上调miR-378b抑制ALX4甲基化、抑制甲状腺癌细胞上皮-间质转化、侵袭和迁移

目的 探讨miR-378b通过ALX4调节甲状腺癌细胞的上皮-间质转化以及侵袭和迁移能力。方法 MSP法检测甲状腺癌细胞ALX4基因甲基化状态,用去甲基化药物5-aza-dc处理甲状腺癌细胞后,通过MSP法、RT-PCR和Western blot探究ALX4表达与启动子甲基化的关系;将miR-378b mimics/inhibitors转染甲状腺癌细胞后,通过MSP法检测miR-378b对ALX4甲基化的影响,通过RT-PCR、Western blot检测miR-378b对ALX4以及上皮-间质转化相关因子HMGA1、N-cadherin、Vimentin表达的影响,通过TranswellTM实验检测甲状腺癌细胞的侵袭迁移情况;荧光素酶活性分析实验验证ALX4是miR-378b的作用靶点;pcDNA3.1-ALX4质粒过表达甲状腺癌细胞后,检测ALX4对细胞上皮-间质转化以及侵袭迁移能力的影响。结果 与正常的甲状腺细胞比较,甲状腺癌细胞中ALX4基因发生了甲基化,导致ALX4表达受抑制;miR-378b mimics转染甲状腺癌细胞后,抑制ALX4甲基化发生,促进ALX4表达,抑制甲状腺癌细胞上皮-间质转化相关因子HMGA1、N-cadherin、Vimentin的表达,抑制细胞的侵袭迁移能力;miR-378b靶向作用ALX4基因的3′非翻译区(3′UTR);过表达pcDNA3.1-ALX4后,抑制HMGA1、N-cadherin、Vimentin的表达,抑制细胞侵袭迁移能力。结论 miR-378b通过抑制ALX4甲基化的发生从而抑制甲状腺癌细胞上皮-间质的转化以及细胞的侵袭和迁移能力。

外周血miR-155和miR-378b表达水平与女性生殖道沙眼衣原体感染的相关性分析

目的探讨外周血miR-155、miR-378b与女性生殖道沙眼衣原体(GCT)感染的相关性。方法收集2021年1月-2023年1月于昆明市延安医院生殖遗传科就诊的女性GCT感染患者82例为观察组(感染GCT组),选取同期进行检查的未感染GCT女性92人为对照组(未感染GCT组)。比较两组外周血miR-155、miR-378b、Th1/Th2水平及Th1、Th2相关细胞因子水平;Pearson法分析女性GCT感染患者外周血miR-155、miR-378b水平与各指标的相关性;Logistic回归分析发生GCT感染的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血miR-155、miR-378b对GCT感染的预测价值。结果感染GCT组患者和配偶/男友一起居住(65.85%vs.48.91%)、白细胞计数>15×109/L(60.98%vs.32.61%)、阴道清洁度>Ⅱ级(68.29%vs.43.48%)所占比例以及外周血miR-155[(1.51±0.48)vs.(1.02±0.11)]、miR-378b[(1.48±0.49)vs.(1.04±0.12)]、Th2细胞比例[(2.08±0.61)%vs.(1.31±0.35)%]、血清IL-4[(34.17±10.68)ng/mL vs.(23.82±7.53)ng/mL]、IL-10[(36.74±10.11)ng/mL vs.(25.63±5.61)ng/mL]、外周血GATA3[(1.42±0.45)vs.(1.02±0.06)]水平显著高于未感染GCT组(χ^(2)/t=5.074、14.046、10.794、9.518、8.340、10.348、7.448、9.089、7.984,P均<0.05);乳酸杆菌阳性率、pH=3.8~4.5所占比例以及Th1细胞比例、Th1/Th2水平、血清IL-2、IFN-γ、外周血T-bet水平显著低于未感染GCT组(χ^(2)/t=12.142、10.017、11.344、20.390、12.027、8.455、12.583,P均<0.05);GCT感染患者外周血miR-155与Th1/Th2、IL-2、IFN-γ、T-bet水平均成负相关(r=-0.554、-0.437、-0.510、-0.493、P均<0.05),与IL-4、IL-10、GATA3水平均成正相关(r=0.462、0.524、0.442,P均<0.05);外周血miR-378b与Th1/Th2、IL-2、IFN-γ、T-bet水平均成负相关(r=-0.548、-0.412、-0.496、-0.470,P均<0.05),与IL-4、IL-10、GATA3水平均成正相关(r=0.433、0.505、0.437,P均<0.05)。miR-155、miR-378b均为发生GCT感染的危险因素(P均<0.05);外周血miR-155、miR-378b联合诊断GCT感染的曲线下面积为0.923,优于各自单独诊断(Z_(二者联合vs.miR-155)=2.249、Z_(二者联合vs.miR-378b)=3.036,P均<0.05)。结论女性GCT感染患者外周血miR-155、miR-378b水平升高,可通过调节Th1/Th2平衡介导免疫应答反应,与女性GCT感染的发生发展密切相关,且二者联合诊断GCT感染具有较高效能。

甲基阿魏酸通过microRNA-378b介导CaMKK2-AMPK通路改善乙醇诱导的L02细胞脂肪变性

酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD),随着其发病率和病死率的不断上升,已严重且广泛地影响着全世界人民的健康。甲基阿魏酸(methyl ferulic acid, MFA)在前期已被证实可通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)信号显著抑制乙醇诱导的L02细胞内脂质生成,但深层作用机制尚不清楚。该研究旨在现有基础上,进一步阐明MFA可通过microRNA-378b(miR-378b)介导钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2,CaMKK2)-AMPK信号通路改善乙醇诱导的L02细胞脂质积累的机制。通过100 mmol·L^(-1)乙醇诱导L02细胞48 h建立体外ALD模型,并给予不同浓度(100、50、25μmol·L^(-1))的MFA处理。采用电穿孔法将miR-378b质粒(含过表达质粒-miR-378b mimics、沉默质粒-miR-378b inhibitor及各自的阴性对照-miR-378b NCs)转染进L02肝细胞以上调或下调细胞中miR-378b水平。采用市售诊断试剂盒和全自动生化分析仪检测细胞中胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)水平。采用定量实时聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测L02细胞中miR-378b的表达水平,采用PCR检测CaMKK2 mRNA水平,采用Western blot检测脂质代谢过程中参与脂质合成、分解和转运的相关因子的蛋白表达。结果显示乙醇能显著诱导细胞内TG、TC水平的上升,而MFA则能显著降低TG、TC水平。乙醇使miR-378b的水平急剧上调,而MFA有效地抑制了miR-378b水平。miR-378b过表达刺激了乙醇诱导的L02细胞中的脂质积累,miR-378b沉默改善了乙醇诱导的脂质沉积,而MFA通过降低miR-378b来激活CaMKK2-AMPK信号通路,调节脂质合成、分解与转运,从而改善L02细胞内脂代谢紊乱。实验结果表明,MFA通过miR-378b调控CaMKK2-AMPK通路改善L02细胞内脂质沉积。