血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平与急性脑梗死患者病情及预后的关系

目的 检测急性脑梗死患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并探讨其与患者病情及预后的关系。方法 选取2020年3月至2022年10月安阳市人民医院神经内科收治的136例急性脑梗死患者纳入脑梗死组,另选取本院同期136例体检健康志愿者作为对照组。根据病情程度将脑梗死组患者分为轻度组(n=42)、中度组(n=59)和重度组(n=35)。根据患者90 d随访情况分为预后良好组103例和预后不良组33例。采用qRT-PCR法检测两组受检者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并比较各组受试者miR-182-5p、miR-372-3p表达水平和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分。采用Spearman相关性分析急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p与NIHSS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性脑梗死预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-182-5p、miR-372-3p预测急性脑梗死患者预后的价值。结果 脑梗死组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.56±0.16、0.39±0.11,明显低于对照组的0.99±0.23、1.00±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);随着脑梗死患者病情程度的加重,轻度组、中度组、重度组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平逐渐降低,而NIHSS评分逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p水平与NIHSS评分均呈负相关(r=-0.483、-0.648,P<0.05);预后良好组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.62±0.17、0.42±0.12,明显高于预后不良组的0.39±0.12、0.30±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-182-5p和miR-372-3p低表达以及重度梗死是急性脑梗死预后不良的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-182-5p、miR-372-3p水平联合预测急性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)明显大于miR-182-5p单独预测的AUC (Z=1.991,P=0.046)及miR-372-3p单独预测的AUC (Z=2.294,P=0.022)。结论 急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p表达降低,两者是急性脑梗死患者不良预后的危险因素,且与病情程度密切相关,可作为急性脑梗死预后的生物标志物。

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

miR-372靶向E2F转录因子5抑制宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-372(miR-372)对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞恶性生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁组织中miR-372和E2F转录因子5(E2F5)表达水平,构建miR-372过表达和低表达SiHa细胞系(miR-372、anti-miR-372),采用MTT法、流式细胞术、Transwell法及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况及其相关蛋白水平。在线预测miR-372与E2F5靶向关系并进行双色荧光素酶实验验证,在miR-372过表达SiHa细胞系上调E2F5,观察细胞增殖、凋亡和侵袭情况。结果:癌组织中miR-372表达低于其癌旁组织(P<0.05),而E2F5表达高于其癌旁组织(P<0.05)。miR-372过表达抑制细胞增殖、侵袭和核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)表达(P<0.05);上调细胞凋亡和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤2蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2/Bax)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达(P<0.05)。miR-372可靶向抑制E2F5表达,E2F5过表达可缓解miR-372对SiHa细胞作用效果。结论:miR-372过表达可抑制SiHa细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡,可能与靶向作用抑制E2F5表达有关。

miR-372-3p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:检测miR-372-3p在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p对膀胱癌5637和T24细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:采集2016年3月至2017年1月武汉中心医院收治的6例膀胱癌患者癌及癌旁组织(距离肿瘤边缘>5 cm),q PCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p表达。采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics或者miRNC转入膀胱癌5637和T24细胞。用q PCR和Western blotting检测转染miR-372-3p mimics和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p和ATAD2 m RNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:膀胱癌组织miR-372-3p m RNA的表达显著低于癌旁组织(0.65±0.56 vs 1.76±0.34,P<0.01)。和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞的miR-372-3p m RNA表达显著增加,ATAD2 m RNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少。结论:miR-372-3p的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标。

急性髓系白血病患者miR-372的表达水平及其临床意义

目的探讨miR-372在急性髓系白血病(AML)患者的血浆中的表达情况及其参与AML发病的可能作用机制。方法实时定量PCR检测血浆中miR-372的水平。生物信息学软件预测miR-372可能的靶基因并通过双荧光素酶报告基因验证。在HL-60细胞中,敲低miR-372,通过划痕实验和克隆形成实验检测其对细胞迁移和克隆形成的影响。结果 AML患者血浆中miR-372的水平显著上调。受试者工作特征(ROC)曲线分析表明,miR-372可以区分AML患者以及健康对照组。双荧光素酶报告基因结果表明,miR-372可以抑制PTEN-3′UTR的活力。在HL-60细胞中敲低miR-372可以显著降低HL-60的细胞迁移率和克隆形成能力。结论在急性髓系白血病患者血浆中,miR-372水平显著升高。通过靶向抑癌基因PTEN,miR-372可能成为一个潜在的筛查和诊断急性髓系白血病的非侵入性生物学标志物。

miR-372通过程序性细胞死亡4调节白血病细胞U937增殖和凋亡

目的:分析miR-372通过程序性细胞死亡4(PDCD4)调节白血病细胞U937增殖和凋亡的机制。方法:白血病细胞U937分别转染miR-372 inhibitor(Anti-miR-372组)、inhibitor control(Anti-NC组)、PDCD4 siRNA和miR-372 inhibitor(Anti-miR-372+si-PDCD4组)、siRNA control和miR-372 inhibitor(Anti-miR-372+si-NC组),未行转染的常规培养U937细胞为Control组,CCK-8法测定各组细胞增殖,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot测定各组细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达。生物信息数据库预测miR-372和PDCD4靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定二者靶向关系。结果:与Anti-NC组比较,Anti-miR-372组白血病细胞U937增殖能力降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P均<0.01)。miR-372和PDCD4互为靶向关系。PDCD4 siRNA转染可以提高下调miR-372的白血病细胞U937增殖能力,减少细胞凋亡,促进细胞中Bcl-2蛋白表达,减少细胞中Bax蛋白表达水平(P均<0.01)。结论:下调miR-372通过PDCD4抑制白血病细胞U937增殖并诱导细胞凋亡。

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移:通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC(miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照)、miR-inhibitor(miR-372-5p抑制剂)、miR-mimics(miR-372-5p类似物)以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12(CXCL12干扰)以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著(P<0.01);双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因(P<0.05)。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果(P<0.05),si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用(P<0.01);PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力(P<0.05),而miR-mimics可中和这一作用(P<0.01);miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力(P<0.01),联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用(P<0.01)。结论miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。

miR-372在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞迁移的影响

目的探讨miR-372在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞功能的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测64例前列腺癌和癌旁组织中miR-372的表达差异;分析miR-372的表达差异与前列腺癌组织临床病理之间的相关性。应用脂质体法转染miR-372mimics(模拟物)、miR-372inhibitor(干扰物)及其对应无关对照序列(negative control,NC)至前列腺癌DU145及LNCaP细胞。转染48h后用qRT-PCR法检测转染效率,用细胞划痕实验检测各转染miR-372组前列腺癌DU145及LNCaP细胞的迁移能力。结果 miR-372在前列腺癌组织中的表达明显低于对应的癌旁组织(P<0.05);miR-372表达情况在不同患者年龄、Gleason评分、TNM分期及转移组间差异显著(P<0.05);miR-372mimics能上调前列腺癌细胞miR-372表达,miR-372inhibitor能下调miR-372在前列腺癌细胞中的表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-372inhibitor能明显增强前列腺癌细胞迁移能力,miR-372mimics能降低前列腺癌细胞迁移能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-372在前列腺癌组织中表达下调,并且能抑制前列腺癌细胞迁移,可作为前列腺癌的抑癌因子。

miR-372在非小细胞肺癌组织中表达及意义

目的探讨miR-372在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达,以及升高A549细胞中miR-372表达对细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2018年3月至2021年3月在我院接受治疗的NSCLC患者111例,qRT-PCR术检测NSCLC和癌旁组织中miR-372表达,培养A549细胞,并分别M组、NC组和N组,分别转染miR-372模拟序列、阴性对照物及不作处理,qRT-PCR术检测细胞中miR-372表达,利用CCK-8实验、Annexin V-FITC/PI染色和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及侵袭力。结果NSCLC和癌旁组织中miR-372表达量分别为(0.31±0.10)和(1.02±0.11),差异有统计学意义(t=50.031,P<0.001);低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期和发生淋巴结转移的NSCLC组织中miR-372表达量明显低于中-高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和未发生淋巴结(P<0.05);M组细胞中miR-372表达量高于NC组和N组(P<0.05),24、48、72和96h时细胞OD值低于NC组和N组(P<0.05),细胞凋亡率高于NC组和N组(P<0.05),侵袭细胞数低于NC组和N组(P<0.05)。结论miR-372在NSCLC组织中呈低表达,升高A549细胞中miR-372表达可抑制细胞增殖并加速细胞凋亡,降低细胞侵袭力。

miR-372调控血管生成因子AGGF1的表达并抑制血管生成

目的 :研究miR-372(miR-372)对新血管生成因子AGGF1基因的表达调控。方法:通过生物信息学预测找到可能靶向调控AGGF1基因的候选miRNA;通过荧光素酶报告基因实验、荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western blot检测等实验证实miR-372对AGGF1基因表达的靶向调控;通过体外血管内皮细胞成管实验检测miR-372对血管生成的影响。结果:生物信息学预测显示miR-372靶向AGGF1;荧光素酶报告基因实验证实miR-372可通过结合AGGF1基因3′-非翻译区(3′-untranslational region,3′-UTR)而抑制其表达;q PCR和Western blot实验分别表明miR-372在m RNA水平和蛋白水平下调AGGF1表达;体外血管生成实验表明miR-372所介导的AGGF1表达下调可明显抑制血管生成。结论 :miR-372可通过靶向结合AGGF1基因的3′-UTR下调其表达,并抑制内皮细胞血管生成能力。

circ-PKD2靶向miR-372-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)-PKD2在结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中发挥的作用及可能的调控机制。方法 采用qRT-PCR分别检测结直肠癌组织、癌旁组织、结直肠癌细胞系(HCT116、HT-29、SW480、LoVo)与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中circ-PKD2的表达水平。应用MTS实验、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。运用qRT-PCR和Western blot法分别检测circ-PKD2靶基因及下游蛋白的表达。结果 circ-PKD2在结直肠癌和癌旁组织中的表达量分别为1.28±0.14和6.38±0.29,circ-PKD2在结直肠癌组织中显著低表达(P<0.01)。与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)比较,circ-PKD2在结直肠癌细胞系中显著低表达(P<0.01),其表达水平最低的细胞系是HT-29细胞(P<0.01)。NC组和circ-PKD2组HT-29细胞中circ-PKD2的表达量分别为1.02±0.11和12.02±1.08,差异有统计学意义(P<0.01)。与NC组比较,circ-PKD2组HT-29细胞的增殖能力明显降低(P<0.05)。NC组和circ-PKD2组HT-29细胞划痕愈合率分别为(69.65±5.99)%和(25.58±4.33)%,NC组和circ-PKD2组HT-29细胞侵袭数分别为(89.28±11.07)个和(41.20±10.33)个。与NC组比较,circ-PKD2组HT-29细胞的迁移、侵袭能力明显降低(P均<0.01)。starBase v2.0软件分析circ-PKD2与miR-372-3p存在互补结合位点。circ-PKD2能够靶向结合miR-372-3p(P<0.01)。结直肠癌组织中circ-PKD2与miR-372-3p的表达呈明显负相关(P<0.01)。与NC组比较,circ-PKD2组HT-29细胞中miR-372-3p表达显著降低(P<0.01)。LATS2蛋白和Hippo信号通路蛋白的表达显著增加。结论 circ-PKD2在结直肠癌组织和细胞系中低表达,circ-PKD2通过靶向miR-372-3p抑制结直肠癌HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

LncRNA HULC通过miR-372/CXCR4轴来调控肝癌细胞的增殖、凋亡与上皮-间质转化

目的探讨LncRNA HULC通过miR-372/CXCR4轴在肝癌细胞增殖、凋亡与上皮-间质转化(EMT)中的作用。方法在线生物信息学TargetScan数据库预测靶基因;细胞转染建立基因过表达和沉默细胞模型;qRTPCR和Western blot检测基因和蛋白质表达;CCK-8分析用于细胞活力检测;细胞集落形成实验用于分析细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI分析用于细胞凋亡检测;免疫组织化学染色检测蛋白的阳性表达。结果在肝癌组织和肝癌细胞中,HULC和CXCR4表达上调,miR-372表达下调;TargetScan数据库分析和双荧光素酶分析揭示了miR-372与HULC或CXCR4之间的靶向关系;CCK-8分析显示HULC和CXCR4提高细胞活力,miR-372抑制细胞活力;细胞集落形成实验表明,HULC和CXCR4促进细胞增殖,miR-372抑制细胞增殖;细胞流式术结果表明,HULC和CXCR4抑制细胞凋亡,miR-372促进细胞凋亡;Western blot结果表明,HULC和CXCR4抑制E-cadherin表达,促进Vimentin表达,而miR-372促进E-cadherin表达,抑制Vimentin表达。结论HULC抑制miR-372的表达,从而促进CXCR4的表达,因此促进了肝癌细胞的增殖、抑制其凋亡并促进EMT进程。

妊娠期糖尿病miR-29、miR-372-3p、miR-375表达水平及其与胰岛素抵抗的相关性

目的:探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)miR-29、miR-372-3p、miR-375表达水平及其与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的相关性。方法:选取2019年5月至2020年5月南京市中西医结合医院诊治的220例GDM患者为研究组,并选取同期220例糖耐量正常的孕妇为对照组。检测并对比两组孕妇空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)及糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbAlc)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较两组孕妇外周血miR-29、miR-372-3p、miR-375的表达水平,并分析其与IR的相关性。结果:研究组FINS水平明显低于对照组,FBG、HbAlc水平及HOMA-IR均明显高于对照组(均P<0.05);研究组外周血miR-29的表达水平明显低于对照组,miR-372-3p、miR-375的表达水平均明显高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示:研究组外周血miR-29的表达水平与HOMA-IR呈负相关(r=-0.379,P<0.05),外周血miR-372-3p、miR-375的表达水平与HOMA-IR呈正相关(均r=0.530、0.628,P<0.05)。结论:GDM患者外周血miR-29、miR-372-3p、miR-375的表达水平跟糖耐量正常的孕妇相比差异具有统计学意义,临床检测其表达水平对诊断GDM有较高的价值,且三者均与患者HOMA-IR有一定相关性,参与IR的发生、发展过程。

LncRNA SNHG14通过调控miR-372-3p对OGD/R诱导的星形胶质细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) SNHG14通过调控miR-372-3p对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外分离大鼠星形胶质细胞并建立OGD/R损伤细胞模型,分为Control组、OGD/R组、OGD/R+si-NC组、OGD/R+si-SNHG14组、OGD/R+miR-NC组、OGD/R+miR-372-3p组、OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-NC组和OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-372-3p组。qRT-PCR检测SNHG14和miR-372-3p的表达量;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-1β的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG14和miR-372-3p的关系。结果 与Control组比较,OGD/R组SNHG14表达量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著升高(P<0.05),miR-372-3p表达量、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与OGD/R+si-NC组比较,OGD/R+si-SNHG14组的内细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著降低(P<0.05);细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。与OGD/R+miR-NC组比较,OGD/R+miR-372-3p组内细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著降低(P<0.05)。与OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-NC组比较,OGD/R+si-SNHG14+anti-miR-372-3p组内细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-10显著升高(P<0.05)。结论 敲低SNHG14通过上调miR-372-3p对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有一定的保护作用。

LINC00607通过抑制miR-372影响A549/DDP细胞的增殖和凋亡

目的探讨LINC00607对肺癌顺铂耐药细胞系(A549/DDP)增殖、凋亡的影响和可能的分子机制。方法RT-qPCR检测肺癌组织、癌旁组织、A549、A549/DDP中LINC00607和miR-372的表达水平。将A549/DDP分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-LINC00607组、(pcDNA3.1-LINC00607+miR-NC)组、(pcDNA3.1-LINC00607+miR-372)组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved-caspase-3和Ki67蛋白表达;双荧光素酶报告基因和RT-qPCR实验确定LINC00607对miR-372的靶向调控作用。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中LINC00607表达显著降低,miR-372表达显著升高(P<0.05)。与A549细胞比较,A549/DDP细胞中LINC00607表达显著降低,miR-372表达显著升高(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-LINC00607组A549/DDP细胞存活率、克隆形成数、Ki67蛋白表达显著降低,而凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。与(pcDNA3.1-LINC00607+miR-NC)组比较,(pcDNA3.1-LINC00607+miR-372)组A549/DDP细胞存活率、克隆形成数、Ki67蛋白表达显著升高,而凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。LINC00607靶向负调控miR-372表达。结论LINC00607通过下调miR-372能够抑制A549/DDP细胞增殖,诱导细胞凋亡。

miR-372靶向LATS2对结肠癌SW620细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的:探讨miR-372对结肠癌SW620细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:将体外培养的SW620细胞分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-372模拟物阴性对照)、miR-372组(转染miR-372模拟物)、pLV-LATS2组(转染pLVLATS2质粒)和miR-372+LATS2组(转染miR-372模拟物和pLV-LATS2质粒),采用实时荧光定量PCR(qPCR)测定miR-372和LATS2 mRNA的表达,荧光素酶实验测定miR-372和LATS2的靶向关系,Western blotting测定LATS2蛋白的表达,MTT法测定各组细胞的增殖,Transwell小室实验测定细胞的侵袭和迁移。结果:与对照组相比,miR-372组细胞中miR-372表达水平升高,而LATS2 mRNA表达降低(P<0.05);LATS2是miR-372的潜在靶基因。与对照组相比,miR-372组细胞中LATS2蛋白的表达水平显著降低,细胞的增殖水平显著升高、侵袭和迁移细胞数显著增多,而pLV-LATS2组中LATS2蛋白的表达水平显著升高,细胞的增殖水平显著降低、侵袭和迁移细胞数显著减少,且miR-372+LATS2组细胞增殖水平、侵袭细胞数和迁移细胞数均显著低于miR-372组(P<0.05)。结论:miR-372可靶向LATS2促进结肠癌SW620细胞增殖、侵袭和迁移。

肺癌组织中lncRNA ZFAS1和hsa-miR-372-3p的表达与患者恶性特征及预后的关系

目的探究肺癌组织中长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(lncRNA ZFAS1)、hsa-miR-372-3p表达水平及与患者恶性特征及预后的关系。方法选取2015年3月至2016年10月在石家庄市人民医院诊治的82例肺癌患者。RT-qPCR检测肿瘤组织和癌旁组织ZFAS1和miR-372-3p的表达,分析ZFAS1、miR-372-3p水平与肺癌患者恶性特征的关系;Pearson分析肿瘤组织中ZFAS1和miR-372-3p的关系;用Kaplan-Meier分析ZFAS1、miR-372-3p水平与肺癌患者预后生存期的关系;COX回归分析对肺癌患者预后产生影响的因素。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中ZFAS1、miR-372-3p表达水平均显著升高(P<0.05)。肿瘤组织ZFAS1、miR-372-3p表达水平与TNM分期、浸润胸膜、是否发生淋巴结转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05)。肿瘤组织中ZFAS1和miR-372-3p表达水平呈显著正相关(r=0.477,P<0.001)。ZFAS1和miR-372-3p高表达组患者5年内生存率均明显低于低表达组(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移、ZFAS1、miR-372-3p是肺癌患者发生不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肿瘤组织中ZFAS1、miR-372-3p呈异常高表达,其高水平与肺癌患者恶性特征及预后不良有关,是肺癌患者预后不良的独立危险因素。

血清miR-372在鼻咽癌患者中的诊断和预后价值研究

目的研究血清miR-372在鼻咽癌患者中的诊断和预后价值。方法选取116例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,另选同期58例健康志愿者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测两组研究对象血清中miR-372的表达水平,并进行比较;分析miR-372表达水平与患者临床病理特征之间的关系;建立受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-372的诊断价值;通过KaplanMeier(KM)生存曲线和Cox回归分析评估miR-372的预后价值。结果qRT-PCR检测结果表明,血清miR-372在鼻咽癌组患者中的表达水平(2.130±0.786)显著低于健康对照组的(3.852±1.114),差异具有统计学意义(χ^2=11.794,P<0.01)。ROC曲线表明,曲线下面积(AUC)为0.888,说明miR-372具有较高的诊断鼻咽癌的能力;诊断截断值为3.135,灵敏度为87.1%,特异度为77.6%。Kaplan-Meier生存曲线表明,miR-372低表达与患者低生存率显著相关(log-rank P=0.012)。Cox回归分析证明miR-372是鼻咽癌患者的独立预后因子[HR=2.191,95%CI=(1.027,4.671),P=0.042<0.05]。结论鼻咽癌患者血清中miR-372的表达水平降低,是一个潜在的诊断和预后生物标志物,有望改善鼻咽癌患者的临床诊断和预后。

下调miR-372靶向调控BTG1表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响

目的研究miR-372靶向调控B细胞易位基因(BTG)1的表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响。方法Realtime PCR方法测定胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中miR-372表达变化。在胶质瘤细胞中转染miR-372抑制剂(inhibitor),Realtime PCR方法检测下调效果,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液上清中转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-8含量。利用生物信息学软件预测miR-372的靶基因可能为BTG1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western印迹检测miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞中BTG1蛋白表达影响。在胶质瘤细胞中共转染BTG1 siRNA和miR-372 inhibitor,检测细胞培养液上清中TGF-β1、VEGF、IL-8含量和细胞中BTG1蛋白水平。结果胶质瘤细胞中miR-372表达水平高于正常星形胶质细胞。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞分泌的TGF-β1、VEGF、IL-8含量显著减少。miR-372靶向调控BTG1。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞中BTG1蛋白水平显著升高。BTG1 siRNA可以逆转miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞分泌TGF-β1、VEGF、IL-8的抑制作用和BTG1蛋白表达的促进作用。结论下调miR-372靶向调控BTG1的表达抑制胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子TGF-β1、VEGF、IL-8。

长链非编码RNA NPPA-AS1通过靶向miR-372-3p调控结直肠癌SW480细胞的增殖和凋亡

目的探讨长链非编码RNA NPPA-AS1(lncRNA NPPA-AS1)对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取南方医科大学附属花都医院和湖北医药学院附属人民医院2017年1月至2019年1月期间的30对结直肠癌组织及匹配的癌旁组织;将结直肠癌细胞(SW480细胞)进行体外培养并单独或者联合转染pcDNA-3.1载体(pcDNA)、miRNA抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)、NPPA-AS1过表达载体(pcDNA-NPPA-AS1)、miR-372-3p抑制剂(anti-miR-372-3p)、miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)和miR-372-3模拟物(miR-372-3p)以构建pcDNA组、pcDNA-NPPA-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-372-3p组、pcDNA-NPPA-AS1+miR-NC组和pcDNA-NPPA-AS1+miR-372-3p组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证lncRNA NPPA-AS1和miR-372-3p的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)比较细胞活力;蛋白质印迹法比较蛋白表达;流式细胞术比较凋亡情况。结果结直肠癌的lncRNA NPPA-AS1对比癌旁组织表达更低,但miR-372-3p对比癌旁组织表达更高(P<0.05);过表达lncRNA NPPA-AS1显著降低SW480细胞的活力,使细胞的凋亡率增加,并降低了B淋巴细胞瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2;Bcl-2)和cyclinD1的表达,提高了B淋巴细胞瘤/白血病2相关X蛋白(BCL2-associated x protein;Bax)和p21的表达(P<0.05)。lncRNA NPPA-AS1靶向调控miR-372-3p表达。抑制miR-372-3p显著降低SW480细胞的活力,使细胞的凋亡率增加,并降低了Bcl-2和cyclinD1的表达,提高了Bax和p21的表达(P<0.05)。上调miR-372-3p表达逆转了过表达lncRNA NPPA-AS1对SW480细胞的影响。结论过表达lncRNA NPPA-AS1通过靶向下调miR-372-3p表达调控结直肠癌SW480细胞的增殖及凋亡。