孕中期胎儿大脑中动脉、孕妇子宫动脉血流参数联合血清miR-424对FGR胎儿预后的评估价值

目的探究孕中期胎儿大脑中动脉(MCA)、孕妇子宫动脉(UtA)血流参数联合血清miR-424对生长受限(FGR)胎儿预后的评估价值。方法选取FGR孕妇87例为观察组,同期产检健康的孕妇124例为对照组。FGR孕妇按照预后分为预后不良组和预后良好组。比较各组胎儿MCA、孕妇UtA血流和血清miR-424情况。采用ROC评估胎儿MCA、孕妇UtA血流和血清miR-424对FGR胎儿预后的评估价值。结果孕妇血清miR-424观察组高于对照组,预后不良组高于预后良好组(P<0.05)。胎儿MCA搏动指数(PI)及血流阻力指数(RI)观察组低于对照组,预后不良组低于预后良好组(P<0.05)。孕妇UtA PI及RI观察组高于对照组,预后不良组高于预后良好组(P<0.05)。胎儿MCA、孕妇UtA血流和血清miR-424联合检测对FGR胎儿预后具有良好的预测价值(P<0.05)。结论胎儿MCA、孕妇UtA血流和血清miR-424联合检测对FGR胎儿预后的预测效果更优,具有更高临床应用价值。

MP感染合并哮喘患儿血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平联合检测预测预后的效能

目的探讨肺炎支原体(MP)感染合并哮喘患儿血清miR-424-5p、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、Toll样受体4(TLR4)水平联合检测预测预后的效能。方法回顾性选取2021年8月至2023年8月濮阳市人民医院收治的107例MP感染合并哮喘患儿作为研究对象,所有患儿均给予对症治疗,根据6个月预后分为预后良好组86例和预后不良组21例。比较两组患儿的基线资料和血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平,采用Logistic回归分析各血清指标对预后的影响,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4对预后的预测效能。结果两组患儿的病程、发热天数、呼吸道感染史比较差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组患儿的血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平分别为1.56±0.41、(84.29±15.19)μg/L、(95.21±13.52)ng/mL,明显高于预后良好组的1.23±0.33、(70.38±11.36)μg/L、(83.10±10.17)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);校正前Logistic回归分析结果显示,病程、发热天数、呼吸道感染史、血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4均是MP感染合并哮喘患儿预后的独立影响因素(P<0.05),校正后Logistic回归分析结果显示,血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4仍是MP感染合并哮喘患儿预后的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4联合检测预测MP感染合并哮喘患儿预后的AUC为0.900,优于各血清指标单独预测。结论MP感染合并哮喘患儿血清mi R-424-5p、MCP-1、TLR4与预后密切相关,三者联合检测预测MP感染合并哮喘患儿预后具有良好的参考价值。

结缔组织病合并肺间质病变患者血清中miR-133a和miR-424表达及与T淋巴细胞亚群关系的研究

目的 探究结缔组织病(connective tissue disease,CTD)合并肺间质病变(interstitial lung disease,ILD)患者血清中miR-133a和miR-424表达及与T淋巴细胞亚群的关系。方法 选取我院2019年12月至2022年12月收治的96例CTD-ILD患者为CTD-ILD组,选择同期我院收治的CTD无ILD患者96例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-133a和miR-424水平;通过流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平。采用Pearson法分析miR-133a、miR-424与T淋巴细胞亚群的关系。结果 与对照组相比,CTD-ILD组血清中miR-133a水平显著降低,miR-424的表达水平显著升高(P<0.05)。不同肺通气障碍程度下,轻度、中度和重度患者血清中miR-133a表达水平依次显著降低,miR-424表达水平依次显著升高(P<0.05)。不同肺弥散功能障碍分级下,轻度、中度和重度患者血清中miR-133a表达水平依次显著降低,miR-424表达水平依次显著升高(P<0.05)。CTD-ILD组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平与对照组相比显著升高,CD8^(+)、CD3^(+)水平显著降低(P<0.05)。miR-133a与CD4^(+)均呈负相关关系,与CD8^(+)、CD3^(+)呈正相关关系;miR-424与CD4^(+)均呈正相关关系,与CD8^(+)、CD3^(+)呈负相关关系(P<0.05)。结论 CTD-ILD患者血清miR-133a表达水平降低,miR-424表达水平升高,且与患者T淋巴细胞亚群有关。

miR-424靶向FBXW7对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-424靶向F-box和WD重复结构域7(F-Box and WD repeat domain containing 7,FBXW7)轴对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖、凋亡的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测人正常骨髓浆细胞与MM细胞系MM.1S、RPMI 8226、U266中miR-424及FBXW7表达。体外培养U266细胞并随机分为对照组、miR-424抑制剂组(转染miR-424抑制剂)、FBXW7过表达组(转染FBXW7过表达质粒)、阴性对照组(转染miR-424阴性对照和空载质粒)、miR-424抑制剂+FBXW7敲低组(转染miR-424抑制剂和FBXW7siRNA)。以RT-qPCR实验检测miR-424及FBXW7表达;以Edu染色、TUNEL染色分别检测增殖、凋亡;以蛋白质印迹实验检测增殖相关蛋白(Cyclin D1、PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)与FBXW7蛋白表达。在裸鼠右腋皮下接种转染后的各组U266细胞来构建多发性骨髓瘤移植瘤裸鼠模型,检测其移植瘤生长情况并比较其21 d移植瘤体积。以双荧光素酶报告实验验证miR-424对U266细胞FBXW7的靶向调控作用。结果与人正常骨髓浆细胞相比,MM.1S、RPMI 8226、U266细胞miR-424表达升高(P<0.05),FBXW7 mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-424抑制剂组、FBXW7过表达组细胞增殖率、Cyclin D1、PCNA及Bcl-2蛋白表达、21 d移植瘤体积降低(P<0.05),FBXW7mRNA表达、凋亡率、FBXW7和Bax蛋白表达升高(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无显著差异(P>0.05)。与miR-424抑制剂组相比,miR-424抑制剂+FBXW7敲低组细胞增殖率、Cyclin D1、PCNA及Bcl-2蛋白表达、21 d移植瘤体积增大(P<0.05),FBXW7 mRNA表达、凋亡率、FBXW7和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。miR-424可靶向下调U266细胞FBXW7表达。结论下调miR-424可通过上调FBXW7表达而抑制MM细胞增殖及在裸鼠体内生长,促使其凋亡。

miR-424靶向PTEN基因调控IL-6/STAT3信号通路影响骨髓瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究miR-424靶向张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)调控白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录因子(STAT)3信号通路影响骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的机制。方法靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-424对PTEN的靶向调控作用;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨髓瘤患者骨髓标本及骨髓瘤细胞株中miR-424、PTEN的表达,并分析miR-424表达与患者临床病理参数的关系;采用脂质体瞬时转染法将mimic NC、miR-424 mimic、anti-miR-424 mimic、si-control、si-PTEN转染H929、U266细胞并分为对照组、miR-NC组、miR-424组、anti-miR-424组、anti-miR-424+si-NC组和anti-miR-424+si-PTEN组;噻唑蓝(MTT)法及单克隆染色检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western印迹检测PTEN、IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、原癌基因(c-Myc)水平。结果双荧光素酶实验及Western印迹验证了miR-424对PTEN的靶向调控作用。MM患者骨髓标本及MM细胞株中miR-424水平明显高于正常骨髓标本及浆细胞,PTEN水平明显低于正常骨髓标本及浆细胞,且miR-424水平与PTEN水平呈负相关,与ISS分期、危险分层、轻链类型呈正相关关系。与miR-NC组相比,miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡率、PTEN、Bax水平明显降低;anti-miR-424组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显降低,凋亡率、PTEN、Bax水平明显升高(P<0.05)。与anti-miR-424+si-NC组相比,anti-miR+424-si-PTEN组细胞增殖能力、IL-6、STAT3、Bcl-2、c-Myc水平明显升高,凋亡能力、PTEN、Bax水平明显降低(P<0.05)。结论MM细胞的增殖、凋亡受miR-424及PTEN的双重调控,miR-424可靶向PTEN调控IL-6/STAT3信号通路影响MM细胞的增殖和凋亡。

miR-424-5p在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的探讨miR-424-5p在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达及临床意义。方法选择2018年1月至2019年12月于西安交通大学第二附属医院血液内科就诊的58例AML患者骨髓标本作为研究对象,同时收集13例缺铁性贫血(irondeficiency anemia,IDA)患者的骨髓标本作为对照,通过实时定量PCR方法检测两组骨髓标本中miR-424-5p的相对表达量。通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析miR-424-5p对AML的诊断价值。总结58例AML患者miR-424-5p表达谱及临床资料,用Kaplan-Meier法分析miR-424-5p与AML总体生存期(overall survival,OS)的关系,并分析其表达水平与临床资料的相关性。建立COX比例风险模型进行多因素分析。利用在线数据库预测miR-424-5p下游通路,探究miR-424-5p在AML发病中可能发挥的作用机制。结果miR-424-5p在初发AML患者中低表达(P=0.002),其表达量与患者年龄、外周血白细胞数有关(P<0.05)。ROC曲线下面积为0.776,95%CI为0.663~0.889,可有效区分AML患者和IDA患者。分析临床资料发现miR-424-5p的表达水平降低和患者的OS延长显著相关(P=0.005)。建立COX比例风险模型,结果显示miR-424-5p表达量在模型中有统计学意义(P<0.05),且miR-424-5p表达量>12.478患者发生死亡的风险是≤12.478患者的3.315倍。StarbaseV2.0数据库预测发现miR-424-5p的靶基因可能通过TRAIL信号通路参与AML的发生发展。结论miR-424-5p在初发AML患者中低表达,具有一定的辅助诊断价值,其表达水平与AML患者年龄、外周血白细胞数相关,表达水平升高与AML患者的预后不良显著相关,有望成为AML的潜在预后标志物。

miR-424-5p靶向KIF23调控细胞周期并抑制肝癌细胞的增殖和迁移能力

目的探究miR-424-5p、KIF23对肝癌细胞的作用机制,为探索新的肝癌靶向治疗途径提供思路。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-424-5p的表达水平,生物信息学技术和萤光素酶报告基因验证KIF23与miR-424-5p在肝癌中的结合关系。qRT-PCR和蛋白免疫印迹(western blot,WB)分别检测KIF23 mRNA和蛋白表达水平。CCK8实验、克隆形成实验、迁移实验和流式细胞术评估miR-424-5p和KIF23对肿瘤细胞的增殖、迁移能力,以及对细胞周期进展的影响。结果与正常肝组织比较,miR-424-5p在肝癌组织和细胞中显著低表达(P<0.05);KIF23是miR-424-5p的直接下游靶点,在肝癌组织和细胞中的表达显著上调(P<0.05)。过表达KIF23会促进肝癌细胞增殖和迁移,并将细胞周期阻滞于G2/M期。过表达miR-424-5p能显著减弱过表达KIF23对细胞增殖、迁移和细胞周期分布的影响(P<0.05)。结论miR-424-5p可以通过靶向下调KIF23,从而抑制肝癌细胞增殖和迁移能力,影响细胞周期进展。

肺炎支原体感染诱发哮喘患儿血清中miR-424-5p和CX3CL1表达水平及与预后预测价值研究

目的检测肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染诱发哮喘患儿血清中微小核糖核酸(micro RNA,miR)-424-5p和CX3CL1表达水平及其与患儿预后的关系。方法选取2020年3月~2021年5月在内江市第一人民医院进行治疗的MP感染患儿128例作为研究对象,根据是否诱发哮喘分为哮喘组(n=82)和MP组(n=46),另选取50例健康儿童作为对照组。分别比较哮喘组、MP组和对照组血清miR-424-5p,CX3CL1,IgE,IL-6,TNF-α水平和肺功能指标;根据哮喘患儿预后情况分为预后良好组(n=50)和预后不良组(n=32),分析哮喘患儿预后情况与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析MP诱发哮喘患儿血清中miR-424-5p和CX3CL1表达与患儿预后的关系;采用多因素Logisitic回归分析MP诱发哮喘患儿预后的影响因素。结果对照组、MP组和哮喘组血清miR-424-5p(0.95±0.26,1.12±0.35,1.34±0.39),CX3CL1(0.47±0.08,0.62±0.17,0.91±0.22 ng/ml),Ig E(22.64±5.74,41.26±8.91,52.31±10.26 IU/ml),IL-6(5.26±0.90,8.24±1.07,9.14±1.18 ng/L)和TNF-α(55.27±10.54,88.56±18.67,105.26±26.48 pg/ml)水平依次升高,差异具有统计学意义(F=20.287,103.274,174.470,205.317,87.349,均P<0.05)。对照组、MP组和哮喘组肺功能指标VC(80.24±19.35,62.35±15.48,51.26±12.38ml),FVC(78.35%±18.29%,60.21%±16.34%,48.36%±11.73%)和FEV1(63.31%±17.26%,44.26%±10.31%,38.69%±9.58%)依次降低,差异具有统计学意义(F=54.943,61.821,63.006,均P<0.05)。哮喘患儿预后良好组血清Ig E,IL-6,TNF-α,miR-424-5p和CX3CL1水平均明显低于预后不良组,差异具有统计学意义(t=3.825,6.137,3.086,4.003,6.044,均P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,血清miR-424-5p低表达组和CX3CL1低表达组患儿预后良好率高于高表达组(χ^(2)=4.377,4.172,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,Ig E,IL-6,TNF-α,miR-424-5p和CX3CL1水平为MP诱发哮喘患儿预后的影响因素(P<0.05)。结论MP诱发哮喘患儿血清miR-424-5p和CX3CL1水平上调,且二者水平变化与患儿预后情况密切相关。

miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制

背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖,抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力,而其对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F6 3’UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后,A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后,A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后,A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后,细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。

miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响

目的构建hsa-miR-424基因慢病毒表达载体,并鉴定miR-424在细胞内表达水平,研究hsa-miR-424对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法以人基因组DNA为模板,设计合成miR-424的上下游引物,PCR扩增目的片段,回收产物将其连入pMD18T载体中,进行测序。再以pMD18T-miR424为模板进行PCR扩增,将其中表达pMD18T-miR424的结构经酶切后插入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体,构建成pLentis-CMV-GFP-miR424-PGK-PURO,在293T细胞中与pSPAX2、pMD2.G包装产生所需的慢病毒,再用含慢病毒的上清液感染Hela细胞。结果 miR-424基因与慢病毒载体连接成功,测序结果证明了插入到质粒载体中的miR-424前体序列完全正确,成功构建pLentis-CMV-GFP-miR424重组慢病毒载体,用其感染宫颈癌Hela细胞后上调miR-424的表达近60倍。采用MTT法检测增殖结果提示:感染miR-424慢病毒的宫颈癌Hela细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了miR-424慢病毒载体,建立了高效稳定表达miR-424的细胞株,并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌Hela细胞,成功抑制了Hela细胞的增殖,为后续相关的研究奠定了良好的基础。

miR-424负向调节人脂肪源间充质干细胞向成脂细胞分化

目的研究miR-424对人脂肪源间充质干细胞(hAMSCs)向成脂分化的影响。方法用real-time PCR检测hAMSCs成脂分化前后细胞内miR-424水平的变化。在脂质体介导下,用人工合成的miR-424模拟物转染hAMSCs提高细胞内miR-424的含量,随后对其进行成脂诱导。用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,用real-time PCR和Western blot检测成脂关键转录因子PPARγ及相关标记物mRNA的表达。结果 hAMSCs成脂分化后,miR-424表达下调。与对照组细胞相比,转染miR-424模拟物的实验组细胞中miR-424含量明显升高。成脂诱导第8天油红O染色结果显示,实验组脂滴形成显著少于对照组。PPARγ和成脂相关标记物的表达量也出现下调。结论 miR-424可负向调节hAMSCs向脂肪细胞分化。

miR-424在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测胃癌组织中miR-424的表达,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法:选取本院收治的55例胃癌患者的胃癌组织样本及相应癌旁组织,应用RT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-424 mRNA表达,分析其与胃癌临床病理特征间的关系。结果:4例患者随访失败,研究实际完成51例;胃癌组织中miR-424 mRNA阳性检出率为66.67%,明显高于癌旁组织的23.53%(P<0.01);胃癌组织中miR-424 mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.01);胃癌组织中miR-424 mRNA的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径无关(P>0.05),与浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.01);1年期随访发现,死亡15例,存活36例;死亡组在入院时胃癌组织中miR-424 mRNA表达高于存活组(P<0.01)。结论:miR-424 mRNA在胃癌组织中高表达,与胃癌的临床病理特征密切相关,可能是评判胃癌患者预后的有效指标。

miR-424-5p靶向NLRP1抑制非小细胞肺癌增殖迁移和侵袭

目的:揭示miR-424-5P及NAcht富含亮氨酸重复蛋白1(NLRP1)在非小细胞肺癌细胞系增殖迁移和侵袭过程的作用机制。方法:利用qRT-PCR检测来自医院的15名非小细胞肺癌患者肿瘤组织和癌旁组织中NLRP1的mRNA水平;通过qRT-PCR检测2种非小细胞肺癌细胞HCC827、A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中NLRP1的mRNA水平;利用CCK-8检测下调表达NLRP1对A549细胞增殖能力的影响,Transwell检测下调表达NLRP1对A549细胞迁移和侵袭的影响;通过Targetscan软件预测,miR-424-5p是NLRP1的调控miRNA之一,将检测细胞分为miRNC组、miR-424-5p mimics组及miR-424-5p inhibitor组,利用qRT-PCR检测3组细胞中miR-424-5p及NLRP1的mRNA水平,Western印迹检测NLRP1蛋白表达水平,双萤光素酶报告基因实验检测miR-424-5p与NLRP1之间靶向调控关系;将肺癌细胞A549分为miR-NC组、miR-424-5p inhibitor组及miR-424-5p inhibitor+si-NLRP1组,利用CCK-8法检测3组细胞的增殖能力,Transwell检测3组细胞的迁移和侵袭能力。结果:非小细胞肺癌患者肿瘤组织中NLRP1表达量明显高于癌旁组织;A549细胞中NLRP1表达量最高(P<0.01),而BEAS-2B中NLRP1表达量最低(P=0.157);下调表达NLRP1抑制A549细胞增殖迁移和侵袭能力;过表达miR-424-5p的A549细胞中NLRP1蛋白表达量降低(P<0.01),而敲低miR-424-5p增加NLRP1的蛋白表达(P<0.01);双萤光素酶报告基因实验验证miR-424-5p能与NLRP1的3'非翻译区结合抑制其表达(P<0.01);敲低miR-424-5p能够促进A549细胞的增殖迁移和侵袭能力(P<0.01),同时敲低miR-424-5p和NLRP1的表达量则可以使A549细胞的增殖迁移和侵袭能力降低到miR-NC的水平。结论:miR-424-5p能够靶向NLRP1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖迁移和侵袭能力。

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P<0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P<0.01),细胞活力下降(P<0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P<0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P<0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。

新生儿缺氧缺血性脑病血清miR-15b、miR-424表达水平及其临床意义

目的检测新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清中miR-15b、miR-424表达水平,探讨二者与HIE发生发展和预后的关系。方法选取2015年4月—2017年4月我院儿科收治的68例HIE患儿为试验组,根据患儿临床HIE分度标准分为轻度组、中度组和重度组;另选取68名在本院同期分娩的正常足月健康婴儿为对照组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HIE患儿和健康新生儿血清中miR-15b、miR-424表达水平;分析HIE患儿血清miR-15b、miR-424水平与各生化指标的相关性。出生后28 d测定新生儿神经行为量表(NBNA)评分,评估新生儿神经行为,分析miR-15b、miR-424表达水平与HIE患儿NBNA评分、预后的关系。结果HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于健康婴儿(P<0.05);重度组、中度组HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于轻度组(P<0.05),重度组HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于中度组(P<0.05)。重度组、中度组HIE患儿出生后28 d NBNA评分低于轻度组(P<0.05),重度组HIE患儿出生后28 d NBNA评分低于中度组(P<0.05)。相关性分析显示,血清miR-15b、miR-424表达水平与HIE患儿出生后28 d NBNA评分均呈正相关(P<0.05);预后良好的HIE患儿血清miR-15b、miR-424高表达率均明显高于预后不良的患儿(P<0.05)。结论HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均明显下调,与HIE临床分度、出生后28 d NBNA评分有关,且可影响患儿的预后。

miR-1262、miR-424表达与上皮性卵巢癌临床病理特征及预后的关系

目的 miR-1262、miR-424表达与上皮性卵巢癌临床病理特征及预后的关系。方法 选择上皮性卵巢癌患者85例。使用问卷调查法调查患者年龄。查阅患者病案信息,收集患者的肿瘤直径、淋巴结转移、FIGO分期、分化程度、组织类型。抽取患者肘静脉血3 ml,离心处理后留下血清,采用Qrt-pcr法检测血清miR-1262、miR-424相对表达量。根据miR-1262、miR-424表达情况,分为低表达和高表达。结果 miR-1262表达与年龄、淋巴结转移无相关性(P>0.05),与FIGO分期、分化程度、组织学类型有关(P<0.05)。miR-424表达与年龄无关(P>0.05),与淋巴结转移、FIGO分期、分化程度、组织学类型有关(P<0.05)。miR-1262低表达患者生存时间(8.02±0.58)个月,高表达患者(6.57±0.51)个月;miR-424低表达患者生存时间(8.14±0.51)个月,高表达患者(6.01±0.58)个月。miR-1262低表达患者生存时间长于高表达者(P<0.05)。miR-424低表达患者生存时间长于高表达者(P<0.05)。miR-1262表达与预后生存时间呈负相关(P<0.05),miR-424表达与预后生存时间呈正相关(P<0.05)。结论 上皮性卵巢癌患者miR-1262、miR-424高表达,其表达水平与疾病临床病理特征及预后密切。miR-1262、miR-424高表达会促使肿瘤发生和发展,建议密切灌注。

miR-424对宫颈癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制

目的研究抑癌因子miR-424对宫颈癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法划痕实验检测宫颈癌细胞迁移能力;ranswell小室法检测侵袭能力;WesternBlot检测处理后细胞中WNT8A、β-catenin和VEGF的蛋白表达水平;茎环法qRT-PCR检测miRNA。结果与miR-424NC组(22.45±3.25)比较,miR-424inhibitor组(3.48±0.36)细胞迁移距离降低(P<0.010);侵袭数目与miR-424NC组(165.78±12.15)比较,miR-424inhibitor组(36.54±2.35)细胞侵袭数目降低(P<0.01),VEGFmRNA表达量下调,β-catenin表达量下调。结论miR-424对肿瘤细胞迁移及增殖的作用机制可能通过抑制WNT8A表达,阻断wnt/β-catenin信号通路,进一步通过抑制VEGF表达抑制恶性肿瘤的侵袭转移。

miR-424通过结合ARK5 mRNA 3'-UTR抑制胶质瘤细胞侵袭

前期的研究证明,人腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)通过Gab2-Akt-ARK5通路,促进胶质瘤的侵袭。然而,ARK5的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-424是否通过与ARK5 mRNA结合,进而影响胶质瘤侵袭。通过Targetscan找到与ARK5的3'-UTR区互补结合的microRNA(miR-424)。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胶质瘤细胞系中miR-424表达水平,发现3种胶质瘤母细胞(高级别胶质瘤细胞)株中,miR-424表达量均不同程度低于低级别胶质瘤H4细胞株。miR-424及miR-424抑制剂质粒转染胶质瘤细胞系H4、LN-229并结合蛋白质印迹法显示,miR-424可负向调控ARK5蛋白表达。qRT-PCR显示,在胶质瘤细胞内过表达miR-424后,ARK5mRNA无显著变化,提示miR-424在翻译水平影响ARK5蛋白表达。Transwell侵袭实验显示,过表达miR-424导致胶质瘤细胞体外侵袭能力明显减弱。双荧光素酶基因报告检测显示,miR-424能与ARK5 mRNA的3'-UTR结合,抑制荧光素酶活性。上述结果提示,miR-424可以结合ARK5mRNA的3'-UTR而抑制ARK5蛋白翻译,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。

miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用qRT-PCR法检测肝癌组织中miR-424-5p,ATG14的表达。培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组(n=3):干扰miR-424-5p表达阴性对照组(in-NC组),干扰miR-424-5p表达组(in-miR-424-5p组);HCCLM3细胞实验分组(n=3):过表达miR-424-5p组(mi-miR-424-5p组),另设过表达miR-424-5p阴性对照组(mi-NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组(mi-NC+NC组);过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组(mi-NC+ATG14组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14阴性对照组(mi-miR-424-5p+NC组);过表达miR-424-5p+过表达ATG14组(mi-miR-424-5p+ATG14组)。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡(P<0.05);干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡(P<0.05);miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),降低自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05);过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平(P<0.05),提高自噬受体蛋白P62的表达水平(P<0.05)。结论miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。

miR-424与肿瘤的发生发展及其机制研究进展

对miR-424在部分肿瘤发生发展中的作用及其机制的研究现状进行了综合评述。miR-424是近年来发现的一类长度为19~25nt内源性的非编码小分子单链RNA,其在多种肿瘤中通过作用于靶基因,参与靶基因调控的信号通路,影响肿瘤细胞生物学效应,最终影响肿瘤的发生发展,发挥类似于癌基因、抑癌基因的作用,或促进、抑制肿瘤的侵袭转移。未来可进一步在肿瘤发生发展的作用机制、临床早期诊断、愈后判断和药物筛选等方面进行研究。