miR-451a对慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡与自噬的影响

目的探究miR-451a对慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡与自噬的作用机制。方法采用1μmol/L阿霉素(DOX)建立慢性心衰细胞模型。将细胞实验分为Control组(正常心肌细胞H9c2)、DOX组(DOX培养)、DOX+miR-NC组(DOX培养转染对照miR-NC)、DOX+miR-451a组(DOX培养转染miR-451a模拟物miR-451a)、DOX+miR-451a+CCI-779组(DOX和CCI-779培养转染miR-451a)。qRT-PCR检测各组细胞miR-451a相对表达水平;CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖活性与凋亡;Western blotting检测剪切的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3I(LC3I)、LC3II、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70s6k、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p-p70s6k蛋白表达。结果成功建立慢性心衰细胞模型。与Control组比较,DOX组miR-451a相对表达水平、细胞活性、p-mTOR、p-p70s6k蛋白表达降低,而凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达升高。与DOX+miR-NC组比较,DOX+miR-451a组miR-451a相对表达水平、细胞活性、p-mTOR、p-p70s6k蛋白表达升高,而凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达降低。与DOX+miR-451a组比较,DOX+miR-451a+CCI-779组细胞活性降低,凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达升高。结论miR-451a通过抑制mTOR信号通路促进慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡和自噬。

广西地区鼻咽癌miR-451a表达与预后的关系

目的:探讨mi R-451a在鼻咽癌中的表达及与预后关系。方法:用实时荧光定量RT-PCR方法检测89例广西地区人群鼻咽未分化非角化性癌(鼻咽癌)组织中mi R-451a的表达情况,分析其表达强度与预后的关系。结果:鼻咽癌组织表达mi R-451a,其表达强度与总生存期及无病生存期呈负相关(P=0.01及P=0.04)。结论 :mi R-451a在鼻咽癌发生中可能起重要作用,是预测鼻咽癌患者预后的分子标志物,mi R-451a高表达者预后较差。

慢性心力衰竭病人血清miR-451a调控MMP-9的表达及临床意义

目的探讨慢性心力衰竭病人血清miR-451a与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况及其临床意义。方法选取我院确诊为慢性心力衰竭的病人80例作为研究组,美国纽约心脏病学会(NYHA)分级:Ⅰ级20例,Ⅱ级22例,Ⅲ级26例,Ⅳ级12例。另选择健康成年人80名作为对照组。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测血清miR-451a和MMP-9表达水平,分析二者在不同NYHA分级中的表达情况及相关性。结果与对照组比较,研究组miR-451a表达水平显著降低,而血清MMP-9表达水平显著增加,差异均有统计学意义(P <0.05)。随着NYHA分级的增高,miR-451a表达水平下降,而MMP-9表达水平上升,各分级间差异均有统计学意义(P <0.05)。线性相关分析发现,随着miR-451a表达水平的降低,MMP-9表达水平逐渐增加,血清miR-45a与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.702,P <0.05)。结论 miR-451a至少部分通过调控MMP-9表达而在慢性心力衰竭的发生发展及病情演变过程中起作用。

过表达miR-451a通过靶向巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)抑制HepG2细胞的增殖

目的探讨miR-451a对巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的调控及对HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法实时定量PCR检测临床肝癌组织中miR-451a及MIF mRNA的表达,荧光素酶报告系统验证miR-451a对MIF的靶向调控关系。包装miR-451a慢病毒过表达载体,感染HepG2细胞,实时定量PCR检测miR-451a和MIF mRNA表达量变化,Western blot法检测MIF蛋白水平,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率。结果 miR-451a在肝癌组织中呈现低表达,MIF mRNA在肝癌样本中呈现高表达;荧光素酶报告系统显示,MIF 3'UTR野生型联合miR-451a模拟物共转染细胞的荧光信号强度明显弱于其他转染组,miR-451a慢病毒感染HepG2细胞,miR-451a表达显著升高,MIF表达显著降低,细胞增殖能力减弱,克隆形成能力减弱。结论 HepG2细胞过表达miR-451a通过抑制MIF的表达,抑制HepG2细胞的增殖和克隆形成。

荞麦七水提物通过调控LncRNA SOX21-AS1/miR-451a通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的机制

目的探索荞麦七水提物对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测胃癌组织长链非编码RNA(LncRNA)SOX21反义RNA1(SOX21-AS1)和miR-451a表达。用10 mg/ml、20 mg/ml、40 mg/ml荞麦七水提物处理胃癌细胞MKN45,qPCR检测LncRNA SOX21-AS1和miR-451a表达,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达。在MKN45细胞中转染si-SOX21-AS1,评估抑制SOX21-AS1表达在细胞增殖、迁移、侵袭中的作用。生物信息学结合双荧光素酶报告实验分析LncRNA SOX21-AS1与miR-451a的靶向关系。在细胞中转染pcDNA-SOX21-AS,并使用40 mg/ml荞麦七水提物处理,观察LncRNA SOX21-AS1过表达对荞麦七水提物诱导的胃癌MKN45细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中LncRNA SOX21-AS1表达明显上调,miR-451a表达显著下调(P<0.05)。荞麦七水提物明显降低LncRNA SOX21-AS1表达量、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白水平,显著提高miR-451a表达量、细胞生长的抑制率、p21、p27蛋白水平,且呈浓度依赖性(P<0.05)。抑制LncRNA SOX21-AS1表达明显增加MKN45细胞抑制率、p21蛋白表达量,显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量(P<0.05)。LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-451a的表达。LncRNA SOX21-AS1过表达逆转了荞麦七水提物对胃癌MKN45细胞SOX21-AS1表达、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用及对miR-451a表达、抑制率、p21蛋白表达的促进作用。结论荞麦七水提物通过调控LncRNA SOX21-AS1/miR-451a通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭。

MiR-451a对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的研究miR-451a在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-451a是否通过下调LMP7来影响雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(DU145)细胞的增殖和侵袭能力。方法收集37例前列腺癌组织标本及40例良性前列腺增生组织标本,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组组织中与前列腺癌相关的miR-451a、miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137、LMP7mRNA的表达情况,Pearson相关分析检验miR-451a表达量与LMP7的相关性;免疫印迹试验(Western blot)分别检测两组LMP7的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-451a mimic和miR-NC至离体培养的DU145细胞中,随后,Western blot检测DU145细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶试验验证LMP7是miR-451a的靶基因;紧接着通过转染过表达LMP7的质粒至DU145细胞,检测DU145细胞中相应蛋白的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于前列腺增生组织,miR-451a在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);而miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137的表达在两组之间无显著差异;前列腺癌组织中LMP7mRNA的表达增加(P<0.01);MiR-451a与LMP7 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.4708,P<0.01)。在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-451a mimic后,DU145细胞中VEGF、E-cadherin、LMP7的表达减少(P<0.05),DU145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-451a能够降低LMP7-3'-UTR质粒的荧光素活性(P<0.05);转染过表达LMP7质粒后,相比于miR-451+空质粒组,DU145细胞中VEGF和E-cadherin表达增加(P<0.05),细胞的迁移侵袭能力得到部分恢复(P<0.01)。结论在前列腺癌组织中,miR-451a低表达;MiR-451a通过下调LMP7抑制DU145细胞的迁移和侵袭。

miR-451a调控BAP31诱导结直肠癌细胞凋亡

目的:探讨miR-451a及靶蛋白BAP31在结直肠癌中的作用。方法:体外培养HCT116、SW620、SW480、DLD细胞,以Real-time PCR法检测结直肠癌细胞系中miR-451a和BAP31的相对表达量;通过建立miR-451a不同表达情况的结直肠癌细胞HCT116模型,应用抑制消减杂交方法建立抑制消减文库,从中筛选miR-451a的调控蛋白,并通过萤光素酶报告基因检测miR-451a的直接调控靶基因;采用MTT法、流式细胞术以及Hoechst染色法评价miR-451a调控的靶蛋白BAP31对结直肠细胞凋亡的调节作用。结果:在抑制杂交消减文库中得到了miR-451a可能调控的相关基因,其中在正向文库中得到BAP31、EEF1A1和CDC20等7个基因,在反向文库中得到DKK1和PSME1等4个基因。在HCT116、HT29、SW480、SW620和DLD结直肠癌细胞中miR-451a的相对表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的0.32、0.44、0.53、0.43和0.73倍,BAP31在DLD、HT29、SW620和HCT116结直肠癌细胞中的表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的1.85、2.84、2.37和3.71倍。双萤光素酶报告基因实验证明,miR-451a可作用于与BAP31开放阅读框上游177的位点,通过miR-451a作用使海肾荧光素酶的活性降低80.3%。在HCT116细胞和SW620细胞中过表达miR-451a后72h抑制率分别为39.50%和39.50%;沉默BAP31后72h抑制率分别为45.32%和53.56%。过表达miR-451a48h后HCT116凋亡增加13.57%,SW620细胞凋亡率增加13.2%;沉默BAP31 48h后HCT116细胞凋亡增加5.62%,SW620细胞凋亡率增加8.68%。结论:miR-451a在结直肠癌细胞中能够直接通过调控BAP31诱导细胞的凋亡从而抑制细胞的增殖。

LncRNA NORAD通过调节miR-451a对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨lncRNA NORAD对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞HK-2上皮间充质转分化(EMT)的影响及作用机制。方法:HK-2细胞分为对照组、高糖组、si-NORAD+高糖组、si-NC+高糖组、miR-451a+高糖组、miR-NC+高糖组、si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组及si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组,RT-qPCR检测各组细胞中NORAD和miR-451a表达水平,Western Blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证NORAD与miR-451a调控关系。结果:与对照组比较,高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平升高(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P<0.05)。与si-NC+高糖组比较,si-NORAD+高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平降低(P<0.05),E-cadherin水平升高(P<0.05)。与miR-NC+高糖组比较,miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平降低(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平升高(P<0.05)。与si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组比较,si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平升高(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P<0.05)。NORAD在HK-2细胞中负调控miR-451a表达。结论:下调NORAD表达可抑制高糖诱导的HK-2细胞发生EMT,其作用机制与上调miR-451a表达有关。

乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者外周血miR-200a、miR-451a水平及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血miR-200a、miR-451a水平及临床意义。方法选取该院2017年7月至2021年3月收治的60例HBV-ACLF患者作为观察组,另选取同期收治的60例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照组。比较两组外周血miR-200a、miR-451a水平及相关生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、清蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)]水平。分析外周血miR-200a、miR-451a水平与相关生化指标的相关性。评价外周血miR-200a、miR-451a水平对HBV-ACLF的诊断价值。比较不同预后HBV-ACLF患者外周血miR-200a、miR-451a水平,分析外周血miR-200a、miR-451a水平与HBV-ACLF患者预后的关系。结果观察组外周血miR-200a水平高于对照组,miR-451a水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组ALT、AST、TBIL水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组ALB、HDL-C、LDL-C、TC、TG及HBV-DNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析可知,HBV-ACLF患者外周血miR-200a水平与ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.597、0.598、0.584,P<0.05),miR-451a与ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.607、-0.613、-0.592,P<0.05),HBV-ACLF患者外周血miR-200a、miR-451a水平与ALB、HDL-C、LDL-C、TC、TG及HBV-DNA均无相关性(P>0.05)。绘制ROC曲线,结果显示,外周血miR-200a、miR-451a水平联合诊断HBV-ACLF的曲线下面积(AUC)为0.925,较两项指标单独检测的诊断效能更高。HBV-ACLF患者1个月内死亡15例,生存45例;死亡患者外周血miR-200a水平高于生存患者,miR-451a水平低于生存患者,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析,外周血miR-200a、miR-451a水平均为HBV-ACLF患者死亡的独立影响因素(P<0.05),miR-200a水平越高、miR-451a越低,患者死亡风险越大(P<0.05)。结论HBV-ACLF患者外周血miR-200a水平上调,miR-451a水平下调,且二者水平与肝功能及预后有关,可为临床诊断及预后评估提供参考。

mmu-miR-451a调节小鼠成肌细胞增殖的功能研究

【目的】丰富对mmu-miR-451a的生物学认识,并为家畜骨骼肌生长发育的分子机制提供新的理论依据。【方法】应用实时荧光定量PCR方法检测mmu-miR-451a在C2C12细胞增殖过程中的表达情况;将携带荧光标记的mmu-miR-451a模拟物转染C2C12细胞,使用荧光倒置显微镜以及实时荧光定量PCR方法检测转染效率;采用CCK-8法、EdU法以及流式细胞术检测mmu-miR-451a对C2C12细胞增殖的影响。【结果】mmu-miR-451a在C2C12细胞增殖过程中表达量逐渐降低(P<0.05);转染mmu-miR-451a模拟物组的表达量极显著高于对照组(P<0.01);CCK-8结果显示转染mmu-miR-451a模拟物组的OD值极显著低于NC对照组(P <0.01);EdU细胞增殖结果显示转染mmu-miR-451a模拟物组的EdU阳性细胞率(33.73%±3.21%)极显著低于NC对照组(44.40%±6.55%)(P<0.01);流式细胞术结果显示转染mmu-miR-451a模拟物组的C2C12细胞中处于S期的细胞数极显著低于对照组(P<0.01),处于G2期的细胞数极显著低于对照组(P<0.01)。【结论】mmu-miR-451a可以抑制小鼠成肌细胞增殖。

miR-451a促进胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的:探究miR-451a在胰腺癌吉西他滨耐药中的功能。方法:通过低浓度梯度递增法建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞株,microRNA(miRNA)测序筛选耐药相关miRNA;细胞存活曲线、克隆形成实验及流式凋亡实验分析miR-451a对胰腺癌细胞耐药的影响;裸鼠成瘤实验检测在动物体内模型中miR-451a对胰腺癌吉西他滨耐药的调控作用;调取TCGA数据分析miR-451a表达水平与胰腺癌病人预后的相关性。结果:胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中miR-451a表达水平明显下调;miR-451a过表达增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性,增强了吉西他滨抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;miR-451a诱导了裸鼠皮下肿瘤对吉西他滨敏感;miR-451a低表达与胰腺癌患者不良预后相关。结论:miR-451a增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。

丹参川芎嗪注射液联合重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭的疗效及对外周血miR-423-5p、miR-451a表达的影响

目的探讨丹参川芎嗪注射液联合重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭的疗效及对外周血miR-423-5p、miR-451a表达的影响。方法选取2019年4月—2020年4月我院收治的178例慢性心力衰竭病人作为研究对象,根据治疗方案分组,观察组60例给予丹参川芎嗪注射液联合重组人脑利钠肽治疗,对照A组59例给予重组人脑利钠肽治疗,对照B组59例给予丹参川芎嗪注射液治疗。比较3组临床疗效、不良反应发生率及治疗前后症状评分、心功能指标[左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、心排血量(CO)、二尖瓣舒张早期血流速度峰值与晚期血流速度峰值的比值(E/A)]、6 min步行距离、外周血miR-423-5p、miR-451a表达。结果观察组临床疗效优于对照A组、对照B组(P<0.05);观察组治疗后症状评分低于对照A组、对照B组(P<0.05);观察组治疗后LVEF、CO、E/A高于对照A组、对照B组,LVEDD低于对照A组、对照B组(P<0.05);观察组治疗后6 min步行距离高于对照A组、对照B组(P<0.05);观察组治疗后miR-423-5p低于对照A组、对照B组,miR-451a高于对照A组、对照B组(P<0.05);3组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参川芎嗪注射液联合重组人脑利钠肽治疗慢性心力衰竭,可缓解病人临床症状,改善心功能,提高治疗效果,调节外周血miR-423-5p、miR-451a表达。

miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估中的临床价值

目的探讨miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估的临床价值。方法选取2014年1月至2016年12月在该院就诊的胃癌患者血清标本117例为胃癌组,选择同期在该院行胃镜检查诊断为息肉的患者血清标本75例和健康体检者血清标本45例分别设为胃息肉组和健康对照组。比较各组研究对象血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平,观察胃癌患者血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平与临床病理因素和随访2年胃癌患者预后的关系,以及其在诊断胃癌和预测胃癌患者2年内死亡的效能。结果胃癌组术前血清miR-181a-5p表达水平明显高于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌术后血清miR-181a-5p表达水平较术前明显降低(P<0.01);胃癌组术前血清miR-451a表达水平明显低于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组的血清miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌组术后血清miR-451a表达水平较术前明显升高(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测诊断胃癌的灵敏度为77.8%,特异度为97.3%,曲线下面积均明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.01),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平在不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度的胃癌患者中差异有统计学意义(P <0.001)。死亡组患者血清miR-181a-5p表达水平明显高于存活组(P <0.01),而血清miR-451a表达水平明显低于存活组(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测在预测胃癌患者2年内死亡的灵敏度为100.0%,特异度78.6%,曲线下面积明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.05),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测血清miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断中具有重要临床价值,其表达水平与患者的预后具有重要关系,在预测2年内死亡具有较高的效能。

miR-451a和MMP-2蛋白在结直肠癌组织中的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-451a和MMP-2蛋白在结直肠癌组织中的表达情况及两者对肿瘤细胞增殖的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分别检测结直肠癌组织与癌旁组织(来自2018年金华市中心医院手术切除的标本),多个肿瘤细胞系中miR-451a的表达和MMP-2蛋白的表达;在HCT116细胞系中过表达miR-451a(miR-451a-mimic)检测MMP-2蛋白表达;miR-451a-mimic或沉默MMP-2表达检测细胞增殖情况。结果在结直肠癌组织中miR-451a表达明显下降,MMP-2蛋白的表达显著升高,这种结果同时出现在各个结直肠癌细胞株中,以HCT116细胞株最为明显;在HCT116细胞系中miR-451a-mimic显著减少MMP-2蛋白表达量,miR-451a-mimic或沉默MMP-2均会抑制肿瘤细胞的增殖。结论 miR-451a在结直肠癌组织中表达明显降低,其本身可能通过抑制MMP-2蛋白的表达来抑制肿瘤细胞的增殖。

血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平预测卵巢癌患者预后的临床价值

目的探讨血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平在预测卵巢癌患者3年内出现死亡的诊断效能。方法选取2016年1月至2017年12月在该院就诊、病理诊断为卵巢癌的患者110例(卵巢癌组)作为研究对象。选择同期在该院经病理证实的良性卵巢肿瘤患者75例和女性体检健康者45例分别作为卵巢良性组和健康对照组。采用qRT-PCR法检测各组血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平。观察各组血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平变化,卵巢癌患者血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平在术前、术后的变化,以及其与临床指标和预后的关系。结果卵巢癌组血清miR-221-3p相对表达水平明显高于卵巢良性组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组术后血清miR-221-3p相对表达水平较术前明显降低,差异有统计学意义(t=11.785,P<0.05)。卵巢癌组血清miR-451a相对表达水平较卵巢良性组和健康对照组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组术后血清miR-451a相对表达水平较术前明显升高,差异有统计学意义(t=10.833,P<0.05)。卵巢癌患者血清miR-221-3p相对表达水平与血清miR-451a相对表达水平呈负相关(r=-0.648,P<0.01)。血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平在预测卵巢癌患者3年内出现死亡具有较高的效能,联合检测其灵敏度为87.1%,特异度为91.1%,AUC为0.929,AUC均明显高于miR-221-3p(Z=2.016,P<0.05)和miR-451a(Z=2.543,P<0.05)单项检测。结论血清miR-221-3p和miR-451a相对表达水平在预测卵巢癌患者3年内发生死亡具有较高的效能,联合检测能够明显提高预测效能,为是否对卵巢癌患者采取进一步干预措施提供理论依据。

低氧下miR-451a对K562细胞向红系分化过程的影响

目的:探讨低氧下K562细胞向红系分化过程中GATA-1蛋白的表达变化及GATA-1如何通过上调miR-451a表达抑制14-3-3ζ的表达调控红系分化。方法:将K562细胞分为常氧组及低氧组,经氯化血红素(hemin)诱导96 h后,检测联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达以及CD235a的表达等相应红系分化指标,验证模型是否复制成功;采用Western blot及qRT-PCR检测GATA-1蛋白和miR-451a在上述2组中的表达变化及过表达GATA-1后miR-451a的表达变化;将常氧组和低氧组细胞分别分为阴性对照组(NC组)及miR-451a过表达组,结合相应红系分化指标共同判断4组细胞红系分化程度;过表达miR-451a后通过Western blot检测14-3-3ζ的表达变化。结果:低氧下K562细胞诱导96 h后联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达及CD235a的表达均显著高于0 h(P<0.05),这提示,低氧下K562细胞红系分化模型复制成功。低氧组GATA-1蛋白及miR-451a的表达水平均显著高于常氧组(P<0.05)。低氧下过表达GATA-1后,miR-451a的表达水平较NC组明显升高(P<0.05)。低氧下过表达miR-451a后,联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达水平及CD235a的表达均明显高于NC组(P<0.05)。14-3-3ζ的蛋白表达水平检测结果显示,低氧下miR-451a过表达组14-3-3ζ的表达水平低于NC组(P<0.05)。结论:低氧条件可显著提高GATA-1蛋白的表达水平,GATA-1表达的升高可上调miR-451a,进而抑制14-3-3ζ的蛋白表达,阻碍K562细胞红系分化模型中的细胞增殖过程,发挥促红系分化的作用。

miR-451a在鼻咽癌中的表达与病理特征及预后的相关性

目的探讨miR-451a在鼻咽癌中的表达与病理特征及预后的相关性。方法选取本院2006年3月~2012年7月经病理活检证实为鼻咽癌的患者95例作为实验对象,采用实时荧光定量RT-PCR法检测鼻咽癌组织、癌旁正常组织中miR-451a的表达水平,对95例患者进行预后随访,并分析miR-451a表达强度与鼻咽癌组织浸润程度、远处转移以及5年生存率的关系。结果鼻咽癌组织的miR-451a表达水平较癌旁正常组织显著增加(P<0.05)。鼻咽癌组织中miR-451a的表达水平随癌组织浸润程度的加深而显著升高(P<0.05)。有远处转移者的miR-451a表达水平显著高于无转移者(P<0.05)。miR-451a高表达的鼻咽癌患者其5年生存率明显低于miR-451a低表达者(P<0.05)。结论miR-451a的异常表达不仅参与鼻咽癌的发生,也有可能促进癌细胞浸润转移,其对于预测患者的生存预后具有一定的参考价值。

SNHG15-lncRNA ceRNA网络靶向miR-451a促进胶质瘤增殖

目的:探索SNHG15-lncRNA ceRNA网络靶向miR-451a促进胶质瘤增殖的作用机制。方法:qRT-PCR检测SNHG15和miR-451a在临床组织标本、人脑神经胶质细胞系HEB和神经胶质瘤细胞系(U87、U251和Hs683)的表达量中的表达量;双荧光素酶报告基因检验、qRT-PCR和Pull down检测SNHG15-miR-451a轴靶向调控关系。分别将SNHG15小干扰RNA(siRNA)、阴性对照序列(NC)、miR-451a抑制剂(miR-451a inhibitor)对U87细胞进行转染。细胞随机分为转染阴性对照序列(siNC)组、转染SNHG15 siRNA(siSNHG15)组、转染SNHG15 siRNA和miR-451a inhibitor(siSNHG15+miR-451a inhibtor)组。Tranwell细胞侵袭、细胞划痕和Tunel细胞凋亡分别检测SNHG15和miR-451a对U87细胞侵袭、迁移及凋亡的调控;构建裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤生长及体内细胞增殖情况。结果:与癌旁组织及HEB细胞相比,胶质瘤组织及胶质瘤细胞系中的SNHG15表达显著增高,而miR-451a表达显著降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示转染miR-451a inhibitor后SNHG15荧光素酶活性显著增加(P<0.05);Pull down生物素化实验结果显示miR-451a降低U87细胞中SNHG15的表达水平(P<0.05);而转染SNHG15质粒后miR-451a水平表达降低(P<0.05)。SNHG15显著抑制,而miR-451a inhibitor显著促进U87细胞侵袭和迁移距离及细胞凋亡率(均P<0.05)。SNHG15组移植瘤重量显著高于较NC组,而miR-451a组移植瘤重量显著低于miR-NC组(均P<0.05)。siSNHG15组PCNA表达低于siNC组及siSNHG15+miR451a inhibitor组(均P<0.05);miR-451a inhibitor组PCNA表达高于NC inhibitor组及siSNHG15+miR451a inhibitor组(均P<0.05)。结论:SNHG15竞争性结合miR-451a促进胶质瘤细胞侵袭和迁移,下调SNHG15-miR-451a轴可能作为治疗胶质瘤的新靶点。

miR-451a表达抑制宫颈癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及作用机制

目的探讨miR-451a对宫颈癌细胞侵袭和顺铂(DDP)耐药的影响及作用机制研究。方法qRT-PCR检测miR-451a在宫颈癌组织中的表达水平,分析miR-451a的表达水平与患者临床病理参数的关系。宫颈癌细胞HeLa分为对照组(NC HeLa组)和miR-451a模拟物组(miR-451a mimic HeLa组),分别进行各组mimic转染,Boyden实验检测各组细胞侵袭能力。采用药物递增诱导法建立DDP耐药细胞株HeLa(DDP-HeLa),qRT-PCR检测HeLa和DDP-HeLa细胞中miR-451a的表达。DDP-HeLa细胞分为NC DDP-HeLa组和miR-451a mimic DDP-HeLa组,分别进行各组mimic转染,MTS实验检测NC HeLa组、miR-451a mimic HeLa组、NC DDP-HeLa组和miR-451a mimic DDP-HeLa组对DDP敏感性的影响。Western blotting检测各组细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果miR-451a宫颈癌组织中的表达低于其在癌旁组织中的表达(P<0.05),miR-451a的表达与宫颈癌患者局部浸润、淋巴结转移、FIGO分期和化疗耐药呈负相关(P<0.05)。与NC HeLa组细胞相比,细胞侵袭能力降低(P<0.05)。miR-451a在DDP-HeLa中的表达低于在HeLa中的表达(P<0.05)。MTS实验显示与NC HeLa组细胞相比,NC DDP-HeLa组细胞对DDP的敏感性降低,miR-451a mimic HeLa组和miR-451a mimic DDP-HeLa组细胞对DDP的敏感性增加(P<0.05)。在HeLa和DDP-HeLa中过表达miR-451a均可以促进E-cadherin的表达,抑制细胞中N-cadherin和Vimentin的表达(P<0.05)。结论miR-451a可能通过调控EMT抑制宫颈癌细胞的侵袭和DDP耐药,是治疗宫颈癌的潜在靶标。

miR-451a通过MIF调节滋养细胞侵袭能力

目的探讨miR-451a对人绒毛外滋养细胞侵袭能力的调节机制。方法以人工合成的寡核苷酸miR-451a模拟物(miR-451a mimics)转染人绒毛外滋养细胞株HTR-8/SV neo细胞,应用逆转录-实时PCR法检测转染后细胞中miR-451a的表达和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)mRNA表达的变化;应用Western blot法检测转染后细胞中MIF蛋白表达的变化;应用Transwell小室侵袭实验观察转染前后细胞侵袭能力的变化;分别向HTR-8/SVneo细胞中加人重组人巨噬细胞迁移抑制因子(AMIF)和MIF特异性抑制剂ISO-1,应用Western blot法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和Vimenthi蛋白表达的变化。结果转染miR-451a mimics后HTR-8/SVneo细胞中miR-451a表达明显升高,MIF mRNA及蛋白表达降低,细胞侵袭能力下降。加入不同药物后,与空白组相比,AMIF组的E-cadherin蛋白表达下降,Vimentin蛋白表达上升;ISO-1组的E-cadherin蛋白表达上升,Vimentin蛋白表达下降。结论转染miR-451a可以下调人绒毛外滋养细胞中MIF的表达,并可能通过上皮间质转化途径(EMT)调控人绒毛外滋养细胞的侵袭能力。