LncRNA GNAS-AS1通过调节miR-449a/Notch1轴参与胃癌细胞的增殖和迁移

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)GNAS反义RNA1(GNAS-AS1)通过调节miR-449a/缺刻基因1(Notch1)轴对胃癌(GC)细胞增殖和迁移的影响。方法收集四川省人民医院2013年9月至2017年9月30例确诊为GC的患者肿瘤组织与癌旁组织标本;将GC细胞AGS随机分为对照组(Control组)、si-NC组、si-GNAS-AS1组、si-GNAS-AS1+inhibitor NC组、si-GNAS-AS1+miR-449a inhibitor组。实时荧光定量PCR检测GNAS-AS1、miR-449a和Notch1 mRNA的表达;MTT实验、平板克隆形成实验检测增殖;wound healing实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。Western Blot检测Notch1、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-449a和GNAS-AS1、Notch1的关系。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中GNAS-AS1、Notch1 mRNA表达升高,miR-449a表达降低(P<0.05)。与Control组、si-NC组相比,si-GNAS-AS1组AGS细胞GNAS-AS1表达、OD_(490)值、克隆形成数、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Notch1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达表达降低,miR-449a表达、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与si-GNASAS1组、si-GNAS-AS1+inhibitor NC组相比,si-GNAS-AS1+miR-449a inhibitor组OD_(490)值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Notch1、Vimentin、N-cadherin表达升高(P<0.05),miR-449a表达、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。GNAS-AS1靶向负调控miR-449a表达,miR-449a靶向负调控Notch1表达。结论沉默GNAS-AS1可能通过上调miR-449a来抑制Notch1蛋白的表达,从而抑制GC细胞增殖、迁移、侵袭过程。

miR-449a下调TGIF2抑制甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖的研究

目的 探讨miR-449a靶向TGIF2对甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖、氧化应激和上皮间质转化(EMT)的调控作用。方法 以甲状腺癌细胞CAL-62作为研究对象。分为对照组、miR-449a mimic组、pcDNA-TGIF2组、miR-449a mimic+pcDNA-TGIF2共转染组。采用RT-qPCR检测细胞中miR-449a和TGIF2表达;TargetScan软件与双荧光素酶报告实验验证二者靶向关系;CCK8检测细胞活力;Brdu染色检测细胞增殖;试剂盒检测氧化应激标记物SOD和MDA含量;DCF染色检测ROS含量;Western blot检测EMT标记分子E-cadherin, N-cadherin和Fibronectin的蛋白表达。结果 TGIF2在CAL-62细胞中表达较高,与对照组相比,pcDNA-TGIF2转染组BrdU阳性细胞数目和百分率显著增加,SOD含量显著升高而MDA和ROS含量显著降低,同时N-cadherin和Fibronectin表达显著上升而E-cadherin表达显著下降(均P<0.05)。在miR-449a mimic+pcDNA-TGIF2共转染组中上述现象被有效缓解和逆转。结论 miR-449a过表达可通过靶向TGIF2抑制甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖,加剧其氧化应激和上皮间质转换。

miR-449a通过靶向NF-κB改善周围神经损伤炎症反应

旨在评估骨髓间充质干细胞通过miR-449a靶向调控NF-κB信号通路改善周围神经损伤炎症反应的作用机制。方法 采用过表达和抑制miR-449a转染干细胞,检测转然后干细胞的miR-449a水平和活力;体外共培养干细胞和神经元,评价过表达miR-449a的干细胞对神经元的体外作用机制;建立周围神经损伤大鼠模型,分为空白对照组、模型组、干细胞组、干细胞+miR-449a过表达组和干细胞+miR-449a抑制剂组。检测大鼠的行为状态,脊髓神经细胞miR-449a表达,分析NF-кB信号通路蛋白(IκBα、p50、p65)水平,评估炎症因子TNF-α和 IL-1β含量以及观察损伤组织的恢复情况。结果 体外干细胞组与实验组相比细胞活性无明显增加。而加入神经元后,miR-449a过表达组神经元活性明显增多,NF-кB信号通路蛋白(IκBα、p50、p65)表达减少,炎症因子TNF-α和 IL-1β明显减少(P<0.05)。大鼠体内实验也表明建模后大鼠反应迟钝,受到刺激后不鸣叫不躲避,而进干细胞治疗后大鼠体重以及反应逐渐恢复正常,干细胞+miR-449a过表达组中miR-449a表达显著增加,NF-кB信号通路蛋白(IκBα、p50、p65)表达减少,炎症因子TNF-α和 IL-1β明显减少,细胞活性明显增加(P<0.05)。干细胞+miR-449a抑制剂组可以逆转骨髓间充质干细胞修复周围神经损伤的炎症反应。结论 骨髓间充质干细胞可以通过miR-449a靶向调控NF-кB信号通路减轻周围神经损伤炎症反应修复神经损伤。

绵羊miR-449a/b前体序列组织表达及生物信息学分析

【目的】探究miR-449a/b在绵羊生长发育和繁殖性能方面的作用,为进一步研究miR-449a/b在绵羊繁殖调控中的作用提供参考。【方法】以湖羊为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术鉴定miR-449a/b在湖羊下丘脑、垂体和卵巢中的相对表达量。使用TargetScan、miRWalk、miRDB软件预测绵羊miR-449a/b前体序列的靶基因,利用微生信和KOBAS网站对其进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】试验获得的前体序列与NCBI数据库中绵羊前体序列信息比对结果一致。实时荧光定量PCR结果显示,miR-449a在垂体中的相对表达量显著高于miR-449b(P<0.05),miR-449b在卵巢中的相对表达量极显著高于miR-449a(P<0.01)。利用3个靶基因预测软件做韦恩图分析,取其交集得到miR-449a/b的靶基因数目分别为299和23个。GO功能富集显示,miR-449a/b主要被富集到生物进程;KEGG通路富集结果取前20个通路进行分析发现,主要包括催产素、MAPK等与繁殖调控相关的信号通路。【结论】miR-449a在垂体中的表达量较高,miR-449b在卵巢中的表达量较高。miR-449a/b的靶基因数目分别为299和23个,其基因功能主要集中在生物过程,可能参与湖羊的繁殖调控。

miR-449a在乳腺癌组织中的表达及生物信息学分析

探讨miR-449a在乳腺癌组织中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的作用。利用实时荧光定量PCR检测83例乳腺癌和癌旁组织中miR-449a的相对表达量,发现miR-449a在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织,并与肿瘤组织学级别、大小、雌激素受体状态和孕激素受体状态有关(P<0.05)。miR-449a在三阴性乳腺癌中的表达水平显著低于管腔型。使用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析,结果显示在三阴性乳腺癌中miR-449a低表达组总生存率显著低于高表达组,而在管腔B型乳腺癌中miR-449a高表达组总生存率显著降低(P<0.05)。利用ENCORI数据库预测得到靶基因186个,通过metascape数据库进行富集分析,发现其功能涉及间充质细胞分化、细胞迁移、内分泌抵抗、粘附连接、肌动蛋白细胞骨架调节以及NOTCH、TGF-β、Wnt、PI3K-Akt等介导的信号通路。通过string数据库进行蛋白互作网络分析,并使用Cytoscape软件筛选出由NOTCH1、JAG1和cyclin D1等蛋白构成的关键子网络。应用ENCORI数据库分析miR-449a与NOTCH途径靶基因的相关性,发现miR-449a与NOTCH1在乳腺癌组织中的表达呈负相关。本研究结果表明miR-449a在乳腺癌组织中的表达具有明显的异质性,可通过影响多种信号通路参与肿瘤发展过程,调控NOTCH信号通路可能是其在乳腺癌中的重要机制。

miR-449c通过抑制c-Myc的表达抑制肺腺癌细胞周期进程

目的:探讨miR-449c对肺腺癌发生发展的影响及可能机制。方法:利用生物信息学分析鉴定高复发风险肺腺癌患者(无病生存期≤6个月)与低复发风险患者(无病生存期>60个月)之间差异表达的microRNA(miRNA)。靶基因预测及通路分析研究可能的机制。RT-PCR检测miR-449c在肺腺癌组织和细胞系中的表达,利用细胞转染实验在肺腺癌细胞系中过表达miR-449c和c-Myc,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白质印迹分析检测相关蛋白表达水平。结果:生物信息学分析结果显示,相比低复发风险患者,肺腺癌高复发风险患者的miR-449c表达显著降低。miR-449c表达水平与肺腺癌患者临床分期和淋巴结转移相关,miR-449c低表达患者的预后显著差于高表达患者。通路和功能分析表明,miR-449c可能与细胞周期进程有关。与癌旁组织相比,miR-449c在肺腺癌组织中显著低表达;过表达miR-449c抑制了肺腺癌细胞增殖,导致细胞周期阻滞于G1期,下调了c-Myc及其下游细胞周期蛋白的表达。c-Myc过表达可部分逆转miR-449c对细胞周期蛋白的抑制,miR-449c过表达也可部分逆转c-Myc对细胞周期蛋白的上调。结论:miR-449c低表达的肺腺癌患者预后较差,过表达miR-449c可以通过下调c-Myc调控细胞周期,抑制肺腺癌细胞增殖,提示miR-449c可能作为肺腺癌潜在的治疗靶标之一。

黄芩素介导自噬经由miR-449a/HDAC1轴抑制喉癌细胞增殖及迁移的机制研究

目的 探究黄芩素抑制喉癌细胞增殖及迁移的机制。方法 采用Hep-2细胞为研究对象。MTT法检测各组细胞增殖活力;划痕实验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3II/I、p62及HDAC1的表达水平;RT-PCR检测细胞miR-449a的表达水平;生物信息学软件分析miR-449a与HDAC1的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验鉴定;透射电子显微镜观察自噬小体数量。结果 黄芩素显著抑制了喉癌细胞的增殖和迁移,并诱导细胞凋亡;黄芩素增加了细胞内Beclin-1及LC3II的蛋白表达水平,减少了p62及LC3I的蛋白表达水平;黄芩素显著增加喉癌细胞miR-449a的表达水平,降低HDAC1的蛋白表达量;HDAC1与miR-449a存在结合作用;黄芩素联合miR-449a mimic处理喉癌细胞,可以更显著的抑制细胞增殖及HDAC1的蛋白表达水平,以及更为有效地上调miR-449a的相对表达量和诱导自噬。结论 黄芩素可以介导自噬经由miR-449a/HDAC1轴抑制喉癌细胞增殖及迁移。

广东地区胃癌患者中医临床证候分型与miR-449表达相关性研究

目的:研究不同中医症候临床分型胃癌患者癌变组织miR-449表达差异,探讨胃癌患者中医证候临床分型与miR-449表达情况的相关性。方法:收集2011年1月—2012年10月就诊于广州军区广州总医院消化内科及广州中医药大学第一附属医院脾胃病科的患者,其中以"胃脘痛"为中医诊断并确断为"胃癌"患者60名为研究对象,中医四诊对其进行中医辨证分型;胃镜下钳取胃癌组织及癌旁周围正常组织为标本,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测标本miR-449表达情况。结果:①60名患者中医证型以"脾胃湿热型"为主,占46.67%,明显高于其他证型比率。②相对于癌旁正常组织,所有患者胃癌组织miR-449表达下调,相对表达量为32.367±7.318(P=0.001)。③"脾胃湿热型"患者胃癌组织miR-449相对表达量为26.250±2.287,明显低于其他证型(P<0.05)。结论:广东地区胃癌患者中医症候临床分型以"脾胃湿热证"为主,"脾胃湿热证"患者胃癌组织内miR-449表达下调,表明湿热之邪可能通过诱导组织miR-449表达下调参与胃癌的发生与发展。

miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移能力的影响

目的:通过敲低微小RNA(microRNA,miRNA)-449a的方法研究miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力的影响。方法:采用miRNA芯片在乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺细胞MCF-10A筛选具有表达差异的miRNA;化学合成法制备miR-449a的抑制剂(inhibitor),转染后经real-time PCR验证表达的变化;细胞增殖CCK-8实验对转染后细胞增殖能力进行检测;划痕实验检测细胞转移能力,transwell小室实验检测细胞侵袭的改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)实验对MCF-7细胞增殖和迁移相关的β-catenin和E-cadherin蛋白进行检测;通过生物信息学软件预测miR-449a潜在靶基因为Notch 1,荧光素酶实验检测Notch 1是miR-449a的靶基因。结果:分别收集MCF-7和MCF-10A细胞,芯片结果显示miR-449a在MCF-7细胞的表达水平显著高于MCF-10A;本研究将细胞分为未处理组(Mock组),阴性对照组(negative control组,NC组)和处理组,通过收集不同组MCF-7细胞进行试验,CCK-8结果显示miR-449a下调后MCF-7细胞增殖能力显著降低;划痕实验结果显示miR-449a表达降低导致MCF-7细胞转移能力降低;transwell实验结果显示MCF-7细胞侵袭受到抑制;Western blot结果发现miR-449a敲低后β-catenin表达降低,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-449a能够显著降低Notch 1-3'-UTR质粒的荧光素活性(P<0.01)。结论:在乳腺癌细胞MCF-7中敲低miR-449a能够显著抑制癌细胞增殖和迁移,而这一变化可能通过降低Notch 1蛋白表达实现的。

miR-449a/b负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖

目的探讨miR-449a/b在胃癌发生中的可能作用机制。方法采用qRT-PCR方法检测了miR-449a/b和E2F1基因在胃癌细胞BGC-823和胃粘膜细胞GES-1表达情况;采用瞬时转染技术将miR-449a/b模拟物(mimic)以及mimic阴性对照分别转入胃癌细胞BGC-823中,qRT-PCR验证转染成功后,通过CCK-8法检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化,细胞划痕实验检测胃癌细胞的迁移能力,Western blot方法检测miR-449a/b上调后其靶基因蛋白的表达水平;并通过转染E2F1过表达质粒和空质粒对照入胃癌细胞BGC-823,Western blot确定转染效率后,分别用qRT-PCR和数字PCR检测miR-449a/b的表达水平。结果相比于正常胃粘膜细胞株GES-1,miR-449a/b在胃癌细胞株BGC-823中表达均下调(P<0.01);过表达miR-449a/b可抑制胃癌细胞BGC-823增殖和迁移,并促进其凋亡(P<0.05);过表达的E2F1可上调miR-449a/b的表达(P<0.001),而上调miR-449a/b的表达,其直接靶基因CDK4、CDK6表达下调,并可通过CDKs-pRb-E2F1信号通路,间接下调E2F1蛋白的表达(P<0.01)。结论 miR-449a/b的低表达和E2F1的高表达均参与了胃癌的发生、发展,并且miR-449a/b能负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖。

miR-449a/b在Ⅱ型子宫内膜癌中表达下调

目的分析Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌及良性子宫内膜组织间MicroRNA(miRNA)表达谱差异。方法收集子宫内膜癌手术患者内膜及良性患者内膜组织,利用免疫组化法分组,分别提取总RNA,基因芯片检测差异表达的miRNA,并经反转录PCR和荧光定量PCR验证差异表达的miRNA。结果芯片检测发现Ⅱ型子宫内膜癌与Ⅰ型子宫内膜癌及良性内膜组织间存在显著下调的miRNA分别有12个和9个,均下调的有miR-449a/b和miR-20b,显著上调的miRNA分别有18个和4个,均上调的有miR-29a。经反转录PCR和荧光定量PCR验证后发现miR-449a在Ⅱ型子宫内膜癌比Ⅰ型子宫内膜癌及良性内膜组织分别下调347倍和288倍,miR-449b分别下调461倍和424倍。结论Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌间miRNA的表达差异可能与不同类型子宫内膜癌的发生发展相关,而miR-449a/b可能与Ⅱ型子宫内膜癌的发病机制有关,可为进一步研究子宫内膜癌发生的分子机制提供依据。

miR-449与胃癌相关性研究进展

自1993年首次在秀丽线虫体内发现了miRNA-lin-4后,对miRNA的深入研究成为临床与基础研究的新热点。由于不同的miRNA在胃癌的发生与胃癌发展的不同阶段都呈现不同的表达水平,因此对于未来早期胃癌的筛查、诊断、治疗等方面,miRNA的应用有着巨大的潜力。

miR-449a靶向调控外周血Toll样受体5影响风湿性心脏病发生发展的分子机制研究

目的:研究微小RNA-449a(miR-449a)是否通过靶向外周血中的Toll样受体5(TLR5)影响风湿性心脏病的发生发展。方法:实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测风湿性心脏病患者外周血中TLR5和miR-449a的表达水平。在风湿性心脏病心肌细胞中转染miR-449a模拟物或TLR5小干扰RNA si-TLR5。采用qRT-PCR检测miR-449a表达,Western blot分析细胞核相关抗原Ki67(Ki67)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、TLR5、磷酸化p65(p-p65)和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达,MTT测定细胞增殖,流式细胞仪评估细胞凋亡,ELISA测定炎症因子IL-1β、TNF-α水平。Starbase靶位点预测软件与双荧光素酶报告基因分析miR-449a与TLR5之间的靶向关系。在风湿性心脏病心肌细胞中共转染miR-449a模拟物和TLR5过表达质粒pcDNA-TLR5,观察细胞增殖、凋亡和NF-κB信号通路活性变化。结果:风湿性心脏病患者外周血中miR-449a的表达水平明显降低,TLR5 mRNA和TLR5蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。过表达miR-449a明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率,显著降低Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IκBα蛋白表达水平、细胞凋亡率和IL-1β、TNF-α水平(P<0.05)。低表达TLR5明显提高风湿性心脏病心肌细胞的Ki67蛋白表达水平、细胞存活率,显著降低Cleaved-caspase-3蛋白表达水平、凋亡率(P<0.05)。miR-449a通过靶向TLR5调控TLR5蛋白的表达。高表达TLR5后,miR-449a对风湿性心脏病心肌细胞增殖、Ki67蛋白表达的促进作用,以及miR-449a对细胞凋亡、Cleaved-caspase-3、p-p65、pIκBα蛋白表达和IL-1β、TNF-α水平的抑制作用被逆转。结论:miR-449a通过靶向TLR5抑制NF-κB信号通路活性,促进风湿性心脏病心肌细胞的增殖与抑制其凋亡。

miR-449a通过NOTCH1介导铁死亡调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨miR-449a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其分子机制。方法 用miR-499a过表达类似物Agomir-499a(Agomir-499a组)及其阴性对照(NC组)分别转染非小细胞肺癌NCI-H1975细胞,采用qRT-PCR检测转染细胞中miR-499a的表达水平,CCK-8和Ki67染色法检测细胞增殖,Annexin V染色法检测细胞凋亡。采用铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)和谷胱甘肽(GSH)分别处理转染Agomir-499a的NCI-H1975细胞(依次记为Agomir-499a+Fer-1组和Agomir-499a+GSH组),采用荧光探针法检测细胞内的Fe2+水平,光学比色法检测细胞内的GSH含量,qRT-PCR检测细胞内铁死亡和铁稳态相关基因的mRNA表达,Western blot检测NOTCH1信号通路相关蛋白的表达。结果 与NC组比较,Agomir-499a组NCI-H1975细胞的miR-449a表达水平明显增加(P=0.001),细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例明显增加(P=0.004);铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、SLC7A11和COX2的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF、STEAP3、TFRC和DMT1的表达水平均明显增加(均P<0.05),但GSH含量以及NOTCH1信号通路相关分子NOTCH1、NICD、JAG1、JAG2、DLL1和HES1的表达水平均明显降低(均P<0.05)。与Agomir-449a组比较,Agomir-449a+Fer-1组铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、COX2和SLC7A11的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF和STEAP3的表达水平均明显降低(均P<0.05),但GSH含量和NOTCH1信号通路相关分子NICD、JAG1和DLL1的表达水平均明显增加(均P<0.05);Agomir-449a+GSH组SLC7A11、COX2和ACSL4的表达水平也较Agomir-449a组明显降低(均P<0.05)。结论 miR-449a可诱导非小细胞肺癌NCI-H1975细胞凋亡和增殖抑制,其作用机制可能与抑制NOTCH1信号介导的铁死亡有关。

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。方法脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。结果转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。

骨肉瘤患者血清中miR-34a、miR-449a表达及与新辅助化疗耐药的关系

目的分析骨肉瘤患者血清中miR-34a、miR-449a表达水平及与新辅助化疗耐药的关系。方法随机选择骨肉瘤83例,将其纳入研究组。另选取同期体检健康受试者83例,将其纳入对照组。检测血清miR-34a、miR-449a表达水平。问卷调查骨肉瘤患者临床病理特征,给予新辅助化疗,统计耐药情况。结果研究组患者血清miR-34a水平(6.47±1.28)明显高于对照组(P<0.05),miR-449a水平(29.47±1.23)低于对照组(P<0.05)。不同年龄、性别、肿瘤位置患者血清miR-34a、miR-449a水平差异比较无统计学意义(P>0.05)。不同肿瘤大小、临床分期患者的血清miR-34a、miR-449a水平差异比较有统计学意义(P<0.05)。化疗有效组患者血清miR-34a表达水平(7.09±1.09)明显低于无效组(P<0.05),miR-449a表达水平(33.74±2.06)明显高于化疗无效组(P<0.05)。结论骨肉瘤患者血清miR-34a高表达,miR-449a低表达,且表达水平影响新辅助化疗效果,高表达会增加耐药性,增加化疗无效风险。

miR-449a靶向调节c-Met抑制Hela细胞的迁移和侵袭

目的探讨micro RNA-449a(mi R-449a)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌进展的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)测定mi R-449a及其靶向调节分子c-Met在宫颈癌组织及正常宫颈标本(对照组)中的表达水平。构建转染mi R-449a高表组(mi R-449a组)、转染c-Met干扰质粒组(si RNA组)和相应的空载质粒组(mock组),q PCR检测mi R-449a和c-Met m RNA表达量;免疫印迹法检测c-Met、MMP2和MMP9蛋白水平变化;细胞划痕修复和Transwell侵袭试验进一步观测mi R-449a和c-Met对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 mi R-449a在宫颈癌组织中表达量低于对照组(P<0.05),c-Met m RNA在宫颈癌组织中的表达高于对照组(P<0.05),两者间呈负相关关系(r=-0.32,P<0.05)。在宫颈癌细胞Hela细胞中过表达mi R-449a后,c-Met m RNA的表达水平降低(P<0.05),并且蛋白水平也明显降低。mi R-449a能显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),抑制c-Met表达后也能显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论 mi R-449a通过靶向抑制c-Met的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。mi R-449a可能是潜在的宫颈癌筛查和诊断分子标志物,并为宫颈癌个体化治疗提供一个新的方向。

miR-449a在乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型中的作用

目的探究敲低miR-449a对裸鼠皮下乳腺癌细胞移植瘤生长的影响。方法本实验通过采用乳腺癌MCF-7细胞系建立乳腺癌的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将含有shRNA-miR-449a表达的质粒稳定转染MCF-7细胞,将筛选的稳转细胞采取多点注射的方法注入裸鼠皮下,采用阴性质粒为阴性对照,PBS作为空白对照;处理裸鼠后检测成瘤体积并计算肿瘤生长抑制率;Real-time PCR检测肿瘤组织miR-449a、Notch 1表达情况;Western blot检测移植瘤组织内的Notch 1、β-catenin和E-cadherin蛋白水平;免疫组织化学技术检测肿瘤组织内Notch1、E-cadherin表达水平。结果移植瘤形成过程中裸鼠未出现死亡,肿瘤体积检测后发现miR-449a敲低后能够显著抑制肿瘤的生长(P<0.05);miR-449a在移植瘤组织内表达降低,同时Notch 1蛋白表达降低,β-catenin表达降低,而E-cadherin蛋白表达升高;免疫组化结果也显示Notch 1蛋白水平降低,E-cadherin蛋白的表达水平升高(P<0.05)。结论敲低miR-449a可能是通过下调Notch 1、β-catenin蛋白水平,促进E-cadherin蛋白表达,从而抑制乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长。

miR-449b表达对慢性乙型肝炎合并肝细胞癌患者预后的影响

目的:探讨miR-449b表达对慢性乙型肝炎(CHB)合并肝细胞癌(HCC)患者预后的影响。方法:选取2014年1月至2018年1月的100例CHB合并HCC患者为观察组,同期40例CHB患者作为对照组,使用qRT-PCR检测患者外周血中miR-449b水平,分析miR-449b与观察组患者总生存期(OS)的关系。结果:观察组外周血miR-449b表达水平(0.27±0.10),低于对照组(0.64±0.10),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-449b表达与HBV病毒载量、肿瘤分期、Child-Pugh分级具有相关性(P<0.05)。观察组共失访9例,成功随访率91.0%,平均随访时间(49.9±7.9)个月,死亡51例。miR-449b表达增高组2年死亡率为15.91%,miR-449b表达降低组2年死亡率为38.30%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier联合Log-rank检验提示,miR-449b表达降低组OS短于miR-449b表达升高组(P<0.05)。Cox分析结果显示,miR-449b表达、年龄、TNM分期、病毒载量是CHB合并HCC OS的独立影响因素(P<0.05)。结论:CHB合并HCC患者外周血中miR-449b表达水平与TNM分期、病毒载量及Child-Pugh分级有关,且miR-449b表达降低患者的OS缩短,miR-449b可能是CHB合并HCC预后的标志物。

中国人群miR-449a单核苷酸多态性与胃癌易感性的相关性研究

目的 探讨miR-449a rs112310158基因多态性与胃癌易感性的关系。方法 共纳入448例胃癌患者和452例健康对照者。miR-449a rs112310158基因型检测采用聚合酶链反应结合直接测序方法。miR-449a表达水平检测采用荧光定量PCR方法。此单核苷酸多态性位点功能由RT-PCR和免疫组化试验验证。结果 相对于对照组,胃癌病例组在吸烟者（OR=1.345,95%CI=1.028-1.761）、饮酒者（OR=1.910,95%CI=1.465-2.490）、有肿瘤家族史者（OR=4.178,95%CI=1.554-11.231）、幽门螺杆菌感染率较高者（OR=1.428,95%CI=1.098-1.857）,差异均具有统计学意义。相较AA基因型,GG基因型显著增加胃癌的发病风险（OR=2.542,95%CI：1.304-4.954,P=0.005）。相较于A等位基因,携带G等位基因的个体罹患胃癌的风险升高（OR=1.279,95%CI：1.012-1.617,P=0.043）。GG型患者比AA型患者miR-449a表达水平下降。与AA基因型相比,miR-449a靶基因PRKCE在GG基因型胃癌患者中有更高的表达。结论 该研究发现miR-449a rs112310158是胃癌的遗传易感因素之一。