顺阿曲库铵通过调控miR-3666表达抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨顺阿曲库铵对膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭及分子机制。方法膀胱癌细胞T24分为Con组、顺阿曲库铵低、中、高浓度(Cis-L、Cis-M、Cis-H)组、miR-NC组、miR-3666组、Cis+anti-miR-NC组、Cis+anti-miR-3666组。MTT、Transwell检测细胞增殖、迁移和侵袭;Western印迹法检测蛋白表达;RT-qPCR检测miR-3666表达。结果不同浓度顺阿曲库铵显著增加膀胱癌细胞T24增殖抑制率、p21表达水平及miR-3666表达水平,显著降低细胞迁移、侵袭数、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平(P<0.05)。miR-3666过表达显著增加细胞增殖抑制率、p21表达水平,显著降低细胞迁移、侵袭数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平(P<0.05)。抑制miR-3666逆转顺阿曲库铵对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论顺阿曲库铵可能通过上调miR-3666表达抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

circKIF4A通过靶向miR-3666调控胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭研究

目的探讨circKIF4A对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对miR-3666的靶向调控作用。方法qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中circKIF4A、miR-3666的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,si-NC、si-circKIF4A、miR-NC、miR-3666 mimics、si-circKIF4A+anti-miR-NC、si-circKIF4A+anti-miR3666分别转染至AGS细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测circKIF4A与miR-3666的靶向关系。结果胃癌组织中circKIF4A的表达量升高(P<0.05),miR-3666的表达量降低(P<0.05);转染si-circKIF4A或转染miR-3666 mimics均可降低细胞活力和划痕愈合率(P<0.05),克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05);circKIF4A能够靶向调控miR-3666;共转染si-circKIF4A和anti-miR-3666可恢复转染si-circKIF4A对AGS细胞生物学行为的作用。结论干扰circKIF4A表达可通过靶向miR-3666而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

miR-3666在胃癌中的表达及其临床意义

目的:检测胃癌组织中miR-3666的表达并分析其与临床病理特征的关系。方法:采用茎环逆转录实时定量PCR技术检测80例胃癌手术标本与相对应的癌旁组织中miR-3666的相对表达量,并分析其与胃癌临床病理参数和预后的关系。结果:miR-3666在胃癌组织中表达与癌旁组织相比显著下调(P <0. 001),miR-3666的表达与胃癌淋巴结转移(P=0. 002)和TNM分期(P=0. 017)相关,与年龄、性别、浸润深度、肿瘤位置及分化程度无关(P> 0. 05)。合并淋巴结转移的胃癌组织中miR-3666的表达低于无淋巴结转移的胃癌组织(P <0. 001)。miR-3666低表达与高表达的患者1年及3年生存率分别为78. 0%、22. 6%和96. 9%、48. 1%,中位生存率分别为16个月和29个月,差异有统计学意义(P <0. 001)。COX预后分析发现miR-3666低表达和肿瘤TNM分期是胃癌患者预后的独立影响因素。结论:miR-3666在胃癌组织中的表达量明显降低,提示miR-3666可能参与了胃癌的发生发展,并且与胃癌的淋巴结转移相关; miR-3666低表达提示胃癌患者预后不良。

lncRNA XIST通过靶向miR-3666调控胃癌细胞增殖、侵袭转移机制

目的:探讨lncRNA XIST对胃癌细胞增殖、侵袭转移的影响及分子机制。方法:收集武汉市第四医院30例胃癌患者癌组织及癌旁组织,培养正常胃黏膜上皮细胞MRG-1、胃癌细胞SGC-7901和AGS,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA XIST和miR-3666表达水平;通过敲减胃腺癌细胞AGS中lncRNA XIST表达以及下调miR-3666表达水平,分析lncRNA XIST及miR-3666对胃癌细胞的调控作用,将细胞AGS分为si-NC组、si-XIST组、miR-NC组、miR-3666组、si-XIST+antimiR-NC组、si-XIST+anti-miR-3666组;MTT检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测lncRNA XIST和miR-3666的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常胃黏膜上皮细胞MRG-1比较,胃癌组织和AGS、SGC-7901细胞中XIST表达水平升高,miR-3666表达水平降低(P<0.05)。敲除lncRNA XIST或过表达miR-3666,AGS细胞增殖能力减弱,迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。lncRNA XIST靶向调控miR-3666,抑制miR-3666逆转了XIST基因敲除对胃癌AGS细胞增殖、运动性及凋亡的影响。结论:敲除lncRNA XIST可通过上调miR-3666抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。

依托咪酯通过调控miR-3666/UBQLN1基因表达抑制乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡的机制

本研究旨在探讨依托咪酯对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制,选取依托咪酯(0.2μg/mL,0.4μg/mL和0.8μg/mL)处理乳腺癌细胞SK-BR-3,筛选最适浓度0.8μg/mL。将依托咪酯+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、依托咪酯+anti-miR-3666组(转染anti-miR-3666)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-3666组(转染anti-miR-3666)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)和anti-miR-3666组(转染anti-miR-3666)用脂质体法转染至SK-BR-3细胞,部分组用0.8μg/mL依托咪酯处理。细胞计数(CCK-8)法、流式细胞术、免疫印迹(Western blotting)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞的抑制率、凋亡率、miR-3666、泛素1(UBQLN1)、细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X基因(Bax)的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。依托咪酯(0.2μg/mL,0.4μg/mL和0.8μg/mL)明显的增强对乳腺癌细胞的抑制率和凋亡率,并上调miR-3666,下调UBQLN1,均呈明显的浓度依赖性(p<0.05)。miR-3666能够明显的抑制野生型UBQLN1细胞的荧光活性。过表达miR-3666具有与依托咪酯相似的增强乳腺癌细胞抑制率和凋亡率,下调CyclinD1、Bcl-2,上调p21、Bax的作用。抑制miR-3666明显的减弱依托咪酯对乳腺癌细胞的抑制和凋亡的作用。依托咪酯可抑制乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,其机制与上调miR-3666进而靶向抑制UBQLN1有关,将可为依托咪酯用于乳腺癌的治疗提供更充分的理论依据。

LINC00839靶向miR-3666调控肝癌细胞的增殖迁移和侵袭

目的探讨LINC00839对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测2016年2月至2018年11月于郑州大学附属肿瘤医院行手术治疗的38例肝癌患者的癌组织及相应癌旁组织中LINC00839和miR-3666的表达。体外培养肝癌细胞MHCC97H,分为si-NC组、si-LINC00839组、miR-NC组、miR-3666组、si-LINC00839+anti-miR-NC组和si-LINC00839+anti-miR-3666组,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中p21、E-cadherin和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00839与miR-3666的调控关系。结果肝癌组织中LINC00839的表达量为2.82±0.27,高于癌旁组织(0.96±0.10,P<0.001),miR-3666的表达量为0.23±0.02,低于癌旁组织(1.01±0.10,P<0.001)。肝癌组织中LINC00839和miR-3666的表达水平呈负相关(r=-0.658,P<0.001)。si-LINC00839组细胞存活率为(53.91±5.41)%,克隆形成数为(92.0±8.0)个,迁移细胞数为(131.0±12.7)个,侵袭细胞数为(66.0±6.4)个,MMP-2蛋白表达量为0.20±0.02,均低于si-NC组[分别为(100.53±10.22)%、(164.0±14.3)个、(247.0±22.4)个、(120.0±11.6)个和0.67±0.06,均P<0.001],p21蛋白表达量为0.76±0.07,E-cadherin蛋白表达量为0.78±0.08,均高于si-NC组[分别为0.25±0.02和0.14±0.01,均P<0.001]。LINC00839靶向负调控miR-3666的表达。miR-3666组细胞存活率为(47.93±4.86)%,克隆形成数为(78.0±7.7)个,迁移细胞数为(117.0±12.1)个,侵袭细胞数为(57.0±5.7)个,MMP-2蛋白表达量为0.16±0.01,均低于miR-NC组[分别为(100.11±10.21)%、(166.0±15.9)个、(250.0±25.0)个、(121.0±12.3)个和0.69±0.07,均P<0.001],p21蛋白表达量为0.83±0.08,E-cadherin蛋白表达量为0.87±0.09,均高于miR-NC组[分别为0.24±0.02和0.13±0.01,均P<0.001]。si-LINC00839+anti-miR-3666组细胞存活率为(89.94±9.05)%,克隆形成数为(143.0±13.8)个,迁移细胞数为(208.0±19.8)个,侵袭细胞数为(108.0±10.1)个,MMP-2蛋白表达量为0.66±0.06,均高于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为(54.12±5.39)%、(94.0±9.4)个、(129.0±12.6)个、(65.0±6.4)个和0.31±0.03,均P<0.001],p21蛋白表达量为0.31±0.03,E-cadherin蛋白表达量为0.28±0.03,均低于si-LINC00839+anti-miR-NC组[分别为0.74±0.07和0.80±0.08,均P<0.001]。结论抑制LINC00839表达可能通过靶向上调miR-3666抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。