miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制。方法运用逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测甲状腺癌组织、细胞中miR-361-3p表达水平;脂质体法将miR-con组(转染miRcon)、miR-361-3p组(转染miR-361-3p)、si-con组(转染si-con)、si-L型氨基酸转运蛋白(S100A6)组(转染si-S100A6)、miR-361-3p+pcDNA组(共转染miR-361-3p和pcDNA)、miR-361-3p+pcDNA-S100A6组(共转染miR-361-3p和pcDNA-S100A6)转染至CAL-62细胞。细胞计数试剂盒(CCK)8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)法检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力;Western印迹检测S100A6蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果与癌旁组织、Nthy-ori 3-1相比,癌组织、癌细胞(TPC-1、SW579、CAL-62)中miR-361-3p表达均显著降低(P<0.05)。过表达miR-361-3p后,细胞增殖显著降低,EDU阳性率显著降低,划痕抑制率显著升高,迁移侵袭能力显著降低(P<0.05)。miR-361-3p显著抑制野生型S100A6细胞的荧光活性,并负向调控S100A6蛋白,二者在癌组织中表达呈显著负相关(r=-0.627,P<0.05)。敲减S100A6具有与过表达miR-361-3p相似的作用,过表达S100A6部分逆转miR-361-3p增殖、迁移侵袭抑制作用。结论miR-361-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移侵袭,产生这种作用的机制与靶向S100A6有关。

miR-361介导PI3K/Akt/Ca^(2+)通路对大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与IL-4表达水平的影响

目的:探讨miR-361介导PI3K/AKt/Ca^(2+)通路对活化大鼠肥大细胞增殖情况及组胺与白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将大鼠肥大细胞(RBL-2H3细胞)分为miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组和正常对照组,miR-361过表达组、miR-361抑制组、miR-361对照组细胞分别转染miR-361过表达、miR-361抑制及miR-361无义序列寡核苷酸片段,测定并比较各组细胞miR-361 mRNA、组胺、IL-4及PI3K/AKt/Ca^(2+)通路相关蛋白水平。结果:miR-361过表达组细胞miR-361 mRNA相对表达水平高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,miR-361过表达组24、48、72 h细胞增值率均低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测结果显示,miR-361过表达组细胞组胺和IL-4水平的表达水平低于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,miR-361过表达组细胞p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K蛋白表达水平均高于miR-361抑制组、miR-361对照组及正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-361过表达可抑制大鼠肥大细胞的增殖,降低组胺与IL-4的表达水平,其作用机制可能与其能够提高PI3K/AKt/Ca^(2+)通路活性有关。

MiR-361-3p下调STC2抑制头颈部鳞状细胞癌的作用研究

目的探讨STC2调控HNSCC进展的作用机制。方法HNSCC相关mRNA和miRNA通过对The Cancer GenomeAtlas(TCGA)数据库分析整理获取。随后,通过MTT法、集落形成实验、流式细胞检测和迁移侵袭法,验证STC2下调后,对HNSCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。再利用生物信息学数据库,预测潜在靶向STC2的miRNA。通过qRT-PCR和荧光素酶报告基因实验,对预测获取的miR-361-3p干扰STC2的表达能力进行验证。最后,通过动物移植瘤模型验证了miR-361-3p通过下调STC2对HNSCC肿瘤发挥抑制作用。结果STC2在HSNCC细胞中高表达。在体外,下调STC2抑制HSNCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进HSNCC细胞的凋亡。荧光素酶报告基因实验证实miR-361-3p可能是STC2的上游调控因子。过表达miR-361-3p下调STC2,可以抑制HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭,促进HNSCC细胞的凋亡。结论STC2在HNSCC细胞中呈高表达。miR-361-3p负调控STC2,进而改变HNSCC的相关细胞进展。

LncRNA NEAT1/miR-361-5p/TRPM7轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)/miR-361-5p/瞬时受体电位通道7(TRPM7)轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用RT-qPCR和Western blot检测正常宫颈上皮细胞End1/E6E7和宫颈癌细胞(Caski、HeLa和C33a)内lncRNA NEAT1、miR-361-5p和TRPM7的表达;将HeLa细胞分为si-NC组、si-lncRNA NEAT1组、miRNC组、miR-361-5p组、si-lncRNA NEAT1+anti-miR-NC组、si-lncRNA NEAT1+anti-miR-361-5p组、miR-361-5p+vector组、miR-361-5p+TRPM7组,采用RT-qPCR检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-361-5p表达;使用MTT、Transwell检测细胞的增殖、迁移和侵袭;使用Western blot检测TRPM7、MMP-2、CyclinD1和MMP-9蛋白的表达;使用双萤光素酶报告实验验证lncRNA NEAT1与miR-361-5p、miR-361-5p和TRPM7的靶向关系。结果在宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33a中lncRNA NEAT1、TRPM7蛋白表达升高,而miR-361-5p表达水平降低;敲低lncRNA NEAT1或过表达miR-361-5p可降低CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达及细胞活性,并减少细胞迁移、侵袭。lncRNA NEAT1靶向调控miR-361-5p,抑制miR-361-5p表达可减弱敲低lncRNA NEAT1对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用;miR-361-5p靶向调控TRPM7,上调TRPM7可减弱过表达miR-361-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论lncRNA NEAT1可能通过调控miR-361-5p/TRPM7轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-361-3P调控转化生长因子β1诱导成骨细胞凋亡的研究

目的研究人成骨细胞内miR-361-3P对转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞凋亡标志分子caspase 3蛋白活性表达的影响,探讨miR-361-3P/TGF-β1通路在人成骨细胞凋亡中的作用机制。方法用miR-361-3p mimic或inhibitor及TGF-β1 siRNA(siTGF-β1)转染人成骨细胞系hFob1.19;RT-qPCR和Western blotting检测caspase 3的变化;CCK-8法检测细胞的增殖和凋亡;荧光素酶基因报告实验检测miR-361-3p和TGF-β1基因的结合情况。结果在hFob1.19细胞内,miR-361-3p mimic显著下调了TGF-β1mRNA表达,同时明显抑制了细胞内的TGF-β1蛋白活性(P<0.05);miR-361-3p mimic作用hFob1.19细胞48 h后,miR-361-3p可明显抑制细胞增殖(P<0.05),导致成骨细胞内caspase 3蛋白活性明显升高(P<0.05),并减少WT-TGF-β1的荧光素酶活性;miR-361-3p inhibitor可增强hFob1.19细胞增殖,抑制细胞内caspase 3蛋白活性,而si-TGF-β1则可明显增强caspase 3活性表达。结论miR-361-3p可能通过抑制TGF-β1负向调控人成骨细胞的增殖并促进其凋亡。

LncRNA MIAT靶向miR-361-3p影响内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)对内毒素(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响及分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为control组、LPS组、si-LncRNA MIAT+LPS组、si-NC+LPS组、miR-361-3p+LPS组、miR-NC+LPS组、anti-miR-361-3p+si-LncRNA MIAT+LPS组、anti-miR-NC+si-Ln-cRNA MIAT+LPS组;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA MIAT和miR-361-3p表达水平;流式细胞术实验检测细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;双荧光素酶报告实验检测LncRNA MIAT和miR-361-3p的靶向关系。结果LPS处理的血管内皮细胞中LncRNA MIAT表达水平明显升高,miR-361-3p表达水平明显降低,切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3表达水平、细胞凋亡率明显升高,MDA含量明显升高,SOD和CAT活性明显降低(P<0.05)。低表达LncRNA MIAT或过表达miR-361-3p,Cleaved-caspase-3表达水平和血管内皮细胞凋亡率明显降低,MDA含量明显降低,SOD和CAT活性明显升高(P<0.05)。LncRNA MIAT靶向调控miR-361-3p;低表达miR-361-3p可以逆转LncRNA MIAT低表达对LPS处理的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。结论低表达LncRNA MIAT可通过靶向调控miR-361-3p抑制LPS诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤。

lncRNA GATA3-AS1通过靶向miR-361-3p调控T细胞淋巴瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA GATA结合蛋白3反义RNA(GATA3-AS)1对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法选取30例胶质瘤组织及相应癌旁组织,体外培养人T淋巴细胞H9和T细胞淋巴瘤细胞Jurkat、CCRF-CEM和SUP-T1,将Jurkat分为si-NC组和si-GATA3-AS1组、miR-NC组和miR-361-3p组、si-GATA3-AS1+anti-miR-NC组和si-GATA3-AS1+anti-miR-361-3p组。RT-聚合酶链反应(qPCR)检测T细胞淋巴瘤组织和细胞中lncRNA GATA3-AS1和miR-361-3p的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;Western印迹检测相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA GATA3-AS1和miR-361-3p的靶向关系。结果T细胞淋巴瘤组织和细胞中lncRNA GATA3-AS1表达水平显著升高,miR-361-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与H9组比较,Jurkat、CCRF-CEM和SUP-T1细胞组lncRNA GATA3-AS1表达水平显著升高,miR-361-3p表达水平显著降低(P<0.05)。干扰lncRNA GATA3-AS1表达或过表达miR-361-3p显著降低Jurkat细胞的活性、迁移、侵袭数及细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平,显著升高p21表达水平(P<0.05)。lncRNA GATA3-AS1靶向调控miR-361-3p表达(P<0.05)。且下调miR-361-3p逆转了干扰lncRNA GATA3-AS1表达对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论干扰lncRNA GATA3-AS1表达通过靶向上调miR-361-3p抑制T细胞淋巴瘤Jurkat细胞的增殖、迁移和侵袭。

肺癌患者血浆miR-197-3p和miR-361-3p表达的诊断评价

目的:评价血浆miR-197-3p和miR-361-3p用于肺癌诊断的价值。方法:采用实时定量PCR法检测57例肺癌患者和53例良性肺病患者血浆中miR-197-3p和miR-361-3p的表达水平。建立这两个血浆miRs的受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断肺癌的效果,并与血清癌胚抗原和细胞角蛋白19(Cyfra21-1)诊断效果进行比较。结果:miR-197-3p和miR-361-3p在肺癌患者血浆中的表达水平明显高于良性肺病患者(均P<0.001)。两指标诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.908和0.869(均P<0.001)。血浆miR-197-3p表达与肺癌的病理组织学类型显著相关(P=0.011);而血浆miR-361-3p表达与肺癌的分化程度及临床分期相关(P=0.005和P=0.015)。血浆miR-197-3p和miR-361-3p测定诊断肺癌的敏感性(78.9%和71.9%)和准确性(81.8%和80%)高于血清癌胚抗原(42.6%和60%)和Cyfra21-1(25%和58.9%),两种miR的联合检测可较大程度提高诊断的敏感性(89.5%)和准确性(85.5%),但特异性略有下降。结论:血浆miR-197-3p和miR-361-3p可作为诊断肺癌的肿瘤标志物,诊断效果优于血清癌胚抗原和Cyfra21-1。

lncRNA LINC00308作为ceRNA通过调控miR-361-5p/TRIP13轴促进前列腺癌PC3细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00308对前列腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的影响及其相关作用机制。方法:利用基因芯片在前列腺癌组织与癌旁对照组织中筛选差异表达的lncRNA及mRNA,并确定LINC00308及甲状腺激素受体因子13(thyroid hormone receptor interactor13,TRIP13)为研究对象。MTT实验、平板克隆及Transwell和划痕实验检测LINC00308对前列腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,应用裸鼠移植瘤在体内验证上述影响,应用Western blotting及免疫组化实验在瘤组织和癌细胞中探究LINC00308对TRIP13表达的影响。生物信息学分析技术与RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)及qPCR和双荧光素酶基因报告实验预测并探究miR-361-5p与LINC00308及TRIP13之间的相互作用机制,并利用平板克隆、Transwell侵袭实验对癌细胞恶性生物行为进行验证。结果:芯片结果及qPCR共同证实LINC00308(P<0.01)与TRIP13(P<0.05)在前列腺癌组织及4种细胞系中均异常高表达;细胞功能实验结果表明过表达LINC00308可以促进前列腺癌细胞PC3的增殖、侵袭及迁移能力(均P<0.05),而下调前列腺癌细胞中LINC00308表达起相反作用。裸鼠移植瘤实验证实,LINC00308能够在体内促进前列腺癌PC3细胞的成瘤(P<0.05或P<0.01),且能够在体内体外促进TRIP13表达(P<0.05)。生物信息学分析与RIP及qPCR和双荧光素酶基因报告实验结果证实miR-361-5p能够分别与LINC00308与TRIP13的3'-UTR靶向结合,且LINC00308能够通过吸附miR-361-5p而作为内源性竞争RNA(competing endoge-nous RNA,ceRNA)调控TRIP13的表达,MTT、平板克隆及Transwell实验检测癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力变化证实了三者之间的调控作用。结论:在前列腺癌组织和细胞中异常高表达的LINC00308通过发挥ceRNA的功能抑制miR-361-5p表达而增强TRIP13表达,从而促进前列腺癌的增殖、侵袭及迁移能力。

miR-361-3p调节恶性胶质瘤细胞功能的研究

目的研究miR-361-3p在恶性胶质瘤(GB)细胞中的功能。方法培养LN299和U87MG细胞及人正常星形胶质细胞(NHA)。miR-361-3p的mimic或inhibitor及MTCP1的siRNA(si-MTCP1)转染U87MG细胞。RT-PCR和Western blot检测目标基因水平的变化。CCK-8和Caspase3试剂盒分别检测细胞的增殖和凋亡。荧光素酶基因报告实验检测miR-361-3p和MTCP1基因的结合。结果与NHA比较,miR-361-3p在LN299和U87MG中低表达。U87MG转染mimic可抑制MTCP1的表达和细胞增殖率,升高Caspase3活性,并减少WT-MTCP1的荧光素酶活性。U87MG转染inhibitor增加细胞增殖率,而转染si-MTCP1后细胞凋亡增加。结论miR-361-3p可能通过抑制MTCP1来抑制GB细胞的增殖并促进凋亡。

SNHG1/miR-361-3p/MMP-1轴调控乳腺癌细胞迁移和侵袭的机制

目的探讨lncRNA SNHG1(核仁小分子RNA宿主基因1)对乳腺癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1和miR-361-3p对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-361-3p,miR-361-3p是否能够结合基质金属蛋白酶1(MMP-1),利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记实验检测SNHG1与miR-361-3p以及MMP-1表达的关系。结果抑制SNHG1和增加miR-361-3p的表达后,细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-361-3p(P<0.01),miR-361-3p可结合MMP-1(P<0.01)。PCR结果显示SNHG1低表达使得miR-361-3p的表达增加(P<0.01),蛋白免疫印记实验结果显示抑制SNHG1的表达可降低MMP-1的表达(P<0.01)。结论SNHG1/mir-361-3p/MMP-1轴调控乳腺癌细胞迁移和侵袭。

miR-361-3p调控BTG2对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-361-3p调控BTG2影响急性髓系白血病细胞系HL-60细胞增殖的作用及机制。方法采用microRNA靶基因预测软件获取miRNA-361-3p下游靶基因,利用荧光素酶报告基因技术鉴定靶向关系。HL-60细胞随机分为7组:(1)正常组未转染;(2)miR-361-3p mimic组转染miR-361-3p mimic;(3)miR-361-3p inhibitor组转染miR-361-3p inhibitor;(4)mimic NC对照组转染miR-361-3p mimic NC;(5)inhibitor NC对照组转染miR-361-3p inhibitor NC;(6)si-BTG2组转染si-BTG2;(7)si-NC对照组转染siNC,后用完全培养基培养24、48和72 h。采用CCK-8法、流式细胞术、Western blot分别检测HL-60细胞的增殖、凋亡、以及caspase-3、caspase-7、P53、Bcl-2、survive凋亡相关蛋白的表达水平。结果与NC对照组比较,靶基因BTG23′UTR质粒的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8检测结果显示,与NC对照组比较,miR-361-3p mimic组和si-BTG2组能促进细胞的增殖,而miR-361-3p inhibitor组能抑制细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,与NC对照组比较,miR-361-3p inhibitor组可促进细胞的凋亡,miR-361-3p mimics组和si-BTG2组抑制细胞的凋亡;Western blot检测结果显示,与NC对照组对比,si-BTG2组细胞caspase3/7、P53蛋白表达下降(P<0.05),Bcl-2、survive表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-361-3p通过靶向抑制BTG2基因,调控HL-60细胞增殖和凋亡。

番石榴叶通过miR-361-5p调控Zucker糖尿病肥胖大鼠胰岛β细胞功能的机制研究

目的探讨番石榴叶提取物对Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠胰腺组织microRNA表达水平的影响。方法实验共纳入12只6周龄雄性ZDF大鼠及6只同龄雄性Zucker瘦型(Zucker lean,ZL)大鼠,适应性喂养1周后,ZDF大鼠使用高脂饲料喂养,ZL大鼠使用普通饲料喂养。诱导喂养2周后,将6只ZL雄性大鼠作为正常组,12只ZDF大鼠检测随机血糖≥11.1 mmol/L者纳入实验,并随机分为模型组和治疗组,每组各6只大鼠。治疗组大鼠每日按0.01 mL/g体质量(折合生药材8 g/kg)灌胃给药,正常组、模型组大鼠灌服等体积蒸馏水,共干预4周。每周监测大鼠体重和空腹血糖。实验结束后,将大鼠心脏放血处死,并分离血清测定胰岛素水平,剖取胰腺并采用基因芯片检测模型组、治疗组大鼠胰腺中microRNA的表达。结果与模型组大鼠比较,治疗组大鼠空腹血糖和空腹胰岛素水平均降低,基因芯片检测到两组大鼠胰腺组织中共有9种microRNA差异性表达(7种上调,2种下调),其中miR-361-5p的表达显著上调。结论番石榴叶提取物干预后影响了大鼠胰腺中microRNA的表达,并可能通过调控miR-361-5p的表达调节胰岛β细胞去分化,从而降低血糖。

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-361-5p mimics/inhibitor、sh-CCND1转染到SGC-7901/OXA细胞中,用CCK-8法和流式细胞术检测SGC-7901/OXA细胞的增殖、凋亡和细胞周期。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-361-5p与CCND1的靶向关系,用WB法检测CCND1的表达水平。结果:miR-361-5p在多种胃癌细胞和SGC-7901/OXA细胞中均低表达(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-361-5p可显著促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,miR-361-5p靶向负调控CCND1的表达(P<0.01)。敲减CCND1抑制SGC-7901/OXA细胞CCND1表达和细胞增殖,并诱导凋亡和G0/G1周期阻滞(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-361-5p靶向下调CCND1进而促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-361-5p过表达可逆转胃癌SGC-7901/OXA细胞对OXA的耐药性,其机制可能与靶向下调CCND1表达有关。

circ_0041795靶向miR-361-3p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA 0041795(circ_0041795)靶向微小RNA(miR)-361-3p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响。方法用30.0 mmol/L葡萄糖处理HK-2细胞48 h建立体外细胞损伤模型。实时定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0041795和miR-361-3p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞测量术检测细胞存活率和凋亡率。商品试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量。分别转染circ_0041795小干扰RNA、miR-361-3p模拟物、miR-361-3p抑制物至HK-2,观察沉默circ_0041795或过表达miR-361-3p或抑制miR-361-3p对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。结果高糖处理显著降低HK-2细胞存活率、SOD活性、miR-361-3p表达量(P<0.05),增加凋亡率、MDA含量、LDH释放量以及circ_0041795表达量(P<0.05)。沉默circ_0041795显著增加HK-2细胞存活率、SOD活性、miR-361-3p表达量(P<0.05),降低凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05)。过表达miR-361-3p显著增加HK-2细胞存活率、SOD活性(P<0.05),降低凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05)。抑制miR-361-3p表达显著降低HK-2细胞存活率、SOD活性(P<0.05),增加凋亡率、MDA含量、LDH释放量(P<0.05)。circ_0041795与miR-361-3p直接结合。抑制miR-361-3p表达能够减弱沉默circ_0041795对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响(P<0.05)。结论沉默circ_0041795通过靶向上调miR-361-3p可减弱高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡和氧化应激损伤。

党参多糖调控miR-361-5p/TLR4/NF-κB通路对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响

目的探讨党参多糖对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和炎症因子表达的影响和机制。方法采用CCK-8实验、流式细胞术评估党参多糖(10、20、40μmol/L)对胃癌细胞AGS活力和凋亡的影响。RT-qPCR检测miR-361-5p表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β分泌。蛋白质免疫印记法检测TLR4和磷酸化核因子(NF)-κBp65(p-p65)和磷酸化NF-κB抑制蛋白-α(p-IκBα)蛋白的表达。将miR-361-5p模拟物、miR-361-5p抑制物分别转染AGS细胞,经40μmol/L党参多糖处理后,用上述方法检测AGS细胞活力、凋亡率、Toll样受体4(TLR4)、p-p65和p-IκBα蛋白表达以及TNF-α、IL-6、IL-1β分泌。结果10、20、40μmol/L党参多糖显著降低AGS细胞活力(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),抑制TNF-α、IL-6、IL-1β分泌(P<0.05),并上调miR-361-5p表达水平(P<0.05)。40μmol/L党参多糖明显降低TLR4、p-p65和p-IκBα蛋白表达水平(P<0.05)。过表达miR-361-5p联合40μmol/L党参多糖能够降低AGS细胞活力(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),抑制TNF-α、IL-6、IL-1β分泌(P<0.05),抑制TLR4、p-p65和p-IκBα蛋白表达(P<0.05)。抑制miR-361-5p后显著减弱40μmol/L党参多糖对AGS细胞活力、凋亡率、促炎因子分泌以及TLR4、p-p65和p-IκBα蛋白表达的影响(P<0.05)。结论党参多糖可有效抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制促炎因子分泌,其机制可能与调控miR-361-5p/TLR4/NF-κB通路有关。

miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及其细胞周期的影响。方法:将miR-361-5p mimics和miR-361-5p inhibitor分别转染至肾癌ACHN细胞中,用q PCR检测转染细胞中miR-361-5p的表达水平,用MTT法、划痕愈合实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡水平。结果:与空白对照组和Mimics-NC组比较,miR-361-5p mimics组ACHN细胞中miR-361-5p表达水平显著升高(P<0.01),细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著减弱(均P<0.01),而凋亡率升高(P<0.01)。与空白对照组或Inhibitor-NC组比较,miR-361-5p inhibitor组细胞中miR-361-5p表达水平显著下降(P<0.01),细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(均P<0.01),细胞周期运转加速(P<0.01),凋亡率降低(P<0.05)。结论:miR-361-5p可抑制肾癌ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其在肾癌发生发展过程中发挥重要的抑制作用。

miR-361-3p对儿童肺炎炎性损伤的保护作用及机制研究

目的探讨miR-361-3p在儿童肺炎炎性损伤中的保护作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-361-3p在肺炎患儿和健康儿童血清中的表达水平。采用脂多糖(LPS)刺激人胚肺成纤维细胞WI-38细胞,在体外建立LPS诱导的肺炎模型。在WI-38细胞体外肺炎模型中过表达或敲减miR-361-3p,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测miR-361-3p对促炎性因子水平的影响。在体外肺炎模型中共转染miR-361-3p和MyD88,采用qPCR和Western blot检测miR-361-3p和MyD88的表达水平,ELISA检测MyD88对促炎性因子水平的影响。结果在肺炎患儿中,miR-361-3p的相对表达水平(0.78±0.33)显著低于健康儿童(1.53±0.52),而在肺炎患儿中MyD88的相对表达水平(4.58±0.82)显著高于健康儿童(1.96±0.31),同时促炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β水平的显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在体外肺炎模型中过表达miR-361-3p可以抑制促炎性因子的分泌,敲减miR-361-3p可促进促炎性因子的分泌。miR-361-3p可通过结合MyD88的3′端非翻译区(3′UTR)抑制MyD88的表达。在肺炎模型中过表达MyD88可以逆转miR-361-3p对炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β分泌的促进作用。结论在肺炎中,miR-361-3p通过靶向调节MyD88的表达抑制促炎性因子的分泌,保护肺炎患者免受进一步的炎性损伤。

循环miR-361-5p、miR-223及miR-146a水平与ACS患者冠脉介入术后近期预后的关系

目的 探讨循环miR-361-5p、miR-223及miR-146a水平与急性冠状动脉综合征(ACS)患者冠脉介入术后近期预后的关系。方法 选择2020年12月至2021年12月就诊于文昌市人民医院心血管内科的196例行冠脉介入术ACS患者临床资料。所有ACS患者自出院后均随访6个月,以发生主要不良心脏事件(MACE)为终点。以ACS患者随访期间是否发生MACE分为MACE组(n=29)和未发生MACE组(n=167),比较两组临床资料,将有统计学意义的因素进行Logistic回归分析,绘制ROC曲线评估miR-361-5p、miR-223及miR-146a预测ACS患者发生MACE的效能。结果 196例ACS患者共发生MACE 29例(14.79%)。单因素结果显示,两组患者年龄、Cr、Tn I、BNP、miR-361-5p、miR-223及miR-146a水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,miR-223是影响ACS患者冠脉介入术后近期预后的保护因素(P<0.05),miR-361-5p、miR-146a是影响ACS患者冠脉介入术后近期预后的独立危险因素(P<0.05)。循环miR-361-5p、miR-223及miR-146a预测ACS患者发生MACE的曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.701、0.794(P<0.05)。结论 循环miR-361-5p、miR-223及miR-146a水平与ACS密切相关,在预测ACS预后方面有较高的诊断价值。

膀胱癌组织miR-361-5p、BTF3表达变化及临床意义

目的检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象,所有患者均行根治性膀胱全切术,收集癌组织及癌旁正常组织,采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量,采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况,根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析,将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组,分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系,分析患者的3年生存情况。结果膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织(P<0.05),BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织(P<0.05);膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74),癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74),差异有统计学意义(χ^(2)=30.694,P<0.001);miR-361-5p、BTF3表达水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移均有显著相关性(均P<0.05);miR-361-5p高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为24、16个月,高表达组患者的3年累积生存率明显高于低表达组(χ^(2)=7.516,P=0.006);BTF3高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为15.0、23.5个月,BTF3高表达组患者的3年累积生存率明显低于低表达组(χ^(2)=5.217,P=0.022)。结论膀胱癌组织中miR-361-5p表达降低,BTF3表达升高,其水平变化与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关,可能参与肿瘤增殖分化、转移侵袭过程,并可作为反映膀胱癌患者预后的生物指标。