lncRNA CASC9通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法采用RT-qPCR检测CASC9在食管鳞状细胞癌组织、配对癌旁组织、食管鳞状细胞癌细胞系(KYSE450、KYSE150、EC190、EC9706)及正常人食管鳞状上皮细胞株(Het-1A)中的表达;敲降CASC9在KYSE450细胞中的表达水平,检测下调CASC9对细胞增殖、侵袭及其细胞周期的影响;采用Western blotting法检测SOX9蛋白及周期蛋白2(CCND1、CCNA、CDK4、CDK6)的表达;通过CCK-8和Transwell方法检测KYSE450细胞的增殖和侵袭能力,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-424-5p与CASC9或SOX9的靶向关系。结果食管鳞状细胞癌组织与细胞系高表达CASC9(P<0.01),敲降CASC9可抑制KYSE450细胞增殖和侵袭能力、并阻滞细胞周期G1/S期(P<0.01)。双荧光素酶报告基因法证实,CASC9靶向miR-424-5p、并下调其表达,SOX9是miR-424-5p的靶基因;敲降CASC9可上调miR-424-5p、并抑制SOX9的表达(均P<0.01)。结论lncRNA CASC9可通过下调miR-424-5p,并促进SOX9表达而刺激KYSE450细胞的增殖、侵袭。

miR-145-5p抑制造釉细胞型颅咽管瘤细胞增殖、侵袭和SOX9/β-catenin表达

目的探究miR-145-5p对造釉细胞型颅咽管瘤(aCP)细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法选取2019年9月至2022年9月在四川大学华西医院和广元市中心医院神经外科术中切除的aCP和乳头状颅咽管瘤(pCP)各5例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测aCP和pCP中miR-145-5p、SOX9、CTNNB1(β-catenin基因)mRNA的表达差异,采用免疫荧光及Western blot检测SOX9、β-catenin蛋白的表达;通过CCK8实验、Transwell小室及流式细胞术分别检测颅咽管瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡水平。将aCP细胞分为aCP组(空白对照,未转染)、aCP+miR-145-5p control组(阴性对照)、aCP+miR-145-5p mimic组(过表达),研究miR-145-5p对aCP细胞的增殖、侵袭和凋亡及SOX9、β-catenin表达的影响。结果与pCP相比,aCP细胞中miR-145-5p mRNA表达明显降低,SOX9、CTNNB1 mRNA、SOX9及胞核β-catenin蛋白表达明显增高,胞质β-catenin蛋白表达略降低,细胞增殖和侵袭显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。aCP组、aCP+miR-145-5p control组和aCP+miR-145-5p mimic组在miR-145-5p、SOX9、CTNNB1 mRNA,SOX9、胞核β-catenin、胞质β-catenin蛋白表达以及细胞增殖和侵袭方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。两两比较显示,aCP+miR-145-5p mimic组较其他2组miR-145-5p mRNA表达显著升高,细胞增殖和侵袭减弱,凋亡增加,SOX9、CTNNB1 mRNA表达明显降低;aCP+miR-145-5p mimic组较aCP+miR-145-5p control组SOX9、胞核β-catenin蛋白表达明显降低,胞质β-catenin蛋白表达略升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-145-5p可能通过下调SOX9、β-catenin抑制aCP的增殖、侵袭能力,促进细胞凋亡。