miR-500a表达在三阴性乳腺癌中的临床意义及对肿瘤进展的影响

目的 研究miR-500a在三阴性乳腺癌(TNBC)中的作用,明确其对TNBC的临床意义。方法 收集2012年8月—2015年8月在郴州市第一人民医院确诊的113例TNBC患者的肿瘤组织及相应的癌旁正常组织。培养TNBC细胞和正常乳腺上皮细胞。采用qRT-PCR检测miR-500a在TNBC组织和细胞系中的表达水平。采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析其预后价值。用miR-500a模拟物、miR-500a抑制物和阴性对照转染TNBC细胞。CCK-8法检测TNBC细胞增殖能力。采用Transwell试验检测miR-500a对TNBC细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-500a在TNBC组织和细胞系中的表达高于相邻正常组织和细胞系。与miR-500a低表达的患者相比,miR-500a上调的TNBC患者通常预后较差,总生存期较短。miR-500a高表达可促进TNBC细胞增殖、迁移和侵袭。结论 miR-500a可能在TNBC的发生发展过程中发挥促癌作用。

循环miR-500对内皮祖细胞募集和颈动脉粥样斑块稳定性的调节作用

目的探讨mi R-500对小鼠颈动脉粥样硬化斑块中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的募集和斑块稳定性的调节作用。方法采用颈动脉硅胶圈植入法建立颈动脉粥样硬化斑块小鼠模型,实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测正常小鼠和模型小鼠血浆中mi R-500的表达水平。32只模型小鼠随机均分为4组,每周分别尾静脉注射mi R-500模拟物、对照模拟物、mi R-500抑制物和对照抑制物,6周后收集颈动脉标本,流式细胞术检测斑块内EPCs的数量,免疫组化检测患处内皮完整性和单核/巨噬细胞浸润程度,油红O染色检测不稳定斑块面积。分离培养骨髓EPCs,分别转染mi R-500模拟物、对照模拟物、mi R-500抑制物和对照抑制物,72 h后酶联免疫吸附试验法检测炎症标志因子基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP)-9和白细胞介素(interleukin,IL)-6的分泌,Transwell法检测细胞迁移能力。结果模型小鼠血浆中mi R-500的表达水平显著上调(P<0.01);循环mi R-500水平的减少显著促进斑块内EPCs的聚集和内皮的完整性,减少不稳定斑块的形成和斑块内单核/巨噬细胞浸润(P<0.01),抑制EPCs分泌MMP-9和IL-6,并增强其迁移能力(P<0.01);而mi R-500水平增加则作用相反。结论循环mi R-500可抑制颈动脉粥样斑块中EPCs的募集和斑块的稳定性。

长链非编码RNA LINC00641靶向调控miR-500对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA LINC00641(LncRNA LINC00641)靶向调控miR-500的表达对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将pc-DNA、pc-DNA-LINC00641、anti-miR-500的阴性对照(anti-miR-con)、anti-miR-500、pc-DNA-LINC00641与miR-500 mimics的阴性对照(miR-con)、pc-DNA-LINC00641与miR-500 mimics分别转染至SW480细胞,分别命名为第1转染组、第2转染组、第3转染组、第4转染组、第5转染组、第6转染组。用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组LINC00641与miR-500表达;双荧光素酶报告基因检测LINC00641与miR-500之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况;Transwell小室检测细胞迁移及侵袭。结果转染后,第1转染组、第2转染组的LINC00641表达水平分别为1.00±0.14,4.79±0.34;细胞存活率分别为(101.34±5.45)%,(72.46±7.69)%;迁移细胞数分别为(218.68±18.16),(89.58±9.48)个;侵袭细胞数分别为(138.38±9.42),(54.16±5.16)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实LINC00641可调控miR-500的表达与活性。第3转染组、第4转染组的miR-500表达水平分别为0.95±0.07,0.47±0.06;细胞存活率分别为(101.65±7.24)%,(73.65±6.59)%;迁移细胞数分别为(191.34±17.52),(93.64±9.67)个;侵袭细胞数分别为(127.64±9.84),(45.37±6.25)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。第5转染组、第6转染组的miR-500表达水平分别为0.59±0.07,1.64±0.15;细胞存活率分别为(75.05±5.67)%,(88.36±8.35)%;迁移细胞数分别为(57.67±7.29),(133.59±11.64)个;侵袭细胞数分别为(37.56±5.18),(82.64±9.38)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LINC00641可调控miR-500的表达抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

lncRNA VIM-AS5在人乳腺癌细胞系中的表达及对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)VIM-AS5在人乳腺癌组织中表达的临床意义及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法 利用Lnc2Cancer 3.0数据库分析VIM-AS5在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期、生存期的相关性。RT-qPCR检测乳腺癌BT-549、MDA-MB-435、MDA-MB-231、CAL-51细胞中VIM-AS5的表达量。通过脂质体分别将VIM-AS5过表达质粒和阴性对照质粒转染至CAL-51细胞,依次记为VIM-AS5组和NC组。采用集落形成实验、划痕愈合法分别检测CAL-51细胞的增殖活力和迁移率。双荧光素酶报告基因实验验证VIM-AS5与miR-500a的靶向关系。RT-qPCR检测CAL-51细胞中miR-500a表达。Western blot检测CAL-51细胞中JAK/STAT3分子通路蛋白表达。结果 乳腺癌组织中VIM-AS5表达显著低于癌旁组织(P<0.01)。VIM-AS5表达量与乳腺癌患者的临床分期呈负相关(P<0.01)。VIM-AS5低表达乳腺癌患者的生存期明显短于VIM-AS5高表达乳腺癌患者(P<0.01)。与乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌细胞中VIM-AS5表达显著降低(P<0.01)。VIM-AS5组集落形成数显著低于NC组(P<0.01)。VIM-AS5组细胞迁移率显著低于NC组(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-500a是VIM-AS5的靶基因(P<0.01)。VIM-AS5能够负调控miR-500a的表达(P<0.01)。与NC组比较,VIM-AS5组CAL-51细胞中JAK/STAT3分子通路蛋白JAK、p-STAT3、c-Myc、Bcl-2、CDK3表达均明显下降。结论 乳腺癌细胞中VIM-AS5呈低表达,上调VIM-AS5可能通过靶向miR-500a/JAK/STAT3分子通路抑制乳腺癌CAL-51细胞的增殖及迁移。