胃癌患者血清miR-369、miR-1323水平及其临床意义

目的分析胃癌患者血清中miR-369与miR-1323的表达水平及其与患者临床病理特征预后的关系。方法选取2016年3月—2018年3月西南医科大学附属医院胃肠外科手术治疗的胃癌患者97例为病例组,根据随访生存情况分为预后良好亚组59例和预后不良亚组38例;另外选择同期医院健康体检者90例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌患者血清miR-369与miR-1323的表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-369、miR-1323及两者联合对胃癌患者预后的预测价值;采用Kaplan-Meier法分析血清miR-369、miR-1323与胃癌患者预后的关系;Cox回归分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果病例组血清miR-369水平低于健康对照组,血清miR-1323水平高于健康对照组(t/P=8.808/<0.001、7.919/<0.001);预后不良亚组患者血清miR-369水平显著低于预后良好亚组,血清miR-1323水平显著高于预后良好亚组(t/P=4.537/<0.001、7.010/<0.001);血清miR-369、miR-1323表达水平与患者癌组织分化程度、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关(miR-369:t/P=5.500/<0.001、4.813/<0.001、2.965/0.004、2.674/0.009、3.276/0.001;miR-1323:2.790/0.006、3.878/<0.001、2.621/0.010、3.605/0.001、3.560/0.001);血清miR-369、miR-1323及二者联合预测胃癌患者预后的AUC为0.704、0.747、0.823,二者联合预测价值大于单独检测(Z/P=2.713/0.006、1.733/0.040);miR-369低、miR-1323高、分化程度低、TNM分期高、淋巴结转移、浸润深度高是胃癌患者预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.256(1.174~4.333)、1.376(1.011~1.872)、1.058(1.007~1.111)、1.288(1.002~1.655)、1.353(1.080~1.695)、1.493(1.029~2.167)]。结论胃癌患者血清miR-369呈低表达,miR-1323呈高表达,二者对于患者预后具有良好的预测价值,是患者预后不良的影响因素。

miR-369-3p靶向MMP14调节乳头状甲状腺癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的作用

目的:探究miR-369-3p通过靶向调控MMP14表达,对乳头状甲状腺癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法:将人乳头状甲状腺癌B-CPAP细胞分为B-CPAP组、mimic-NC组、miR-369-3p mimic组、pLV-MMP14组、mimic+pLV-MMP14组,mimic-NC组细胞转染阴性对照mimic(mimic-NC),miR-369-3p mimic组细胞转染miR-369-3p mimic,pLV-MMP14组细胞转染MMP14过表达慢病毒,mimic+pLV-MMP14组共转染miR-369-3p mimic和MMP14过表达慢病毒,RT-PCR检测miR-369-3p和MMP14基因表达水平,荧光素酶报告实验检测miR-369-3p和MMP14的靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕法检测细胞迁移,Western blot检测MMP14、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Twist、EGFR、p-ERK1/2、VEGF、MMP2蛋白表达水平。结果:与B-CPAP组比较,miR-369-3p mimic组miR-369-3p表达水平升高,MMP14基因表达水平降低。同时在荧光素酶报告实验中,与MMP14 WT组比较,MMP14 WT+miR-369-3p mimic组荧光素酶活性显著降低。同时,与B-CPAP组比较,miR-369-3p mimic组侵袭和迁移能力显著降低,并且MMP14、N-cadherin、Vimentin、Twist、EGFR、p-ERK1/2、VEGF、MMP2蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高;pLV-MMP14组侵袭和迁移能力显著升高,并且MMP14、N-cadherin、Vimentin、Twist、EGFR、p-ERK1/2、VEGF、MMP2蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低。与pLV-MMP14组比较,mimic+pLV-MMP14组侵袭和迁移能力显著降低,同时MMP14、N-cadherin、Vimentin、Twist、EGFR、p-ERK1/2、VEGF、MMP2蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。结论:miR-369-3p可通过沉默MMP14,阻断EGFR-ERK信号通路使VEGF、MMP2蛋白表达水平降低,进而抑制乳头状甲状腺癌细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化。

miR-369-5p对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的探讨miR-369-5p对大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活化增殖的影响。方法差速贴壁离心法提取CFs,并于倒置相差显微镜下进行形态鉴定。分别向各组细胞瞬时转染miR-369-5p抑制物、miR-369-5p模拟物、阴性对照组(NC)24～48 h后,应用实时定量PCR检测miR-369-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原前胶原A1(Col1A1)的蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;Western blot测定α-SMA和Col1A1蛋白表达。结果 miR-369-5p在模拟物组CFs中表达上调;而在抑制物组中的表达下降。Western blot结果显示,α-SMA和Col1A1蛋白在模拟物组中的表达明显降低,在抑制物组中的表达明显增加。CFs瞬时转染miR-369-5p模拟物后培养48 h,CFs增殖活力明显下降,而抑制物组的CFs活力明显增强。结论 miR-369-5p表达下调能够促进CFs的活化增殖,提示miR-369-5p是心肌纤维化的可能作用靶点。

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物(mimics)转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化; Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系; Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009); miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高(P=0.031); Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关。

血清miR-1228-3p和miR-369-3p水平与非小细胞肺癌患者预后的关系

目的:分析血清miR-1228-3p和miR-369-3p水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的关系。方法:比较106例NSCLC患者(恶性组)和40例肺部良性病变者(良性组)的基线资料、血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)及鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag),RT-qPCR法测定miR-1228-3p、miR-369-3p,分析其与病理参数关系,对比存活组、死亡组患者入院时各血清指标并分析预测价值。结果:恶性组血清CEA、CA125、CYFRA21-1、miR-1228-3p、miR-369-3p水平均高于良性组(P<0.05),两组基线资料及SCC-Ag水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);NSCLC中,miR-1228-3p表达水平与病理类型、肿瘤分期、肿瘤大小、有无远处转移有关(P<0.05),miR-369-3p表达水平与肿瘤分期、有无远处转移有关(P<0.05);死亡组患者入院时血清CEA、CYFRA21-1、miR-1228-3p、miR-369-3p水平高于存活组(P<0.05);ROC曲线显示,miR-1228-3p、miR-369-3p预测NSCLC患者预后的曲线下面积(AUC)优于CEA、CYFRA21-1。结论:NSCLC患者血清miR-1228-3p、miR-369-3p呈高表达,且其与病理、预后密切相关。

miR-369-3p对缺氧诱导海马神经元细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨miR-369-3p对缺氧诱导的海马神经元细胞(Hhn)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将Hhn细胞置于持续充入95%N2+5%CO2的密闭培养箱中进行缺氧处理48 h(缺氧组),正常培养的细胞作为对照组。将miR-NC、miR-369-3p、anti-miR-NC、anti-miR-369-3p转染至Hhn细胞中,分别记为miR-NC组、miR-369-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-369-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-369-3p、pcDNA3.1、pcDNA3.1-NAMPT分别转染至Hhn细胞中再进行缺氧处理,分别记为缺氧+anti-miR-NC组、缺氧+anti-miR-369-3p组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-NAMPT组;将anti-miR-369-3p质粒分别与si-NC、si-NAMPT共转染至Hhn细胞中再进行缺氧处理,分别记为缺氧+anti-miR-369-3p+si-NC组、缺氧+anti-miR-369-3p+si-NAMPT组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-369-3p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性和MDA含量;双荧光素酶报告基因检测miR-369-3p和NAMPT的靶向关系。结果与对照组比较,缺氧组Hhn细胞中miR-369-3p表达水平升高,NAMPT表达水平降低,P21、Bax表达水平升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平降低,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,SOD活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+anti-miR-NC组比较,缺氧+anti-miR-369-3p组miR-369-3p表达水平降低,P21、Bax表达水平降低,Cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-NAMPT组NAMPT表达水平升高,P21、Bax表达水平降低,Cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与缺氧+anti-miR-369-3p+si-NC组比较,缺氧+anti-miR-369-3p+si-NAMPT组P21、Bax表达水平升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平降低,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,SOD活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-369-3p表达可促进缺氧诱导的海马神经元细胞增殖,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激反应,保护缺氧诱导的海马神经元细胞损伤,其机制可能与NAMPT相关,可为阿尔兹海默症的防治提供新思路和新靶点。

miR-369-5p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-369-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况、临床意义,观察miR-369-5p对HCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:实时定量PCR检测miR-369-5p在HCC组织与相应癌旁组织、正常肝细胞(L02)与HCC细胞系中的表达情况;CCK-8实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞增殖能力;Transwell实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞迁移及侵袭能力;Targetscan数据库预测p21活化激酶4(p21 activated kinase 4,PAK4)为miR-369-5p下游靶基因;用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性;蛋白免疫印迹试验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞中PAK4的蛋白表达水平。结果:miR-369-5p在HCC组织及细胞系中均明显低表达,低表达miR-369-5p与肿瘤大小、TNM分期、微血管浸润相关;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力;通过生物信息学工具预测PAK4是miR-369-5p的下游靶基因;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p下调PAK4蛋白的表达。结论:在HCC中miR-369-5p表达下调且其低表达与HCC恶性病理特征有关,在HCC中过表达miR-369-5p可通过下调PAK4表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

黄花倒水莲下调miR-369对LPS诱导大鼠心肌细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨黄花倒水莲(PFH)下调miR-369对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护机制。方法:将大鼠心肌细胞H9c2随机分为对照组(Con组)、LPS组、LPS+PFH组和LPS+PFH+转染组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-369和AKT1 mRNA表达,Western blot检测AKT1蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-369是否靶向AKT1。结果:LPS诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制率和凋亡率升高,细胞中miR-369表达升高,AKT1 mRNA和蛋白表达降低;PFH处理后心肌细胞中miR-369表达降低,AKT1 mRNA和蛋白表达升高,细胞增殖抑制率和凋亡率降低,其中3 g/kg的PFH效果最好;抑制miR-369表达后LPS诱导的心肌细胞增殖抑制率降低,细胞中Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率降低,而过表达miR-369可逆转PFH对LPS诱导大鼠心肌细胞损伤的保护作用;双荧光素酶报告基因实验证实miR-369靶向负调控AKT1表达;抑制AKT1表达逆转了PFH对LPS诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论:PFH下调miR-369,靶向激活AKT1活性,保护LPS诱导的大鼠心肌细胞损伤。

桑枝提取物抑制miR-369对SK-N-SH细胞损伤的影响

目的:探讨桑枝提取物对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)处理的SK-N-SH细胞损伤的影响及分子机制。方法:将SK-N-SH细胞随机分为对照组(未作任何处理)、模型组(2.5 mmol/L MPP^+)、低、中、高剂量药物组(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L桑枝提取物+2.5 mmol/L MPP^+)、阳性对照给药组(50μmol/L司来吉兰+2.5 mmol/L MPP^+)、anti-miR-NC组(转染miR-369抑制阴性对照剂+2.5 mmol/L MPP^+)、anti-miR-369组(转染miR-369抑制剂+2.5 mmol/L MPP^+)、高剂量药物+antimiR-NC组(转染miR-369抑制剂阴性对照剂+60μmol/L桑枝提取物+2.5 mmol/L MPP^+)、高剂量药物+anti-miR-369组(转染miR-369抑制剂+60μmol/L桑枝提取物+2.5 mmol/L MPP^+)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western blot)法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-369和蛋白激酶B1(AKT1)mRNA的表达水平;将AKT1野生型和突变型荧光素酶表达载体分别与miR-NC和miR-369共转染至细胞SK-N-SH中,用荧光素酶报告实验检测miR-369和AKT1的靶向关系。结果:MPP^+处理的SK-N-SH细胞中细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,Caspase3表达水平升高,IL-1β水平升高,MDA含量升高,SOD活性降低,miR-369表达水平升高,AKT1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。低、中、高剂量桑枝提取物处理后,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,Caspase3表达水平降低,IL-1β水平降低,MDA含量降低,SOD活性升高,miR-369表达水平降低,AKT1mRNA表达水平升高(P<0.05)。抑制miR-369表达可促进细胞存活,抑制细胞凋亡、炎症因子IL-1β的释放,降低MDA含量,提高SOD活性。且抑制miR-369表达能增强桑枝提取物对MPP^+处理SK-N-SH细胞损伤的保护作用。miR-369靶向调控AKT1。结论:桑枝提取物可抑制MPP^+诱导的SK-N-SH细胞凋亡、炎症反应及氧化应激,可能通过调控miR-369/AKT1对MPP^+诱导的SK-N-SH细胞损伤起保护作用。

miR-369-3p靶向CTHRC1对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨微小RNA-369-3p(miR-369-3p)是否通过靶向胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)影响宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药性。方法:体外培养人宫颈癌细胞HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP;实验分组:DDP+miR-NC组、DDP+miR-369-3p组、DDP+si-NC组、DDP+si-CTHRC1组、DDP+miR-369-3p+pcDNA组、DDP+miR-369-3p+pcDNA-CTHRC1组;采用MTT法检测细胞增殖抑制率及计算IC_(50)值;qRT-PCR检测miR-369-3p、CTHRC1表达量;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p、CTHRC1的靶向关系;Western blot检测CTHRC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p21表达。结果:与HeLa组比较,HeLa/DDP组细胞增殖抑制率、miR-369-3p的表达水平显著降低(P<0.05),IC_(50)值、CTHRC1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);HeLa/DDP细胞转染miR-369-3p mimics或转染si-CTHRC1后,细胞增殖抑制率、p21蛋白水平显著升高(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数显著减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-369-3p可靶向结合CTHRC1;CTHRC1过表达可明显逆转miR-369-3p过表达对细胞增殖、迁移、侵袭及顺铂耐药性的作用。结论:miR-369-3p过表达可能通过下调CTHRC1表达抑制HeLa/DDP细胞增殖、迁移及侵袭从而逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性。

miR-369-3p在山荷叶素调控甲状腺癌细胞增殖、迁移中的作用

目的观察山荷叶素对甲状腺癌细胞增殖及迁移的影响,并探讨miR-369-3p在其中的作用。方法将人甲状腺癌细胞SW579随机分为对照组及山荷叶素2.5μmol/L组、5.0μmol/L组、10.0μmol/L组,分别予以DMEM培养基及2.5、5.0、10.0μmol/L山荷叶素处理24 h,以CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验分别观察细胞增殖、克隆形成及迁移能力,qRT-PCR法检测细胞中的miR-369-3p。采用脂质体转染法将miR-NC、miR-369-3p mimic分别转染至SW579细胞,分别记为miR-NC组、miR-369-3p mimic组,按上法观察胞增殖、克隆形成、迁移能力及细胞中的miR-369-3p;采用脂质体转染法将anti-miR-NC、miR-369-3p Inhibitor转染至SW579细胞,转染成功后加入含10.0μmol/L山荷叶素的DMEM培养基培养24 h,分别记为山荷叶素+anti-miR-NC组、山荷叶素+miR-369-3p Inhibitor组,按上法观察胞增殖、克隆形成、迁移能力及细胞中的miR-369-3p。结果与对照组比较,山荷叶素2.5μmol/L组、5.0μmol/L组、10.0μmol/L组细胞增殖抑制率均逐渐升高,细胞克隆形成数逐渐减少,划痕愈合率逐渐降低,miR-369-3p表达量逐渐升高(P均<0.05)。与miR-NC组比较,miR-369-3p mimic组细胞中miR-369-3p表达增加,细胞增殖抑制率升高,细胞克隆形成数减少,划痕愈合率降低(P均<0.05)。与山荷叶素+anti-miR-NC组比较,山荷叶素+miR-369-3p Inhibitor组中miR-369-3p表达减少,细胞增殖抑制率降低,细胞克隆形成数增多,划痕愈合率升高(P均<0.05)。结论山荷叶素可能通过上调miR-369-3p表达进而降低甲状腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移能力。

不同猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的表达差异及其与胴体、肉质性状相关性分析

为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部皮下脂肪中的表达水平显著高于地方猪种(P<0.05);地方猪种中,miR-1和miR-369表达水平分别在藏猪和雅南猪中最高;相关性分析显示,miR-1和miR-369在背部皮下脂肪中表达水平均与瘦肉率、多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01),与单不饱和脂肪酸含量均呈显著负相关(P<0.05),miR-369表达水平还与平均背膘厚呈极显著负相关(P<0.01)。试验表明miR-1和miR-369可能对猪脂肪沉积和单不饱和脂肪酸生成起负调控作用,对多不饱和脂肪酸生成起正调控作用。

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P<0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。

miR-369-3p靶向FGF9信号通路调控肝癌细胞增殖与侵袭

目的:阐明脂代谢相关mi R-369-3p在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病理组织中的表达特征及其与临床预后的相关性,解析mi R-369-3p在HCC细胞中的作用性质及相应分子机理。方法:实时定量PCR法检测mi R-369-3p在HCC病理组织和细胞中的表达变化,并通过Spearman’s法分析mi R-369-3p表达水平与临床病理资料相关性;CCK-8检测、Transwell穿透小室实验和裸鼠荷瘤实验检测敲低内源性mi R-369-3p表达后对HCC细胞增殖和侵袭性的影响作用;利用生物信息学分析、瞬时转染、定点突变和荧光素酶报告基因活性检测分析mi R-369-3p对纤维母细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)的转录后调控作用。结果:mi R-369-3p在HCC病理组织(n=68)和细胞中异常低表达,且此低表达趋势与HCC患者预后呈显著负相关关系(x^2=6.907,P=0.0086);敲低内源性mi R-369-3p可显著促进HCC细胞的增殖、侵袭性;参与调控这一抑瘤效应的关键分子机制可能是miR-369-3p与FGF9的3’-UTR区直接结合,在转录后水平抑制FGF9 m RNA的稳定性,进而抑制后者表达水平。结论:miR-369-3p可通过靶向FGF9信号在转录后调控水平负性调控肝癌细胞增殖和侵袭过程,在肝癌发生和进展过程中发挥关键抑癌作用。

miR-369-3p靶向α-辅肌动蛋白4调控肝癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用,Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04,低于癌旁组织(1.00±0.08,P<0.001);ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29,高于癌旁组织(1.01±0.09,P<0.001);ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06,高于癌旁组织(0.25±0.03,P<0.001)。与miR-NC组细胞比较,miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%,P<0.001],S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%,P<0.001)],细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较,抑制ACTN4的表达后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%,P<0.001],S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%,P<0.001],细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较,过表达ACTN4后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06,P<0.001),G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%,P<0.001],S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%,P<0.001],细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期,抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。

microRNA-369-5p在糖尿病心肌病心肌组织与心肌成纤维细胞活化增殖中的表达变化

目的:探究microRNA-369-5p(miR-369-5p)在糖尿病心肌病心肌组织与心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts CFs)活化增殖中的表达变化。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建大鼠糖尿病心肌病模型,体外应用高糖诱导CFs细胞活化增殖模型。利用HE、Masson染色,观察心肌组织病理改变及胶原分布情况。应用qRT-PCR检测CFs细胞中miR-369-5p的表达。qRT-PCR和Western blotting实验检测α-SMA、Collagen I mRNA与蛋白的表达;结果:HE和Masson染色显示糖尿病心肌病大鼠心肌胶原沉积明显增多,细胞相对排列紊乱,细胞大小不一。Western blotting实验表明与正常组相比,糖尿病组和高糖组的α-SMA与Collagen I的表达增长;qRT-PCR实验表明与正常组相比,高糖诱导CFs细胞中miR-369-5p表达降低,而α-SMA与Collagen I的表达增加。结论:miR-369-5p在糖尿病心肌病心肌组织与高糖诱导CFs细胞中表达降低,提示miR-369-5p可能是影响糖尿病心肌病形成的潜在作用靶点。

黄芩提取物抑制IL⁃22诱导的人角质形成细胞系HaCaT过度增殖

目的探究黄芩提取物通过miR-369-3p对白介素-22(IL-22)诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法将HaCaT细胞分为对照组、IL-22组(细胞模型,100 ng/mL的IL-22培养细胞)、低、中和高剂量组(黄芩提取物50、100、150μg/mL)、anti-miR-NC干预组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-369-3p干预组(转染anti-miR-369-3p)、miR-NC+高剂量组(转染miR-NC,高剂量黄芩提取物培养细胞)、miR-369-3p+高剂量组(转染miR-369-3p,高剂量黄芩提取物培养细胞)。MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6含量;RT-qPCR检测miR-369-3p表达。结果与对照组相比,IL-22组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达的差异无统计学意义;与IL-22组相比,低、中和高剂量组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与anti-miR-NC干预组相比,anti-miR-369-3p干预组细胞存活率、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。过表达miR-369-3p可以部分逆转黄芩提取物对银屑病细胞模型的细胞活性,凋亡以及炎性水平的作用(P<0.05)。结论黄芩提取物可能通过抑制miR-369-3p表达,抑制IL-22诱导的人角质形成细胞过度增殖和炎性反应,并促进其凋亡。

普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制

[目的]探讨普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制。[方法]N9细胞、PC12细胞分为对照组、缺氧组、低、中、高剂量普鲁卡因组(缺氧+2、6、18 mg/L普鲁卡因)、anti-miR-con组、anti-miR-369-3p组、miR-con+高剂量普鲁卡因组(转染miR-con+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)、miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组(转染miR-369-3p+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)。流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,RT-qPCR检测miR-369-3p表达水平。[结果]相比于对照组,缺氧组N9细胞、PC12细胞凋亡率升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,miR-369-3p表达水平升高(P<0.05)。相比于缺氧组,低、中、高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,MDA、ROS含量降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,miR-369-3p表达水平降低,且均具有浓度依赖性(P<0.05);相比于anti-miR-con组,anti-miR-369-3p组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,ROS和MDA含量降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05)。相比于miR-con+高剂量普鲁卡因组,miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率升高,cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05)。[结论]普鲁卡因可减轻缺氧诱导的N9细胞和PC12细胞损伤,其机制可能与抑制miR-369-3p表达有关。