miR-4324与Talin2在乳腺癌中高表达

目的 探讨miR-4324对踝蛋白2(Talin2)调控和乳腺癌细胞的影响及临床意义。方法 利用免疫组化法检验Talin2在乳腺癌组织(BCT)和对应癌旁乳腺组织(PCBT)的表达,结合病理资料分析Talin2与乳腺癌预后及病理特征间的关联;qRT-PCR法测定miR-4324在BCT和PCBT的表达;人乳腺癌细胞株(SKBR-3)体外培养,分为Control对照组(正常培养)及相关转染组(转染相关片段):miR-4324 mimics组;miR-4324 inhibitor组;miR-4324 NC组;si-Talin2组;miR-4324 inhibitor+si-Talin2组。通过细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭实验,检测SKBR-3的生物学活性改变;通过qRT-PCR及Western-blot实验测定Talin2的表达;利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达;利用Transwell回复实验验证miR-4324调控Talin2影响SKBR-3细胞的迁移能力。结果 Talin2在BCT中的表达高于PCBT,并与淋巴结转移、HER-2的高表达有关(P<0.05),与年龄、临床分期、组织学分级及雌、孕激素受体(ER、PR)的表达间无明显相关性(P>0.05);miR-4324在BCT中表达较PCBT降低(P<0.01);与Control组比较,miR-4324 mimics组SKBR-3细胞增殖降低,凋亡增多(P<0.01),迁移和侵袭能力降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测证实,相对于Control组,miR-4324 mimics共转染可显著降低Talin2-3’-UTR WT报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05);miR-4324 mimics组中Talin2的Mrna和蛋白表达较Control组降低(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示,相对于Control组,SKBR-3细胞的迁移能力在miR-4324 inhibitor组中上升(P<0.01);si-Talin2组中下降(P<0.01);miR-4324 inhibitor+si-Talin2组中居中(P<0.05)。结论 Talin2高表达与乳腺癌患者淋巴结转移及HER-2过表达相关,下调miR-4324能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移,并诱导凋亡,其中抑制迁移可能是其靶向抑制Talin2表达实现的。

MiR-4324通过作用于RacGAP1抑制人RCC细胞的增殖

目的:观察miR-4324对人RCC细胞生长的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测RCC组织和癌旁组织中RacGAP1 mRNA和miR-4324的表达;通过细胞瞬时转染的方式在人RCC细胞中转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒;qPCR检测细胞miR-4324潜在靶基因RacGAP1 mRNA的表达,Western印迹法检测RacGAP1蛋白的表达;采用细胞增殖实验检测细胞增殖能力;采用EdU实验检测细胞增殖活力。结果:qPCR结果显示,与肾小管上皮细胞和正常肾组织相比,RCC细胞和RCC组织中miR-4324表达明显降低,RacGAP1 mRNA表达明显增高;与对照组相比,转染miR-4324分别抑制786-O和CAKI-1细胞中RacGAP1 mRNA的表达,Western蛋白印迹检测结果验证了miR-4324对RacGAP1基因表达的调控;而RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞中RacGAP1表达恢复。MTT结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物后,细胞增殖能力明显下降;共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞增殖能力逐渐增强。EdU结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物的细胞EdU阳性细胞百分比明显减低,表明细胞增殖能力明显下降。双荧光素酶报告基因实验结果显示,在RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中miR-4324能够与RacGAP1基因3’UTR特定序列结合从而靶向调控RacGAP1基因的表达。结论:miR-4324能通过靶向结合RacGAP1的3’UTR特定序列抑制其表达,从而显著抑制RCC细胞的增殖。

circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的分析circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达与临床意义,探究circ-RACGAP1对膀胱癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法通过TCGA数据库探究circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达,分析circ-RACGAP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法分析细胞系5637、T24、J82、RT-4、UM-UC-3中circ-RACGAP1表达。通过脂质体转染技术将circ-RACGAP1敲降质粒转染T24细胞。克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别分析敲降circ-RACGAP1对T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用deepBase、Circbank、CircInteractome、circRNABase数据库和荧光报告系统验证circ-RACGAP1和miR-4324之间的靶向结合。qPCR检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中miR-4324表达的影响。采用Western blot法检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)蛋白和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白表达的影响。结果膀胱癌组织中circ-RACGAP1呈高表达(P<0.01),其表达随着患者临床分期恶性程度增高而升高(P<0.01)。膀胱癌细胞系中circ-RACGAP1表达明显高于人正常膀胱上皮细胞(均P<0.01)。与对照组比较,sh-sh-circ-RACGAP1组T24细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.01)。circ-RACGAP1可靶向抑制miR-4324的表达(P<0.01)。与对照组比较,sh-circ-RACGAP1组T24细胞中RACGAP1蛋白表达水平降低(P<0.01),PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子κB(NF-κB)表达水平均降低(均P<0.01)。结论膀胱癌组织和细胞系中circ-RACGAP1呈高表达,敲降circ-RACGAP1能够抑制T24细胞的恶性生物学行为,circ-RACGAP1是通过抑制miR-4324表达激活PI3K/AKT信号通路来发挥作用。