子宫内膜癌患者血清miR-425-5p与miR-155表达水平

目的 分析子宫内膜癌(endometrial cancer, EC)血清中微小RNA(micro RNA,miR)-425-5p与miR-155表达意义及对近期疗效的预测价值。方法 选取100例EC患者,设为疾病组。另选取98例健康女性,设为健康组。比较2组研究参与者血清miR-425-5p、miR-155水平;根据疗效将疾病组分为有效组(28例)、无效组(72例),比较2组血清miR-425-5p、miR-155及可能影响因素差异;采用logistic回归分析法分析疾病组近期疗效影响因素;绘制受试者操作特征(ROC)曲线,分析血清miR-425-5p、miR-155对EC近期疗效预测价值。结果 疾病组血清miR-425-5p、miR-155相对表达量均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);无效组血清miR-425-5p、miR-155相对表达量均大于有效组,差异有统计学意义(P<0.05),经logistic回归分析血清miR-425-5p、miR-155是EC近期疗效的影响因素;ROC曲线结果显示,血清miR-425-5p、miR-155单独及联合预测疾病组无效的曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.792、0.846。结论 miR-425-5p与miR-155在EC血清中异常高表达,两者联合可作为预测该病近期疗效的有效参考依据。

miR-425-5p靶向TGF-β1/Smad2信号通路减少小鼠增生性瘢痕组织胶原纤维沉积

目的探究miR-425-5p在增生性瘢痕(HS)形成中的作用及机制。方法通过RT-qPCR和Western blot检测了16对HS组织和正常皮肤组织中miR-425-5p、转化生长因子-β1(TGF-β1)和SMAD家庭成员2(Smad2)的水平。将成纤维细胞分为9组:对照组(control组)、miR-425-5p-mimic组、NC-mimic组、miR-425-5p-inhibitor组、NC-inhibitor组、TGF-β1-pcDNA3.1组、NC-pcDNA3.1组、miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组和miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组,并采用Lipofectamine 2000对细胞进行转染处理。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和TGF-β1的靶向关系。通过博莱霉素(BLM)诱导小鼠增生性瘢痕,然后将小鼠随机分为3组,对照组(NC-agomir)、模型组(NC-agomir+BLM)和转染miR-425-5p干预模型组(miR-425-5p-agomir+BLM),小鼠均治疗21 d。通过Masson三色染色检测HS组织的胶原纤维沉积。通过RT-qPCR和Western blot检测组织和细胞中miR-425-5p、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1和Smad2的表达水平。结果与正常组相比,HS组的miR-425-5p表达水平降低(t=4.242,P<0.001),而TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.001)。与对照组相比,miR-425-5p-mimic组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与control组相比,miR-425-5p-inhibitor组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic共转染后,TGF-β1-3′-UTR-WT组的相对荧光素酶活性比TGF-β1-3′-UTR-MUT组降低(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组相比,miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与NC-agomir+BLM组相比,miR-425-5p-agomir+BLM组的相对胶原蛋白含量降低(P<0.05),miR-425-5p表达水平升高,而TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-425-5p在HS组织中表达下调,上调miR-425-5p通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路抑制胶原沉积和HS形成。

miR-425-5p通过靶向HSPB8表达介导心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨miR-425-5p及其下游靶点HSPB8对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响及相关机制。方法:将AC16细胞随机分为control组,H/R组,H/R+miR-NC组,H/R+miR-425-5p inhibitor组,H/R+miR-425-5p mimic组,H/R+OE-NC组,H/R+OEHSPB8组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定AC16的增殖能力;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(western blotting)分别检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,荧光素酶报告基因检测验证miR-425-5p及HSPB8间的靶向关系。结果:miR-425-5p在MIRI患者中表达显著高于正常人群;HSPB8在MIRI患者中表达低于正常人群;与control组相比,H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-425-5p mimic组、H/R+OE-NC组细胞活力降低(P<0.01),凋亡、炎症及氧化应激水平上升(P<0.01);与control组相比,H/R+miR-425-5p inhibitor组和H/R+OE-HSPB8组细胞活力显著增强(P<0.01),凋亡、炎症及氧化应激水平下降(P<0.01);与H/R+OE-NC组相比,H/R+OE-HSPB8组凋亡、炎症和氧化应激水平显著降低(P<0.01);靶向关系结果显示,miR-425-5p和HSPB8之间存在靶向作用关系。结论:miR-425-5p可以靶向HSPB8介导MIRI,抑制miR-425-5p可通过上调HSPB8来减轻MIRI。

miR-425-5p通过调控靶基因HGF促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的分析

目的探讨miR-425-5p与肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的相关性,并分析两者的调控作用影响急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)进程诱导心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)的发生。方法采用qRT-PCR检测miR-425-5p在AMI患者及AMI小鼠中的表达水平;荧光素酶报告基因法分析HGF及Western blot检测HGF与miR-425-5p的相关性;应用CCK8和流式细胞法分别检测miR-425-5p转染后对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖能力的影响;通过心脏超声心动图检测AMI小鼠心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒4周后的左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF);采用qRT-PCR检测心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒的AMI小鼠中Nppa mRNA的表达量;通过Masson’s trichrome染色法检测小鼠4周后左心室纤维化;应用CD31抗体对小鼠左室切片进行免疫组化分析; ELISA检测AMI小鼠心脏中miR-425-5p与HGF的蛋白表达量。结果 miR-425-5p与AMI存在相关调控机制; miR-425-5p可下调HGF的mRNA和蛋白表达,而miR-425-5p inhibitor可抑制该下调; miR-425-5p可抑制细胞的增殖;与心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒的AMI小鼠相比,AMI小鼠的左心室纤维化增加; miR-425-5p可促进心肌梗死的发展; miR-425-5p过表达的AMI小鼠心脏中CD31阳性毛细血管的数量明显低于AMI小鼠; miR-425-5p能通过抑制HGF的表达导致AMI小鼠心脏中血管的生成受到抑制,导致心功能降低。结论 miR-425-5p通过抑制HGF的表达,显著促进AMI诱导MF的病理进程。

miR-425-5p靶向ZNF423基因调控Notch信号通路促进胃癌细胞侵袭转移

目的探究miR-425-5p靶向ZNF423基因通过Notch信号通路对胃癌细胞侵袭转移的影响和机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人胃上皮细胞GES-1和3种胃癌细胞(AGS、SGC-7901和BGC-823)中miR-425-5p和ZNF423的表达水平。以SGC-7901细胞为研究对象,构建抑制miR-425-5p表达的细胞株,qRT-PCR检测miR-425-5p的表达水平,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测迁移侵袭和Notch信号通路相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-425-5p和ZNF423的靶向调控关系。结果与GES-1细胞相比,3种胃癌细胞中miR-425-5p的表达显著上调,ZNF423的表达显著下调。稳定抑制miR-425-5p表达的细胞株构建成功。抑制miR-425-5p可显著抑制MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes5和Hey1蛋白的表达,抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭。沉默ZNF423可逆转抑制miR-425-5p表达对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。沉默ZNF423还可逆转抑制miR-452-5p表达对胃癌细胞中Notch信号通路的抑制作用。结论miR-425-5p通过下调ZNF423表达激活Notch信号通路,进而促进胃癌细胞的侵袭和转移。

miR-425-5p通过下调PTEN表达对促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-425-5p通过下调PTEN表达对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法:运用qPCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-425-5p和PTEN的mRNA表达水平,Western blot检测PTEN蛋白表达水平。分别建立过表达miR-425-5p、抑制miR-425-5p表达或过表达PTEN的MCF-7和MDA-MB-231细胞株,采用MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因分析法和Western blotting验证miR-425-5p和PTEN的靶向调控关系。结果:与正常乳腺细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中miR-425-5p的表达显著升高(P<0.05),PTEN的表达显著降低(P<0.05)。过表达miR-425-5p促进MCF-7和MDAMB-231细胞的增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。抑制miR-425-5p或过表达PTEN均可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。PTEN是miR-425-5p的靶基因,miR-425-5p可负性调控PTEN的表达。结论:miR-425-5p可通过下调PTEN蛋白的表达,从而促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响

目的探讨木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响及可能机制。方法将宫颈癌HeLa细胞(购自中国医学科学院肿瘤细胞库)分成Control组(不做任何处理)、Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control)、Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor)、木犀草素+Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control,经40μmol/L木犀草素处理)、木犀草素+Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor,经40μmol/L木犀草素处理)共5组,并对上述5组采用MTT测定细胞培养24 h后A值(以A值代表细胞增殖活性),平板克隆实验测定细胞培养12 d后克隆形成率,流式细胞术检测细胞培养24 h后凋亡率,Transwell小室测定细胞培养24 h后侵袭和迁移数目,Western blot法检测细胞培养24 h后p-Akt、c-caspase-3、c-caspase-9、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,比较5组上述指标差异。结果与Anti-NC组比较,Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组、木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组比较,木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论木犀草素联合下调miR-425-5p可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,作用机制可能与抑制Akt信号通路的激活有关。

lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴调节喉癌细胞干性

目的:探讨lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴对喉癌细胞干性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法将LINC-PINT全长序列扩增并转染到HEp-2细胞,应用Diana Tools、双荧光素酶报告分析系统分别预测和验证LINC-PINT及miR-425-5p的分子靶标,应用qRT-PCR和Western blot检测LINC-PINT和癌细胞干性相关基因(Sox-2、CD44、CD133和Nanog)及其蛋白的表达。结果:转染LINC-PINT后证实LINC-PINT过表达会引起癌细胞干性相关基因表达下调,抑制miR-425-5p可引起癌细胞干性相关基因表达下调;LINC-PINT的分子靶标为miR-425-5p,且miR-425-5p的分子靶标为PTCH1。结论:LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴抑制喉癌细胞干性而抑制喉癌的发生。

MiR-425-5p通过调控PTEN促进乳腺癌细胞体外生长和转移的机制

目的研究miR-425-5p对乳腺癌细胞体外生长和转移的影响及机制。方法RT-qPCR检测5种乳腺癌细胞株中miR-425-5p的表达水平;miR-425-5p mimic、inhibitor、NC转染至乳腺癌细胞,CCK8法和Transwell小室法检测转染后乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,采用生物信息学的方法预测miR-425-5p的靶基因,荧光素酶报告实验验证靶基因,Western blot检测转染miR-425-5p mimic、inhibitor、NC后靶基因的表达水平。检测过表达及低表达PTEN后,miR-425-5p对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。结果5种乳腺癌细胞株中miR-425-5p表达水平均显著高于乳腺上皮细胞(P<0.05)。miR-425-5p mimic显著促进MCF-7细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.001);miR-425-5p inhibitor显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.001)。预测并验证PTEN为miR-425-5p的靶基因,miR-425-5p能够下调PTEN的表达;过表达PTEN后,miR-425-5p mimic的促增殖和迁移作用则被显著抑制(P<0.05);抑制PTEN表达后miR-425-5p inhibitor的抑制增殖和迁移作用亦被显著增强(P<0.05)。结论miR-425-5p能够调控乳腺癌细胞的体外生长和转移,其机制可能为抑制抑癌基因PTEN的表达。

miR-425-5p在调控宫颈癌HeLa细胞功能中的作用及其机制

目的miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞功能的调控作用及其机制。方法将体外培养的HeLa细胞分为miR-NC组(转染miR-425-5p模拟物对照)、miR-425-5p组(转染miR-425-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-425-5p抑制剂对照)和anti-miR-425-5p组(转染miR-425-5p抑制剂)共四组。采用RT-PCR检测四组细胞中miR-425-5p的表达水平,CCK-8法、克隆形成试验、Transwell试验、划痕试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡能力。生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因试验检测miR-425-5p和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的靶向关系,Western blot检测miR-425-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果转染miR-425-5p模拟物后HeLa细胞中miR-425-5p的表达水平较miR-NC组明显升高,而miR-425-5p抑制剂后miR-425-5p的表达水平较anti-miR-NC组明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显升高,而细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实miR-425-5p能够与PTEN 3′UTR靶向结合,Western blot试验结果证实miR-425-5p可负向调控PTEN蛋白的表达。结论miR-425-5p可促进HeLa细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。

晚期结直肠癌患者血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平及其与化疗敏感性、预后的关系

目的分析晚期结直肠癌患者血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平及其与化疗敏感性、预后的关系。方法选取2017年1月1日至2018年12月10日我院肿瘤内科收治的82例晚期结直肠癌患者作为观察组,另选取同期我院70名体检健康人群作为对照组。均行血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平测定。比较两组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平。比较观察组不同亚组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平。分析观察组化疗前、后血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平变化情况与化疗敏感性及预后的关系。结果观察组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平低于对照组(P<0.05)。DCR组化疗后的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平高于化疗前及PD组(P<0.05)。DCR组中,血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者占比高于未升或下降患者(P<0.05)。血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者的无进展生存期长于未升或下降患者(P<0.05)。结论血清miR-143-3p和miR-425-5p在晚期结直肠癌患者中呈低表达。化疗后血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者的化疗敏感性更高,无进展生存期更长。

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用。方法用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组。通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平。通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系。结果与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33′UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33′UTR的萤光素酶活性无影响。结论下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡。

经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p水平检测对宫颈癌的诊断效能分析

目的分析经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p水平检测对宫颈癌的诊断效能。方法选取2017年1月~2019年1月在郑州市第七人民医院诊治的宫颈癌患者58例和宫颈炎及宫颈上皮瘤变者77例分别为癌症组和疾病组,60例同期来院体检结果正常的健康女性为对照组。对三组实施经阴道彩色多普勒超声检查,并使用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130a,miR-425-5p水平。分析经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p表达对宫颈癌的诊断效能。结果癌症组、疾病组和对照组的收缩期血流速度(peak systolic velocity,PSV)(12.01±2.85,9.53±1.98和8.52±1.23cm/s)依次降低,阻力指数(resistive index,RI)(0.42±0.10,0.58±0.12和0.66±0.14)依次升高,差异有统计学意义(F=43.178,60.098,均P<0.001);癌症组、疾病组和对照组的血清miR-130a(0.092±0.030,0.045±0.012和0.030±0.008),miR-425-5p(0.733±0.203,0.365±0.098和0.205±0.048)表达水平依次升高,差异有统计学意义(F=181.070,259.304,P<0.001)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)显示经阴道多普勒超声诊断宫颈癌的敏感度、特异度、准确度、曲线下面积(area under curve,AUC)分别为77.59%,87.01%,82.96%和0.889;血清miR-130a分别为79.31%,80.52%,80.00%和0.820;血清miR-425-5p分别为74.14%,77.92%,76.30%和0.785;联合诊断分别为74.14%,90.91%,83.70%和0.932,三者联合检测的AUC大于单独检测(P<0.05)。结论阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a和miR-425-5p的表达对宫颈癌具有较高的诊断效能。

血清外泌体来源的miR-425-5p与帕金森病认知功能障碍的相关性分析

目的分析血清外泌体来源的微小核糖核酸-425-5p(miR-425-5p)与帕金森病(PD)并发认知功能障碍(CD)的相关性。方法选择129例PD患者,使用蒙特利尔认知评估(MoCA)量表评价认知功能,判断患者是否并发CD。抽取患者外周静脉血,提取血清中的外泌体,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测外泌体中miR-425-5p水平,比较CD与非CD患者的miR-425-5p水平。采用Pearson相关分析miR-425-5p与MoCA量表评分的关系,用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-425-5p对PD并发CD的诊断价值,用Logistic回归分析miR-425-5p与PD并发CD的关系。结果129例PD患者中,并发CD 47例、非CD 82例。CD患者外泌体中miR-425-5p水平低于非CD患者(P<0.05)。miR-425-5p与MoCA量表中的语言、抽象、视空间与执行、延迟记忆和总分均呈正相关(r分别为0.339、0.489、0.347、0.555、0.541,P均<0.05)。miR-425-5p诊断PD并发CD的ROC曲线下面积为0.876,灵敏度和特异度分别为82.98%和87.80%。Logistic回归分析结果显示,miR-425-5p>0.71是PD并发CD的独立保护因素(OR=0.023,95%CI为0.005~0.107,P<0.05)。结论血清外泌体来源的miR-425-5p水平低与PD并发CD有关。

miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及预后

目的:检测微小RNA-425-5p(miR-425-5p)在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及与预后关系。方法:收集本院2014年4月—2015年5月收治的子宫内膜癌患者84例为研究对象,另取健康体检妇女50例为健康对照组。qRT-PCR检测受试者血清及患者癌组织和癌旁组织中miR-425-5p表达水平。结果:子宫内膜癌患者血清miR-425-5p表达水平高于对照组,癌组织中表达水平高于癌旁正常组织(均P<0.05);血清和组织中miR-425-5p表达水平与子宫内膜癌肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关,低表达患者总生存率高于高表达患者(均P<0.05)。COX分析表明,血清和组织中miR-425-5p表达水平、组织分化程度是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和组织中表达均上调,且与患者预后有关,可作为子宫内膜癌患者预后评判的参考指标。

miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中表达水平变化及临床意义

目的分析微小核糖核苷酸(miRNA)-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平变化及临床意义。方法收集2019年5月至2021年3月绵阳市中心医院收治的124例子宫内膜癌患者作为子宫内膜癌组,另选择同期体检的124例健康女性作为健康对照组。应用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相对表达水平。比较两组血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相对表达水平,分析其与肿瘤临床分期、淋巴结转移的关系,通过Pearson相关分析miR-125b、miR-29a、miR-425-5p之间的相关性。结果子宫内膜癌组血清miR-425-5p相对表达水平明显高于健康对照组,血清miR-125b、miR-29a相对表达水平明显低于健康对照组(P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a相对表达水平高于Ⅲ~Ⅳ期患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05);中高分化子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a水平高于低分化患者,血清miR-425-5p表达水平低于低分化患者(P<0.05);淋巴结转移的子宫内膜癌患者miR-125b、miR-29a相对表达水平高于无淋巴结转移患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于无淋巴结转移患者(P<0.05);浅肌层浸润的子宫内膜癌患者血清miR-125b、miR-29a相对表达水平高于深肌层浸润患者,血清miR-425-5p相对表达水平低于深肌层浸润患者(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,子宫内膜癌患者miR-425-5p与miR-125b、miR-29a均呈负相关(r=-0.419、-0.436,P<0.05)。结论miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平升高,miR-125b、miR-29a在子宫内膜癌患者血清中相对表达水平降低,且其与临床分期、淋巴结转移密切相关,可能作为子宫内膜癌诊断、治疗的新型靶点。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

miR-425-5p及PTEN、TGF-β1在非吸烟者早期非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨miR-425-5p及PTEN、TGF-β_(1)在非吸烟者早期非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2020年4月至2020年9月间在本院接受手术治疗肺腺癌患者41例为观察组,癌旁正常组织为对照组。采用RT-qPCR检测肺癌和癌旁正常肺组织中miR-425-5p的表达量,采用Western blot法检测肺癌和相邻正常肺组织样本中PTEN、TGF-β_(1)的相对表达,比较两组miR-425-5p及PTEN、TGF-β_(1)的相对表达量。分析miR-425-5p及PTEN、TGF-β_(1)表达与临床及病理参数的相关性。分析miR-425-5p表达与PTEN和TGF-β_(1)相对表达水平之间的相关性。结果观察组miR-425-5p、及PTEN、TGF-β_(1)的表达水平低于对照组(P<0.001)。miR-425-5p的表达与肿瘤复发存在相关性,与miR-425-5p表达较高的患者相比,miR-425-5p表达较低的患者肿瘤复发风险较高(P<0.05)。比较肿瘤直径大小、不同年龄、性别、临床分期、淋巴转移、肿瘤发现的时间和血清肿瘤标志物的肺癌组织中miR-425-5p表达水平差异均无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析提示miR-425-5p的表达与PTEN的表达呈正相关,但与TGF-β_(1)的表达无相关性。结论非吸烟者早期非小细胞肺癌组织中miR-425-5p及PTEN、TGF-β_(1)异常低表达,且miR-425-5p异常低表达和肿瘤高复发风险及PTEN蛋白的表达密切相关。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。