miR-493-5p、miR-7、miR-24在肝癌组织中的表达及与预后的相关性分析

目的 探讨微RNA(microRNA,miRNA)-493-5p、miR-7、miR-24在肝癌组织中的表达情况及其与预后的相关性。方法 选取2017年5月至2018年5月在石家庄市中医院接受手术治疗的54例肝癌患者,采用RT-PCR检测肝癌组织及癌旁组织中miR-493-5p、miR-7、miR-24的表达水平,并分析其与肝癌患者预后的相关性。结果 与癌旁组织相比,肝癌组织中miR-493-5p、miR-7的表达水平明显降低,miR-24的表达水平明显升高,差异有显著性(P<0.05);与Ⅰ/Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的肝癌患者相比,Ⅲ/Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的肝癌患者癌组织中miR-493-5p、miR-7表达水平明显降低,miR-24表达水平明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。相关分析结果显示,miR-493-5p、miR-7与肝癌患者的TNM分期、淋巴结转移呈负相关,与分化程度呈正相关,而miR-24与肝癌患者的TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关。死亡组患者miR-493-5p、miR-7表达水平低于生存组,miR-24表达水平高于生存组(P<0.05)。多因素回归分析显示,miR-24为肝癌患者3年内死亡的独立危险因素,而miR-493-5p、miR-7为其独立保护因素(P<0.05)。结论 miR-493-5p、miR-7、miR-24在肝癌组织中呈异常表达,并与肝癌的临床病理特征相关,有望用于肝癌患者的预后评估。

木犀草素调控CTBP1-AS2/miR-493-5p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨木犀草素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)损伤的影响,分析其保护机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)C-末端结合蛋白-1反义RNA2(CTBP1-AS2)和miR-493-5p表达有关。方法用30 mmol/L葡萄糖处理hRECs 48 h建立细胞损伤模型。将hRECs分为正常糖(NG)组、高糖组(HG)、甘露醇组(MA)、HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组。为探讨木犀草素是否调控CTBP1-AS2/miR-493-5p影响高糖诱导的hRECs损伤,将hRECs分为HG+pcDNA组、HG+pcDNA-CTBP1-AS2组、HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组。实时定量PCR检测hRECs中CTBP1-AS2和miR-493-5p表达水平;流式细胞术检测hRECs凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。荧光素酶报告实验确定CTBP1-AS2和miR-493-5p靶向关系。结果与NG组比较,HG组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著降低(均P<0.05)。与HG组比较,HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著升高(均P<0.05)。与HG+pcDNA组比较,HG+pcDNA-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性显著升高(均P<0.05)。miR-493-5p是CTBP1-AS2的靶基因。与HG+木犀草素高剂量组比较,HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性显著降低(均P<0.05)。结论木犀草素可减轻高糖诱导的hRECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调CTBP1-AS2/miR-493-5p途径实现的。

miR-493-5p抑制人卵巢癌细胞系SKOV3增殖和迁移

目的探讨miR-493-5p对卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响以及潜在的作用机制。方法培养人卵巢上皮细胞系IOSE80以及卵巢癌细胞系A2780、SKOV3和OVCAR3,将miR-493-5p过表达载体、miR-493-5p抑制表达载体及G蛋白偶联受体激酶相互作用因子1(GIT1)表达载体转染至SKOV3细胞,采用RT-qPCR检测miR-493-5p和mRNA的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测miR-493-5p和GIT1的靶向关系。结果A2780、SKOV3和OVCAR3细胞中miR-493-5p低表达,GIT1高表达(P<0.05);过表达miR-493-5p后,SKOV3细胞增殖活性、迁移和侵袭数降低(P<0.05)。miR-493-5p靶向调控GIT1的表达,过表达GIT1降低了miR-493-5p对SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用以及对p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-c-Jun、p-c-Fos表达的抑制作用。结论miR-493-5p可抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控GIT1以及MEK1/2-ERK1/2通路有关,并可为卵巢癌的诊断、预防和治疗提供新靶点。

miR-493-5p在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导恶变细胞中的功能研究

目的:探讨在反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)中低表达的mir-493-5p在化学致癌物致癌过程中的作用。方法:运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-493-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的表达水平。瞬时转染miRNA的模拟物,改变16HBE-T中miR-493-5p的表达,检测转染后16HBE-T细胞的增殖能力。结果:16HBE-N细胞中mir-493-5p的表达水平是16HBE-T的0.28倍,在16HBE-T组过表达mir-493-5p后实验组细胞增殖能力下降。结论:mir-493-5p表达水平的改变对细胞的增殖能力有影响,在anti-BPDE恶性转化细胞中低表达的mir-493-5p可能发挥着类抑癌基因的作用。

前列腺癌组织中miR-449a、miR-493-5p表达与临床病理参数及预后的关系

目的检测miR-449a、miR-493-5p在前列腺癌组织中的表达水平,探究miR-449a、miR-493-5p表达与前列腺癌患者临床病理参数和预后之间的关系。方法选取2013年2月至2015年3月在常州市第七人民医院住院的125例前列腺癌患者的石蜡组织样本及其相应的癌旁组织样本作为研究对象。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测组织中miR-449a、miR-493-5p表达水平,同时分析miR-449a和miR-493-5p表达与患者临床病理参数之间的关系,分析miR-449a、miR-493-5p表达与患者预后关系。结果与癌旁正常组织相比,前列腺癌组织中miR-449a、miR-493-5p表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中miR-449a表达水平与Gleason评分、骨转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05);miR-493-5p表达水平与前列腺特异性抗原(PSA)、Gleason评分、骨转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05)。生存分析结果显示,miR-449a高表达患者的术后5年总生存率高于miR-449a低表达患者,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-493-5p高表达患者的5年总生存率高于miR-493-5p低表达患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论前列腺癌组织中miR-449a和miR-493-5p均表现为低表达,且与部分临床病理参数相关,两者对前列腺癌患者的预后均有一定的预测价值。

LncRNA LUCAT1通过调节miR-493-5p/RAC1轴对非小细胞肺癌细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:阐明长链非编码RNA(lncRNA)肺癌相关转录物1(LUCAT1)对非小细胞肺癌(NSCLC)发挥作用的潜在机制。方法:RT-qPCR和Western blot检测基因和蛋白表达。双荧光素酶报告基因(DLRG)验证miR-493-5p与LUCAT1或RAC1之间的关系。通过CCK-8、集落形成、流式细胞术以及Transwell对细胞生物学行为进行评估。此外,通过肿瘤异种移植实验研究LUCAT1在NSCLC中的生物学功能。结果:LUCAT1和RAC1 mRNA在NSCLC组织和细胞系中表达上调,miR-493-5p表达下调(P<0.05);而且在NSCLC中观察到LUCAT1与miR-493-5p呈负相关,与RAC1 mRNA呈正相关,miR-493-5p与RAC1 mRNA呈负相关(P<0.05)。DLRG证实miR-493-5p与LUCAT1或RAC1之间存在相互作用关系(P<0.05)。沉默LUCAT1可显著上调miR-493-5p水平,下调RAC1水平(P<0.05)。此外,沉默LUCAT1可显著减弱细胞增殖活力,且侵袭能力也降低,促进细胞凋亡(P<0.05)。另外,抑制miR-493-5p或过表达RAC1均可部分逆转LUCAT1沉默对NSCLC细胞的影响(P<0.05)。体内异种移植肿瘤实验证实,沉默LUCAT1可显著抑制体内NSCLC肿瘤的生长(P<0.05)。结论:LUCAT1沉默通过调节miR-493-5p/RAC1轴来抑制NSCLC肿瘤的发生。

miR-493-5p靶向HOPX基因对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨miR-493-5p对前列腺癌细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法培养正常膀胱上皮细胞HUC及前列腺癌细胞T24、5637、SW780,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-493-5p和同源域特有蛋白(HOP)X mRNA表达水平;Western印迹检测HOPX蛋白表达。将T24细胞分为NC组、miR-con组、miR-493-5p组、si-con组、si-HOPX组、miR-493-5p+pcDNA组、miR-493-5p+pcDNA-HOPX组;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、酶切半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-493-5p和HOPX的靶向关系。结果相较于正常膀胱上皮细胞HUC,前列腺癌细胞T24、5637、SW780中miR-493-5p表达水平均显著降低(均P<0.05);HOPX表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-493-5p和干扰HOPX可抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡;抑制CyclinD1蛋白的表达,促进酶切Caspase-3蛋白的表达(均P<0.05)。miR-493-5p靶向调控HOPX。过表达HOPX能逆转miR-493-5p对T24细胞的作用。结论miR-493-5p可通过下调HOPX抑制前列腺癌细胞增殖、促进凋亡。

miR-493-5p、CHE联合GP73检测在肝癌筛查、病情评估中的应用研究

目的探讨miR-493-5p、胆碱脂酶(CHE)联合高尔基体糖蛋白73(GP73)检测在肝癌筛查、病情评估中的应用价值。方法选取2015年7月~2019年7月安阳市第五人民医院收治的98例肝癌患者(临床分期:早期31例、中期35例、晚期32例)作为观察组,选取同期本院的健康体检者104例作为对照组。聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法检测miR-493-5,丁酰基硫代胆碱法测定CHE水平,电化学发光法检测GP73水平。比较3项指标在不同组别之间的表达水平,分析3者联合检测对肝癌患者病情进展预测的价值。结果观察组miR-493-5p、CHE水平低于对照组,GP73水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-493-5p相对表达量及CHE水平比较:早期>中期>中晚期,差异具有统计学意义(P<0.05);GP73水平比较:早期<中期<晚期,差异具有统计学意义(P<0.05);联合miR-493-5p、CHE、GP73检测灵敏度、特异度、AUC分别为92.10%、94.50%、0.960,均高于单一指标检测,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论临床可加强联合miR-493-5p、CHE、GP73检测,用于诊断早期肝癌和评估患者病情进展情况。

Circ_VANGL1调控miR-493-5p/FXR1影响结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景circRNA在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织、细胞系和血浆中异常表达,与CRC临床恶性特征密切相关,但CRC中环状RNA VANGL1(circular RNA VANGL1,circ_VANGL1)的表达及其功能机制仍不清楚.假设circ_VANGL1通过微小RNA(microRNA,miR)-493-5p/脆性X相关基因1(fragile X-related gene 1,FXR1)轴影响CRC细胞的增殖、迁移和侵袭.目的探讨circ_VANGL1调控miR-493-5p/FXR1对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法Western blot检测FXR1在CRC组织和癌旁组织中表达.RT-qPCR检测circ_VANGL1和miR-493-5p表达.体外培养CRC细胞Caco-2,将其分为si-circ_VANGL1组、si-NC组、miR-NC组、miR-493-5p mimic组、si-circ_VANGL1+miR-493-5p Inhibitor组.细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和克隆形成实验评估Caco-2增殖能力.Transwell实验评估Caco-2迁移和侵袭能力.双荧光素酶报告实验检测RNAs(circ_VANGL1和miR-493-5p、miR-493-5p和FXR1)之间的相互作用.结果与癌旁组织比较,CRC组织中circ_VANGL1相对水平、FXR1蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-493-5p相对水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-circ_VANGL1组Caco-2细胞抑制率、miR-493-5p相对水平显著升高(P<0.05),FXR1蛋白表达、克隆形成数、迁移数、侵袭数显著降低(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-493-5p mimic组Caco-2细胞抑制率显著升高(P<0.05),FXR1蛋白表达、克隆形成数、迁移数、侵袭数显著降低(P<0.05).circ_VANGL1直接与miR-493-5p结合.与si-circ_VANGL1组比较,si-circ_VANGL1+miR-493-5p Inhibitor组Caco-2细胞抑制率显著降低(P<0.05),FXR1蛋白表达、克隆形成数、迁移数、侵袭数显著升高(P<0.05).结论沉默circ_VANGL1通过靶向miR-493-5p/FXR1轴抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

miR-493-5p下调METTL3表达影响鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-493-5p对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法实验分为miR-NC组(转染miR-493-5p模拟物阴性对照)、miR-493-5p组(转染miR-493-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-493-5p抑制剂阴性对照)、anti-miR-493-5p组(转染miR-493-5p抑制剂)、si-NC组(转染METTL3抑制表达载体阴性对照)、si-METTL3组(转染METTL3抑制表达载体)、miR-493-5p+pcDNA组(共转染miR-493-5p模拟物和METTL3过表达载体阴性对照)、miR-493-5p+pcDNA-METTL3组(共转染miR-493-5p模拟物和METTL3过表达载体)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-493-5p和甲基转移酶样蛋白3(METTL3)mRNA表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测miR-493-5p和METTL3的靶向关系。结果鼻咽癌组织中miR-493-5p表达水平降低,METTL3表达水平升高(P<0.05)。过表达miR-493-5p或抑制METTL3表达,鼻咽癌5-8F细胞活性降低,5-8F细胞迁移、迁袭数降低(P<0.05)。miR-493-5p靶向调控METTL3,上调METTL3表达逆转了miR-493-5p过表达对鼻咽癌5-8F细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论过表达miR-493-5p可能通过下调METTL3表达抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

miR-222-5p靶向WNK2基因促进肝细胞癌生长

目的 探讨miR-222-5p对肝细胞癌(HCC)生长的影响及其分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-222-5p和WNK2 mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝细胞系L02、不同HCC细胞系Hep3B、HepG2、HuH-7中表达;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-222-5p和WNK2靶向关系;取生长密度达50%~60%的HepG2癌细胞,分为miR-222-5p NC组、miR-222-5p mimics组、miR-222-5p inhibitor组、miR-222-5p NC+pSUPER-si NC组、miR-222-5p NC+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si NC组、miR-222-5p inhibitor+pSUPER-si WNK2组、miR-222-5p NC+pcDNA组、miR-222-5p NC+pcDNA-WNK2组、miR-222-5p mimics+pcDNA组、miR-222-5p mimics+pcDNA-WNK2组,另取未转染L02正常肝细胞和HepG2癌细胞。24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率;平板克隆法检测克隆形成能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;Western印迹法检测WNK2蛋白表达水平。结果 与癌旁组织及正常肝细胞相比,HCC组织及各细胞系中miR-222-5p表达水平明显升高,WNK2 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-222-5p NC组相比,miR-222-5p mimics组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05),miR-222-5p inhibitor组miR-222-5p表达水平、增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低,WNK2蛋白表达水平升高(P<0.05)。miR-222-5p和WNK2存在靶向关系。与miR-222-5p NC+pcDNA组相比,miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05);miR-222-5p mimics+pcDNA组增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p NC+pcDNA WNK2组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显升高(P<0.05)。与miR-222-5p mimics+pcDNA组相比,miR-222-5p mimics+pcDNA WNK2组细胞增殖活性、克隆形成数和成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论 过表达miR-222-5p可能通过靶向抑制WNK2表达促进肝癌HepG2细胞的增殖、克隆形成和成瘤能力,促进HCC生长。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

miR-340-5p靶向调控ARID1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平。通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化。双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系。最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展。结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P<0.05)。通过抑制BCPAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平。miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系。敲降ARID1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

LncRNA DGUOK-AS1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)脱氧鸟苷激酶反义RNA(DGUOK-AS)1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析肝癌组织中DGUOK-AS1和miR-204-5p表达量。双荧光素酶报告实验确定DGUOK-AS1与miR-204-5p靶向关系,RT-qPCR检测干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞miR-204-5p表达量。集落形成实验分析DGUOK-AS1和miR-204-5p表达对MHCC97-H细胞增殖的影响。流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡。Transwell实验分析细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织比较,肝癌组织中DGUOK-AS1表达量明显上调,而miR-204-5p表达量明显下调(P<0.05)。miR-204-5p是DGUOK-AS1的靶基因。干扰DGUOK-AS1表达后miR-204-5p表达量显著升高(P<0.05)。干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与干扰DGUOK-AS1表达比较,同时干扰DGUOK-AS1和miR-204-5p表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 干扰DGUOK-AS1通过靶向miR-204-5p可抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。