circCEP128靶向miR-4458对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的探讨circCEP128靶向miR-4458调控胃癌AGS细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法采用qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测胃癌组织、癌旁组织中circCEP128与miR-4458的表达量;si-NC、si-circCEP128、miR-NC、miR-4458 mimics、si-circCEP128+anti-miR-NC、si-circCEP128+anti-miR-4458分别转染入胃癌细胞AGS;采用细胞对数试剂盒(CCK)-8实验检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡能力;采用Trasnwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circCEP128与miR-4458的靶向关系。结果胃癌组织中circCEP128表达水平比癌旁组织显著升高,miR-4458表达水平显著降低(P<0.05);转染si-circCEP128或转染miR-4458 mimics后细胞活力显著降低,迁移及侵袭细胞数明显减少,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实circCEP128可靶向调控miR-4458的表达;共转染si-circCEP128与anti-miR-4458可减弱转染si-circCEP128对AGS细胞生物学行为的作用。结论抑制circCEP128表达可通过靶向miR-4458从而减弱胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并可诱导胃癌细胞凋亡。

CircDONSON靶向miR-4458对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨CircDONSON对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法检测肝癌组织中CircDONSON、miR-4458表达量;肝癌细胞Huh-7分为si-NC组、si-CircDONSON组、miR-NC组、miR-4458组、si-CircDONSON+anti-miR-NC组、si-CircDONSON+anti-miR-4458组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭情况;双荧光素酶报告实验检测miR-4458与CircDONSON靶向的关系;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果:肝癌组织中CircDONSON表达量较癌旁组织升高(4.82±0.38比1.00±0.12,P<0.05),miR-4458表达量较癌旁组织降低(0.34±0.04比1.00±0.07,P<0.05);抑制si-CircDONSON或过表达miR-4458降低肝癌细胞活力、划痕愈合率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05)减少,细胞克隆形成数和侵袭细胞数(P<0.05);miR-4458过表达可降低WT-CircDONSON的荧光素酶活性(P<0.05);干扰miR-4458表达逆转了抑制CircDONSON表达对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭的作用(P<0.05)。结论:抑制CircDONSON表达可阻碍肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,这可能与抑制CircDONSON导致细胞中miR-4458表达升高有关。

七氟醚调控miR-4458影响胃癌SNU-1细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨七氟醚是否调控miR-4458影响胃癌SNU-1细胞的增殖、迁移和凋亡。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、Transwell实验、流式细胞术、实时定量PCR(RT-qPCR)分析不同浓度七氟醚对SNU-1细胞增殖、迁移、凋亡及miR-4458表达的影响。观察过表达miR-4458或抑制miR-4458表达对SNU-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果不同浓度七氟醚处理后SNU-1细胞活力、迁移细胞数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率、miR-4458表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖效应。过表达miR-4458后SNU-1细胞活力、迁移细胞数显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-4458表达后SNU-1细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-4458表达可逆转七氟醚对SNU-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响(P<0.05)。结论七氟醚通过上调miR-4458可抑制胃癌SNU-1细胞增殖和迁移,并诱导细胞凋亡。

咪唑安定通过调控miR-4458/NF-κB通路影响结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究咪唑安定对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制是否与调控微小RNA-4458(miR-4458)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路有关。方法本研究于2019年12月至2020年10月开展实验。用不同浓度咪唑安定处理结肠癌细胞SW620,噻唑蓝法、Transwell实验检测SW620细胞增殖、迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、MMP9、磷酸化的NF-κBp65(phosphorylated NF-κB p65,p-p65)和磷酸化的NF-κB抑制蛋白-α(phosphorylated NF-κB inhibitory protein-α,p-IкBα)表达,实时定量聚合酶链反应分析miR-4458表达。转染miR-4458抑制物至SW620细胞,采用上述方法评估抑制miR-4458表达对SW620细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果咪唑安定处理显著降低SW620细胞增殖活力[(0.843±0.05)、(0.611±0.04)、(0.527±0.03)比(1.089±0.07)]、迁移能力[(147±10.49)个、(117±8.06)个、(83±6.13)个比(179±13.07)个]和侵袭能力[(113±8.67)个、(89±4.71)个、(61±3.79)个比(136±9.14)个](均P<0.05),并下调CyclinD1[(0.70±0.05)、(0.51±0.03)、(0.44±0.03)比(0.83±0.07)]、MMP2[(0.73±0.05)、(0.56±0.04)、(0.45±0.03)比(0.91±0.07)]、MMP9[(0.58±0.04)、(0.41±0.03)、(0.34±0.02)比(0.76±0.06)]、p-p65[(0.70±0.05)、(0.57±0.04)、(0.43±0.03)比(0.83±0.07)]和p-IкBα[(0.61±0.04)、(0.48±0.04)、(0.37±0.02)比(0.71±0.05)]蛋白的表达(均P<0.05),上调miR-4458[(1.43±0.10)、(1.89±0.15)、(2.01±0.14)比(1.00±0.08)]表达(均P<0.05)。抑制miR-4458表达显著增加SW620细胞增殖活力[(1.428±0.11)比(1.093±0.08)]、迁移能力[(237±19.76)个比(183±14.55)个]和侵袭能力[(179±14.12)个比(131±8.14)个](均P<0.05),上调CyclinD1[(1.37±0.11)比(0.85±0.06)]、MMP2[(1.58±0.12)比(0.93±0.08)]和MMP9[(1.11±0.09)比(0.77±0.06)]蛋白表达(均P<0.05)。抑制miR-4458表达可减弱咪唑安定对SW620细胞增殖活力[(0.978±0.07)比(0.534±0.04)]、迁移能力[(173±9.84)个比(87±5.73)个]、侵袭能力[(143±11.04)个比(65±4.13)个]以及CyclinD1[(0.81±0.06)比(0.43±0.02)]、MMP2[(0.89±0.08)比(0.48±0.03)]和MMP9[(0.75±0.05)比(0.36±0.02)]蛋白表达的抑制作用(均P<0.05)。抑制NF-κB通路可逆转抑制miR-4458表达对咪唑安定处理的SW620细胞增殖[(0.547±0.03)比(0.978±0.07)]、迁移[(76±4.19)个比(173±9.84)个]和侵袭[(61±4.05)个比(143±11.04)个]的影响(均P<0.05)。结论咪唑安定通过上调miR-4458和抑制NF-κB活化对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭产生抑制作用。

miR-4458靶向结合BZW2对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-4458及其靶向蛋白BZW2在肝细胞癌(肝癌)中的表达及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法本研究标本来源于2019年1月至2020年12月中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院收治的247例肝癌患者空腹血清、肝癌组织标本(肝癌组),并收集同期200例健康志愿者空腹血清标本作为对照组。其中肝癌组男153例,女94例;年龄35~71岁,中位年龄49岁。对照组男120例,女80例;年龄30~70岁,中位年龄41岁。所有入组人员均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。采用实时荧光定量PCR检测两组患者miR-4458和BZW2 mRNA表达量;Western blot检测肝癌组织和癌旁组织中BZW2蛋白表达情况,分析肝癌组织中BZW2 mRNA表达量与患者临床病理特征的关系;生物信息学预测miR-4458和BZW2的作用关系,并采用双荧光素酶检测验证。培养和转染人肝癌细胞株HepG2,采用CCK-8法、Transwell实验检测调控miR-4458表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果肝癌组患者血清miR-4458平均相对表达量为0.85±0.23,明显低于健康对照组的1.06±0.30(t=-7.886,P<0.05)。肝癌组织miR-4458相对表达量为0.77±0.27,明显低于癌旁组织的1.23±0.35(t=-12.646,P<0.05)。肝癌组血清BZW2 mRNA相对表达量为1.67±0.44,明显高于健康对照组的1.13±0.29(t=13.674,P<0.05)。肝癌组织BZW2 mRNA相对表达量为1.98±0.31,明显高于癌旁组织的1.27±0.30(t=16.537,P<0.05)。肝癌组织BZW2蛋白相对表达量为1.57±0.44,明显高于癌旁组织的0.83±0.38(t=16.483,P<0.05)。肝癌组织BZW2 mRNA相对表达量与肝癌患者肿瘤直径、肿瘤包膜、微血管侵犯和肿瘤分化相关(t=-8.208,-13.248,-7.981,7.145;P<0.05)。生物信息平台预测并荧光素酶验证miR-4458和BZW2互为靶向关系。HepG2细胞转染miR-4458抑制剂后BZW2蛋白相对表达量为1.95±0.24,明显高于转染miR-4458模拟物的0.43±0.11(LSD-t=3.384,P<0.05)。HepG2细胞转染miR-4458抑制剂后24、48、72 h增殖、迁移和侵袭能力上调。结论肝癌患者中miR-4458低表达,BZW2高表达。miR-4458靶向结合BZW2后下调miR-4458表达可促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与肝癌患者不良预后相关。

下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458调控乳腺癌SK-BR-3细胞放射敏感性

目的研究下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭及放射敏感性影响。方法qRT-PCR方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织、正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中LINC00263表达差异。SK-BR-3细胞中转染LINC00263shRNA下调LINC00263表达,克隆实验检测放射敏感性。SK-BR-3细胞给予6Gy照射处理,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测细胞运动和侵袭,蛋白印迹法检测C-Caspase-3、C-Caspase-9、MMP-2、MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测LINC00263和miR-4458有互补结合位点,荧光素酶报告系统测定二者的靶向关系。在SK-BR-3细胞中共转染LINC00263shRNA和miR-4458 inhibitor,给予6Gy照射处理,检测细胞增殖、运动、侵袭和凋亡变化。结果乳腺癌组织中LINC00263表达水平高于癌旁组织。乳腺癌细胞中LINC00263表达水平高于正常乳腺上皮细胞。转染LINC00263shRNA以后的SK-BR-3细胞放射敏感性增加。转染LINC00263shRNA和放射联合具有协同作用,共同抑制细胞增殖、运动、侵袭,促进细胞凋亡,提高细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达水平,降低细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。下调LINC00263靶向促进miR-4458表达。miR-4458 inhibitor逆转LINC00263shRNA联合放射对SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭的抑制作用和凋亡促进作用。结论下调lncRNA LINC00263靶向miR-4458抑制SK-BR-3细胞增殖、运动、侵袭,提高细胞放射敏感性。

miR-4458靶向STAT3对结直肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-4458对人结肠癌细胞(HT-29)增殖、凋亡及上皮间质化(EMT)的影响及其作用机制。方法体外培养HT-29细胞,分为对照组、miR-4458阴性对照(NC)组和miR-4458模拟物(mimics)组,另将人正常结肠上皮细胞(HCoEpiC)设置为正常组。逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测正常组、各组HT-29细胞、结肠癌组织及癌旁组织中miR-4458和信号转导与转录激活因子(STAT3)mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组HT-29细胞存活率变化;划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移和侵袭变化;Western blot检测各组HT-29细胞上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经性钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-4458与STAT3的靶向关系。结果与癌旁组织和正常组细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-4458均低表达,STAT3 mRNA均高表达。Targetscan human数据库预测miR-4458与STAT3 mRNA 3′UTR区有结合位点。与STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 NC组比较,STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组和miR-4458 NC组相比,miR-4458 mimics组细胞miR-4458表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),存活率、划痕迁移率、侵袭数量、STAT3 mRNA和蛋白表达、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。此外,体内实验证实,过表达miR-4458可显著抑制HT-29移植瘤的生长。结论miR-4458可能通过靶向抑制STAT3表达,抑制人结直肠癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质化行为。

miRNAs对293T细胞IL-10表达调控的研究

目的探讨体外hsa-let-7、hsa-miR-98、hsa-miR-4458、hsa-miR-4500、hsa-miR-27a和hsa-miR-27b对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)表达的影响。方法通过生物信息学分析预测IL-10靶向的miRNAs。在体外培养的293T细胞中瞬时转染候选miRNAs类似体,提取总RNAs,应用real time PCR检测IL-10的表达。结果在293T细胞中上调let-7、miR-98、miR-27a和miR-27b的表达,IL-10表达分别下调了46.72%、58.57%、65.29%和57.37%(P<0.01)。上调miR-4458及miR-4500水平,IL-10表达无明显下调(P>0.05)。结论 let-7、miR-98和miR-27a/b对293T细胞中IL-10的表达存在负调控功能,IL-10可能为其靶基因。