常春藤皂苷元通过调控lncRNA PCAT19/miR-4319对TPC-1甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨常春藤皂苷元对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法 用不同剂量常春藤皂苷元处理人甲状腺癌TPC-1细胞,si-NC、si-PCAT19分别转染至TPC-1细胞,pcDNA、pcDNA-PCAT19分别转染至TPC-1细胞后加入常春藤皂苷元处理细胞。MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖和周期,Transwell检测细胞迁移及侵袭,RT-qPCR法检测PCAT19、miR-4319表达,双荧光素酶报告实验检测PCAT19、miR-4319靶向关系,Western blot法检测Twist、Snail、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达。结果 常春藤皂苷元能剂量依赖性地降低细胞存活率、S期细胞比例、PCAT19 mRNA表达及Twist、Snail、N-cadherin蛋白表达(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),升高G_(0)/G_(1)期细胞比例、E-cadherin蛋白表达、miR-4319表达(P<0.05)。PCAT19可靶向调控miR-4319的表达。转染si-PCAT19可抑制TPC-1细胞增殖、迁移及侵袭,并可诱导细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期。转染pcDNA-PCAT19可通过抑制miR-4319表达而恢复常春藤皂苷元对TPC-1细胞生物学行为的作用。结论 常春藤皂苷元可通过调节PCAT19/miR-4319表达而诱导细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,并抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

lncRNA DNAJC3-AS1靶向miR-4319调控皮肤鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1靶向miR-4319对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR检测39例CSCC患者癌组织及癌旁组织中DNAJC3-AS1和miR-4319表达。将CSCC细胞A431分为si-NC组、si-DNAJC3-AS1组、miR-NC组、miR-4319组、pcDNA组、pcDNA-DNAJC3-AS1组、si-DNAJC3-AS1+anti-miR-NC组、si-DNAJC3-AS1+anti-miR-4319组。CCK-8法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验分别用于检测A431细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭能力。双荧光素报告实验分析DNAJC3-AS1和miR-4319的靶向关系。结果CSCC组织中DNAJC3-AS1表达上调,miR-4319表达下调。与si-NC组比较,si-DNAJC3-AS1组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),miR-4319表达水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-4319组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。DNAJC3-AS1与miR-4319直接特异性结合。pcDNA-DNAJC3-AS1组A431细胞miR-4319表达水平显著低于pcDNA组(P<0.05)。与si-DNAJC3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DNAJC3-AS1+anti-miR-4319组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。结论CSCC中DNAJC3-AS1呈高表达,miR-4319呈低表达。抑制DNAJC3-AS1通过靶向上调miR-4319可降低CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。因此,抑制DNAJC3-AS1/miR-4319轴可能成为潜在的CSCC治疗策略。

miR-4319通过靶向TNFAIP3调控强直性脊柱炎成纤维细胞成骨分化

目的探讨miR-4319对强直性脊柱炎(AS)成纤维细胞骨向分化的影响机制。方法原代分离培养AS成纤维细胞和正常成纤维细胞;脂质体法将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3(TNFAIP3)组(转染pcDNA-TNFAIP3)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-4319组(转染miR-4319mimics)、miR-4319+pcDNA组(共转染miR-4319 mimics和pcDNA)、miR-4319+pcDNA-TNFAIP3组(共转染miR-4319 mimics和pcDNA-TNFAIP3)转染至AS成纤维细胞。实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-4319、TNFAIP3的表达;Western blot检测细胞TNFAIP3蛋白;双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验、RNA下拉(RNA pull down)实验检测miR-4319与TNFAIP3的靶向关系;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、羟脯氨酸检测试剂盒、放免法骨钙素检测试剂盒检测成骨标志物ALP、胶原、骨钙素的含量。结果与正常成纤维细胞相比,AS成纤维细胞中miR-4319表达显著升高,TNFAIP3表达显著降低(P<0.05),并且miR-4319靶向结合TNFAIP3。过表达TNFAIP3能上调AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素的含量,而过表达miR-4319则可抑制AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素的含量。过表达TNFAIP3还可部分逆转过表达miR-4319对AS成纤维细胞ALP、胶原、骨钙素含量的调控。结论 miR-4319可抑制AS成纤维细胞的骨向分化,其机制与miR-4319靶向TNFAIP3有关。

胡黄连苷Ⅱ联合曲美替尼对HT-29细胞凋亡和上皮细胞间质转化的影响

目的:研究胡黄连苷Ⅱ联合曲美替尼通过miR-4319对结直肠癌细胞HT-29凋亡和上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法:将结直肠癌细胞HT-29分成6组,分别为对照组、曲美替尼组、胡黄连苷Ⅱ组、联合组、miR-NC抑制组、miR-4319抑制组,n=9。采用CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blotting法检测Vimentin、E-cadherin、Bax、C-Caspase-3蛋白表达,qRT-PCR检测miR-4319表达。比较6个组的检测结果。结果:与对照组比较,曲美替尼组、胡黄连苷Ⅱ组、联合组的细胞成活率和Vimentin的表达均减少(均P<0.05),而凋亡率和Bax、C-Caspase-3、E-cadherin的表达均增加(均P<0.05);与miR-NC抑制组比较,miR-4319抑制组的细胞成活率、Vimentin的表达均显著增加(均P<0.05),细胞凋亡率和Bax、C-Caspase-3、E-cadherin蛋白表达却显著减少(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,曲美替尼组、胡黄连苷Ⅱ组细胞中miR-4319的表达增多(均P<0.05)。结论:胡黄连苷Ⅱ联合曲美替尼通过上调miR-4319诱导结直肠癌细胞HT-29凋亡,并抑制细胞EMT。