lncRNA GAS5调控miR-452-5p/Mcl-1通路对急性肺损伤大鼠肺组织细胞焦亡的影响

目的探讨长链非编码RNA生长抑制特异因子5(lncRNA GAS5)调控miR-452-5p/髓样细胞白血病序列-1(Mcl-1)通路对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞焦亡的影响。方法取SD大鼠随机分成6组(每组10只):对照组、模型组、pUC57-lncRNA GAS5组、miR-452-5p抑制剂组、pUC57-NC+miR-452-5p-NC组、pUC57-lncRNA GAS5+miR-452-5p激活剂组。模型组和各干预组大鼠以腹腔注射脂多糖的方法构建ALI模型,对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,造模同时进行分组干预。然后检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)/FVC、潮气量(VT);HE染色观察大鼠肺组织病理损伤,并以Holfbauer评分评估其损伤程度;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肺泡灌洗液(BALF)和血清炎症因子白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;免疫印迹法检测大鼠肺组织焦亡相关指标[消皮素D(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Caspase-11]及Mcl-1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织lncRNA GAS5、miR-452-5p及Mcl-1表达;双荧光素酶报告基因实验验证大鼠肺泡上皮细胞L2中lncRNA GAS5对miR-452-5p的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、lncRNA GAS5表达、Mcl-1蛋白及mRNA表达降低(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,pUC57-lncRNA GAS5组、miR-452-5p抑制剂组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、Mcl-1蛋白及mRNA表达均升高(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达均降低(均P<0.05);pUC57-NC+miR-452-5p-NC组大鼠各指标无显著差异(均P>0.05)。与pUC57-lncRNA GAS5组比较,pUC57-lncRNA GAS5+miR-452-5p激活剂组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、Mcl-1蛋白及mRNA表达降低(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达升高(均P<0.05)。结论lncRNA GAS5可通过靶向下调miR-452-5p而促进Mcl-1表达,进而抑制ALI大鼠炎症反应及肺组织细胞焦亡,最终减轻大鼠肺损伤并改善其肺功能。

LINC01140通过miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴调控食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01140在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法:选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第四医院收治的133例ESCC患者的临床资料和GEPIA数据库中收集的182例ESCC组织及286例食管正常黏膜组织的LINC01140表达数据,以及ESCC细胞系Kyse150、Eca109和TE13。用qPCR法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平,分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照(pcDNA3.1-NC)或miR-452-5p mimic及阴性对照(miR-NC)转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验及TOP/FOP报告基因系统检测LINC01140与miR-452-5p的靶向结合作用及LINC01140对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调(均P<0.01),LINC01140低表达与ESCC患者年龄、淋巴结转移、TNM分期及OS密切相关(均P<0.05)。LINC01140过表达明显抑制Eca109细胞的增殖及侵袭能力(均P<0.01)。机制研究表明,LINC01140可能通过竞争结合miR-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学行为。结论:LINC01140通过靶向miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。

miR-452在肾透明细胞癌中的异常表达研究

目的检测miR-452在肾透明细胞癌组织中的表达差异,探讨miR-452在肾癌发生过程中的作用。方法提取20例肾透明细胞癌及其相应癌旁组织的总RNAs,通过逆转录(RT)方法获得cDNA后,采用实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测组织中miR-452的表达差异,并分析其与肾癌患者临床病理特征的关系。结果与相应的癌旁组织相比,miR-452在肾透明细胞癌组织中显著高表达,癌组织较癌旁组织升高约4.69倍,但其异常表达与肾癌患者临床病理特征并无显著相关性。结论 miR-452在肾透明细胞癌组织中明显高表达,其可能作为重要的致癌基因参与了肾癌的发生与发展过程,可能成为潜在的肾癌标志物,为肾癌的早期诊断及治疗提供新靶点。

miR-452-5p靶向SOX7促进食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭及EMT

目的:检测miR-452-5p在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨其异常表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响及其分子机制。方法:收集2012年3月至2015年12月在河北医科大学第四医院就诊的86名ESCC患者的癌组织样本和对应的癌旁组织,用qPCR法检测miR-452-5p及其他相关基因在ESCC组织和细胞中的表达;向KYSE-150细胞中分别转染miR-452-5p mimic或pcDNA3.1-SOX7构建过表达的细胞株。分析miR-452-5p表达与ESCC病理特征和患者5年OS的关系。用MTS、Tanswell法检测miR-452-5p过表达对食管癌KYSE-150细胞增殖、侵袭能力和EMT进程的影响;用双荧光素酶报告基因实验及TOP/FOP报告基因系统检测miR-452-5p与SRY盒转录因子(SOX7)3’UTR区的结合作用及对Wnt/β-catenin通路活化水平的影响。结果:miR-452-5p在ESCC组织中呈明显高表达(P<0.01),并与ESCC患者的淋巴结转移、TNM分期及5年OS密切相关(均P<0.01)。miR-452-5p过表达明显促进食管癌KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程(P<0.05或P<0.01)。SOX7是miR-452-5p的直接靶基因,miR-452-5p通过对SOX7的负向调控影响了Wnt通路活化水平(P<0.05或P<0.01),同时,miR-452-5p表达也受Wnt通路活化水平的影响(P<0.05或P<0.01),其可能为Wnt通路下游靶基因。结论:miR-452-5p通过miR-452-5p/SOX7/Wnt/miR-452-5p正反馈环路提高Wnt/β-catenin通路活化水平,进而促进ESCC KYSE-150细胞的增殖、侵袭能力及EMT进程,miR-452-5p有望成为ESCC患者靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。

血浆外泌体miR-452作为胃癌诊断的生物标志物

目的筛选胃癌血浆外泌体中差异表达的miRNA,分析其对胃癌诊断的敏感性与特异性及与胃癌患者的疾病特点之间的相关性。方法收集南京医科大学第一附属医院消化内科病理确诊为胃癌的住院患者与消化内科及体检中心的无癌健康对照人群的血液样本,离心后试剂盒抽提血浆外泌体及其RNA,通过透射电子显微镜观察、蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定标志蛋白及纳米粒径分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)对血浆外泌体进行鉴定,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)鉴定与胃癌发病相关的miRNA。结果共纳入胃癌患者80例和健康对照80名。成功对2例血浆外泌体(GC1和NC1)进行鉴定以证实其相关特性。在初始筛选阶段,对12例胃癌和12名健康对照者的血浆外泌体RNA进行qRT-PCR验证并依据其各自的2^-△Ct值,分析受试者的诊断ROC曲线下面积(AUC)。与健康对照者相比,胃癌的血浆外泌体miR-452-5p表达量显著升高(P=0.002),miR-452-5p的AUC值为0.798(95%CI:0.552~0.883)。而后纳入新的68对样本对筛选结果进一步验证,miR-452-5p的表达趋势与初始筛选一致,且诊断AUC值为0.733(95%CI:0.647~0.818)。分析已验证的miR-452-5p表达水平与胃癌病理特征无相关性(P>0.05)。结论血浆外泌miR-452-5p可能为检测胃癌的新型潜在生物标志物,然而其对疾病的病理特性的影响仍需更大样本量的实验进一步研究。

脓毒症并发急性肾损伤患儿血清miR-452-3p的水平表达及其临床意义

目的探讨miR-452-3p在脓毒症并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患儿中的表达及其临床意义。方法选取2018年1月~2020年12月海口市妇幼保健院收治的脓毒症并发AKI患儿106例,根据生存情况分为生存组(n=71)和死亡组(n=35),检测两组血清miR-452-3p,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)及肾损伤分子-1(KIM-1)水平。应用多因素Logistic回归分析AKI患儿发生死亡的危险因素。绘制ROC曲线分析miR-452-3p,NGAL及KIM-1预测AKI患儿死亡的价值。结果死亡组血清miR-452-3p(3.92±1.61 vs 2.17±0.95),NGAL(562.38±53.62mg/L vs 287.46±31.70 mg/L)及KIM-1(29.15±6.28μg/L vs 15.96±3.20μg/L)水平明显高于生存组,差异均有统计学意义(t=18.245,15.117,11.613,均P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,miR-452-3p(OR=2.583,95%CI:1.690~5.374),NGAL(OR=2.792,95%CI:1.835~6.153)及KIM-1(OR=1.950,95%CI:1.274~3.902)水平升高是AKI患儿发生死亡的独立危险因素(P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-452-3p,NGAL及KIM-1三项联合预测AKI患儿死亡的曲线下面积(0.947,95%CI:0.886~0.991)最大,其敏感度和特异度分别为96.2%和89.5%。结论miR-452-3p在脓毒症并发AKI患儿中明显升高,联合NGAL及KIM-1预测AKI患儿死亡具有更高的价值。

上调的miR-452-5p抑制RORα的表达并促进肝癌细胞的增殖和迁移

为了探究肝细胞癌中miR-452-5p对患者预后生存的影响及其对肝癌细胞增殖、迁移的作用。采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中肝细胞肝癌数据集对miR-452-5p进行差异表达分析和Kaplan-Meier生存分析。采用TargetscanHuman和miRDB靶基因数据库对miR-452-5p靶基因进行预测;采用基因差异表达分析和加权基因共表达网络分析(WGCNA)的方法对数据集GSE14520进行分析计算。用Lipofectmine-2000将miR-452-5p模拟物、模拟物阴性对照和miR-452-5p抑制剂、抑制剂阴性对照分别转染到Huh7细胞中。分别采用RT-qPCR和Westernblot实验,检测4组细胞中RORα在mRNA和蛋白水平上的表达情况。采用CCK-8、Transwell实验,检测4组细胞的增殖活力以及迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证Huh7细胞中miR-452-5p与RORα的调控关系。经TCGA数据分析,miR-452-5p在肝癌组织中高表达且显著影响患者预后总生存期。通过miRNA靶基因预测、基因差异表达分析、WGCNA分析,筛选出关键基因RORα和LAMC1。通过Kaplan-Meier生存分析得知RORα的异常表达显著影响肝癌患者的预后总生存期。肝癌细胞中miR-452-5p的过表达,会降低RORα的mRNA和蛋白表达,同时增强肝癌细胞的增殖能力和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验结果证实了miR-452-5p靶向RORα的3′UTR区。在肝细胞癌患者中高表达的miR-452-5p靶向抑制了RORα的表达,促进了肝癌细胞增殖和迁移,进而加剧了肝癌的进展和预后不良。

环状RNA ATP2B1靶向miR-452-5p降低胃癌细胞系的增殖和侵袭

目的探讨环状RNA circATP2B1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法收集2018年7月至2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院胃肠肝胆外科行手术切除并病理学诊断的44例胃癌组织标本及癌旁组织标本。选取4株胃癌细胞系(SGC7901、HS-746T、MGC803、BGC823)和正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)。RT-qPCR检测胃癌组织和细胞系中circATP2B1表达。将circATP2B1表达最低的胃癌细胞分为对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染circATP2B1过表达质粒)。分别采用MTT法和Transwell小室法检测各组胃癌细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析circATP2B1可能的作用机制,RT-qPCR和Western blot检测circATP2B1下游基因的表达。结果胃癌组织circATP2B1表达量显著低于癌旁组织(0.92±0.08 vs 3.62±0.23,P<0.01)。胃癌细胞系circATP2B1表达量均显著低于GES-1细胞(P<0.01),其中以HS-746T细胞的表达量最低(P<0.01)。与对照组相比,实验组HS-746T细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),侵袭能力显著下降(P<0.01)。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验显示circATP2B1可靶向结合miR-452-5p(P<0.01),miR-452-5p可靶向结合原钙黏附蛋白9(PCDH9)(P<0.01)。与对照组比较,实验组HS-746T细胞miR-452-5p表达显著下降(1.00±0.04 vs 0.24±0.05,P<0.01),PCDH9基因表达显著上升(P<0.01)。结论circATP2B1在胃癌组织和细胞系中低表达,circATP2B1通过靶向结合miR-452-5p正调控PCDH9基因表达,进而降低胃癌HS-746T细胞增殖和侵袭能力。

miR-452-5p调控YTHDF2肝细胞癌细胞凋亡和铁死亡的机制研究

目的探究miR-452-5p、YTH结构域家族成员2(YTH domain family,member 2,YTHDF2)调控肝细胞癌细胞凋亡、铁死亡的作用及其机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测L02、SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B细胞中miR-452-5p、YTHDF2的表达;脂质体法将anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-452-5p组(转染anti-miR-452-5p)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-YTHDF2组(转染pcDNA-YTHDF2)、anti-miR-452-5p+si-con组(转染anti-miR-452-5p+si-con)、anti-miR-452-5p+si-YTHDF2组(转染anti-miR-452-5p+si-YTHDF2)转染HepG2细胞;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)双染法检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)法检测细胞活性;蛋白免疫印迹(western blotting,WB)实验检测细胞中YTHDF2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链(FTH1)的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞比较,肝细胞癌细胞(SMMC-7721、HepG2、Huh7、Hep3B)中miR-452-5p显著升高,YTHDF2显著降低(P<0.05);抑制miR-452-5p明显抑制HepG2细胞活性,促进凋亡,促进ROS、SLC7A11、GPX4和FTH1表达(P<0.05)。过表达YTHDF2具有与抑制miR-452-5p相类似的HepG2细胞调控作用。miR-452-5p显著抑制野生型YTHDF2细胞的荧光活性,并负向调控YTHDF2表达。敲减YTHDF2部分逆转抑制miR-452-5p对HepG2细胞凋亡、铁死亡的调控作用。结论miR-452-5p在肝细胞癌细胞中高表达,抑制miR-452-5p促进癌细胞凋亡、铁死亡,其机制与靶向YTHDF2有关。

非小细胞肺癌组织中miR-371-5p、miR-452、miR-5100、LZTS1表达水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-371-5p(miR-371-5p)、微小RNA-452(miR-452)、微小RNA-5100(miR-5100)、亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)表达水平及临床意义。方法选择非小细胞肺癌患者100例为研究对象,并收集患者的癌旁正常组织及肺癌组织。检测肺癌组织与癌旁正常组织中miR-371-5p、miR-452、miR-5100、LZTS1的表达水平,分析其与临床病理特征的关系。结果肺癌组织中miR-371-5p、miR-452、LZTS1水平明显低于癌旁正常组织,miR-5100水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。非小细胞肺癌组织中miR-371-5p、LZTS1表达水平与年龄、吸烟、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05),miR-452表达水平与淋巴结转移、病理类型显著相关(P<0.05),miR-5100表达水平与TNM分期显著相关(P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中miR-371-5p、miR-452、LZTS1均为低表达,miR-5100为高表达。miR-371-5p、LZTS1表达水平与年龄、吸烟、淋巴结转移、TNM分期相关,miR-452表达水平与淋巴结转移、病理类型相关,miR-5100表达水平与TNM分期相关。

miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p在肝癌组织中的表达情况及其与临床特征、预后的关系

目的探讨miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p在肝癌组织中的表达情况及其与临床特征、预后的关系。方法选取2017年1月至2020年1月河南大学第一附属医院收治的115例肝癌患者作为研究对象。比较肝癌组织与癌旁组织中miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p表达情况,分析其与患者临床特征、预后的关系,通过单因素、多因素logistic回归分析肝癌患者的预后危险因素。结果肝癌患者肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于癌旁组织,miR-452表达高于癌旁组织(P<0.05)。低分化组肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于高、中分化组,中分化组低于高分化组;低分化组肝癌组织中miR-452表达高于高、中分化组,中分化组高于高分化组;Ⅳ期组肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期组,Ⅲ期组低于Ⅰ、Ⅱ期组;Ⅳ期组肝癌组织中miR-452表达高于Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期组,Ⅲ期组高于Ⅰ、Ⅱ期组(P<0.05)。miR-124-3p、miR-7-5p高表达的患者3 a生存率均高于低表达的患者,miR-452高表达的患者3 a生存率低于低表达患者(P<0.05)。有血管侵犯的3 a生存率为26.83%,低于无血管侵犯的51.35%(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,miR-124-3p低表达、miR-452高表达、miR-7-5p低表达、有血管侵犯是肝癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p的表达与肝癌的发生、发展密切相关,且miR-124-3p、miR-7-5p低表达、miR-452高表达、有血管侵犯是肝癌患者预后的独立危险因素。

MiR-452逆转人乳腺癌MCF-7/DOC细胞对多西他赛耐药性及其机制研究

目的探讨miR-452在逆转人乳腺癌MCF-7/多西他赛(docetaxel,DOC)细胞对多西他赛耐药的作用机制。方法应用实时荧光定量PCR法验证对DOC耐药的乳腺癌细胞MCF-7/DOC及其亲本细胞MCF-7中miR-452的表达差异,同时分别检测MCF-7和MCF-7/DOC转染miR-452模拟物和抑制物后的表达变化。用MTT法检测细胞转染后对DOC耐药性的变化,并用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法验证生物信息学预测的miR-452靶基因胰岛素生长因子1受体(insulin-like growth factor-1receptor,IGF-1R),以探讨其可能的作用机制。结果MCF-7/DOC细胞中miR-452的相对表达量显著高于其亲本细胞MCF-7的表达量(78.86±21.89)倍,t=3.88,P=0.02;MCF-7转染miR-452模拟物后,miR-452相对表达量高于其阴性对照组(212.15±50.08)倍,t=11.13,P<0.01;耐药性实验组为(1.98±0.11)μmol/L,高于阴性对照组的(0.85±0.08)μmol/L,P<0.01;IGF-1R的mRNA和蛋白质水平低于其阴性对照组,mRNA水平为(0.54±0.22)倍,t=2.90,P=0.04。相反,MCF-7/DOC转染miR-452抑制物后,miR-452相对表达量低于其阴性对照组(0.58±0.07)倍,t=8.00,P=0.02;耐药性实验组为(44.45±3.20)μmol/L,低于阴性对照组的(107.31±6.63)μmol/L,P<0.01;IGF-1R的mRNA和蛋白质水平高于其阴性对照组,mRNA水平为(50.90±4.16)倍,t=53.76,P<0.01。结论 miR-452可能通过靶基因IGF-1R改变DOC的耐药性。

基于TCGA分析miR-452-3p在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达及意义

探讨miR-452-3p在不同分子亚型乳腺癌中的表达与意义。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取1053例乳腺癌组织与101例癌旁组织miRNA-seq数据及患者的临床病理资料。比较miR-452-3p在乳腺癌组织和正常组织的表达情况,分析其在不同分子亚型乳腺癌中的差异。采用logistic回归分析评价其与患者临床病理特征的相关性。通过miRWalk和Targetscan数据库预测其靶基因,使用Metascape数据库进行编码蛋白互作网络分析并筛选核心子网络。结果:miR-452-3p在乳腺癌组织中的表达显著低于正常乳腺组织,在管腔型乳腺癌中的表达显著低于其他分子亚型(P<0.05)。miR-452-3p表达水平与乳腺癌组织学类型、N分期以及雌激素受体、孕酮受体的表达状态密切相关(P<0.05)。靶基因预测结果筛选出287个靶点,蛋白互作网络分析结果显示其功能主要涉及雌激素信号通路、MAPK信号通路。结论:miR-452-3p在不同分子亚型的乳腺癌中表达存在差异,通过不同靶点调控雌激素和MAPK信号通路可能是其参与乳腺癌进展的重要机制。

微小RNA-452-5p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-452-5p在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-361、HCC70和正常乳腺细胞株MCF-10A中的表达水平,选取表达水平最低的细胞株进行后续实验。脂质体转染法将miR-452-5p mimic及阴性对照转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞,并设空白对照组。QPCR检测转染效果,EdU增殖实验和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3和procaspase-9的表达水平,生物信息学软件TargetScan预测miR-452-5p与血管内皮生长因子A(VEGF-A)的靶向结合位点,Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。结果miR-452-5p在乳腺癌细胞株MDA-MB-231(0.26±0.02)、MCF-7(0.35±0.04)、MDA-MB-361(0.49±0.05)和HCC70(0.67±0.07)中的表达量均明显低于正常乳腺细胞株MCF-10A(1.00±0.11),差异有统计学意义(P<0.05),选取表达量最低的MDA-MB-231细胞进行后续实验。QPCR检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组MDA-MB-231细胞中miR-452-5p的表达量上调(0.95±0.09 vs.4.28±0.44,P<0.05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。EdU检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞增殖率降低(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。克隆形成实验显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞克隆形成数目均减少[(77.65±7.84)个vs.(53.22±6.16)个,P<0.05)],空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞凋亡率升高[(2.21±0.46)%vs.(20.61±3.09)%,P<0.05)],而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组procaspase-3(1.20±0.13 vs.0.49±0.05)和procaspase-9(1.49±0.20 vs.0.38±0.04)蛋白表达下调(P<0.05),空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,miR-452-5p组细胞中VEGF-A蛋白表达下降(P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,VEGF-A-Wt组与阴性对照比较,miR-452-5p相对荧光素酶活性降低(P<0.05),而VEGF-A-Mut组和阴性对照miR-452-5p相对荧光素酶活性无显著改变(P>0.05)。结论miR-452-5p在乳腺癌细胞株中呈低表达,miR-452-5p通过调控VEGF-A的表达影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡。