lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在SK-N-SH细胞中负调控miR-411-5p表达。与对照组、si-NC组比较,si-SNHG8组SK-N-SH细胞OD值、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),SK-N-SH细胞凋亡率和Cleaved-Caspases-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较,si-SNHG8+anti-miR-411-5p组SK-N-SH细胞OD值、迁移和侵袭数及Ki67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05),SK-N-SH细胞凋亡率和Cleaved-Caspases-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。而对照组与si-NC组,si-SNHG8组与si-SNHG8+anti-miR-NC组各检测指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:下调SNHG8通过负调控miR-411-5p抑制NB细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

环状RNA_000926通过靶向miR-411-5p调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨环状RNA_000926(circ_000926)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年5月至2020年9月河北医科大学第一医院手术切除的30例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7,用qPCR法检测组织和细胞中circ_000926和miR-411-5p的表达水平。将circ_000926过表达质粒及空白质粒、circ_000926小干扰RNA及阴性对照寡核苷酸、miR-411-5p mimic和阴性对照质粒分别转染HeLa和SiHa细胞,分为pc-circ_000926组、pc-NC组、si-circ_000926组、si-NC组、miR-411-5p mimic组和miR-NC组。通过CCK-8法检测转染细胞的增殖活力,TUNEL法检测细胞的凋亡水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证circ_000926与miR-411-5p之间的靶向关系,WB法检测细胞中Ki67、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结果:与癌旁组织和Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌组织和He La、SiHa细胞中circ_000926表达显著升高、miR-411-5p表达显著降低(均P<0.01)。与pc-NC组相比,pc-circ_000926组细胞增殖活力显著增强、细胞凋亡率显著降低(均P<0.01),细胞中miR-411-5p表达显著降低、Ki67蛋白表达显著升高,BAX、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著降低(均P<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_000926组细胞增殖活力显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),细胞中miR-411-5p表达显著升高、Ki67蛋白表达显著降低,BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著升高(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实circ_000926靶向负向调控miR-411-5p表达,过表达miR-411-5p可逆转过表达circ_000926对宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用。结论:circ_000926通过靶向吸附miR-411-5p促进宫颈癌细胞的增殖,并抑制细胞凋亡。

过表达miR-411对宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的探讨过表达miR-411对宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法以正常宫颈上皮永生化细胞End1/E6E7为对照细胞,qRT-PCR检测宫颈癌Caski、SiHa和C-33A细胞miR-411表达。MTT法、Transwell小室及流式细胞术检测转染miR-411 mimics 48 h的SiHa细胞增殖、侵袭能力和凋亡率。通过双荧光素酶报告基因实验及miR-411 mimics/inhibitor对PIK3R3表达影响验证miR-411和PIK3R3靶向关系。将PIK3R3 siRNA及miR-411 mimics+PIK3R3过表达载体转染至SiHa细胞,转染48 h,检测细胞的增殖、侵袭能力和凋亡率。Western blotting检测转染miR-411 mimics 48 h的SiHa细胞PI3K、p-AKT、PCNA、E-cadherin和cleaved caspase3表达。结果miR-411在宫颈癌细胞表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-411可明显抑制SiHa细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-411可靶向负调控PIK3R3表达。抑制PIK3R3表达可明显降低SiHa细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PIK3R3可逆转miR-411对SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。过表达miR-411可明显抑制PI3K、p-AKT和PCNA表达,促进E-cadherin和cleaved caspase3表达(P<0.05)。结论miR-411可通过靶向PIK3R3抑制PI3K/AKT信号通路,从而影响宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡。

miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成

microRNA-411a-3p(miR-411a-3p)在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子(Mitf)依赖的毛色基因酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相关蛋白-2(Tyrp2)及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。

TBB对乳腺癌细胞miR-411表达及细胞凋亡的影响

目的观察TBB作用下乳腺癌细胞中miR-411的表达,研究过表达miR-411对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期改变的影响。方法 Real-time PCR验证生物芯片检测的差异miRNAs,流式细胞术分析转染前后细胞周期及细胞凋亡情况,针对miR-411进行下游靶基因预测,以real-time PCR验证预测结果。结果 TBB作用下MCF-7细胞株中miR-411显著升高;与对照组相比,转染组早期凋亡细胞比例升高;Fox O1 mRNA表达含量显著增高。结论TBB能够改变乳腺癌M CF-7细胞株中miR-411的表达,过表达miR-411能够抑制乳腺癌细胞株的凋亡,其机制可能与通过影响Fox O1表达有关。

miR-411-3p靶向MLK4对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响

目的本文探讨了miR-411-3p对膀胱癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法用miR-411-3p mimic和pcDNA-MLK4过表达质粒分别或共转染膀胱癌5637细胞。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-411-3p和MLK4 mRNA表达。免疫印迹(Western blot)检测蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。克隆形成实验检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡。结果miR-411-3p在膀胱癌组织和细胞中下调表达(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验验证miR-411-3p与MLK4的靶向关系。与对照组比,miR-411-3p mimic组的克隆形成率、Ki67和PCNA蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比例显著升高(P<0.05);周期蛋白p53和p27的表达显著上调,而cyclin A的表达显著下调(P<0.05)。pcDNA-MLK4组的结果与miR-411-3p mimic组正好相反。MLK4与miR-411-3p mimic共转染细胞后,逆转了pcDNA-MLK4组的结果。结论miR-411-3p通过靶向MLK4基因抑制膀胱癌5637细胞增殖及阻碍细胞周期进程并促进细胞凋亡。

miR-411-5p靶向SPHK1基因调控宫颈癌细胞存活和凋亡的分子机制

目的探讨miR-411-5p对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法将miR-con、miR-411-5p、anti-miR-con、anti-miR-411-5p、si-con、si-SPHK1分别转染至SiHa细胞中,分别记为miR-con组、miR-411-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-411-5p组、si-con组、si-SPHK1组;将miR-411-5p质粒分别与pcDNA、pcDNA-SPHK1共转染至SiHa细胞中,分别记为miR-411-5p+pcDNA组、miR-411-5p+pcDNA-SPHK1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-411-5p表达水平;Western印迹检测鞘氨醇激酶(SPHK)1、细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期素(Cyclin)D1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-411-5p和SPHK1的靶向关系。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中SPHK1高表达,miR-411-5p低表达。过表达miR-411-5p和沉默SPHK1宫颈癌细胞SiHa中Ki67、CyclinD1表达水平显著降低,酶切caspase-3、酶切caspase-9表达水平显著升高,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。miR-411-5p靶向调控SPHK1表达;过表达SPHK1部分逆转miR-411-5p对宫颈癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论过表达miR-411-5p可抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-411-5p表达有关。

miR-411-3p靶向PAK2介导Wnt信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的影响及调控机制

目的:探究miR-411-3p靶向p21活化激酶2(PAK2)基因介导Wnt信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的影响。方法:收集我院52例口腔癌组织及正常口腔黏膜上皮组织。免疫组化检测组织中PAK2阳性表达,qRT-PCR及Western blot检测miR-411-3p及PAK2表达。筛选PAK2高表达细胞系并将其分为:阴性对照组、miR-411-3p agomir组、miR-411-3p antagomir组、PAK2基因沉默组、联合组(miR-411-3p agomir联合PAK2沉默联合处理细胞)。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞miR-411-3p、Wnt1、GSK3β、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin表达,CCK8检测细胞活力,划痕实验、Transwell检测细胞迁移和侵袭。Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况。结果:与正常口腔黏膜上皮组织相比,癌组织中miR-411-3p表达下降,PAK2表达升高。与阴性对照组相比,miR-411-3p过表达或沉默PAK2能够抑制Wnt信号通路相关因子(Wnt1,β-catenin)及N-cadherin表达,促进GSK3β及E-cadherin表达,且联合组效果最为明显(P<0.05),抑制口腔鳞癌细胞活力,减少癌细胞迁移和侵袭,促进其凋亡,且联合组效果更明显(P<0.05)。结论:miR-411-3p可靶向抑制PAK2基因的表达介导Wnt信号通路进而抑制口腔鳞状细胞癌迁移、侵袭,促进癌细胞凋亡,有望成为口腔鳞状细胞癌治疗的重要靶点。

circ_0092306靶向miR-411调控胃癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的机制研究

目的探讨circ_0092306对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响及作用机制。方法分别以癌旁组织和正常胃上皮细胞GES-1为对照,RT-qPCR法检测胃癌组织及细胞系N87、HGC-27和AGS中circ_0092306和miR-411表达水平。将AGS细胞分为si-NC组、si-circ_0092306组、miR-NC组、miR-411组、si-circ_0092306+anti-miR-NC组、si-circ_0092306+anti-miR-411组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测CyclinD1、P21、Bcl-2、Bax及E-cadherin和Vimentin蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0092306与miR-411调控关系。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中circ_0092306表达升高(P<0.05),miR-411表达降低(P<0.05)。与GES-1细胞比较,胃癌细胞系N87、HGC-27和AGS中circ_0092306表达升高(P<0.05),miR-411表达降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_0092306组AGS细胞OD值及CyclinD1、Bcl-2、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率及P21、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-411组AGS细胞OD值及CyclinD1、Bcl-2、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率及P21、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与si-circ_0092306+anti-miR-NC组比较,si-circ_0092306+anti-miR-411组AGS细胞OD值及CyclinD1、Bcl-2、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率及P21、Bax、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。circ_0092306在AGS细胞中靶向负调空miR-411表达。结论circ_0092306在胃癌组织和细胞系中表达升高,下调其表达可靶向负调控miR-411抑制胃癌细胞增殖和上皮间质转化,并促进细胞凋亡。

miR-411-5p对胃癌细胞凋亡、增殖和干样特性以及裸鼠成瘤的影响

目的 miR-411-5p对胃癌SGC-7901细胞生物学特性及裸鼠成瘤的影响.方法 荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染效率.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色检测增殖.流式细胞术检测凋亡.干细胞成球实验检测细胞干样特性.蛋白印迹实验检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡抑制蛋白(Survivin)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)及P21蛋白的表达.免疫组化检测肿瘤组织中PCNA和Caspase-3的表达.结果 与对照组比较,miR-411-5p过表达组BrdU阳性细胞减少,PCNA和Survivin蛋白表达下调;细胞凋亡率降低,Caspase-3、Caspase-9及P21蛋白表达上调;干细胞数减少.与miR-NC组比较,肿瘤体质量和肿瘤体积减小,肿瘤组织中PCNA和Caspase-3表达下调.均具有显著性差异(P<0.05).结论 miR-411-5p过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、干细胞样特性,促进细胞凋亡,并抑制裸鼠移植瘤生长.

miR-411在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探究miR-411在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及临床意义。方法收集2017年3月至2018年8月于海南西部中心医院普二科行肺癌根治手术切除的NSCLC组织62例及其相应的癌旁组织,采用Real-time PCR法检测组织中miR-411的mRNA相对表达量。分析miR-411的表达与NSCLC临床病理特征(性别、年龄、有无吸烟史、肿瘤直径、组织学、有无淋巴结转移和TNM分期)的关系,采用Cox比例风险回归模型分析影响预后的因素。结果miR-411在NSCLC组织中表达量为5.58±0.52,在癌旁组织中表达量为1.64±0.38(P<0.05);miR-411表达与淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05);Cox单因素分析显示除miR-411表达外,淋巴结转移和TNM分期,也与OS有关(P<0.05)。结论MiR-411在NSCLC中高表达,miR-411高表达与TNM分期和淋巴结转移有关,miR-411可作为NSCLC诊断和预后的预测新的靶点。

miR-411-5p在胃癌中的表达及其生物学功能

目的检测miR-411-5p(hsa-microRNA-441-5p)在胃癌组织及胃癌细胞中表达情况以及对胃癌细胞功能的影响。方法采用q-PCR检测48对胃癌及癌旁组织、人胃癌细胞系BGC-823、BGC-803、SGC-7901、AGS以及人胃粘膜上皮细胞株GES-1中miR-411-5p的表达水平;采用miR-411-5p expression mimic或inhibitor转染表达差异最显著细胞后,通过平板克隆、CCK-8法、流式细胞仪检测miR-411-5p对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响。结果胃癌组织中miR-411-5p的相对表达量(0.50±0.25)明显低于癌旁组织(1.19±0.44,t=-9.55,P<0.01);与胃正常上皮细胞GES-1(0.90±0.15)中的miR-411-5p相比,人胃癌细胞系BGC-823(0.39±0.08,t=9.33,P<0.01)、BGC-803(0.55±0.15,t=5.21,P<0.01)、SGC-7901(0.58±0.07,t=6.03,P<0.01)、AGS(0.66±0.10,t=4.02,P<0.01)表达相对较低; BGC-823细胞过表达miR-411-5p后,细胞中miR-411-5p的表达(4.00±0.59)较阴性处理组(0.86±0.06)或空白对照组(0.95±0.27)明显增高(t=-15.90、-15.52,P<0.01,转染组(119.60±19.23)克隆形成能力较阴性对照组(222.40±24.82)及空白对照组(242.60±17.39)明显减弱(F=50.67,P<001),CCK-8实验亦显示其增殖能力明显减弱,细胞凋亡实验显示转染组凋亡率(8.72±0.66)%较阴性对照组(1.21±0.18)%及空白对照组(1.10±0.27)%略微上升(P<0.01);转染组跨膜细胞数(348.80±24.13)较阴性对照组(908.40±57.94)和空白对照组显著减少(952.20±51.30,F=250.07,P<0.01)。结论在胃癌组织和细胞中,miR-411-5p是一个抑制性miRNA,其表达水平下调参与了胃癌的发生和发展,有可能成为胃癌生物靶向治疗的新靶点。

miR-411对滋养层细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-411(miR-411)对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响及机制。方法 选取2019年2月—2021年4月于上海市闵行区中心医院诊治的34例子痫前期患者为研究对象,另选取同时期住院正常的22例孕妇为对照组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测22例正常孕妇胎盘组织和34例子痫前期患者胎盘组织中miR-411和围脂滴蛋白2(PLIN2)基因mRNA表达水平。转染miR-411抑制剂或PLIN2过表达载体至人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo),构建miR-411表达抑制或过表达PLIN2的HTR-8/SVneo细胞。四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、克隆形成实验、Transwell及蛋白印迹法分别检测抑制miR-411表达或过表达PLIN2对HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成、迁移和侵袭及P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E-钙粘附素(E-cadherin)及PLIN2蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-411与PLIN2调控关系。结果 子痫前期患者胎盘组织中miR-411(0.32±0.03)表达显著低于正常孕妇胎盘组织(1.01±0.10),而PLIN2基因mRNA(2.15±0.20 vs.0.93±0.09)表达显著升高,差异均有统计学意义(t=37.850、26.841,均P<0.05)。抑制miR-411表达或过表达PLIN2后,HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数及MMP-2蛋白表达降低(均P<0.05),PLIN2、P21和E-cadherin蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-411在HTR-8/SVneo细胞中负调控PLIN2表达。抑制PLIN2表达降低了抑制miR-411表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结论 抑制miR-411表达可能通过靶向上调PLIN2表达抑制滋养层细胞的增殖、迁移及侵袭。

LncRNA HOTTIP靶向miR-411-3p对高糖高胰岛素诱导的视网膜病变细胞增殖、迁移及新生血管形成的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA HOXA远端转录本(HOTTIP)靶向miR-411-3p对高糖高胰岛素(HG+HI)处理人视网膜内皮细胞HRECs增殖、迁移和血管形成的影响。方法选取38例糖尿病视网膜病变(DR)患者(DR组)和健康志愿者(control组)玻璃体体液样本;用25 mmol/L葡萄糖(HG)+100 nmol/L胰岛素(HI)处理HRECs,将HRECs细胞分为NC组、HG+HI组、si-NC+HG+HI组、si-LncRNA HOTTIP+HG+HI组、miR-NC+HG+HI组、miR-411-3p+HG+HI组、anti-miR-NC+si-LncRNA HOTTIP+HG+HI组、anti-miR-411-3p+si-LncRNA HOTTIP+HG+HI组;逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA HOTTIP和miR-411-3p表达水平;Western印迹检测相关蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告实验检测LncRNA HOTTIP和miR-411-3p的靶向关系。结果与control组比较,DR组中LncRNA HOTTIP表达水平明显升高,miR-411-3p表达水平明显降低(P<0.05)。与NC组比较,HG+HI组HRECs中LncRNA HOTTIP表达明显升高,miR-411-3p表达明显降低,基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、血管内皮生长因子(VEGF)A蛋白表达、细胞A值及迁移细胞数明显增加(P<0.05);LncRNA HOTTIP低表达或miR-411-3p上调明显降低HRECs中MMP2、MMP9、VEGFA蛋白表达、细胞A值及迁移细胞数(P<0.05);LncRNA HOTTIP靶向调控miR-411-3p表达(P<0.05),下调miR-411-3p明显逆转LncRNA HOTTIP低表达对HG+HI处理HRECs增殖、迁移和血管腔形成的影响(P<0.05)。结论LncRNA HOTTIP低表达通过靶向上调miR-411-3p影响HG+HI处理HRECs增殖、迁移和血管腔形成。

山慈菇多糖对膀胱癌细胞迁移、侵袭及miR-411表达的影响

目的考察山慈菇多糖对膀胱癌细胞的迁移和侵袭及miR-411表达的影响。方法膀胱癌细胞T24分为对照组(正常培养)、低、中、高剂量实验组(1,2,4 mg·mL^(-1)山慈菇多糖处理)、miR-411组(转染miR-411 mimics)和miR-NC组(转染miR-NC)。用Lipofectamine;2000转染试剂,在T24细胞中转染miR-411 mimics和其阴性对照miR-NC。以碘化丙啶单染法评估各组膀胱癌T24细胞的周期情况;以Transwell小室法测定各组膀胱癌T24细胞的迁移和侵袭情况;以蛋白质印迹法分析各组膀胱癌T24细胞的P21蛋白、细胞周期蛋白D1、细胞核相关抗原Ki-67、E钙黏蛋白、N钙黏蛋白的表达情况;以实时定量反转录聚合酶链反应测定各组膀胱癌T24细胞的miR-411基因表达水平。结果对照组、低、中、高剂量实验组、miR-NC组和miR-411组T24细胞G0-G1细胞比例分别为32.95±0.76,37.00±0.83,43.03±0.86,48.07±0.83,32.96±0.73和40.32±0.80;S期细胞比例分别为33.60±0.74,29.45±0.82,23.30±0.81,18.84±0.78,33.60±0.74和25.81±0.84;迁移细胞数分别为173.67±1.70,152.00±1.63,122.33±1.70,84.33±1.25,174.67±1.70和138.00±1.63;侵袭细胞数分别为97.00±1.63,79.67±1.25,65.67±0.94,45.00±0.82,95.67±2.05和73.00±1.63;miR-411基因表达水平分别为0.99±0.07,1.34±0.10,1.72±0.11,1.97±0.13,1.00±0.03和1.56±0.12。低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-411组与miR-NC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论山慈菇多糖抑制膀胱癌细胞的迁移侵袭,可能与其上调miR-411的表达有关。

CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p调节乳腺癌细胞的生物学行为

目的探究CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p对乳腺癌MCF-7细胞的生物学行为的影响.方法将sh-CDKN2B-AS1、miR-411 inhibitor转染于MCF-7,再共同转染于MCF-7.检测各组细胞增殖、迁移、侵袭及蛋白表达.MCF-7及转染sh-CDKN2B-AS1的MCF-7接种于小鼠体内,为Ctrl及sh-CDK组,检测肿瘤组织CDKN2B-AS1、miR-411-3p、Ki67及VEGF.结果miR-411-3p是CDKN2B-AS1的靶向位点,相比于Ctrl组,sh-CDKN2B-AS1组CDKN2B-AS1、VEGF及P38表达量降低;miR-411-3p,ki67、HIF-1 a,Caspase-3表达量上升,细胞增殖数、侵袭数及迁移率降低(P均<0.05).与Ctrl组比较,sh-CDKN2B-AS1组肿瘤质量降低,肿瘤组织CDKN2B-AS1、ki67、VEGF表达量降低,miR-411-3p表达量上升(P均<0.05).结论抑制CDKN2B-AS1表达可靶向提升miR-411-3p水平,从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及移植瘤生长.

miR-411-5p对胶质瘤微血管内皮细胞迁移和管形成的影响

目的研究miR-411-5p对胶质瘤微血管内皮细胞迁移和管形成的影响。方法qRT-PCR方法检测miR-411-5p在正常脑微血管内皮细胞和胶质瘤微血管内皮细胞中的表达水平。在微血管内皮细胞中瞬时转染miR-411-5p agomir及NC、miR-411-5p antagomir及NC,采用qRT-PCR方法验证其转染效率。划痕实验检测miR-411-5p对胶质瘤微血管内皮细胞迁移能力的影响。Matrigel胶三维血管形成实验检测miR-411-5p对胶质瘤微血管内皮细胞管形成能力的影响。结果miR-411-5p在胶质瘤微血管内皮细胞中的表达水平显著低于在正常脑微血管内皮细胞中的表达。miR-411-5p agomir抑制胶质瘤微血管内皮细胞的迁移和管形成能力,miR-411-5p antagomir促进胶质瘤微血管内皮细胞的迁移和管形成能力。结论miR-411-5p在胶质瘤微血管内皮细胞中低表达,过表达miR-411-5p能够抑制胶质瘤微血管内皮细胞的迁移和管形成能力。

Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞作用功能及相关分子机制的研究

目的:研究Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞功能作用及分子机制。方法:MTT检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS增殖的影响;流式细胞术检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS周期和凋亡的影响;RNAhybrid2.1.2、Miranda3.3a、TargetScan7.0预测Hsa-miR-411-3P靶基因,与m RNA测序结果联合分析,取交集基因认为是比较可靠的靶基因,进行GO、KEGG分析;Real-time PCR检测Hsa-miR-411-3P靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1的表达。结果:过表达Hsa-miR-411-3P抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期;软件预测和测序结果联合分析获得235个交集靶基因;Hsami R-411-3P靶基因分子功能集中在酶结合、蛋白质结合、转移酶活性等;生物学过程集中在代谢过程、细胞组件组装、解剖结构发展、细胞成分生物发生等(P<0.05);KEGG信号通路集中在胰岛素信号通路、cAMP信号通路、AMPK信号通路、FOXO信号通路等(P<0.05);VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1共同参与cAMP信号通路;过表达Hsa-miR-411-3P的SGC-7901、AGS细胞中,VAV3、ROCK2 m RNA表达量均减少,PLD1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中增加,在AGS细胞中减少;PTCH1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中减少,在AGS细胞中增加。结论:过表达Hsa-miR-411-3P将下调靶基因VAV3、ROCK2的表达,从而影响cAMP信号通路,抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期。

MicroRNA-411a-3p靶向钙/钙调素依赖蛋白激酶4调控羊驼黑色素细胞中的黑色素生成（英文）

羊驼是重要的毛用型经济动物,具有22种天然色。毛色由皮肤中黑色素细胞产生的黑色素颗粒的分布和转运所决定的。然而,羊驼色素形成或毛色形成的分子机制复杂,由多个基因、miRNA和lncRNA调控。但是,miR-411a-3p对羊驼色素形成起调控作用未见报道。为研究miR-411a-3p在黑色素产生过程中的调控作用,本文将构建的miR-411a-3p载体转染到羊驼黑色素细胞中,并对毛色基因的表达进行研究。经生物信息学预测,钙/钙调素依赖蛋白激酶4(calcium-calmodulin dependent protein kinase 4,CaMK4)可能是miR-411a-3p的靶基因之一。双荧光素酶报告基因结果显示,与对照组相比,双荧光报告酶活性下降(34.78±16.09)%(P<0.01),其下降趋势明显,说明CaMK4可能是miR-411a-3p的靶基因之一。miR-411a-3p通过结合CaMK4的3'untranslated region(3'-UTR)直接调控CaMK4的表达。在羊驼黑色素细胞中转染miR-411a-3p后,CaMK4、CDK5和TYRP1在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中TYRP1下降趋势尤为显著(53.66±2.11)%(P<0.01)。Western印迹检测CaMK4、CDK5、TYRP1、p-CREB在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显,尤其是CDK5和p-CREB基因下降极为显著,分别为(70.26±4.84)%(P<0.01)和(70.11±9.05)%(P<0.01)。Masson-Fontana法检测黑色素颗粒,结果显示,miR-411a-3p抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒。通过紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(phenomelanin,PM)显示,EM和PM的含量均被下调。结果表明,miR-411a-3p靶向抑制CaMK4表达,从而改变CREB的表达以控制黑色素的产生,此研究结果对哺乳动物毛色形成机制有重要意义。

微小RNA-411抑制甲状腺癌细胞增殖和侵袭

目的:探讨微小RNA(miR)-411对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测100例甲状腺癌组织和3种甲状腺癌细胞系SW579,TPC-1,FTC-133中miR-411的表达水平,并分析miR-411表达与甲状腺癌患者临床病理特征的相关性;将体外培养的TPC-1细胞分为未转染组、阴性对照(NC)组和miR-411组,转染miR-411模拟物及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-411的表达,噻唑蓝(MTT)法和Transwel l小室分别检测各组细胞增殖和侵袭。结果:与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中miR-411表达水平明显降低(P<0.05),且miR-411表达量与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),但与患者性别和年龄无关(P>0.05)。与人甲状腺正常细胞系Nthy-ori 3-1相比,SW579,TPC-1,FTC-133细胞中miR-411明显降低(P<0.05),且miR-411在TPC-1细胞中的表达最低。与未转染组相比,NC组细胞中miR-411的表达水平、细胞增殖活力和侵袭细胞数差异均无统计学意义(P>0.05);与未转染组或NC组相比,miR-411组细胞中miR-411的表达水平明显升高,而细胞增殖活力和侵袭细胞数明显降低(P<0.05)。结论:miR-411在甲状腺癌中低表达,上调其表达可抑制细胞增殖和侵袭。