miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化对肺癌细胞的影响

目的:探究miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)M2极化对肺癌细胞的影响。方法:利用佛波酯及IL-4诱导M2-TAMs分化;将miR-NC和miR-373分别转染M0/M2-TAMs并检测M2-TAMs特征性基因mRNA和miR-373水平;将M0/M2-TAMs与A549、H1299细胞共培养;CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-373与JAK3的调控关系;RT-qPCR检测细胞JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、MMP-2/9、p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6水平。30只裸鼠尾静脉注射已转染慢病毒的A549细胞悬液;检测裸鼠肺组织病理变化;RT-qPCR检测肺组织JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测CD31、VEGFA、M2-TAMs特征性基因及pJAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平。结果:成功诱导M2-TAMs中CD206及IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA表达增加;与M2+miR-NC组相比,M2+miR-373组IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA和Ki67、MMP-2/9蛋白表达明显降低,A549、H1299细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05);JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-373组裸鼠肺部病理损伤明显缓解;M2-TAMs特征性基因蛋白水平明显降低;JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-373通过抑制JAK3/STAT6信号通路抑制TAMs向M2极化,从而抑制肺癌细胞增殖、侵袭、转移和血管生成。

MiR-373-3p促进肺腺癌细胞的侵袭转移

背景与目的肺癌位居全球癌症相关死亡率的首位,其中肿瘤转移是导致肺癌患者死亡的主要原因,研究表明mi R-373与多种肿瘤细胞的侵袭转移有密切关系。本研究旨在探讨mi R-373-3p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其对肺腺癌细胞侵袭转移能力的影响。方法利用q RTPCR法检测mi R-373-3p在NSCLC组织和肺腺癌细胞株中的表达。瞬时转染hsa-mi R-373-3p的mimics和inhibitor至肺腺癌H1299和A549细胞株中,利用Transwell小室检测转染后肺腺癌细胞侵袭转移能力的改变,Western blot检测转染后肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及MMP-14蛋白水平的改变。结果mi R-373-3p在51例NSCLC组织和5种肺腺癌细胞株中均明显高表达。在mi R-373-3p低表达的H1299细胞中过表达mi R-373-3p,细胞的侵袭转移能力明显提高,同时MMP-9及MMP-14的表达上调;在mi R-373-3p高表达的A549细胞中抑制mi R-373-3p表达,细胞的侵袭转移能力下降,并且下调MMP-9和MMP-14的表达。结论 mi R-373-3p可能通过正向调节MMP-9、MMP-14的表达而促进肺腺癌细胞的侵袭转移能力。

miR-373在老年多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床意义

目的:探讨miR-373在多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床价值。方法:RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞中miR-373的表达水平,同时采用细胞增殖实验、细胞周期与凋亡实验、荧光素酶实验和小鼠成瘤实验分析miR-373的生物学功能。结果:RT-PCR检测发现,MM患者血液样品和多发性骨髓瘤细胞系(H929、MM1S和U266)中miR-373的表达水平比正常浆细胞(对照组)明显降低(P<0.05)。与对照组相比,转染miR-373的U266和H929细胞增殖受到显著抑制(P<0.05);同时转染miR-373的H929细胞周期阻滞在G_0/G_1期并诱导其凋亡(P<0.05)。荧光素酶实验发现,miR-373可显著抑制叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达(P<0.05)。小鼠成瘤实验发现,miR-373的过表达通过降低FOXM1水平明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论:miR-373通过直接靶向FOXM1抑制MM中的肿瘤生长,对治疗MM有重要的临床意义。

多发性骨髓瘤患者骨髓组织中miR-181a和miR-373的表达及临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓组织中微小RNA-181a(miR-181a)和微小RNA-373(miR-373)的表达及临床意义。方法收集2013年1月至2018年3月收治的MM患者64例(MM组),并选取同时期进行骨髓穿刺并最后明确骨髓功能无异常的健康者64例(正常对照组)。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测两组骨髓组织中miR-181a、miR-373的表达水平,并分析两者与MM临床病理特征的关系;采用Pearson法分析miR-181a和miR-373表达的相关性。结果 MM组骨髓组织中miR-181a的表达水平为112. 68±16. 53,高于正常对照组的75. 94±10. 02,差异有统计学意义(P<0. 01); miR-373的表达水平为0. 36±0. 06,低于正常对照组的1. 12±0. 10,差异有统计学意义(P<0. 01)。MM患者骨髓组织中miR-181a和miR-373的表达呈负相关(r=-0. 928,P<0. 001)。miR-181a和miR-373表达水平与MM患者的年龄、临床分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0. 001),与性别及一般分型无关(P>0. 05)。结论 miR-181a、miR-373在MM骨髓组织中分别为高表达和低表达,两者表达存在负相关,并与临床分期、淋巴结转移和分化程度有关,可作为MM潜在的分子筛查标志物。

hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染BIU87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。

miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化

背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶原分泌中的作用。方法:(1)建立Bal b/c小鼠肝纤维化模型,Masson法测定肝组织胶原,采集小鼠血清样本,提取血清总RNA,qRT-PCR定量分析小鼠mmu-miR-291a-3p(人hsa-miR-373-3p的同源序列)水平。免疫组化检测肝组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA表达;(2)TargetScan软件预测miR-373的靶基因转化生长因子βⅡ型受体,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-373调控转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性;(3)用25,50 nmol/L miR-373 mimics转染人肝星状细胞(LX-2)过表达miR-373,并以转染随机miRNA序列做对照,采用Western blot和免疫荧光检测转化生长因子βⅡ型受体和成纤维细胞激活蛋白的蛋白表达。实验方案经江苏大学实验动物伦理委员会批准(批准号为UJS-IACUCAP-2020033127)。结果与结论:(1)健康对照组相比,肝纤维化组小鼠血清mmu-miR-291a-3p水平明显降低(P <0.001),肝组织胶原合成显著增加;(2)肝纤维化组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA共表达显著增加;(3)miR-373显著抑制了转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性(P <0.01),miR-373过表达显著抑制LX-2的转化生长因子βⅡ型受体(P <0.05)和成纤维细胞激活蛋白(P <0.01)的蛋白表达;(4)结果说明,miR-373通过调控转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化和肝组织胶原沉积。

吸烟对肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表达的影响观察

目的探究吸烟对肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表达的影响。方法选取2011年1月至2017年1月于我院就诊并确诊为肺腺癌患者86例,根据患者是否吸烟将其分为吸烟组(n=48)和非吸烟组(n=38),对比分析两组患者肺功能状态,采用电话随访方式统计两组患者生存期,检测两组患者病变组织的miR-373和BRF2表达水平,并对结果进行对比分析。结果吸烟组的肺通气功能指标RV及RV/TCL均明显高于非吸烟组(P<0.05);小气道功能指标V25、V25%、V50及V50%均明显低于非吸烟组(P<0.05);肺弥散功能指标DLCO、DLCO/VA、DLCO%及DLCO/VA%均低于非吸烟组。吸烟组生存期>12个月有8例(16.67%),非吸烟组生存期>12个月有8例(36.84%),吸烟组>12个月生存率明显低于非吸烟组(P<0.05)。吸烟组患者病变组织中的miR-373和BRF2基因表达水平均高于非吸烟组(P<0.05)。结论吸烟会影响肺腺癌患者的肺功能,会缩短肺腺癌患者的生存期,不利于患者预后,应鼓励吸烟的肺腺癌患者戒烟。

miR-373在消化系统恶性肿瘤中的研究进展

近年来,恶性肿瘤发病逐年呈整体上升趋势,在我国,消化系统恶性肿瘤的发病率及死亡率增长速度较为明显,食管癌、胃癌、肝癌、结直肠癌这四种消化系统恶性肿瘤占前十位恶性肿瘤死亡总数的40.75%[1]。随着内镜下治疗、手术、放化疗、基因靶向药物等治疗手段的不断进步.

熊果酸通过调节miR-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨熊果酸通过调节mi R-373-3p对肺癌A549细胞凋亡和迁移的影响。方法 MTT法检测熊果酸对肺癌A549细胞的毒性作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法、流式细胞术检测熊果酸作用于转染mi R-373-3p的A549细胞后对A549细胞凋亡影响;实时荧光定量PCR法分别检测熊果酸加药组和转染mi R-373-3p mimics组中A549细胞mi R-373-3p表达程度;RT-PCR和免疫印迹法检测熊果酸作用下mi R-373-3p调控的下游靶基因TXNIP m RNA及蛋白的表达;细胞划痕愈合实验检测mi R-373-3p细胞迁移能力。结果熊果酸显著降低肺癌A549细胞的生长活力(P<0.05),IC 50为60μmol/L;瞬时转染mi R-373-3p mimics可以上调A549细胞中mi R-373-3p的表达(24 h,11.367±2.120;48 h,12.167±1.108);熊果酸作用于转染mi R-373-3p mimics的A549细胞后,能够显著提高细胞中mi R-373-3p mimics的表达水平(24 h,16.787±3.109;48 h,16.980±3.106);并且mi R-373-3p mimics下游预测的目标基因TXNIP m RNA(10.757±0.79)及蛋白表达量(0.8210±0.043)均明显上升;FCM结果显示:mi R-373-3p能够促进肺癌A549细胞凋亡(46.20±5.970)。细胞转染mi R-373-3p mimics后,迁移能力明显受到抑制(P<0.001)。结论熊果酸能够通过促进肺癌A549细胞凋亡抑制其迁移,其作用机制可能是通过上调mi R-373-3p表达来完成的。

miR-373表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-373在卵巢癌的表达量及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测人卵巢表皮细胞IOSE80与人卵巢癌细胞HO8910和SKOV-3中miR-373表达量的差异。Lip2000转染法过表达miR-373,并用RT-PCR检测miR-373 mimics的转染效率。用阴性对照(NC)或miR-373 mimics转染细胞,48 h后,CCK8法检miR-373对细胞增殖的影响;PI和Annexin V双染法检测miR-373过表达对人卵巢癌细胞凋亡的影响;生物信息学预测miR-373的靶基因;Western blot检测miR-373过表达对RAD54B表达量的影响。结果与人卵巢癌表皮细胞IOSE80相比,miR-373在人卵巢癌细胞HO8910和SKOV-3中的表达量降低(P<0.01)。过表达miR-373(P<0.05,P<0.01)可以明显促进HO8910和SKOV-3细胞的增殖(P<0.01),并降低其凋亡率(P<0.001,P<0.05),miR-373过表达可以使RAD54B的表达量降低。结论miR-373在人卵巢癌细胞HO8910和SKOVE-3中呈现低表达,且miR-373可以抑制卵巢癌细胞的凋亡,促进其增殖。同时,RAD54B可能是miR-373的一个靶基因。

miR-373-3p参与去甲肾上腺素对结肠癌细胞RKO体外增殖的调控

目的确定miR-373-3p是否参与去甲肾上腺素对结肠癌细胞RKO细胞增殖的调控。方法将结肠癌细胞RKO分为处理组和对照组,处理组细胞培养于含有终浓度10μmol/L去甲肾上腺素的培养基中,对照组培养于正常培养基中,使用MTT法检测细胞增殖的差异。使用划痕实验观察细胞迁移,使用流式细胞术检测细胞周期。通过RT-PCR检测处理组细胞的miR-373-3p表达量。合成miR-373-3p的DNA抑制剂si-miR-373-3p,将其转染入细胞,观察其对RKO细胞增殖的影响。采用SPSS22.0对数据进行统计学分析,P<0.05视为有统计学差异。结果 10μmol/L去甲肾上腺素促进RKO细胞的体外增殖(P<0.05)和迁移过程。细胞周期结果显示,处理组细胞S期和G2期比例均上升。处理组细胞miR-373-3p表达量上升(P<0.05),转染si-miR-373-3p的RKO细胞增殖受到抑制(P<0.05)。对转染si-miR-373-3p的细胞,去甲肾上腺素不再促进细胞增殖。结论 miR-373-3p参与了去甲肾上腺素促进的结肠癌细胞RKO的增殖过程。

MiR-373-3p对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞体外迁移影响

目的探讨miR-373-3p是否参与对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的调控。方法采用Lipofectamine 2000将miR-373-3p agomir(agomir-373-3p)和negative control agomir(NC)转染至人VSMC,并根据转染及是否加AngⅡ将VSMC分为NC组(A组)、AngⅡ+NC组(B组)、agomir-373-3p组(C组)和AngⅡ+agomir-373-3p组(D组)。采用划痕实验观察细胞迁移的情况,采用qRT-PCR法检测VSMC中miR-373-3p以及合成表型标志物骨桥蛋白(OPN)和收缩表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达量。结果在经AngⅡ诱导的VSMC模型中,miR-373-3p的表达量随着AngⅡ浓度的增加而下调。与B组相比,D组细胞的迁移率降低(t=5.33,P<0.05)。与A组相比,C组细胞α-SMA的表达量增加,OPN的表达量减少,差异有统计学意义(t=17.06、9.64,P<0.05);与B组相比,D组细胞α-SMA的表达量增加,OPN的表达量减少,差异有统计学意义(t=14.78、5.38,P<0.05)。结论 MiR-373-3p的过表达能抑制AngⅡ诱导的VSMC迁移和表型转化。

MiR-199b-3p、miR-373、miR-548c-3p及Lin28在肺癌中表达及其意义

探讨miR-199b-3p、miR-373、miR-548c-3p与Lin28在肺癌中的表达,以及它们与临床指标的相关关系.用溶液法提取46例肺癌患者的癌组织和癌旁组织中的总RNA,Q-PCR检测基因的相对表达量.经过两独立样本t检验,比较miR-373(t=3.28,P=0.0007)、lin28(t=3.94,P=0.0016)及miR-548c-3p(t=2.98,P=0.002)在肺癌组织和癌旁组织中的表达,基因表达均有显著性差异.使用Spearman肺癌组织中RNA与免疫组织化学指标发现MiR-b199b-3p与MRP(Rs=0.40,P=0.029),miR-548c-3p和Ki167呈正相关关系(Rs=0.52,P=0.0056),miR-373与K167呈正相关关系(Rs=0.43,P=0.029),Lin28与P53呈负相关关系(Rs=-0.43,P=0.022),还与PGP呈负相关关系(Rs=-0.38,P=0.034).miR-373在肺癌患者组织中基因表达显著下调,而miR-548c-3p与Lin28基因表达呈上调,3个基因的表达与肿瘤的发生发展关系密切.

miR-373通过P2X7R影响抑郁症小鼠行为的作用机制

目的探讨miR-373对抑郁症小鼠模型抑郁样行为,小胶质细胞激活和焦亡的影响。方法采用慢性不可预知应激构建抑郁症小鼠模型。蔗糖偏好,强迫游泳,尾部悬挂和社会实验评估小鼠的抑郁样行为。免疫荧光双染小胶质细胞标志物Iba-1和小胶质细胞活化标志物OX-42以评估小鼠海马层中小胶质细胞增殖和活化状态。TUNEL试剂盒检测小胶质细胞的凋亡。荧光定量PCR检测miR-373的表达水平。蛋白质印记检测P2X7R和细胞焦亡相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-373和P2X7R的靶向关系。结果慢性不可预知应激处理的小鼠,蔗糖偏好度和社交时间显著下调,并且强迫游泳和尾部悬挂不动时间显著增加(P<0.05)。miR-373在抑郁症模型小鼠中异常高表达,且能够缓解小鼠的抑郁样行为(P<0.05)。miR-373靶向负调控小鼠海马层小胶质细胞中P2X7R的表达水平(P<0.01)。miR-373抑制小鼠海马层中小胶质细胞增殖和激活(P<0.01)。miR-373抑制小胶质细胞中Caspase-1,C-caspase-1,NLRP3,IL-1β和IL-18表达,并抑制小胶质细胞凋亡(P<0.05)。结论miR-373通过靶向抑制P2X7R的表达,从而缓解抑郁症小鼠模型的抑郁样行为,并抑制其海马层中小胶质细胞活化和焦亡。

miR-373靶向VEGFA对糖尿病视网膜病变大鼠的作用

目的:探讨miR-373靶向血管内皮生长因子A(VEGFA)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠的作用。方法:将40只大鼠随机分为对照组(n=10)和DR组(n=30),造模成功后的DR组大鼠分为模型组(n=10)、miR-373 agomir组(n=10)、agomir-NC组(n=10),右眼玻璃体腔分别注射200μL生理盐水、miR-373 agomir(200nmol)、agomir-NC(200nmol),每周1次,共处理12wk。通过RT-qPCR检测各组大鼠视网膜组织中miR-373和VEGFA mRNA表达水平,双荧光素酶实验验证miR-373与VEGFA靶向关系,Western-blot检测各组大鼠视网膜组织中VEGFA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化-丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达水平。结果:与对照组比,模型组和agomir-NC组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著下降,VEGFA mRNA、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与agomir-NC组比,miR-373 agomir组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,VEGFA mRNA及蛋白、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著下降(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实VEGFA是miR-373的靶基因。结论:miR-373通过靶向VEGFA抑制糖尿病视网膜病变,其机制可能与miR-373抑制PI3K/AKT信号通路有关。

miR-373-3p通过靶向Rab22a调节结肠癌SW480细胞增殖和转移

目的探究miR-373-3p通过靶向Rab蛋白22a(Rab22a)对结肠癌SW480细胞增殖和转移的调节作用。方法 RT-PCR检测结肠癌组织和细胞中miR-373-3p的表达。荧光素酶报告检测miR-373-3p和Rab22a相互作用关系。将SW480细胞分为空白对照组(SW480组)、阴性对照组(mimic NC组)、miR-373-3p mimic组、pLV-Rab22a组、pLV-Rab22a+miR-373-3p组,各组分别转染miR-373-3p或Rab22a重组慢病毒,RT-PCR检测miR-373-3p和Rab22a转录水平,CCK-8法检测细胞增殖水平,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测Rab22a、Ki67、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)蛋白表达。结果与正常结肠组织比较,结肠癌组织中miR-373-3p表达降低。与人正常结肠细胞NCM460比较,结肠癌细胞株miR-373-3p均降低。在荧光素酶报告实验中,与Rab22a WT+mimic NC比较,Rab22a WT+miR-373-3p mimic荧光素酶活性降低。在细胞实验中,与SW480组比较,miR-373-3p mimic组miR-373-3p表达和E-cadherin蛋白表达升高,Rab22a基因和蛋白表达、细胞增殖水平、迁移和侵袭能力、Ki67、N-cadherin蛋白表达降低,pLV-Rab22a组细胞增殖水平、迁移和侵袭能力、Rab22a、Ki67、N-cadherin蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低;与pLV-Rab22a组比较,pLV-Rab22a+miR-373-3p组细胞增殖水平、迁移和侵袭能力、Rab22a、Ki67、N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高。结论 miR-373-3p可靶向作用于Rab22a,对结肠癌SW480细胞增殖和转移起抑制作用。

miR-373靶向调控同源异型盒基因B3表达影响子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学特性的实验研究

目的探讨微小RNA(miR)-373靶向调控同源异型盒基因B3(HOXB3)表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法本研究起止时间为2018年2月至2019年6月,将体外培养的Ishikawa细胞分为抑制剂阴性对照(inhibitorNC)组(转染inhibitor-NC)、miR-373抑制剂(inhibitor)组(转染miR-373 inhibitor)、miR-373 inhibitor+siNC组(共转染miR-373 inhibitor和NC siRNA)和miR-373 inhibitor+siHOXB3组(共转染miR-373 inhibitor和HOXB3 siRNA),采用实时荧光定量PCR检测Ishikawa细胞中miR-373的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-373和HOXB3的靶向关系,采用免疫印迹法检测Ishikawa细胞中HOXB3蛋白的表达,细胞计数(CCK-8)法、Transwell实验和膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测各组细胞增殖、侵袭和凋亡能力。结果HOXB3是miR-373的靶基因。与inhibitor-NC组相比,miR-373 inhibitor组、miR-373 inhibitor+siNC组和miR-373 inhibitor+siHOXB3组细胞中miR-373表达水平[(1.00±0.11)比(0.32±0.02)/(0.36±0.03)/(0.34±0.03)]和细胞增殖活力[24 h(0.63±0.04)比(0.41±0.03)/(0.43±0.03)/(0.52±0.03);48 h(0.97±0.06)比(0.68±0.05)/(0.72±0.06)/(0.85±0.05);72 h(1.35±0.11)比(0.88±0.08)/(0.92±0.07)/(1.12±0.09)]、穿膜细胞数[(85.26±8.72)个比(37.64±2.85)个/(40.55±3.23)个/(61.38±3.64)个]均明显降低,而细胞凋亡率[(8.75±1.23)%比(25.64±3.38)%/(28.48±3.26)%/(14.25±2.02)%]和细胞中HOXB3蛋白的表达水平[(0.27±0.03)比(0.77±0.06)/(0.73±0.06)/(0.51±0.03)]均明显升高(P<0.05);且miR-373 inhibitor+siHOXB3组中各指标的变化强度明显低于miR-373 inhibitor组(P<0.05);而miR-373 inhibitor+siNC组和miR-373 inhibitor组之间无明显差异(P>0.05)。结论下调miR-373表达可通过靶向HOXB3抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡。

miR-373在人肝细胞癌中的表达及其作用

目的探讨miR-373在肝细胞癌的表达及其作用。方法 qRT-PCR法检测80例肝癌及癌旁灶中miR-373的表达;qRT-PCR法检测人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中miR-373的表达情况,选择高表达miR-373的细胞株为后续研究对象;干扰miR-373表达后,Transwell检测细胞株体外迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞内MMP2、MMP9蛋白的表达变化。结果人肝细胞癌细胞株BEL7402、HepG2、Hep3b、Huh7、SMMC7721中,HepG2细胞中miR-373的表达最高。用miR-373 inhibitor转染HepG2细胞后,细胞内miR-373表达水平明显下调(P<0.05)。转染miR-373 inhibitor后,细胞迁移和侵袭细胞数目均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-373inhibitor后,HepG2细胞内MMP2、MMP9表达下调,(P<0.05)。结论 miR-373上调MMP2、MMP9表达促进了肝细胞癌的转移,miR-373可能为临床治疗肝细胞癌提供新靶标。

miR-373在视网膜母细胞瘤Y79细胞中的表达及其抑制侵袭及迁移能力的实验研究

目的观察miR-373在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞中的表达及其对RB Y79细胞侵袭及迁移能力的影响和相关机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-373在RB细胞系RB Y79、SO-RB50和人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中的表达水平,并应用脂质体转染法将miR-373抑制物(miR-373抑制物组)和阴性对照(NC组)分别转染至Y79细胞,Transwell实验检测Y79细胞侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测Y79细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物E-Cadherin、Vimentin和N-Cadherin蛋白的表达变化。结果 qRT-PCR结果显示,RB细胞系Y79、SO-RB50中miR-373的相对表达量分别为6. 21±0. 34、5. 40±0. 38,明显高于人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中miR-373的相对表达量(1. 02±0. 04)(均为P <0. 05)。Transwell实验显示,miR-373抑制物组迁移细胞数(74±13)个,明显低于NC组(180±17)个(P <0. 05),miR-373抑制物组侵袭细胞数(51±9)个明显低于NC组(113±14)个(P <0. 05)。Western blot结果显示,miR-373抑制物组E-Cadherin蛋白的表达(0. 40±0. 08)明显高于NC组(0. 20±0. 06)(P <0. 05),Vimentin蛋白的表达(0. 17±0. 06)也明显低于NC组(0. 51±0. 10)(P <0. 05),N-Cadherin蛋白的表达(0. 12±0. 06)也明显低于NC组(0. 33±0. 08)(P <0. 05)。结论 miR-373在RB细胞中表达异常增高,降低miR-373的表达能够通过调控EMT抑制RB Y79细胞的侵袭和迁移能力,为RB的靶向治疗提供了新的潜在靶点。

lncRNA OSER1-AS1和miR-373-3p在动脉粥样硬化患者中的表达及对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(OSER1-AS1)和miR-373-3p在动脉粥样硬化(AS)患者血清、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)中的表达及其对AngⅡ诱导HASMCs增殖与迁移的影响。方法以41例体检健康者为对照,采用RT-qPCR法测定41例AS血清中OSER1-AS1、miR-373-3p表达。体外培养HASMCs,经1×10^(-7)mol/L AngⅡ干预24 h后,采用RT-qPCR法测定细胞中OSER1-AS1、miR-373-3p表达。分别转染OSER1-AS1小干扰RNA、miR-373-3p模拟物或共转染OSER1-AS1小干扰RNA与miR-373-3p抑制剂至HASMCs,再用1×10^(-7)mol/L AngⅡ干预24 h,采用CCK-8法、Transwell小室实验分别测定细胞增殖活性和迁移情况,采用Western blot法测定增殖、迁移相关蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因实验测定OSER1-AS1与miR-373-3p的靶向关系。结果AS患者血清中OSER1-AS1表达较体检健康者升高,miR-373-3p表达较体检健康者降低(P<0.05)。HASMCs经AngⅡ干预后,OSER1-AS1表达升高,miR-373-3p表达降低(P<0.05)。干扰OSER1-AS1或miR-373-3p过表达均可降低AngⅡ诱导HASMCs的增殖活性、迁移数及Ki-67、基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9蛋白表达。OSER1-AS1靶向结合并负调控miR-373-3p;下调miR-373-3p可干扰OSER1-AS1对AngⅡ诱导HASMCs增殖、迁移的影响。结论OSER1-AS1在AS患者血清、AngⅡ诱导的HASMCs中表达上调,miR-373-3p表达下调;OSER1-AS1可能通过靶向下调miR-373-3p促进AngⅡ诱导HASMCs的增殖和迁移。