视神经脊髓炎谱系疾病患者外周血TIMP1和MMP9及miR-363-5p的表达变化及其与血脑屏障破坏的关系

目的探讨视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者外周血金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及血浆TIMP1蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP9)及miR-363-5p的表达变化及其与血脑屏障(BBB)破坏的关系。方法选取2019年9月至2021年11月河北医科大学第二医院收治的NMOSD患者30例,另选择健康体检者作为健康对照组10例。采用ELISA方法检测血浆TIMP1、MMP9的水平。采用qPCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)TIMP1 mRNA和血浆miR-363-5p水平。根据脑脊液/血白蛋白商(Qalb)将NMOSD患者分为BBB正常组与BBB破坏组,分别比较NMOSD组与正常对照组以及BBB正常组与BBB破坏组TIMP1、MMP9及miR-363-5p表达差异,采用相关性分析评估其与BBB破坏的关系。采用双萤光素酶报告基因检测技术验证miR-363-5p与TIMP1靶向结合关系。通过慢病毒载体感染JURKA T细胞并分为4组:未转染miR-363-5p模拟物的正常对照组,转染miR-363-5p模拟物组,未转染miR-363-5p抑制剂的正常对照组,转染miR-363-5p抑制剂组。采用qPCR检测JURKA T细胞TIMP1 mRNA及MMP9 mRNA的表达,采用Western-blot技术检测JURKA T细胞TIMP1、MMP9蛋白表达的水平。结果(1)NMOSD组患者PBMC TIMP1 mRNA、血浆miR-363-5p、血浆TIMP1和MMP9蛋白水平高于健康对照组(P<0.01或P<0.05)。NMOSD组和健康对照组MMP9/TIMP1比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)NMOSD患者BBB破坏组MMP9/TIMP1比值高于BBB正常组(P<0.05)。NMOSD患者MMP9/TIMP1比值与Qalb呈中等正相关(r=0.505,P<0.01)。NMOSD患者血浆miR-363-5p与PBMC TIMP1 mRNA相对表达水平无相关性(r=-0.33,P>0.05),与血浆TIMP1蛋白表达水平呈中等负相关(r=-0.5157,P<0.01)。miR-363-5p可与TIMP13'UTR区结合,在JURKA T细胞中,转染miR-363-5p模拟物后TIMP1 mRNA和蛋白质表达水平下降(P<0.01,P<0.05)。结论NMOSD患者PBMC TIMP1 mRNA以及血浆TIMP1蛋白、MMP9蛋白、miR-363-5p表达升高;miR-363-5p可负调控JURKA T细胞TIMP1的表达;血浆MMP9/TIMP1比值升高可能在NMOSD患者BBB的破坏中发挥作用。

LncRNA BCYRN1调节miR-363-3p/PAX6轴对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨LncRNA BCYRN1调节miR-363-3p/PAX6轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞(H460、HCC-827、A549)中BCYRN1、miR-363-3p和PAX6 mRNA的表达水平,筛选最佳干预细胞;然后将A549细胞分为control组、sh-NC组、sh-BCYRN1组、oe-NC组、oe-BCYRN1组、sh-BCYRN1+inhibitor NC组、sh-BCYRN1+miR-363-3p inhibitor组;qRT-PCR检测各组细胞BCYRN1、miR-363-3p和PAX6 mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞中PAX6、Ki67、MMP-2、caspase3的蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA BCYRN1和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6的靶向关系。结果 与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,NSCLC细胞(H460、HCC-827、A549)中BCYRN1和PAX6 mRNA表达水平显著升高,miR-363-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与control组和sh-NC组相比,sh-BCYRN1组细胞活力、细胞增殖率、细胞迁移和侵袭数量、BCYRN1和PAX6 mRNA表达水平、PAX6、Ki67和MMP-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、miR-363-3p、caspase3表达显著升高(P<0.05);与oe-NC组比较,oe-BCYRN1组细胞活力、细胞增殖率、细胞迁移和侵袭数量、BCYRN1和PAX6 mRNA表达水平、PAX6、Ki67和MMP-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、miR-363-3p、caspase3表达显著降低(P<0.05);与sh-BCYRN1+inhibitor NC组比较,sh-BCYRN1+miR-363-3p inhibitor组细胞活力、细胞增殖率、细胞迁移和侵袭数量、PAX6 mRNA表达、PAX6、Ki67和MMP-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、miR-363-3p、caspase3表达显著降低(P<0.05),BCYRN1表达无显著性变化(P>0.05);双荧光素酶报告基因实验验证miR-652-5p和BCYRN1、PAX6存在靶向调控关系。结论 干扰BCYRN1可通过调控miR-363-3p/PAX6轴抑制NSCLC恶性发展。

基于TCGA探讨急性髓系白血病患者miR-363表达与其临床特征及靶基因的关系

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者miR-363表达与其临床特征及靶基因的关系。方法 下载TCGA数据库中AML患者的miRNA、RNA表达谱及临床数据,按照miR-363表达水平由高到低排序,将前50%设为高表达组(n=81),后50%设为低表达组(n=81),比较两组患者生存曲线及年龄差异;利用Omisc软件,采用Pearson相关性分析筛选与miR-363表达相关的靶基因。将2021年12月至2022年12月在我院诊治的52例AML患者纳入研究,采用RT-qPCR技术检测患者骨髓miR-363表达水平,按照表达水平由高到低排序,将前50%设为高表达组(n=26),后50%设为低表达组(n=26),比较两组患者初诊白细胞计数、血小板计数、血红蛋白及血浆靶基因水平、年龄、性别及预后分层的差异。结果 TCGA数据库分析显示,miR-363低表达组患者中位生存时间高于miR-363高表达组(822d vs 365d,P<0.05);miR-363高表达组高龄患者比例明显高于低表达组(54.32%vs 45.68%,P<0.05);共筛选出5 404个miR-363相关基因,KIAA1377相关性最高(r=0.62,P<0.05)。miR-363高表达组高龄患者比例、预后不良患者比例、初诊白细胞计数≥50×109/L比例、血浆KIAA1377水平明显高于低表达组(均P<0.05);血小板计数、血红蛋白水平明显低于低表达组(均P<0.05)。结论 miR-363高表达与AML患者生存率降低、高龄、预后不良、初诊白细胞计数升高、血小板计数及血红蛋白水平降低有关,且KIAA1377可能是miR-363的靶基因之一。miR-363可能是AML基因治疗和预后评估的新靶点。

上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2信号轴促进宫颈癌细胞的机制

目的探讨LncRNA FEZF1-AS1对宫颈癌细胞增殖、侵袭及上皮间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法实时荧光定量PCR分析宫颈癌组织、癌旁正常组织、Hela、H8细胞中LncRNA FEZF1-AS1、miR-363-3p和Sphk2的表达;siRNA FEZF1-AS1转染Hela细胞,MTT、细胞侵袭实验及Western blot检测下调FEZF1-AS1对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miRanda软件分析LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测二者的相关性。下调miR-363-3p表达,分析Hela细胞增殖、侵袭和EMT。同时上调LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p表达,检测LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan分析miR-363-3p和Sphk2之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和Sphk2相关性。siRNA Sphk2转染Hela细胞,检测Hela细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果与H8细胞相比,Hela细胞中LncRNA FEZF1-AS1、Sphk2表达上调(P<0.01),miR-363-3p表达下调(P<0.01)。下调LncRNA FEZF1-AS1表达明显抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT;LncRNA FEZF1-AS1靶向miR-363-3p;下调miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT。miR-363-3p与Sphk2具有靶向关系。下调Sphk2表达抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT。结论上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2轴促进Hela细胞增殖、侵袭及其EMT。

lncRNA MEG8通过调控miR-363-3p/PAX6轴促进非小细胞肺癌的肿瘤进展

目的探讨长非编码RNA母系表达基因8(lncRNA MEG8)通过调控miR-363-3p/人类配对盒基因6(PAX6)轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)的肿瘤进展。方法选取116例经确诊为NSCLC患者的肿瘤组织与癌旁正常组织标本,常规培养人NSCLC细胞株A549、H1299,采用RT-qPCR法检测组织和细胞中lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6 mRNA的表达。将A549、H1299细胞分别分为对照组(control组,空白培养基处理)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-MEG8组(转染pcDNA-MEG8)、pcDNA-MEG8+miR-NC组(pcDNA-MEG8与miR-NC共转染)、pcDNA-MEG8+miR-363-3p mimic组(pcDNA-MEG8与miR-363-3p mimic共转染)。CCK-8法检测培养24,48,72 h各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和PAX6蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6的关系。RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6之间的结合。结果与正常组织相比,肿瘤组织中lncRNA MEG8、PAX6 mRNA高表达,miR-363-3p呈现低表达(均P<0.05)。与control组和pcDNA组相比,pcDNA-MEG8组培养48,72 h A549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白显著降低(P<0.05)。与pcDNA-MEG8组和pcDNA-MEG8+miR-NC组相比,pcDNA-MEG8+miR-363-3 mimic组培养48,72 h A549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),miR-363-3p表达、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC+MEG8-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-NC+MEG8-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-MUT共转染组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。与miR-NC+PAX6-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-NC+PAX6-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-MUT共转染组荧光素酶活性无显著性差异(P>0.05)。RIP实验结果显示,与IgG处相比,lncRNA MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6均主要富集在Ago2处,IgG处与Ago2处的lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6RNA相对表达水平均具有统计学差异(P<0.05),提示lncRNA MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6能靶向结合。结论过表达lncRNA MEG8可能通过下调miR-363-3p并促进PAX6蛋白的表达,进而促进NSCLC的进展。

circ_BIRC6靶向miR-363-3p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的探讨circ_BIRC6和miR-363-3p在胃癌中表达水平,并研究circ_BIRC6靶向miR-363-3p在胃癌进展中作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_BIRC6和miR-363-3p在胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞HGC-27及人正常胃黏膜细胞GES-1中的表达。将HGC-27细胞分为si-NC组、si-circ_BIRC6组、miR-NC组、miR-363-3p组、si-circ_BIRC6+anti-miR-NC组、si-circ_BIRC6+anti-miR-363-3p组。CCK-8法、流式细胞术、平板克隆实验、Transwell实验分别用于检测HGC-27细胞的体外增殖、凋亡、克隆和迁移能力。通过双荧光素酶实验确定circ_BIRC6和miR-363-3p的靶向关系。结果胃癌组织circ_BIRC6表达显著高于癌旁组织,miR-363-3p表达显著低于癌旁组织(均P<0.05);HGC-27细胞circ_BIRC6表达显著高于GES-1细胞,miR-363-3p表达显著低于GES-1细胞(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_BIRC6组HGC-27细胞抑制率、凋亡率、miR-363-3p表达显著升高,克隆形成数、迁移细胞数显著减少(均P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-363-3p组HGC-27细胞抑制率、凋亡率显著升高,克隆形成数、迁移细胞数显著减少(P<0.05)。miR-363-3p是circ_BIRC6的直接靶点。与si-circ_BIRC6+anti-miR-NC组比较,si-circ_BIRC6+anti-miR-363-3p组HGC-27细胞抑制率、凋亡率显著降低,克隆形成数、迁移细胞数显著增多(P<0.05)。结论下调circ_BIRC6通过靶向上调miR-363-3p表达可诱导胃癌细胞凋亡,抑制其增殖和迁移,从而抑制胃癌进展。

TNF-α通过调控miR-363-3p/EZH2促进肺癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的研究肿瘤坏死因子(TNF)-α和miR-363-3p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用免疫组织化学法、Western印迹法检测组织和细胞中TNF-α、组蛋白甲基转移酶(EZH2)蛋白表达;将miR-363-3p组(转染miR-363-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、TNF-α+miR-NC组(转染miR-NC与TNF-α共处理)、TNF-α+miR-363-3p组(转染miR-363-3p mimics与TNF-α共处理)均以脂质体法转染至肺癌细胞A549;MTT法检测A549细胞增殖;Transwell法检测A549细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验分析miR-363-3p和EZH2相互作用。结果与癌旁正常组织相比,肺癌组织中TNF-α、EZH2的蛋白表达量均显著升高,miR-363-3p表达显著降低(P<0.05);TNF-α可促进A549细胞增殖、迁移、侵袭,且下调miR-363-3p,上调EZH2;过表达miR-363-3p可抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭;EZH2是miR-363-3p的靶标,且过表达miR-363-3p可逆转TNF-α对A549细胞增殖、迁移、侵袭的促进作用。结论TNF-α可能通过下调miR-363-3p/EZH2通路促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,将可为肺癌的预防和治疗提供依据。

miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响

目的探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异,并分析其在胃癌细胞系中的功能。方法使用realtime PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异;使用miR-363-3p模拟物(miR-363-3pmimic)实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验,检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响。结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖(P<0.05,P<0.01),抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移(P<0.001),miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭(P<0.05)。结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点。

miR-363-3p靶向调控SOX4抑制卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-363-3p靶向调控SOX4对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭影响。方法:RT-qPCR检测miR-363-3p和SOX4在正常卵巢IOSE80细胞及卵巢癌SKOV3细胞中的表达。在SKOV3细胞中转染miR-363-3p mimics和mimics NC,Transwell实验探究miR-363-3p对SKOV3细胞迁移和侵袭作用;采用RT-qPCR和Western blot分别检测SOX4、vimentin和E-cadherin mRNA和蛋白表达。双荧光素酶试验检测miR-363-3p和SOX4的靶向关系。结果:与人正常卵巢细胞相比,SKOV3细胞中miR-363-3p表达降低、SOX4表达升高(P<0.05)。在SKOV3细胞中过表达miR-363-3p可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结果,SOX4和vimentin表达miR-363-3p mimics组低于mimics阴性对照组和空白对照组,E-cadherin表达高于mimics阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。miR-363-3p靶向调控SOX4的3'-UTR(P<0.05)。结论:miR-363-3p通过结合到SOX4的3'-UTR促进SOX4的降解,从而下调vimentin和上调E-cadherin的活性,抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭。

miR-363-3p在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-363-3p在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法应用Real-time PCR方法检测7种不同分化程度胃癌细胞株和56例胃癌组织及其对应非癌胃黏膜组织中miR-363-3p的表达,并结合临床资料分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果 miR-363-3p的表达除AGS高分化胃癌细胞株外,在其余6种胃癌细胞株中均显著低于正常胃黏膜细胞株GES-1(P<0.05),且胃癌细胞的分化程度越差,其表达量越低;miR-363-3p在胃癌组织中的表达量显著低于非癌胃黏膜组织(P<0.01);miR-363-3p在高/中分化胃癌组织中的表达显著高于低分化胃癌组织(P=0.035),不同TNM分期患者miR-363-3p的表达量在Ⅰ/Ⅱ期显著高于Ⅲ/Ⅳ期(P=0.046),miR-363-3p的表达量在有淋巴结转移的患者中显著低于无淋巴结转移的患者(P=0.021)。结论 miR-363-3p在胃癌细胞和组织中表达明显下调,且与胃癌的分化程度、病理分期及淋巴结转移等密切相关。

miR-363-5p 靶向TRIM14对化疗药物诱导的乳腺癌细胞系凋亡的影响

目的探讨miR-363-5p靶向三结构域蛋白14(TRIM14)对3种乳腺癌细胞系凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR法比较不同化疗药物诱导3种乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-435、MCF-12A)中miR-363-5p和TRIM14 mRNA表达水平,采用免疫组化法检测不同亚型乳腺癌组织TRIM14表达情况。采用Western blotting检测TRIM14蛋白表达。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用生物信息学方法预测miR-363-5p与TRIM14的结合位点,通过干扰miR-363-5p和TRIM14研究miR-363-5p对3种乳腺癌细胞中TRIM14的调控作用。Pearson相关分析各亚型乳腺癌组织中miR-363-5p与TRIM14的相关性。结果3种化疗药物均能促进细胞凋亡,化疗药物处理3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,TRIM14 mRNA表达下降。荧光素酶报告基因实验发现TRIM14是miR-363-5p的靶基因。过表达miR-363-5p后,3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,TRIM14蛋白和mRNA下降。敲低TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,过表达TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率下降。3种亚型乳腺癌组织miR-363-5p与TRIM14表达呈负相关。结论化疗药物诱导3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,miR-363-5p靶向抑制TRIM14表达,促进3种乳腺癌细胞系凋亡。

miR-363在脆性骨折患者血中的表达及对MC3T3-E1细胞成骨分化及增殖的影响

目的研究miR-363在脆性骨折患者血中的表达及对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化与增殖的影响。方法收集脆性骨折患者外周血,采用荧光定量PCR检测患者miR-363、矮小相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、连环蛋白β1(CTNNB1)和骨髓细胞瘤癌基因(MYC)表达。采用茜素红S染色与噻唑蓝检测过表达miR-363对细胞成骨分化及增殖的影响。采用双荧光素酶报告基因与Western blotting检测miR-363对Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的调控作用。结果miR-363在脆性骨折患者外周血中的表达水平低于正常健康者,而术后1周、2周及4周外周血中的表达水平高于术前并呈上调趋势(P<0.05);模拟物组MC3T3-E1细胞中miR-363表达水平高于阴性对照组(P<0.05);模拟物组MC3T3-E1细胞矿化程度、RUNX2及OCN mRNA表达水平及1天、2天、3天光密度(OD)值高于阴性对照组(P<0.05);DKK1是miR-363的靶基因,模拟物组MC3T3-E1细胞中DKK1蛋白表达水平低于阴性对照组,而CCND1、CTNNB1及MYC mRNA表达水平高于阴性对照组(P<0.05)。结论miR-363可能通过调控靶基因DKK1与Wnt/β-catenin信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化与增殖。

miR-363通过PDZD2对骨肉瘤细胞调控的分子机制研究

目的分析miR-363和PDZD2在骨肉瘤细胞MG-63中的功能及其相互作用,探讨miR-363对骨肉瘤细胞的调控作用及其分子机制。方法检测并对比骨肉瘤组织和瘤旁正常组织中以及成骨细胞和骨肉瘤细胞中的miR-363和PDZD2含量。检测过表达miR-363的骨肉瘤细胞MG-63的恶性生物学特性和细胞凋亡变化。利用生物信息学分析和荧光素酶报告基因检测发现miR-363的直接靶标。构建骨肉瘤动物模型,验证体外实验结果。结果骨肉瘤组织中miR-363呈现低表达,而PDZD2的表达则升高,且二者表达呈现负调控的趋势。miR-363在MG-63细胞中的过表达可以显著抑制细胞的活力,增殖和集落形成能力,促进细胞凋亡和G1/S期阻滞。生物信息学分析和荧光素酶报告基因测定表明PDZD2是miR-363的直接靶标,miR-363的过表达降低PDZD2蛋白水平,抑制PDZD2基因。动物实验研究进一步证实,miR-363具有抑制骨肉瘤生长的作用。结论miR-363在骨肉瘤的发生发展中发挥重要的调控作用,作用机制为通过负向调控PDZD2基因的表达,从而有效抑制骨肉瘤的生长。因此,miR-363可以作为治疗骨肉瘤的潜在分子靶点。

miR-363靶基因预测及生物信息学分析

目的 :初步明确hsa-miR-363潜在的生物学功能。方法:首先通过miRbase、UCSC等在线数据库对hsa-miR-363的碱基序列、基因位点及序列保守性进行分析;其次选择miranda、miRDB、Pic Tar及Target Scan四个在线数据库预测hsa-miR-363的靶基因并取交集,筛选后的靶基因用于后续分析;最后通过基因GO功能注释、富集分析和KEGG信号转导通路富集分析,初步阐明hsa-miR-363靶基因参与调控的细胞功能与信号通路。结果:根据生物信息学分析的结果显示,hsa-miR-363的功能较广泛,其多个潜在靶基因均参与子宫内膜异位症发生、发展过程中的多个生物学进程。结论:hsa-miR-363很可能与子宫内膜异位症的发病机制密切相关,并有可能为临床的靶向治疗提供潜在的新靶点。

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P<0.05),miR-363-3p表达显著下调(P<0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P<0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P<0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。

miR-363通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌的细胞生长与侵袭

目的探讨miR-363通过靶向高迁移率蛋白A2(High mobility protein A1,HMGA2)调控非小细胞肺癌的细胞生长与侵袭行为及其作用机制。方法 qPCR检测非小细胞肺癌和癌旁正常组织、不同细胞株中miR-363的表达;分析miR-363的表达与非小细胞肺癌临床病理学参数之间的关系;CCK-8细胞增殖实验检测miR-363对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-363对非小细胞肺癌细胞周期的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测抑制miR-363后非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的变化;双荧光素酶报告基因检测miR-363与HMGA2的相互作用。结果与癌旁正常组织比较,非小细胞肺癌组织中miR-363表达明显增高;非小细胞肺癌细胞A549中miR-363的表达水平最高;抑制miR-363的表达后非小细胞肺癌细胞增殖能力减弱,促进其凋亡行为;抑制miR-363的表达后,A549细胞的迁移和侵袭能力受到相应的抑制;miR-363能与HMGA2的3’UTR特异性结合,调控HMGA2的表达活性。结论 miR-363在非小细胞肺癌的发生发展过程中起着重要作用,可通过靶向调节HMGA2的表达影响非小细胞肺癌细胞的生长和侵袭。

血清miR-363与miR-122联合检测在肝癌诊断及病情评估中的应用价值

目的探讨原发性肝癌患者血清中miR-363与miR-122的表达水平以及它们联合检测在诊断肝癌和病情评估中的应用价值。方法选择2018年3月至2020年6月华北石油管理局总医院诊治的原发性肝癌患者50例以及同期体检结果健康者50例,分为肝癌组和健康组。检测两组受试者血清中miR-363、miR-122和甲胎蛋白(AFP)的表达水平,对比分析两组血清的水平差异,并根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)检验血清miR-363和miR-122对原发性肝癌的诊断效能。结果肝癌组血清miR-122和miR-363表达水平均明显低于健康组(P<0.05);肝癌组AFP水平显著高于健康组(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ期的原发性肝癌患者血清miR-122和miR-363表达水平较Ⅰ、Ⅱ期患者均明显偏低(P<0.05);发生远处转移的原发性肝癌患者血清miR-122和miR-363表达水平较没有发生转移的患者均明显偏低(P<0.05);miR-363联合miR-122诊断原发性肝癌的曲线下面积为0.884,敏感度和特异性分别为57.9%、98.7%。结论原发性肝癌患者血清miR-122和miR-363的表达水平明显降低,单独检测miR-122或miR-363诊断原发性肝癌的价值优于AFP检测,联合检测效能更佳,且对评估原发性肝癌的病情具有一定参考意义。

溃疡性结肠炎患者血浆miR-106a 和 miR-363-3p 表达水平的变化及意义

目的探究miR-106a和miR-363-3p在溃疡性结肠炎(UC)患者血浆中的表达及其临床意义。方法选择2015年3月至2018年7月在重庆市开州区人民医院消化内科救治的78例UC患者(UC组)、53例CD患者(CD组)及同期46例健康体检者(NC组)作为研究对象。采用RT-PCR法检测3组受试者血浆miR-106a和miR-363-3p的表达水平。评估miR-106a和miR-363-3p表达水平鉴别CD和UC的效能。分析miR-106a和miR-363-3p表达水平与UC患者病情及预后的关系。结果 UC组患者血浆miR-106a和miR-363-3p相对表达量低于CD组,但高于NC组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。ROC曲线显示,miR-106a和miR-363-3p鉴别CD和UC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.906和0.846。miR-106a和miR-363-3p联合检测鉴别CD和UC的AUC大于各指标单独检测(P<0.05)。活动期UC患者血浆miR-106a和miR-363-3p的相对表达量均高于缓解期UC患者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。单因素和多因素Logistic回归分析影响活动期UC患者预后的相关因素,结果显示miR-106a和miR-363-3p与活动期UC患者预后密切相关。miR-106a>1.14、miR-363-3p>1.05的活动期UC患者预后不良。ROC曲线显示,miR-106a和miR-363-3p及两者联合检测诊断活动期UC患者预后的AUC分别为0.836、0.867和0.860,差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测miR-106a和miR-363-3p表达水平可辅助鉴别CD和UC。miR-106a和miR-363-3p的表达水平可反映UC患者病情,并可评估UC患者预后。

miR-363-3p靶向PIK3CA调节非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探索miR-363-3p靶向作用于磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位(PIK3CA)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549增殖、侵袭和迁移的调控作用。方法:RT-PCR检测正常肺组织及NSCLC组织中miR-363-3p和PIK3CA基因表达,Spearman相关分析miR-363-3p和PIK3CA基因表达相关性,荧光素酶报告实验检测miR-363-3p和PIK3CA靶向关系。A549细胞分为mimic NC、miR-363-3p、pc-PIK3CA、miR-363-3p+pc-PIK3CA组,RT-PCR检测PIK3CA基因表达,Western blot检测PIK3CA、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、G1/S特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭。结果:与正常肺组织相比,NSCLC组织中miR-363-3p表达下调,PIK3CA表达量上调,且miR-363-3p和PIK3CA基因表达呈显著负相关(P<0.01)。在荧光素酶报告实验中,相比于WT PIK3CA+mimic NC组,WT PIK3CA+miR-363-3p组中荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。在细胞实验中,与mimic NC组比较,miR-363-3p组PIK3CA基因和蛋白表达、细胞增殖水平、细胞侵袭和迁移能力、N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达水平、p-AKT/AKT比率显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),pc-PIK3CA组PIK3CA基因和蛋白表达、细胞增殖水平、细胞侵袭和迁移能力、N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达,p-AKT/AKT比率显著升高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.01);与pc-PIK3CA组比较,miR-363-3p+pc-PIK3CA组PIK3CA基因和蛋白表达,细胞增殖水平,细胞侵袭和迁移能力,N-cadherin、Cyclin D1蛋白表达,p-AKT/AKT比率显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:miR-363-3p可靶向作用于PIK3CA,抑制NSCLC细胞A549的增殖、侵袭和迁移。

miR-363-3p对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

目的观察miR-363-3p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移与侵袭能力的影响。方法收集发生和未发生淋巴结转移的NSCLC组织样本各26、21例份,常规培养人NSCLC细胞株A549及高转移性NSCLC细胞株H441,采用实时荧光定量PCR法检测不同组织及细胞中miR-363-3p相对表达量。将对数生长期的H441细胞分为对照组、miR-363-3p mimics组、miR-363-3p inhibitor组,分别使用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染对照miRNA、miR-363-3p mimics、miR-363-3p inhibitor。转染30 h,采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力(以迁移和侵袭细胞数表示),采用Western blotting法检测迁移标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及侵袭标志物基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)蛋白表达。结果发生和未发生淋巴结转移的NSCLC组织miR-363-3p相对表达量分别为1.091±0.153、0.128±0.336,二者比较P<0.01。A549、H441细胞miR-363-3p相对表达量分别为1.02±0.039、31.45±1.158,二者比较P<0.01。miR-363-3p inhibitor组、对照组、miR-363-3p mimics组迁移细胞数、侵袭细胞数及Vimentin、MMP-9、MMP-3蛋白相对表达量均依次升高,E-cadherin蛋白相对表达量依次降低,两组间比较P均<0.05。结论 miR-363-3p可能通过升高Vimentin、MMP-9、MMP-3蛋白表达及降低E-cadherin蛋白表达而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。