circ-RBM33靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移

目的:探究circ-RBM33能否靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭。方法:qRT-PCR检测CNE1和HNEpC细胞中circ-RBM33、miR-383-3p表达。将CNE1细胞随机分为si-NC组、si-RBM33组、miR-NC组、miR-383-3p组和si-RBM33+anti-miR-383-3p组。分别检测细胞增殖(CCK-8法)、侵袭(Transwell法)和迁移(划痕实验)及细胞中CKS1B蛋白表达(蛋白质印迹法);荧光素酶活性实验检测circ-RBM33和miR-383-3p/CKS1B的靶向关系。结果:人鼻咽癌细胞CNE1中circ-RBM33相对表达量高于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,miR-383-3p相对表达量低于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(P<0.05)。si-RBM33组CNE1细胞中circ-RBM3相对表达量、细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于si-NC组(P<0.05);si-RBM33+anti-miR-383-3p组CNE1细胞存活率、细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均高于si-RBM33组(P<0.05)。miR-383-3p组CNE1细胞中miR-383-3p相对表达量明显增加,细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于miR-NC组(P<0.05)。转染WT-circ-RBM33/CKS1B时miR-383-3p组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.0001)。结论:敲减circ-RBM33可能通过上调miR-383-3p表达,进而抑制CKS1B表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-383-5p调控MAL2表达影响三阴性乳腺癌肿瘤细胞侵袭及转移机制的研究

目的 探讨微小RNA-383-5p(miR-383-5p)是否可靶向T细胞分化蛋白2(MAL2)调控三阴性乳腺癌(TNBC)肿瘤细胞侵袭及转移。方法 RT-qPCR技术检测TNBC细胞系(MDA-MB-468、MDA-MB-453、BT-549)和人永生化乳腺上皮细胞系(MCF-10A)中miR-383-5p表达水平;MDA-MB-453细胞随机分为对照组、miR-383-5p NC组、miR-383-5p mimics组,转染48 h后,划痕愈合实验评估细胞迁移能力,Transwell实验评估细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-5p与MAL2的靶向关系;RT-qPCR技术检测细胞中miR-383-5p和MAL2 mRNA表达水平;Western blotting法检测MAL2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)相对表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MDA-MB-468、BT-549和MDA-MB-453细胞中miR-383-5p相对表达量均降低(P <0.05),其中MDA-MB-453细胞中miR-383-5p相对表达水平最低(P<0.05);对照组与miR-383-5p NC组间差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,miR-383-5p mimics组细胞划痕愈合率、细胞侵袭数、MAL2 mRNA和蛋白相对表达水平、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达水平降低(P<0.05),miR-383-5p相对表达水平及E-cadherin蛋白相对表达水平升高(P<0.05);经生物信息学分析,MAL2被预测为miR-383-5p的潜在靶基因。结论 miR-383-5p可靶向下调MAL2表达进而抑制TNBC肿瘤细胞的侵袭及转移。

miR-383-5p、KIF3B mRNA在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性

目的 探讨皮肤鳞状细胞癌内miR-383-5p、驱动蛋白家族成员3B(KIF3B)mRNA的表达及临床意义。方法 选取73例皮肤鳞状细胞癌患者作为研究对象,均行手术采集肿瘤标本及癌旁标本。比较肿瘤组织及癌旁组织内miR-383-5p、KIF3B mRNA表达水平,并分析其与病理特征间的关系。结果 肿瘤组织内miR-383-5p表达量低于癌旁组织,KIF3B mRNA表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移及侵袭程度深部患者miR-383-5p表达低于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结未转移及侵袭程度浅表患者,KIF3B mRNA表达高于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结未转移及侵袭程度浅表患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-383-5p在皮肤鳞状细胞癌内呈低表达,KIF3B mRNA呈高表达,两者均与肿瘤分期、淋巴结转移及侵袭程度有关,共同参与肿瘤发展,可为临床诊治提供重要参考。

血清Wnt2和miR-383在青少年抑郁症中的检测价值

目的观察血清无翅型MMTV整合位点家族成员2(Wnt2)、微小RNA-383(miR-383)在青少年抑郁症中的表达与检测价值。方法选取2020年6月~2022年1月浙江省绍兴市第七人民医院就诊后接受治疗的96例青少年抑郁症患者为病例组,选取同期体检健康青少年102例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清中miR-383表达水平,采用酶联免疫吸附法检测Wnt2表达水平;ROC曲线分析血清Wnt2、miR-383表达水平对青少年抑郁症的诊断价值。结果病例组血清miR-383表达水平及非双亲抚养、有精神疾病家族史、有被校园暴力史患者比例高于对照组,Wnt2表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Wnt2、miR-383单独及两者联合诊断青少年抑郁症的AUC分别为0.815、0.835、0.914。结论青少年抑郁症患者血清Wnt2表达水平异常降低,miR-383表达水平异常升高,两者联合可对青少年抑郁症进行有效诊断。

miR-383靶向Notch1对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的影响

目的分析miR-383和Notch1在结肠癌中的作用及机制。方法选择2017年4月至2020年3月在河北北方学院附属第一医院经病理检查确诊为结肠癌的74例患者,收集其经手术切除的肿瘤组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>3 cm)。采用TargetScan预测miR-383的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验、逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)验证这一预测。采用免疫组织化学法、Western Blot和qRT-PCR检测Notch1在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平。分别在结肠癌HCT116细胞中转染阴性对照(NC)、miR-383模拟物、Notch1及共转染miR-383模拟物+Notch1,对应分为miR-NC组、miR-383组、Notch1组及miR-383+Notch1组;另设一组空白对照组。采用CCK8法和Tranwell实验检测miR-383模拟物和Notch1对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。构建结肠癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为miR-NC模型组(n=3)和miR-383模型组(n=3),观察miR-383模拟物对裸鼠肿瘤生长的影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-383组的Notch1野生型质粒荧光素酶活性较miR-NC组明显降低(20.07±0.12比13.61±0.19,P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-383组中Notch1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.01)。结肠癌组织中的Notch1 mRNA和蛋白表达水平均明显高于癌旁正常组织(P均<0.01)。细胞实验显示,与miR-NC组相比,Notch1组细胞的增殖、迁移能力明显升高,miR-383组细胞的增殖、迁移能力降低;miR-383+Notch1组的细胞增殖、迁移能力较miR-383组明显升高。在结肠癌移植瘤裸鼠模型中,miR-383模型组肿瘤组织中Ki67和Notch1蛋白表达水平均明显低于miR-NC模型组。结论Notch1具有促进结肠癌细胞增殖和迁移的作用,而miR-383能靶向调控Notch1以抑制结肠癌细胞的生物学行为并减缓裸鼠肿瘤的生长。miR-383具有抑制结肠癌的作用。

miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达

目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平，通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA，RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现，SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加，miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3，上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。

胶质瘤中miR-383与其靶向circ_001634相互调控机制及作用研究

目的研究脑胶质瘤中circ_001634的表达以及与miR-383的相互调控关系及在胶质瘤发生发展中的作用。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测脑胶质瘤组织中circ_001634的表达情况,及分别过表达circ_001634与miR-383后对相互的影响,非锚定依赖性生长实验检测转染circ_001634后胶质瘤U251细胞生长情况,Western blot检测miR-383下游基因CCND1蛋白表达情况。结果 circ_001634在胶质瘤中的表达显著升高;过表达circ_001634能抑制胶质瘤细胞生长,且能下调miR-383表达,并抑制CCND1表达;同时过表达miR-383,也能够抑制circ_001634表达。结论胶质瘤特异性circ_001634表达升高是miR-383表达下调和功能受抑制重要调控机制,circ_001634与miR-383的相互调控很可能是胶质瘤发生发展的重要原因。

miR-383在牦牛、犏牛睾丸组织中的差异表达及功能预测

本研究旨在分析miR-383成熟体在雄性牦牛和犏牛F1代睾丸组织中的差异表达,以了解其在精子形成中的重要作用。以发育成熟的牦牛和犏牛睾丸组织为材料,利用实时荧光定量PCR方法检测miR-383成熟体在牦牛及犏牛睾丸组织中的差异表达情况;利用TargetScan和miRanda数据库获得miR-383的靶基因集合,通过David和Gene Ontology在线软件分析miR-383靶基因的生物学功能。实时荧光定量PCR结果显示miR-383成熟体在牦牛和犏牛F1代睾丸组织中表达显著差异(P<0.05),在牦牛睾丸组织中表达量较高,靶基因预测共获得131个靶基因,GO分析及KEGG信号通路分析得到miR-383靶基因功能,这些靶基因参与了细胞增殖、凋亡、核酸合成调控等过程。结合miR-383成熟体的表达差异和靶基因功能预测结果,miR-383可能参与生殖细胞的分化及精子形成调控,为miR-383在犏牛生殖细胞中的功能与调控机制研究提供了理论依据。

lncRNA FAM83H-AS1通过抑制miR-383-3p表达调控食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制研究

目的:探讨lncRNA FAM83H-AS1对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:实验设置si-NC组、si-FAM83H-AS1组、pcDNA组、pcDNA-FAM83H-AS1组、miR-NC组、miR-383-3p组、si-FAM83H-AS1+anti-miR-NC组、siFAM83H-AS1+anti-miR-383-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FAM83H-AS1和miR-383-3p的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性;蛋白质印迹(Western blot)法检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测FAM83H-AS1对miR-383-3p的靶向调控。结果:与癌旁组织相比,食管癌组织中FAM83H-AS1高表达,miR-383-3p低表达(P<0.05)。抑制FAM83H-AS1表达或过表达miR-383-3p,细胞活性显著降低,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高(P<0.05)。FAM83H-AS1靶向调控miR-383-3p,干扰miR-383-3p表达逆转了抑制lncRNA FAM83H-AS1表达对食管癌EC9706细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA FAM83H-AS1表达可能通过上调miR-383-3p表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-383-5p与KIF3B的靶向关系及对皮肤鳞状细胞癌增殖、凋亡的调控

目的:探讨miR-383-5p与驱动蛋白家族成员3B(KIF3B)的靶向关系及对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR与Western blot法分别检测人正常皮肤细胞株HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞株SCC13、A431、HSC-5中miR-383-5p、KIF3B的表达。采用双荧光素酶报告实验验证SCC13中miR-383-5p与KIF3B的靶向关系。分别将miR-NC、miR-383-5p mimics、si-KIF3B、miR-383-5p mimics+pcDNA-NC、miR-383-5p mimics+pcDNA-KIF3B转染至SCC13细胞中,MTT法检测细胞增殖率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,Western blot法检测Cyclin D1、Cleaved-Caspase-3的表达。结果:皮肤鳞状细胞癌细胞中miR-383-5p表达降低,KIF3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-383-5p能够靶向结合KIF3B。与未转染组和miR-NC转染组细胞比较,miR-383-5p转染组细胞增殖率、克隆形成数和Cyclin D1蛋白表达水平降低,细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与未转染组细胞比较,si-KIF3B转染组细胞增殖率、克隆形成数和Cyclin D1蛋白表达水平降低,细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与miR-383-5p+pcDNA-NC组相比,miR-383-5p+pcDNA-KIF3B组细胞增殖率和克隆形成数、Cyclin D1蛋白表达水平增加,细胞凋亡率和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:miR-383-5p可通过靶向干扰KIF3B表达,抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

睾丸转染miR-383对KM小鼠精子凋亡的影响

目的探讨睾丸转染miRNA-383对健康可育雄性KM小鼠精子凋亡与繁殖力的影响。方法睾丸局部转染mimic miRNA-383和inhibitor miRNA-383分别获得高表达和抑制表达miRNA-383的个体,随机分为miRNA-383过表达组、miRNA-383抑制组、转染对照组、空白对照组四组。通过对转染效果、精子凋亡率、产子数和睾丸病理切片的检测来观察miRNA-383对小鼠精子凋亡和繁殖力的影响。同时对转染过程中雄鼠生活状态、体重、脏器指数、部分器官病理组织和血液生化指标进行监测,了解该操作对雄鼠机体的影响。结果成功获得在睾丸中高表达和抑制表达miRNA-383小鼠。miRNA-383过表达组精子凋亡率显著低于转染对照组(P<0.05),产子数有高于转染对照组的趋势,睾丸和肾上腺观察到一定异常,第8d和9d校正后平均体重比转染对照组显著下降(P<0.05);miRNA-383抑制表达组精子凋亡率显著高于转染对照(P<0.05),产子数对于转染对照组有下降趋势,睾丸、肺脏和肾脏观察到一定异常。结论健康可育雄性小鼠睾丸内miRNA-383表达量增加能显著降低精子凋亡率,反之则增加。miRNA-383可能对雄鼠繁殖力起重要的正调控作用,通过睾丸转染有望对雄鼠繁殖力进行人为干预。

miR-383-5p通过下调MSH6抑制小儿髓母细胞瘤的增殖和侵袭

目的:探究miR-383-5p通过调控DNA错配修复基因MSH6对小儿髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)增殖和侵袭的影响。方法:选取2014年7月至2017年5月于我院肿瘤外科手术切除并经病理确诊为MB的15例患者癌组织及相应的癌旁组织标本,qPCR检测MB组织和细胞系中miR-383-5p的表达水平。将实验分为对照组(NC组)、miR-383-5p过表达组(miR-383-5p组)、MSH6敲降组(si-MSH6组)及MSH6+miR-383-5p同时敲降组(miR-383-5p inhibitor+si-MSH6),采用CCK-8法检测UW473细胞的增殖活性,Transwell法检测UW473细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因验证miR-383-5p与MSH6的靶向关系,Western blotting(WB)法检测MSH6的表达水平。结果:miR-383-5p在MB组织和细胞系中表达水平显著低于癌旁组织(均P<0.05或P<0.01);过表达miR-383-5p显著抑制UW473细胞增殖、迁移和侵袭(均P<0.05或P<0.01),且下调MSH6在UW473细胞中的表达水平(P<0.01)。双荧光素酶报告基因结果证实miR-383-5p靶向结合MSH6的3'UTR,敲降MSH6可抑制UW473细胞增殖、侵袭和迁移(均P<0.01)。进一步实验证明,同时敲降miR-383-5p和MSH6能够恢复敲降MSH6对UW473细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用(均P<0.01)。结论:miR-383-5p在MB组织和细胞系中低表达,其通过靶向下调MSH6表达水平进而抑制UW473细胞的增殖、迁移及侵袭。

结肠癌组织中miR-383、Notch1 mRNA表达变化与患者临床病理参数及预后的关系

目的观察结肠癌患者肿瘤组织中miR-383、Notch1 mRNA的表达情况,并分析其与临床病理参数及预后的关系。方法收集结肠癌患者126例,采用qRT-PCR法检测结肠癌组织和癌旁正常组织中miR-383、Notch1 mRNA的表达情况,分析结肠癌组织中miR-383与Notch1 mRNA表达的相关性及其与患者临床病理参数的关系。随访5年,以miR-383、Notch1 mRNA表达量中位数为界限,将患者分为miR-383、Notch1 mRNA高表达者与低表达者,Log-Rank检验比较其生存时间。结果结肠癌组织中miR-383相对表达量低于癌旁组织,Notch1 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P均<0.01);结肠癌组织miR-383、Notch1 mRNA相对表达量呈负相关关系(r=-0.665,P<0.01)。与Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者比较,TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者结肠癌组织miR-383相对表达量增高、Notch1 mRNA相对表达量降低(P均<0.05);不同性别、年龄、肿瘤直径、分化程度患者的miR-383、Notch1 mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义。miR-383高表达者5年生存率高于低表达者,Notch1 mRNA高表达者5年生存率低于低表达者(P均<0.05)。结论结肠癌组织中miR-383低表达,Notch1 mRNA高表达,且两者表达量与TNM分期、淋巴结转移及预后相关,有望成为新的结肠癌诊断和预后判断的分子标志物。

miR-383的表达模式及其功能意义的研究进展

miRNA在调控基因表达、细胞周期、细胞增殖、造血作用等生物过程中扮演重要角色。miR-383在肿瘤细胞或组织、血管内皮细胞、生殖细胞等表达模式的改变及产生的功能,提示miR-383和潜在的靶基因参与机体的多种病理生理过程。本文就近年来国内外关于miR-383表达水平的改变及其产生的功能意义等方面的研究进行综述,了解miR-383的分子机制和潜在靶基因,寻找新的预后生物标志物和治疗靶点,探讨miR-383相关的基因诊断及靶向治疗的可能性。

miR-383在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株的作用

目的研究miR-383在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平,分析其对HT-29、LoVo结肠癌细胞株的增殖、侵袭和迁移的调控作用,以及可能的调控机制。方法采用qRT-PCR检测64对结肠癌组织与癌旁正常组织中miR-383的表达情况;利用miR-383类似物(rno-miR-383 mimic)上调结肠癌细胞株HT-29、LoVo中miR-383的表达,噻唑蓝(MTT)法和克隆形成试验检测其对细胞增殖的影响,迁移和侵袭试验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响,并用Western-blotting法检测miR-383靶基因APRIL、MCL-1及COX-2的表达。结果miR-383在结肠癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.01),上调miR-383的表达能够有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且上调miR-383的表达能够抑制增殖诱导配体(APRIL)的表达。结论 miR-383在结肠癌组织中表达降低,上调miR-383的表达对结肠癌细胞具有抑制增殖和降低侵袭及迁移能力的作用,其抑制作用可能是通过对靶基因APRIL的调控实现的。

miR-383通过下调细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠卵泡颗粒细胞的增殖

目的探讨微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、21、21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况。取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外设置阴性对照组。通过噻唑蓝(MTT)法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化。采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、CDK2、CDK4的蛋白水平。结果与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低。与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡和腔较小的有腔卵泡颗粒细胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡颗粒细胞中的含量却有所上调。与空白组相比,miR-383 mimics组颗粒细胞的增殖速度减慢,且G0/G1期比例升高,G2/M期比例降低,cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor组颗粒细胞的增殖速度加快,G0/G1期比例降低,G2/M期比例升高,且cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平增加。结论miR-383可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,将颗粒细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖。

miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞生物学功能的影响及其可能作用机制

目的:探讨miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞功能的影响及其可能作用的靶基因。方法:采用脂质体介导法将miR-383-3p模拟物(miR-383-3p mimic)、miR-383-3p抑制物(miR-383-3p inhibitor)以及对照模拟物(NC)转染6-10B细胞,MTT法检测各组6-10B细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组6-10B细胞的凋亡情况,Transwell实验检测各组6-10B细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验确定miR-383-3p与高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)的靶向作用情况,qRT-PCR检测不同鼻咽癌细胞中miR-383-3p及各组6-10B细胞中miR-383-3p和HMGA2 mRNA表达水平,Western blot检测各组6-10B细胞中水通道蛋白5(aquaporins 5,AQP5)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)、p-CREB以及HMGA2蛋白表达水平,免疫荧光染色检测各组6-10B细胞中AQP5和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的荧光强度。结果:与NP69细胞相比,miR-383-3p在鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、HONE1、HNE-1、C666-1、6-10B中的表达量均明显下降(P<0.05或P<0.001);与NC组相比,miR-383-3p mimic组能够显著抑制鼻咽癌6-10B细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡(P<0.05),而miR-383-3p inhibitor组6-10B细胞增殖和迁移能力明显升高,细胞凋亡水平则明显下降(P<0.05);HMGA2是miR-383-3p的靶基因,与NC组相比,miR-383-3p mimic组HMGA2 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05),而miR-383-3p inhibitor组明显升高(P<0.05);与NC组相比,miR-383-3p mimic组AQP5和p-CREB蛋白表达量明显升高(P<0.05),而miR-383-3p inhibitor组明显下降(P<0.05);与NC组相比,miR-383-3p mimic组AQP5荧光信号较强,而NF-κB荧光信号较弱,miR-383-3p inhibitor组检测结果与此相反。结论:miR-383-3p可能通过负调控HMGA2的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移,进而促进鼻咽癌细胞凋亡,该作用可能与AQP5/CREB途径的信号通路有关。

香叶木素调控STX17-AS1/miR-383-5p轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨香叶木素对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,分析其机制是否与调控STX17-AS1/miR-383-5p轴有关。方法通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、集落形成实验、划痕愈合实验、流式细胞术、实时定量PCR(RT-qPCR)分析香叶木素(10、20、40μmol/L)对结直肠癌细胞HCT116的活力、集落形成数、划痕愈合率、凋亡以及STX17-AS1、miR-383-5p表达的影响。RT-qPCR分析2019年本院29例结直肠癌患者癌组织和对应癌旁组织中STX17-AS1、miR-383-5p相对水平。双荧光素酶报告实验分析STX17-AS1和miR-383-5p的靶向关系。分别转染STX17-AS1的小干扰RNA、miR-383-5p模拟物至HCT116细胞,观察抑制STX17-AS1或过表达miR-383-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果香叶木素(10、20、40μmol/L)处理显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),降低STX17-AS1表达水平(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。结直肠癌组织中STX17-AS1的表达水平较癌旁组织显著升高(P<0.05),miR-383-5p的表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.05)。STX17-AS1与miR-383-5p直接结合。抑制STX17-AS1表达显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。过表达miR-383-5p显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。过表达STX17-AS1或抑制miR-383-5p表达显著减弱香叶木素对HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率和凋亡率的影响(P<0.05)。结论香叶木素通过下调STX17-AS1/miR-383-5p轴可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。

miR-383-5p靶向ZEB2抑制食管癌细胞侵袭及间质转化

目的:探讨miR-383-5p靶向调节ZEB2对食管癌细胞增殖、侵袭及间质转化的影响。方法:RT-PCR验证miR-383-5p过表达效率;荧光素酶报告基因实验验证ZEB2和miR-383-5p的靶向关系;Western blot检测ZEB2蛋白、内皮生长因子(VEGF)、上皮-间质转化相关蛋白(E-cad、N-Cad)表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭。结果:初步确定miR-383-5p可靶向作用于ZEB2的3’UTR,且可在转录后水平负调控ZEB2表达。与ZEB2组相比,miR-383-5p/ZEB2联合转染组Eca-109细胞增殖率、侵袭细胞数及相关蛋白表达均明显降低,E-cad表达减少、N-cad表达增多,明显抑制肿瘤上皮细胞间质转化。结论:miR-383-5p可靶向下调ZEB2,进而抑制食管癌细胞Eca-109增殖、侵袭及上皮-间质转化,缓解食管癌发生发展。

急性冷暴露对仔猪多器官miR-383表达的影响

试验旨在探讨急性冷暴露对仔猪体内miR-383表达量的影响。试验选取16头30日龄断奶仔猪,分为对照组和冷暴露组,冷暴露条件为(4±2)℃。冷暴露组又分为3个处理,分别进行2、6、12 h冷暴露,每组4头仔猪。采用ELISA法检测血清中皮质醇(CORT)含量;次用qRT-PCR法检测肺、小肠、肌肉、肾、脾和肝中miR-383的表达水平。结果显示,冷暴露6 h后,仔猪血清CORT含量显著升高(P<0.01);各器官miR-383表达水平均出现显著变化(P<0.05),但变化出现的时间点和表现出的趋势不同。研究表明,4℃冷暴露6 h可使仔猪处于急性冷应激状态;从miR-383表达量角度分析,肺、肌肉、肝和脾对冷刺激响应迅速,小肠和肾的响应时间较长;急性冷暴露可使仔猪肝脏中miR-383表达量持续显著上升(P<0.05)。