CYP2C19基因多态性、miR-374b-5p与ACI患者神经功能缺损和近期预后的关系

目的探讨细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因多态性、血清miR-374b-5p水平与急性脑梗死(ACI)患者神经功能缺损和近期预后的关系。方法选取2019年1月—2022年12月郑州市第七人民医院ACI患者164例,收集所有患者的一般资料,并检测CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p相对表达量。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估ACI患者神经功能缺损程度。根据治疗15 d后的NIHSS评分将ACI患者分为预后良好组和预后不良组。采用Spearman相关分析评估miR-374b-5p与入院时NIHSS评分的相关性。采用多因素Logistic回归分析评估ACI患者近期预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p判断ACI患者近期预后的效能。结果164例ACI患者CYP2C19基因型中,GG型(野生纯合子)26例(15.86%)、GA型(突变杂合子)66例(40.24%)、AA型(突变纯合子)72例(43.90%)。A等位基因频率为64.02%,G等位基因频率为35.98%。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ^(2)=2.620,P=0.106)。GG基因型、GA基因型、AA基因型的ACI患者入院时NIHSS评分依次升高(P<0.001)。血清miR-374b-5p相对表达量与入院时NIHSS评分呈负相关(r_(s)=-0.510,P<0.001)。ACI患者预后不良发生率为19.51%(32/164)。预后不良组与预后良好组之间年龄、梗死体积、发病至就诊时间、白细胞(WBC)计数、CYP2C19基因型为AA型所占比例和血清miR-374b-5p相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。梗死体积、发病至就诊时间、WBC计数、CYP2C19基因型为AA型均是ACI患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-374b-5p相对表达量为保护因素(P=0.007)。AA基因型和血清miR-374b-5p单项检测和联合检测判断ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.631、0.730、0.802。结论CYP2C19基因多态性、血清mi R-374b-5p相对表达量均与ACI患者神经功能缺损有关,或可作为ACI患者近期预后的评估指标。

miR-374b-5p靶向调控PTEN抑制七氟醚诱导的小鼠海马神经元HT22细胞凋亡

目的 探究miR-374b-5p对七氟醚(sevoflurane,Sev)引起的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用。方法 将HT22细胞并分为6组:对照组、Sev组、miR-con+Sev组、miR-374b-5p+Sev组、miR-374b-5p+pcDNA+Sev组、miR-374b-5p+pcDNA-PTEN+Sev组。RT-qPCR检测各组miR-374b-5p和PTEN mRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组PTEN、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-374b-5p对PTEN的靶向作用,CCK8检测HT22细胞活性;流式细胞术检测HT22细胞凋亡;DCFH-DA探针检测HT22细胞ROS水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HT22细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果 与对照组比较,在Sev处理组miR-374b-5p的表达水平下降,PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-374b-5p通过与HT22细胞中PTEN mRNA的3’UTR结合而抑制PTEN的表达。与对照组比较,Sev组HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量、Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率升高,而miR-374b-5p、GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-con+Sev组比较,miR-374b-5p+Sev组的HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率降低,而miR-374b-5p、GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-374b-5p+pcDNA+Sev组比较,miR-374b-5p+pcDNA-PTEN+Sev组的HT22细胞中PTEN mRNA、PTEN、ROS、MDA含量、Cleaved caspase-3、Bax表达量和细胞凋亡率升高,而GSH含量、Bcl-2表达量和细胞存活率含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 预处理miR-374b-5p可能通过抑制PTEN抑制Sev处理HT22细胞凋亡,从而发挥对神经细胞的保护作用。

血清miR-374a、TSGF、SCCAg对早期宫颈癌淋巴结转移的诊断价值

目的探讨血清miR-374a、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)对早期宫颈癌淋巴结转移(LNM)的诊断价值。方法对收治的109例早期宫颈癌患者进行回顾性分析,根据术后病理有无LNM分为LNM组(28例)和无LNM组(81例),对可能影响宫颈癌LNM的相关因素进行单因素、Logistic回归分析,包括年龄、分化程度、FIGO分期、间质浸润深度、淋巴脉管间隙浸润(LVSI)、肿瘤直径及血清miR-374a、TSGF、SCCAg。ROC曲线评价血清miR-374a、TSGF及SCCAg诊断宫颈癌LNM的价值。结果单因素分析显示,间质浸润深度、LVSI、肿瘤直径、血清miR-374a、TSGF及SCCAg与宫颈癌LNM有关(P<0.05);年龄、分化程度、FIGO分期与宫颈癌LNM无关(P>0.05)。Logistic回归分析显示,间质浸润深度≥1/2、肿瘤直径≥2 cm、血清miR-374a、TSGF及SCCAg均是宫颈癌LNM的危险因素(P<0.05);LVSI与宫颈癌LNM无关(P>0.05)。ROC曲线显示,血清miR-374a、TSGF、SCCAg单独及三者联合诊断宫颈癌LNM的AUC分别为0.695、0.681、0.714、0.786,敏感度分别为53.57%、82.14%、78.57%、82.14%,特异度分别为90.12%、53.09%、65.43%、72.84%。结论血清miR-374a、TSGF及SCCAg是早期宫颈癌LNM的危险因素,有助于诊断早期宫颈癌LNM,且三者联合的诊断的效果更佳。

M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究

目的:探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer,PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法:在成功建立M2型巨噬细胞的基础上,抽提并鉴定其外泌体,检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证,选取miR-374a进行研究;M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养,荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况;DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验;通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因,通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证;干扰FOXO1后进行细胞功能学实验,观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果:成功建立M2细胞并抽提其外泌体,其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达;荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞,PC3细胞与M2细胞共培养后,M2细胞可通过外泌体传递miR-374a至PC3细胞内;敲低PC3和DU145细胞中miR-374a的表达量后显著降低其增殖、迁移能力并促进其凋亡,在PC3中敲低miR-374a表达后裸鼠皮下成瘤体积显著减小;Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验结果证明miR-374a可以直接结合FOXO1,抑制β-catenin入核并抑制PCa细胞EMT;挽救实验结果说明转染si-FOXO1后可逆转miR-374a对PC3和DU145细胞迁移的抑制作用。结论:M2细胞可通过外泌体传递miR-374a进入PCa细胞靶向FOXO1抑制其恶性进展。

miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性分析

目的 研究miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性分析。方法 选择2020年3月—2022年3月于本院行健康体检的健康志愿者50名作为健康组,并将同期收治的102例2型糖尿病患者作为疾病组,采用荧光定量PCR法检测所有研究对象miR-374b、miR-765、miR-126表达量。对比疾病组、健康组各指标表达水平、各指标在疾病组疾病不同时期、不同严重程度中的表达,并分析miR-374b、miR-765、miR-126在2型糖尿病变化中的相关性。结果 在miR-374b、miR-765水平上,疾病组高于健康组,在miR-126水平上,疾病组低于健康组(P<0.05);随着疾病的加重,患者miR-374b、miR-765水平逐渐升高,重度>中度>轻度,miR-126水平逐渐下降,重度<中度<轻度(P<0.05);相关性分析发现miR-374b与miR-765均为正相关;miR-765与miR-126为负相关,miR-374b与miR-126均负相关,(均P<0.05)。结论 miR-126在疾病中均为低表达,miR-374b、miR-765在疾病中均为高表达,检测miR-374b、miR-765、miR-126水平有助于评价2型糖尿病患者疾病严重程度。

探究miR-374a-5p与急性ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的关系

目的探究与分析miR-374a-5p与急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后6个月内支架内血栓形成的关系。方法回顾性分析晋城市人民医院2020年4月至2022年3月收治的实施PCI治疗的急性ST段抬高型心肌梗死患者138例的临床资料,按照术后6个月是否出现了支架内血栓形成分为形成组(27例)及未形成组(111例),查阅患者的临床基线资料以及实验室检查指标等,采用单因素及多因素logistic回归分析ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-374a-5p在判断ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的价值。结果形成组性别、年龄、体质量指数(BMI)、高血压病史、高血脂病史、梗死部位、急诊PCI时间、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、心率(HR)及左心室射血分数(LVEF)与未形成组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。与未形成组相比,形成组糖尿病病史比例、多支架置入比例、血清miR-374a-5p水平较高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC下面积为0.699,标准误差为0.049,显著性为<0.001,渐进95%置信区间为0.604~0.795,该组患者实施PCI后6个月内发生支架内血栓形成的miR-374a-5p切点为1.115,提示miR-374a-5p具有较好的诊断价值。行logistic回归分析发现,糖尿病病史、多支架置入以及miR-374a-5p可作为ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的高危因素(均P<0.05)。结论糖尿病病史、多支架置入以及miR-374a-5p可作为ST段抬高型心肌梗死患者PCI后6个月内支架内血栓形成的高危因素。检测miR-374a-5p水平可辅助评估ST段抬高型心肌梗死患者的预后。

miR-374促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的机制

目的研究微小RNA(miR)-374通过调控白细胞介素(IL)-10对急性心肌梗死(AMI)诱导心肌纤维化的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AMI患者和健康对照组血清中miR-374的表达水平。构建AMI小鼠模型,随机分为假手术组(n=6)、AMI组(n=12)、AMI+miR-374组(n=12,AMI小鼠心肌注射miR-374)。采用qRT-PCR检测假手术组和AMI组心肌组织中miR-374的表达水平及各组Ⅰ型胶原(COL1)A1和Ⅲ型胶原(COL3)A1 mRNA表达水平。检测各组心脏功能,记录左室射血分数(LVEF)、左室长轴缩短分数(FS)、左室舒张末期内径(LVDd)和左室收缩末期内径(LVDs)。比色法检测各组半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3和Caspase8活性。Massontrichrome染色检测各组心肌纤维化程度。miR靶基因数据库预测IL-10为miR-374的潜在靶基因并采用荧光素酶报告基因法验证。采用qRT-PCR检测转染miR-374 mimics对IL-10 mRNA表达的影响。采用Western印迹检测AMI组和AMI+miR-374组心肌组织中IL-10、P65和P50蛋白表达。结果AMI患者血清中miR-374的表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。AMI组心肌组织中miR-374表达水平明显高于假手术组(P<0.001)。相比AMI组,AMI+miR-374组LVEF和FS明显降低、LVDd和LVDs明显升高、Caspase3和Caspase8活性明显升高、COL1A1和COL3A1 mRNA表达水平明显升高、心肌纤维化程度增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。miR-374可靶向调控IL-10并抑制其mRNA表达。相比AMI组,AMI+miR-374组心肌组织中IL-10蛋白表达明显降低,而P65和P50蛋白磷酸化明显增加(P<0.05)。结论miR-374可能通过抑制IL-10的表达显著促进心肌梗死诱导心肌纤维化的发展。

miR-374a在糖尿病肾病患者血清中的表达水平及其意义

目的探讨miR-374a在糖尿病肾病(DN)患者外周血中的表达及对炎症的调控机制。方法选择2017年1月-2020年1月河北省保定市第一中心医院收治的44例T2D患者为研究对象(T2D组)。根据是否并发DN,将患者分为无DN组(n=27)及DN组(n=17)。根据疾病严重程度,将DN组患者分为大量蛋白尿组(n=10)和微量蛋白尿组(n=7)。选择同期在本院治疗的13例合并视网膜病变且白蛋白尿检查正常的T2D患者为阳性对照(阳性对照组),以及同期在我院行健康体检的24名非糖尿病健康人为阴性对照组,比较各组血清miR-374a表达水平,检测并分析DN组和无DN组多形核白细胞(PMN)滚动速度和黏附性、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平。结果T2D组与阴性对照组的血清miR-374a水平分别为(1.28±0.24)、(1.00±0.17),差异无统计学意义(P>0.05)。与无DN组相比,DN组血清中miR-374a水平较低(P<0.01),而阳性对照组的miR-374a水平高于DN组(P<0.01)。大量蛋白尿组miR-374a水平低于无DN组(P<0.01)及微量蛋白尿组(P<0.05)。Logistic多因素分析结果显示,超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、空腹C肽及血清总胆固醇是miR-374a表达水平的独立影响因素(P<0.05)。与无DN组相比,DN组的PMN滚动速度较低(P<0.05),黏附性较高(P<0.01)。miR-374a与PMN滚动速度呈正相关(r=0.625;P<0.01),而与PMN黏附性呈负相关(r=-0.457;P<0.05)。与无DN组比较,DN组TNF-α、IL-6、ICAM-1水平较高(P<0.05)。miR-374a与TNF-α(r=-0.592,P<0.05)、IL-6(r=-0.491,P<0.05)和ICAM-1水平(r=-0.687,P<0.05)呈负相关。结论DN患者血清中miR-374a高表达,可能通过影响机体炎症反应参与DN的发生和发展。

lncRNA BLACAT1通过靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录本(BLACAT)1靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)耐药性的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、与其对应的癌旁组织、卵巢癌细胞SKOV3及卵巢癌Taxol耐药细胞SKOV3/Taxol中BLACAT1和miR-374b-5p表达水平。采用不同浓度Taxol处理SKOV3和SKOV3/Taxol细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC50。将si-BLACAT1和miR-374b-5p mimics分别转染SKOV3/Taxol细胞,经Taxol干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证BLACAT1和miR-374b-5p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低;与SKOV3细胞相比,SKOV3/Taxol细胞中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低(P<0.05)。SKOV3/Taxol细胞的IC50显著高于SKOV3细胞(P<0.05)。沉默BLACAT1或过表达miR-374b-5p均可明显抑制SKOV3/Taxol细胞CyclinD1和Bcl-2表达,明显促进p21和Bax表达,明显促进细胞凋亡(P<0.05)。BLACAT1可靶向负性调控miR-374b-5p表达。干扰miR-374b-5p表达可逆转沉默BLACAT1对SKOV3/Taxol细胞Taxol耐药性的影响。结论沉默BLACAT1通过上调miR-374b-5p表达,抑制SKOV3/Taxol细胞增殖,促进细胞凋亡,从而提高卵巢癌耐药细胞SKOV3/Taxol细胞对Taxol敏感性。

miR-374-5p调控微环境间质干细胞促进胃癌增殖与迁移

目的探讨mi R-374-5p调控人胃组织来源间质干细胞(MSCs)体外促进胃癌细胞增殖和迁移的作用。方法体外分离培养获得人胃癌组织来源间质干细胞(GC-MSC)和配对的癌旁组织来源间质干细胞(GCN-MSC);体外采用GCN-MSC和GC-MSC培养上清液处理胃癌细胞,平板克隆实验检测胃癌细胞增殖能力,划痕实验检测胃癌细胞迁移能力;采用mi R-374-5p模拟物和抑制剂分别过表达和抑制GCN-MSC及GC-MSC中mi R-374-5p的表达水平,收集转染后MSC的培养上清,体外处理胃癌细胞,观察胃癌细胞增殖和迁移能力的改变。结果 GC-MSC培养上清处理组形成的单细胞集落数目[(112±7)个]多于GCN-MSC组[(48±6)个],细胞间距[(6.5±0.5)cm]小于GCN-MSC组[(15±1)cm],可明显促进胃癌增殖(t=12.02,P<0.01)和迁移(t=13.17,P<0.01)。GCN-MSC过表达mi R-374-5p后,其培养上清可增加单细胞集落形成数目[(115±12.1)个],缩小细胞间距[(7.83±1.08)cm],促进胃癌增殖(t=9.31,P<0.01)和迁移(t=4.88,P<0.01)。抑制剂组中培养上清处理组单细胞集落数目[(60±10.2)个]减少,细胞间距[(12.17±1.47)cm]增加,mi R-374-5p抑制剂可逆转GC-MSC促进胃癌增殖(t=5.47,P<0.01)和迁移(t=4.95,P<0.01)能力。结论 mi R-374-5p是调控微环境MSC促进胃癌增殖与迁移的重要分子。

miR-374过表达增强人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的:观察miR-374过表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞docetaxel(多西他赛)耐药性的影响。方法:qPCR检测miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374和对照细胞MDA-MB-231-Cherry中miR-374的相对含量;采用不同浓度的多西他赛处理细胞7 2小时后,MTT检测细胞的活性。在终浓度为3.2 nmol/L的多西他赛处理下,用平板克隆实验检测MDA-MB-231-Cherry和MDA-MB-231-miR-374细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:与MDA-MB-231-Cherry细胞相比,miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374中miR-374的相对表达量明显增高;MDA-MB-231-miR-374细胞的耐药性和克隆形成能力明显增强(P<0.05)。细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,G2/M期细胞增加。结论:miR-374过表达可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231对多西他赛的耐药性。

LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05),LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05)。与NC组比较,HG组HMECs中LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-NC+HG组比较,si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。与miR-NC+HG组比较,miR-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。miR-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过促进miR-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

2型糖尿病患者血清miR-374b的表达及其潜在机制

目的:研究血清miR-374b作为2型糖尿病患者(type 2 diabetes mellitus,T2DM)潜在诊断指标的可能性,并探究miR-374b在T2DM发病过程中潜在的分子机制。方法:运用qRT-PCR技术,检测30例T2DM患者及30例健康对照血清中miR-374b表达水平,测定相关生化指标,并且通过逻辑回归分析两组人群血清miR-374b对T2DM的辅助诊断价值。并且将miR-374b mimics转染进胰岛β细胞株MIN-6中,通过qRT-PCR检测miR-374b对促凋亡基因Bax和抑凋亡基因Bcl-2的mRNA水平的影响。结果:qRT-PCR分析结果显示:与健康对照组相比,miR-374b在T2DM患者的血清中水平显著升高(P<0.01)。进一步逻辑回归分析结果显示在血清中miR-374b的表达水平是T2DM独立影响因素。细胞转染实验结果显示:miR-374b能显著促进促凋亡基因Bax的mRNA表达并且抑制抑凋亡基因Bcl-2的mRNA表达。结论:血清miR-374b高表达是T2DM患者潜在的非侵入性辅助诊断标志物及独立危险因素。MiR-374b表达量升高会导致胰岛β细胞凋亡。

miR-374b及其靶基因Myf6调控成肌细胞增殖分化的研究

本实验旨在研究miR-374b及其靶基因Myf6调控肌细胞增殖分化的作用机制。首先采集70日龄胎羊,培养成肌细胞并诱导分化成肌管,通过荧光定量PCR测定诱导分化时期(0、24、72、120 h)miR-374b、Myf6基因以及成肌细胞增殖标志基因MyoD和分化标志基因MyoG、MyHC在mRNA水平的表达量;通过转染miR-374b过表达载体(mimics)及抑制载体(inhibitor),研究各基因在细胞中mRNA水平的表达规律;采用蛋白免疫印迹技术检测Myf6基因在细胞中蛋白水平表达变化规律。结果表明:细胞在分化第72、120小时出现大量肌管,诱导分化成功;miR-374b的表达趋势为先上升后下降,细胞增殖标志基因MyoD在细胞增殖期(0 h)表达量较高;分化标志基因MyHC、MyoG及Myf6基因在细胞增殖期表达量较低,进入分化阶段后表达量极显著上调;转染miR-374b过表达载体(mimics)后,miR-374b表达量极显著高于阴性对照组,而Myf6基因、MyHC基因表达量极显著低于阴性对照组;Myf6基因蛋白表达量极显著低于阴性对照组;转染miR-374b抑制载体(inhibitor)后,miR-374b表达量极显著低于阴性对照组,而Myf6、MyHC、MyoD基因表达量极显著高于阴性对照组;Myf6基因蛋白表达量极显著高于阴性对照组;MyoG基因表达量显著低于阴性对照组。上述结果表明,miR-374b可能通过靶向Myf6基因抑制绵羊成肌细胞分化。

miR-374b-5p靶向调控ING1表达及对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的研究miR-374b-5p在乳腺癌组织中的表达,探讨miR-374b-5p对乳腺癌细胞增殖、侵袭、转移的影响和对生长抑制因子1(ING1)的靶向调控作用。方法检测miR-374b-5p在50例乳腺癌组织和癌旁组织及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、HCC1937和正常乳腺细胞系MCF 10A中的表达水平。选取miR-374b-5p表达水平最高的乳腺癌细胞和正常乳腺细胞,转染miR-374b-5p抑制剂(miR-374b-5p inhibitor),转染48 h后检测2组的miR-374b-5p表达水平,检测细胞增殖率、细胞侵袭和转移能力。研究miR-374b-5p对ING1基因的靶向作用;miR-374b-5p模拟物(miR-374b-5p mimic)对ING1 mRNA表达影响。结果乳腺癌组织中miR-374b-5p表达高于癌旁组织(P<0.05)。miR-374b-5p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、HCC1937的表达高于其在MCF 10A细胞中的表达水平(P<0.05);选取表达水平最高MCF-7细胞用于后续实验。转染48 h,miR-374b-5p inhibitor组miR-374b-5p水平低于对照组(P<0.05)。miR-374b-5p Inhibitor组的细胞增殖率、穿膜细胞数低于对照组(P<0.05);ING1为miR-374b-5p的靶基因,miR-374b-5p mimic组ING1 mRNA的表达减少(P<0.05)。结论miR-374b-5p在乳腺癌组织和细胞系中均高表达,miR-374b-5p可能通过负调控ING1抑制乳腺癌的侵袭和转移。

尿液miR-374b表达水平与IgA肾病病情相关性初步研究

目的:观察尿标本miR-374b表达水平与IgA肾病(IgAN)病情相关性。方法:收集2016年01月~2016年10月我科住院病人,且首次经肾活检证实为Ig AN40例(少量蛋白尿(<1 g/d)肾脏病理高积分IgAN、少量蛋白尿(<1 g/d)肾脏病理低积分IgAN、中等量蛋白尿(1~3.5 g/d)IgAN、大量蛋白尿(>3.5 g/d)IgAN各10例)、轻微肾小球病变、膜增生性肾小球肾炎I型、局灶节段性肾小球硬化、过敏性紫癜性肾炎及狼疮性肾炎各10例,我院体检中心正常健康对照组25例,收集上述各组尿液,采用RT-qPCR检测上述各组miR-374b表达水平,并分析miRNA-374b表达水平与肾脏病理Haas分级及尿蛋白的相关性。结果:IgA肾病患者miR-374b表达水平高于其他类型肾小球肾炎及健康对照组(P<0.000 1),肾脏病理高积分少量蛋白尿IgAN患者miR-374b表达水平显著升高(P<0.01),miR-374b表达水平与患者尿蛋白水平及肾脏病理损伤程度正相关(r^2=0.89,P<0.01)。结论:尿液miR-374b表达水平与Ig A肾病病情呈正相关,为少量蛋白尿Ig A肾病的早期诊断及治疗提供新的思路。

DLEU2下调miR-374a-5p对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨DLEU2对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2、BEL-7402和正常肝细胞HL-7702中DLEU2和miR-374a-5p的表达水平;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-374a-5p组(转染miR-374a-5pmimics)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-DLEU2组(转染pcDNA3.1-DLEU2)、si-NC组(转染si-NC)、si-DLEU2组(转染si-DLEU2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-374a-5p组(转染anti-miR-374a-5p)、miR-NC+WT-DLEU2组(共转染miR-NC和WT-DLEU2)、miR-NC+MUT-DLEU2组(共转染miR-NC和MUT-DLEU2)、miR-374a-5p+WT-DLEU2组(共转染miR-374a-5p和WT-DLEU2)、miR-374a-5p+MUT-DLEU2组(共转染miR-374a-5p和MUT-DLEU2)、pcDNA3.1-DLEU2+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-DLEU2和miR-NC)、pcDNA3.1-DLEU2+miR-374a-5p组(共转染pcDNA3.1-DLEU2和miR-374a-5p)均用脂质体法转染至HepG2细胞;采用MTT法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞HepG2、BEL-7402中DLEU2 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05);过表达DLEU2、抑制表达miR-374a-5p均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制Bcl-2、N-cadherin蛋白的表达,促进Bax、E-cadherin蛋白的表达。DLEU2靶向调控miR-374a-5p的表达。过表达miR-374a-5p能逆转DLEU2对肝癌细胞HepG2增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。结论长链非编码RNA DLEU2可抑制肝癌细胞HepG2的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与靶向miR-374a-5p基因有关,将为肝癌的预防和治疗提供新靶点。

寿胎丸靶向miR-374c-5p/ATG12信号轴减轻滋养细胞自噬治疗原因不明复发性自然流产

目的:探讨寿胎丸调控miR-374c-5p/ATG12信号轴减轻滋养细胞自噬治疗原因不明复发性自然流产(URSA的作用与机制。方法:收集正常早孕妇女(NP)和URSA患者绒毛组织各30例,Western blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及ATG12蛋白表达;qRT-PCR检测ATG12 mRNA及miR-374c-5p表达。调控HTR-8/SVneo细胞miR-374c-5p表达,观察其对ATG12表达及细胞自噬的影响。体外观察寿胎丸含药血清对HTR-8/SVneo细胞miR-374c-5p、ATG12表达及自噬的影响;建立URSA小鼠模型,随机分为对照组、寿胎丸组、寿胎丸+INC组及寿胎丸+miR-374c-5p inhibitor组,观察各组胚胎吸收率,检测胎盘组织miR-374c-5p、ATG12及自噬相关蛋白表达。结果:与NP组相比,URSA患者绒毛组织LC3Ⅱ/Ⅰ比值及ATG12表达显著升高,P62表达显著降低,miR-374c-5p表达显著降低且与ATG12呈显著负相关。上调miR-374c-5p表达可显著降低ATG12表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值,提高P62蛋白表达;下调miR-374c-5p表达作用相反。双荧光素酶报告基因证实miR-374c-5p可与ATG12 mRNA 3'UTR直接结合。寿胎丸含药血清作用后,HTR-8/SVneo细胞miR-374c-5p及P62表达显著升高,ATG12及LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著下降。与对照组相比,寿胎丸组小鼠胚胎吸收率明显降低,胎盘组织miR-374c-5p及P62表达显著升高,ATG12表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著下降;miR-374c-5p inhibitor可拮抗寿胎丸的妊娠保护作用。结论:miR-374c-5p表达降低可促进ATG12介导的滋养细胞自噬参与URSA发生过程,寿胎丸可靶向调节miR-374c-5p/ATG12信号轴减轻滋养细胞自噬进而治疗URSA。

miR-374b与Myf6在绵羊不同生长时期骨骼肌中表达规律的研究

为探讨miR-374b及其靶基因Myf6调控肉羊肌肉生长发育的分子机制,本实验运用qRT-PCR对miR-374b、Myf6在南非肉用美利奴羊4个不同生长时期(胎龄90 d、胎龄120 d、初生期、出生后60 d)背最长肌和股二头肌mRNA水平的表达规律进行研究;对4个不同生长时期的背最长肌及股二头肌进行HE染色,通过Image J软件分析计算得出不同部位的单根肌纤维横截面积,对miR-374b、Myf6的mRNA表达量与单根肌纤维横截面积变化进行相关性Person检验。结果显示:南非肉用美利奴羊4个不同生长时期,背最长肌中miR-374b、Myf6基因mRNA相对表达量总体呈下降趋势;在股二头肌中miR-374b与Myf6 mRNA表达变化趋势相反;背最长肌和股二头肌单根肌纤维横截面积随月龄增加均呈极显著增长,肌纤维横截面积均表现为股二头肌>背最长肌;在背最长肌中miR-374b表达量与单根肌纤维横截面积变化呈极显著负相关(r=-0.941,P<0.01),Myf6表达量与单根肌纤维横截面积变化呈显著负相关(r=-0.625,P<0.05);在股二头肌中miR-374b表达量与单根肌纤维横截面积变化呈显著负相关(r=-0.677,P<0.05),Myf6表达量与单根肌纤维横截面积变化无显著性相关关系。综上推测,miR-374b密切调控动物肌肉生长,对绵羊骨骼肌生长具有一定的抑制作用。