、NRF2蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与脑缺血1 d组比较,脑缺血3 d组、脑缺血7 d组miR-34a mRNA相对表达量升高,Sirt1、NRF2蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与脑缺血3 d组比较,脑缺血7 d组miR-34a mRNA相对表达量升高,Sirt1、NRF2蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-34a有可能通过调节Sirt1/NRF2通路来调控脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖过程。

EBV下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移的作用及机制研究

目的:探究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法:采用qPCR检测EBV阴性鼻咽癌SUNE1、CNE2、HK1细胞和EBV阳性C666-1细胞中miR-34c表达水平。构建miR-34c模拟物以分析miR-34c对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。使用CCK-8、划痕愈合试验以及Transwell细胞侵袭试验检测鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western blotting测定细胞中迁移、侵袭相关蛋白以及Erk1/2信号通路蛋白的表达水平。结果:miR-34c在EBV阳性C666-1细胞表达下调(P<0.05)。CCK-8结果显示,miR-34c组C666-1细胞在16、24、48 h的活力明显低于EBV组(P<0.01)。划痕试验和Transwell试验结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.01)。Western blotting结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭相关蛋白Vimentin、Snail、MMP-2、MMP-3及Erk1、Erk2蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论:miR-34c在EBV阳性鼻咽癌细中表达下调,EBV下调miR-34c可增强鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移能力及激活Erk1/2信号通路。

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。

基于miR-34a/SIRT1通路研究电针刺激对脑卒中大鼠神经功能恢复的促进作用

目的探讨电针刺激对脑卒中大鼠神经功能恢复的影响并探讨可能机制。方法选取健康雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、模型组、假电针刺激组、假穴位电针刺激组、电针刺激组,除正常组外均采用大脑中动脉闭塞法构建脑卒中大鼠模型,建模成功后均进行为期21 d的治疗,正常组仅观察。治疗后1 d、3 d、14 d、21 d各组大鼠分别行横木行走实验、抓握牵引试验,治疗结束后进行神经功能缺损评分,计算大鼠脑组织梗死比;通过实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCT)检测大鼠脑组织miR-34a表达水平,通过免疫印迹法检测大鼠脑组织SIRT1蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠各时间点平衡木试验评分、神经功能缺损评分、脑梗死比,脑组织miR-34a水平均显著升高(P<0.05),各时间点肌力测验评分,脑组织SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,假电针刺激组、假穴位电针刺激组、电针刺激组大鼠各时间点平衡木试验评分,神经功能缺损评分、脑梗死比,脑组织miR-34a水平均显著下降(P<0.05),各时间点肌力测验评分,脑组织SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05);与假电针刺激组相比,假穴位电针刺激组各时间点平衡木试验评分、肌力测验评分,神经功能缺损评分、脑梗死比、脑组织miR-34a及SIRT1蛋白水平差异无统计学意义(P<0.05);与假电针刺激组、假穴位电针刺激组相比,电针刺激组各时间点平衡木试验评分,神经功能缺损评分、脑梗死比,脑组织miR-34a水平均显著下降(P<0.05),肌力测验评分、脑组织SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05);正常组脑组织结构完整、形态正常,神经细胞排列规则。模型组脑组织结构不清、组织疏松,神经细胞排列紊乱,胞质着色灰暗、胞核稍增大,染色深。假电针刺激组、假穴位电针刺激组、电针刺激组神经细胞部分恢复,且电针刺激组好于假电针刺激组与假穴位电针刺激组。结论电针刺激可能通过激活miR-34a/SIRT1通路促进脑卒中大鼠神经功能恢复。

miR-34a、HMGB1及PCNA在宫颈上皮内病变中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-34a、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及细胞增殖核抗原(PCNA)基因在宫颈上皮内病变(SIL)组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院2016年1月至2019年12月收治的158例SIL、宫颈鳞癌(SCC)及因子宫肌瘤/子宫腺肌症切除子宫的患者宫颈组织标本及临床病理资料。将研究对象分为正常宫颈组(n=50)、SIL组(n=65)和SCC组(n=43)。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测与分析miR-34a、HMGB1及PCNA在组织样本和细胞系中的表达。结果:SIL组和SCC组miR-34a表达均显著低于正常宫颈组(均P<0.001),且SCC组显著低于SIL组(P=0.024)。SCC组HMGB1 mRNA水平均显著高于正常宫颈组和SIL组(P=0.001,P=0.038),且SCC组显著高于SIL组(P=0.039)。SCC组PCNA mRNA水平均显著高于正常宫颈组和SIL组(P=0.033,P=0.004),而正常组和SIL组比较,差异无统计学意义(P=0.967)。H8细胞miR-34a表达显著高于SiHa细胞,而HMGB1和PCNA的mRNA水平显著低于SiHa细胞(P<0.001,P=0.005,P=0.045)。此外,HPV阳性的SIL和SCC组织miR-34a的m RNA水平均显著下调(P=0.028,P=0.039),有淋巴结转移者miR-34a表达显著下调(P=0.015)。结论:随着宫颈病变程度的加重,miR-34a表达逐渐降低,HMGB1和PCNA表达逐渐升高,三者的变化趋势预示着SIL的进展和宫颈癌(CC)的发生,miR-34a、HMGB1及PCNA有望成为预警SIL进展的新靶标。

miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障氧化应激的实验研究

目的探讨miR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障的氧化应激。方法检测年龄相关性白内障患者和正常透明晶状体前囊组织及人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-34a-5p和预测靶基因Nrf2表达及人晶状体上皮细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性。将miR-34a-5p模拟物、模拟物对照、miR-34a-5p抑制剂和抑制剂对照分别转染人晶状体上皮细胞,然后用400μmol·L^-1 H2O2作用8 h后检测miR-34a-5p、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达,并检测人晶状体上皮细胞增殖活性。结果正常晶状体前囊组织中miR-34a-5p的相对表达量为1.03±0.29,Nrf2 mRNA的相对表达量为1.31±0.39;年龄相关性白内障组织中miR-34a-5p的相对表达量为2.69±0.99,Nrf2 mRNA的相对表达量为0.64±0.25。与正常组织相比,年龄相关性白内障晶状体组织中miR-34a-5p表达显著升高,Nrf2表达显著降低。Nrf2蛋白在年龄相关性白内障晶状体组织中表达也显著降低(均为P<0.001)。在人晶状体上皮细胞氧化应激模型中,miR-34a-5p表达显著升高,靶基因Nrf2表达显著降低,内源性ROS水平显著升高(均为P<0.001)。miR-34a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞后,miR-34a-5p表达显著升高,Nrf2表达显著降低,内源性ROS水平显著升高,细胞增殖活性显著降低(均为P<0.001),然而,miR-34a-5p抑制剂转染人晶状体上皮细胞后,miR-34a-5p表达显著降低,Nrf2表达显著升高,内源性ROS水平显著降低,细胞增殖活性显著升高(均为P<0.001)。双荧光素酶报告分析证实,Nrf2是miR-34a-5p的直接靶点。结论 MiR-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路增加晶状体上皮细胞氧化应激,抑制晶状体上皮细胞的增殖,从而参与年龄相关性白内障的发生发展过程。

萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响

目的:探讨萝卜硫素对结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成及miR-34a/Notch1信号通路的影响。方法:设结肠癌HT-29细胞组、氟尿嘧啶组(20.0μg·ml-1)、萝卜硫素低(100.0μg·ml-1)、高(1000.0μg·ml-1)剂量组,置于37℃、5%CO2的环境中培养72 h,培养结束后,细胞计数试剂盒-8测定法测定细胞增殖能力,Giemsa溶液染色细胞计算集落总数,BD Matrigel基质培养测定结肠癌HT-29细胞相对总血管长度、相对总血管数目,流式细胞仪测定凋亡率,RT-PCR法及Western blot测定miR-34a、Notch1 mRNA及Notch1蛋白水平。结果:与结肠癌HT-29细胞组比较,氟尿嘧啶组、萝卜硫素低、高剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05);随着萝卜硫素剂量的增加,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05);与氟尿嘧啶组比较,萝卜硫素各剂量组存活率、单克隆形成数目、相对总血管长度、相对总血管数目、miR-34a mRNA、Notch1 mRNA及蛋白显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:萝卜硫素能抑制结肠癌HT-29细胞增殖、血管形成,并能促进HT-29细胞凋亡,其机制与萝卜硫素抑制miR-34a、Notch1基因和蛋白的表达有关。

七氟醚调控miR-34a/HMGB1表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭

目的探讨七氟醚对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法以1.7%、3.4%和5.1%七氟醚刺激MDA-MB-231细胞4 h后,采用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室实验分别检测细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-34a和HMGB1 mRNA的表达,Western blot检测HMGB1蛋白的表达。采用荧光素酶实验检测miR-34a和HMGB1的靶向关系,脂质体法转染miR-34a抑制剂后,观察下调miR-34a表达对5.1%七氟醚刺激下的MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和HMGB1表达的影响。结果七氟醚能够呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成和侵袭,并上调miR-34a、下调HMGB1mRNA和蛋白的表达。HMGB1是miR-34a的靶基因。转染miR-34a抑制剂成功下调miR-34a表达后,七氟醚对MDA-MB-231细胞增殖、克隆形成和侵袭能力以及对HMGB1表达的抑制作用均明显得以逆转。结论七氟醚可通过调控miR-34a/HMGB1表达抑制MDA-MB-231细胞增殖和侵袭。

miR-34a通过HDAC1调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探究miR-34a通过组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖和凋亡的机制。方法网站预测和荧光素酶实验验证miR-34a靶向HDAC1。人EC细胞系HEC-1A分为对照组、mimic组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。通过转染miR-34a类似物(mimic)或(和)HDAC1 pcDNA以上调miR-34a或(和)HDAC1的水平。检测比较4组HEC-1A细胞中miR-34a、HDAC1 mRNA的相对表达水平以及细胞活力和凋亡率情况。并分析4组HEC-1A细胞中HDAC1、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平。结果与对照组比较,mimic组和mimic+HDAC1组miR-34a表达水平显著升高,HDAC1组HDAC1 mRNA和蛋白的表达水平也显著升高(P<0.05)。mimic组HDAC1 mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。mimic+HDAC1组HDAC1 mRNA和蛋白的表达水平高于mimic组(P<0.05)。与对照组比较,mimic组的细胞活力、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平显著降低,而凋亡率升高(P<0.05)。HDAC1组的细胞活力、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而凋亡率低于对照组(P<0.05)。并且mimic+HDAC1组的细胞活力、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平显著高于mimic组,而凋亡率低于mimic组(P<0.05)。结论miR-34a可通过靶向调节HDAC1的水平调节EC细胞的增殖和凋亡,这种调节作用可能通过影响Wnt/β-catenin通路实现。

miR-34a调控HMGB1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-34a对膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法合成miR-34a的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-34a的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot方法检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性HMGB1 m RNA及蛋白的表达变化。结果 miR-34a的模拟物转染至T24细胞的效率为80%,转染miR-34a模拟物48 h后,T24细胞内miR-34a的表达显著升高(P<0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P<0.05),且呈时间依赖性,HMGB1 m RNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论 miR-34a抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向HMGB1基因相关。

miRNA-34b对子宫内膜癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的探究miR-34b对子宫内膜癌(endometrial cancer)凋亡、迁移、侵袭的影响及对Jag1/Cyclin D1信号通路的影响。方法将人子宫内膜癌细胞AN3CA细胞分为对照组、NC组和miR-34b组。通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Westernblot检测各组细胞Jagged-1蛋白(Jag1)及其靶基因G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cycling D1)mRNA和蛋白的表达水平;通过裸鼠荷瘤实验分析miR-34b对肿瘤生长的影响。结果对照组、NC组和miR-34b组细胞凋亡比例分别为5.6%±0.12%,5.80%±0.22%和19.4%±0.51%。miR-34组细胞凋亡比例高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.325,P<0.01);对照组、NC组和miR-34b组细胞迁移数分别为322.15±13.71个,327.67±9.14个和162.19±7.49个,miR-34b组细胞迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.945,P<0.01);对照组、NC组和miR-34b组细胞侵袭数分别为357.6±14.11个,364.05±16.12个和157.58±8.77个,miR-34b组细胞侵袭数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.643,P<0.01);qPCR结果表明对照组、NC组和miR-34b组Jag1 mRNA表达为2.75±0.21,2.67±0.14和1.19±0.19,miR-34b组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.434,P<0.01);对照组、NC组和miR-34b组蛋白表达为1.71±0.11,1.77±0.24和0.69±0.16,miR-34b组低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.895,P<0.01);对照组、NC组和miR-34b组Cyclin D1mRNA表达为1.29±0.13,1.32±0.11和0.59±0.13,miR-34b组低于对照组,差异具有统计学意义(t=9.124,P<0.01);对照组、NC组和miR-34b组蛋白表达为1.81±0.18,1.79±0.14和1.29±0.16,miR-34b组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.227,P<0.01);裸鼠荷瘤实验表明过表达miR-34b裸鼠肿瘤生长曲线与对照组差异有统计学显著性意义,并且肿瘤体积显著低于对照组(t=8.184,P<0.01)。结论miR-34b可以促进人子宫内膜癌细胞的凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制与Jag1/Cyclin D1信号通路活性的抑制相关。

七氟烷抑制人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、迁移和侵袭

目的研究七氟烷对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法用Western blot检测MCF-7细胞中高迁徙率族蛋白1 HMGB1的表达;miR-34a组(转染miR-34a mimics)、miR-con组(转染miR-con)、七氟烷处理+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)及七氟烷处理+anti-miR-34a组(转染anti-miR-34a),均用脂质体法转染至MCF-7细胞;RT-qPCR检测细胞miR-34a表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果与对照组相比,1.7%的七氟烷处理的细胞中miR-34a表达显著升高(P<0.05),HMGB1表达显著降低(P<0.05),且细胞增殖、迁移和侵袭均显著下调(P<0.05);过表达miR-34a可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭,敲减miR-34a可降低七氟烷对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-34a可明显降低野生型HMGB1的细胞荧光活性,且负向调控HMGB1的表达。结论七氟烷可抑制人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。