miR-506-3p、sST2和CEA在恶性胸腔积液患者中表达水平及诊断价值分析

目的分析miR-506-3p、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和癌胚抗原(CEA)在恶性胸腔积液患者中表达水平及其诊断价值。方法选取108例胸腔积液患者作为研究组,根据超声检查及病理检查结果,将32例结核性胸腔积液患者纳入结核性组,41例癌性胸腔积液患者和35例淋巴瘤性胸腔积液患者纳入恶性组。另随机抽取54例本院健康体检者纳入对照组。比较研究组患者及对照组健康体检者的血清sST2、CEA水平;比较恶性组与结核性组患者胸水miR-506-3p、sST2和CEA水平。采用ROC分析各指标对恶性胸腔积液的诊断价值。结果血清sST2和CEA水平,恶性组>结核性组>对照组(P<0.05)。与结核性组比较,恶性组胸水miR-506-3p水平降低(P<0.05),而sST2和CEA水平升高(P<0.05)。ROC结果显示,血清sST2、CEA及胸水miR-506-3p、sST2、CEA对恶性胸腔积液均具有诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。结论在恶性胸腔积液患者中,胸水miR-506-3p低表达,而血清和胸水sST2、CEA高表达;对恶性胸腔积液具有一定诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。

HOTTIP通过竞争性结合miR-506调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移

目的:探究HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移的作用机制。方法:通过生信分析TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达miRNA、mRNA、lncRNA。利用miRcode数据库数据对lncRNA-miRNA的结合进行预测,并对miRNA调控的靶基因进行预测。qRT-PCR检测肾透明细胞癌细胞系中HOTTIP、miR-506、Vimentin的表达,RNA pull-down实验检测miR-506和HOTTIP结合,RIP实验检测miR-506与HOTTIP和Vimentin的结合,Transwell和划痕愈合实验检测786-O细胞迁移能力。结果:HOTTIP在肾透明细胞癌中显著上调,并且与患者预后显著相关,其靶miRNA miR-506在肾透明细胞癌中显著下调。miR-506的下游调控基因Vimentin在肾透明细胞癌中显著上调并且与患者预后显著相关。HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达。干扰HOTTIP后,肾透明细胞癌细胞的迁移能力显著降低,而干扰HOTTIP的同时沉默miR-506或过表达Vimentin则能逆转干扰HOTTIP对肾透明细胞癌细胞迁移能力的抑制作用。结论:HOTTIP很有可能通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达从而调控肾透明细胞癌细胞迁移。

上皮性卵巢癌患者血清LncRNA KCNQ1OT1、 miR-506-3p水平变化及临床意义

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清长链非编码核糖核酸(RNA)KCNQ1重叠转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、miR-506-3p水平变化。方法 选取2019年3月至2020年12月南京医科大学附属无锡人民医院收治的102例EOC患者作为EOC组,70例良性卵巢肿瘤患者作为良性组,以及体检的60例健康女性作为对照组。分析各组血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-506-3p对EOC的诊断价值,以及EOC患者2年生存率、预后影响因素。结果 3组LncRNA KCNQ1OT1、miR-506-3p相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。EOC患者LncRNA KCNQ1OT1、miR-506-3p表达与国际妇产科学联盟(FIGO)分期、分化程度、淋巴结转移、腹膜转移有关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,LncRNA KCNQ1OT1、miR-506-3p联合诊断EOC的价值较高,ROC曲线下面积(AUC)高于二者单独诊断。LncRNA KCNQ1OT1低表达组2年生存率高于高表达组(P<0.05),miR-506-3p高表达组高于低表达组(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、腹膜转移及血清LncRNA KCNQ1OT1上调、miR-506-3p下调是预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 血清LncRNA KCNQ1OT1在EOC中上调、miR-506-3p下调,二者联合检测对EOC诊断效能较高,与患者不良预后有关,有望成为辅助评估病情和预后的生物学标志物。

miR-506对急性胰腺炎大鼠巨噬细胞迁移抑制因子及肠屏障功能影响

目的探讨微小RNA-506(miR-506)对急性胰腺炎大鼠(AP)巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)及肠屏障功能的影响。方法将SPF级SD大鼠50只随机均分为对照组、模型组、miR-506组、MIF组、miR-506+MIF组。观察各组胰腺组织病理学变化、观察胰腺组织病理学变化、肠屏障功能[血清淀粉酶、内毒素、血浆D-乳酸、乳果糖/甘露醇排除率(L/M)、细菌移位率]及MIF水平变化。。结果HE染色显示,对照组胰腺组织形态结构正常,无明显的病理改变;模型组、MIF组、miR-506组及miR-506+MIF组均有不同程度胰腺坏死,MIF组病变最为严重;miR-506组病变最轻。miR-506组胰腺病理评分、血清淀粉酶、内毒素、MIF、血浆D-乳酸水平、L/M、细菌移位率及MIF mRNA相对表达量较其他干预组降低,miR-506相对表达量则升高(P<0.05);miR-506+MIF组血清淀粉酶、内毒素、MIF、血浆D-乳酸水平、L/M、细菌移位率及MIF mRNA相对表达量较miR-506组升高,miR-506相对表达量较miR-506组下降(P<0.05)。结论miR-506的高表达减轻AP大鼠病变,改善肠屏障功能,其作用可能与抑制MIF有关。

miR-506-3p调控乳腺癌细胞增殖、凋亡以及其对多西他赛耐药性的作用机制

目的探讨miR-506-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡以及对多西他赛耐药性的影响及分子机制。方法体外培养MCF-10A细胞和乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、T47D、BT549;在MDA-MB-231细胞中转染miR-506-3p模拟物、TUBA1C小干扰RNA或TUBA1C过表达质粒、或共转染TUBA1C过表达质粒和miR-506-3p模拟物。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-506-3p和TUBA1C mRNA表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖及半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-506-3p和TUBA1C的靶向关系。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、T47D和BT549细胞中miR-506-3p表达降低,TUBA1C mRNA表达升高(P<0.05)。miR-506-3p高表达或TUBA1C低表达后,MDA-MB-231细胞的活性降低,凋亡率升高,IC_(50)值降低(P<0.05)。miR-506-3p靶向调控TUBA1C,过表达TUBA1C逆转了miR-506-3p高表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡以及对多西他赛耐药性的影响。结论miR-506-3p高表达可能通过靶向下调TUBA1C抑制乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡且减弱乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性。

胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶检测在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值

目的 分析胸腔积液外泌体miR-506-3p联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)在结核性胸膜炎的早期诊断及预后评估中的价值。方法 选取2021年8月至2023年3月就诊于沧州市人民医院的90例结核性胸膜炎患者作为结核组,另选同期于沧州市人民医院就诊的50例非结核性胸膜炎(肺炎旁胸腔积液、恶性胸腔积液等)患者作为非结核组,对比两组临床资料与胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平,经多因素Logistic回归分析影响结核性胸膜炎发生的危险因素。根据治疗3个月后患者预后情况,将结核组分为预后良好组(72例)、预后不良组(18例),对比两组胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平。经Pearson相关性分析,并绘制受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线),分析胸腔积液外泌体miR-506-3p、ADA水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生及患者预后的价值。结果 结核组患者胸腔积液ADA水平比非结核组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比非结核组低(P<0.05);经多因素Logistic回归分析发现,胸腔积液ADA水平高[OR=1.205(95%CI 1.105~1.313)]是结核性胸膜炎发生的危险因素(P<0.05),外泌体miR-506-3p水平高表达[OR=0.320(95%CI 0.158~0.658)]是结核性胸膜炎发生的保护因素(P<0.05);预后不良组患者胸腔积液ADA水平比预后良好组高,胸腔积液外泌体miR-506-3p水平比预后良好组低(P<0.05);绘制ROC曲线发现,胸腔积液ADA、外泌体miR-506-3p水平及二者联合预测结核性胸膜炎发生的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.729(95%CI 0.640~0.818)、0.810(95%CI 0.738~0.883)、0.874(95%CI 0.818~0.930),预测结核性胸膜炎患者不良预后的AUC为0.892(95%CI 0.806~0.978)、0.924(95%CI 0.868~0.981)、0.942(95%CI 0.875~1.000);Pearson相关性显示,胸腔积液ADA与外泌体miR-506-3p水平呈负相关(r=-0.335,P=0.001)。结论 结核性胸膜炎患者胸腔积液外泌体miR-506-3p呈低表达、ADA呈高表达,二者之间为负相关,且miR-506-3p联合ADA可有效预测结核性胸膜炎患者不良预后的发生。

MiR-506-3p靶向TRAF6抑制心肌炎的炎性反应和心肌细胞凋亡

目的探讨miR-506-3p调节心肌炎炎性反应及心肌细胞凋亡的潜在作用机制。方法使用SD大鼠制备病毒性心肌炎(VMC)动物模型,RT-qPCR法检测正常SD大鼠和VMC模型大鼠心脏组织中miR-506-3p相对表达水平;分离培养VMC大鼠心肌细胞,将模拟物对照、miR-506-3p模拟物或miR-506-3p抑制剂转染至心肌细胞,分别采用RT-qPCR、ELISA和Hoechst 33342染色法检测转染后细胞中miR-506-3p表达、细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平及细胞凋亡情况。Targetscan在线预测,RT-qPCR和双荧光素酶报告基因实验验证miR-506-3p和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6的靶向关系。结果与正常SD大鼠相比,VMC模型大鼠心脏组织中miR-506-3p表达显著下调(P<0.05)。以VMC模型大鼠心肌细胞为研究对象,转染miR-506-3p模拟物后,细胞中miR-506-3p表达显著上调(P<0.05),细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡显著减少(P<0.05);转染miR-506-3p抑制剂则结果相反。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和RT-qPCR实验结果表明,TRAF6是miR-506-3p的潜在靶基因,并且miR-506-3p可负调控TRAF6表达。结论miR-506-3p在心肌炎组织中呈低表达,过表达miR-506-3p可抑制心肌炎炎症反应和心肌细胞凋亡,其机制可能与TRAF6有关。

miR-506通过调控MCL-1抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的作用机制

目的:探究miR-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)及侵袭转移的影响和作用机制。方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检及药敏试验确诊为耐阿立替尼的74例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织以及人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,分别采用细胞转染、免疫组化染色(IHC)、qRT-PCR和Western Blot法检测上述临床组织和细胞样本中miR-506、MCL-1、BAX/Bcl-2凋亡信号途径及EMT标志蛋白表达水平;此外,采用Transwell细胞实验观察miR-506过表达和MCL-1敲减对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:免疫组化(IHC)结果显示肺癌患者癌组织中浸润性坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重,且癌组织中MCL-1的阳性表达率为94.64%,明显高于癌旁组织的23.27%(P<0.05)。qRT-PCR和Western Blot结果显示,肺癌组织中miR-506、BAX和E-cadherin的表达明显低于癌旁组织,而MCL-1、Bcl-2和N-cadherin的表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。细胞实验结果表明miR-506过表达和MCL-1敲减能够明显上调BAX和E-cadherin的表达,同时抑制Bcl-2和N-cadherin的表达(P<0.05);此外,miR-506过表达和MCL-1敲减均能显著抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-506可能通过抑制BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径发挥抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞EMT及诱导细胞凋亡作用,有望为临床抗肺癌转移及凋亡抑制靶向治疗提供新分子和靶点。

miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究

目的探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用。方法首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证。将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养。运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况。结果测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中。TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍。细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13)μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12)μg/L。同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150μg/L:7.8%±1.7%vs5.4%±1.2%;300μg/L:33.6%±3.9%vs18.2%±4.7%)。结论成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性。

miR-506在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞自噬的影响

目的研究miR-506在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞自噬的影响。方法收集74例结肠癌患者的癌组织和癌旁组织标本,采用RT-PCR检测miR-506和Beclin1的mRNA表达水平,并分析二者的相关性。培养结肠癌细胞系HCT116、SW48、COLO225细胞,分别转染miR-506 mimic、miR-506 inhibitor或miR-control,采用RT-PCR检测Beclin1的mRNA表达水平,并用Target scan分析Beclin1是否可能与miR-506结合。培养COLO225细胞,分别转染miR-506 mimic、miR-506 inhibitor或miR-control,采用Western blot检测p62、Beclin1和LC3BⅠ/Ⅱ的蛋白表达水平。结果结肠癌患者癌组织标本miR-506、Beclin1的mRNA表达水平显著高于癌旁组织标本[(0.607±0.092)比(0.251±0.089)、(0.546±0.121)比(0.266±0.156),t=23.995、12.203,均P<0.001],而且二者的表达呈显著正相关(r=0.786、P<0.001)。在转染miR-506 mimic后,HCT116、SW48、COLO225细胞中Beclin1的表达均显著升高(P<0.05),在转染miR-506 inhibitor后,HCT116、SW48、COLO225细胞中Beclin1的表达均显著降低(P<0.05),Target scan分析表明,Beclin1上存在可与miR-506相互结合的序列。在转染miR-506 mimic后,COLO225细胞中p62、Beclin1的表达显著升高(P<0.05),LC3BⅠ向LC3BⅡ转化增加;在转染miR-506 inhibitor后,COLO225细胞中p62、Beclin1的表达显著降低(P<0.05),LC3BⅡ向LC3BⅠ转化增加。结论miR-506可促进结肠癌中Beclin1的表达并可促进结肠癌细胞自噬。

circNT5E通过调控miR-506-3p表达对结肠癌细胞迁移、侵袭和凋亡的影响

目的探讨circNT5E对结肠癌细胞迁移、侵袭和凋亡的影响及分子机制。方法选取40例2017年1月至2019年5月本院结肠癌患者癌组织及其相应癌旁组织;将结肠癌细胞HCT116分为si-NC组、si-circNT5E组、pcDNA组、pcDNA-circNT5E组、miR-NC组、miR-506-3p组、si-circNT5E+antimiR-NC组、si-circNT5E+anti-miR-506-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circNT5E和miR-506-3p的表达水平;显色原位杂交(CISH)检测癌组织中circNT5E表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circNT5E和miR-506-3p的靶向关系。结果与癌旁组织相比,结肠癌组织中circNT5E表达水平显著升高,miR-506-3p表达水平显著降低(P<0.05)。沉默circNT5E或过表达miR-506-3p,迁移、侵袭细胞数显著降低,细胞凋亡率显著升高,MMP-2、MMP-9、Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高(P<0.05)。circNT5E靶向调控miR-506-3p,抑制miR-506-3p表达逆转了沉默circNT5E表达对结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭和凋亡的作用。结论沉默circNT5E表达可能通过上调miR-506-3p的表达抑制结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭,促进细胞凋亡。

LncRNA KCNQ1OT1通过调控miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制。方法于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达。以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系。结果喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)]。喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)]。与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)%比(3.79±2.37)%]。KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达。敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为。

miR-506对肝癌细胞恶性表型的影响

目的探讨微RNA-506(micro RNA-506,mi R-506)对肝癌细胞活性、增殖和侵袭等恶性表型的调控作用。方法以肝癌细胞系Hep G2和QGY-7703为模型,依处理方式不同分别分为细胞常规培养(细胞对照)组、pc D-NA3空载体对照组、转染pc DNA3/pri-506过表达mi R-506(过表达mi R-506)组、p SIH1空载体对照组及转染p SIH1/Tu D-506抑制mi R-506(抑制mi R-506)组。实时定量逆转录PCR检测细胞内mi R-506的表达水平。分别用CCK-8实验、体外集落形成实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的活性、集落形成能力和侵袭能力。结果在肝癌细胞系Hep G2和QGY-7703中,与对应的空载体对照组相比,过表达mi R-506组的细胞内mi R-506表达水平升高,而抑制mi R-506组的细胞内mi R-506表达水平降低(P<0.05);过表达mi R-506组细胞活性降低且形成集落的数量和穿过Transwell微孔的细胞数量均减少,而抑制mi R-506组细胞活性升高且形成集落的数量和穿过Transwell微孔的细胞数量均明显增加(P<0.05)。与细胞对照组相比,pc DNA3空载体对照组和p SIH1空载体对照组均不影响以上各指标(P>0.05)。结论 mi R-506抑制肝癌细胞的活性、集落形成能力和侵袭能力等恶性表型,在肝癌细胞中发挥抑癌基因的作用。

miR-506在乳腺肿瘤细胞增殖及转移中的作用

目的分析miR-506与乳腺癌增殖转移的关系。方法 miR-506 minics/inhibitor/NC瞬转入MDA-MB-231乳腺癌细胞后进行CCK-8细胞增殖,细胞计数,集落形成,Transwell小室实验及Real-Time PCR。结果 miR-506相关核苷酸(mimics、inhibitor、NC)瞬转入细胞后第1天miR-506 inhibitor即显现出促进细胞增殖的效应,第3天后miR-506 mimics开始出现明显的细胞增殖抑制效应;集落形成实验中miR-506 mimics组细胞所形成的集落数量明显少于miR-506 inhibitor组和NC组;Transwell小室实验显示三种miR-506 mimics所转染细胞的穿过膜的数量少于miR-506 inhibitor组和NC组。Real-Time PCR显示,与miR-506 inhibitor组相比,miR-506 mimics组p65、MMP2基因表达增高,而RASSF1基因降低。结论 miR-506过表达可以明显的抑制细胞的增殖能力,单克隆集落形成能力和侵袭转移能力,即miR-506高表达可以抑制乳腺癌细胞的恶性表型。这种作用可能与p65、MMP2及RASSF1表达有关。

肝母细胞瘤细胞miR-506-3p表达水平与EZH2过度表达的关系

目的通过检测肝母细胞瘤(HB)患儿肿瘤组织和癌旁组织内miR-506-3p及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)的表达水平,探讨miR-506-3p在调控EZH2表达及HB发病过程中的可能作用。方法选择20例HB患儿为研究对象,手术切取患儿肿瘤及癌旁组织作为实验样本。利用Real-time PCR及Western blotting检测肿瘤组织和癌旁组织内miR-506-3p、EZH2的表达水平。将HepG2细胞分为miR-506-3p过表达组和阴性对照组,过表达组转染miR-506-3p模拟物,阴性对照组转染随机对照,并检测转染后细胞中miR-506-3p与EZH2的表达水平。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中miR-506-3p表达水平明显降低(P<0.001);EZH2的mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.001),且miR-506-3p表达水平与EZH2蛋白水平呈显著负相关(r=-0.59,P=0.006)。HepG2细胞转染miR-506-3p模拟物后,与阴性对照相比,miR-506-3p过表达组miR-506-3p表达水平均明显上调(P=0.008),EZH2表达水平明显下调(P=0.001)。结论HB患儿肿瘤组织中miR-506-3p表达不足可能是EZH2过度表达的原因之一。

miR-506-3p靶向Beclin-1调控烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖机制研究

目的:探讨烧伤后皮肤成纤维细胞中miR-506-3p表达与Beclin-1的靶向关系及增殖调控作用,为烧伤后瘢痕的治疗提供新靶点。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测烧伤组织和热损伤皮肤成纤维细胞中miR-506-3p水平;Targetscan在线预测,双荧光素酶验证miR-506-3p与Beclin-1靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测miR-506-3p模拟物或抑制剂转染对Beclin-1表达的影响;qRT-PCR检测热刺激后miR-506-3p模拟物(10nM或30nM)转染成纤维细胞miR-506-3p的表达并采用CCK-8检测转染细胞增殖效率。结果:与正常组织相比,烧伤组织和热损伤成纤维细胞中miR-506-3p的表达下调;miR-506-3p和Beclin-1存在靶向调控作用关系,并且miR-506-3p可负调控Beclin-1表达;miR-506-3p模拟物转染以剂量依赖的方式抑制了热刺激的真皮成纤维细胞中的细胞增殖。结论:miR-506-3p通过靶向抑制Beclin-1表达来调节烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖,有可能成为烧伤愈合后瘢痕治疗的潜在靶标。

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA-MB-231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照。通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-506模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimentin和Slug蛋白表达的变化。荧光素酶报告基因分析实验检测MDA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响。结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P<0.01)。miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P<0.01)。MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达。Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性。结论在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一。

miR-506对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨mi R-506对胃癌细胞增殖和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测5株胃癌细胞系(MKN-45、SGC-7901、BGC-823、NCI-N87和AGS)中mi R-506的表达量,以永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照。通过脂质体转染的方法在SGC-7901细胞系中瞬时转染mi R-506和anti-miR-506上调和下调mi R-506表达,通过CCK-8实验观察细胞增殖能力改变,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动迁移和侵袭能力的变化。结果 miR-506在各胃癌细胞中的表达量相对于正常胃黏膜上皮细胞GES-1显著降低(P<0.05)。过表达mi R-506可显著抑制SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P<0.01)。抑制mi R-506表达则可促进增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论胃癌细胞系中mi R-506明显降低,上调mi R-506可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,下调则逆转上述过程。

lncRNA FOXD2-AS1通过靶向miR-506-5p调控宫颈癌细胞增殖与凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)FOXD2-AS1是否通过靶向miR-506-5p调控宫颈癌细胞增殖和凋亡。方法:体外培养人宫颈癌细胞系HeLa、Siha、Caski与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,用qPCR检测细胞中FOXD2-AS1和miR-506-5p的表达水平。用脂质体转染技术分别构建抑制FOXD2-AS1表达和过表达miR-506-5p的宫颈癌细胞,用MTT实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况,WB实验检测细胞中增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27及凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX和cleaved-capase-3的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXD2-AS1是否靶向miR-506-5p,并分析同时抑制FOXD2-AS1和miR-506-5p表达对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。结果:与Ect1/E6E7细胞比较,宫颈癌HeLa、Siha和Caski细胞中FOXD2-AS1表达水平显著升高,miR-506-5p表达水平降低(均P<0.01)。抑制FOXD2-AS1表达可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1蛋白和Bcl-2蛋白表达,并促进p21、p27和BAX、cleaved-capase-3蛋白的表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡(均P<0.01)。过表达miR-506-5p可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,促进p21和BAX蛋白表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实宫颈癌细胞中FOXD2-AS1靶向负调控miR-506-5p的表达(P<0.01)。抑制miR-506-5p表达逆转了抑制FOXD2-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用(P<0.01)。结论:FOXD2-AS1通过靶向miR-506-5p的表达调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡。

LncRNA NEAT1通过调节miR-506-5p/CFL2轴对人胃癌细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA核富集转录子1(lncRNA NEAT1),对miR-506-5p/丝切蛋白2(CFL2)轴的调控作用,及其对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响。方法:体外培养BGC-823细胞,将lncRNA NEAT1低表达载体(si-NEAT1)及miR-506-5p抑制物(miR-506-5p inhibitor)转染至BGC-823细胞,分为si-NC组、si-NEAT1组、inhibitor NC组、miR-506-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-506-5p inhibitor组。RT-qPCR检测lncRNA NEAT1及miR-506-5p表达以判定转染效率;CCK-8法检测增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Transwell小室法检测侵袭;Western blot检测CFL2、细胞周期素依赖激酶4(CDK4)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1、CFL2与miR-506-5p的靶向关系;裸鼠荷瘤试验进一步验证lncRNA NEAT1、miR-506-5p、CFL2三者之间的靶向调控作用。结果:与si-NC组相比,si-NEAT1组细胞增殖、侵袭能力、CFL2表达降低,凋亡率、miR-506-5p表达升高(P<0.05)。与inhibitor NC组相比,miR-506-5p inhibitor组细胞增殖、侵袭能力、CFL2表达增加,凋亡率、miR-506-5p表达降低(P<0.05)。LncRNA NEAT1可靶向调节miR-506-5p表达,CFL2是miR-506-5p的靶基因。敲低miR-506-5p可减弱lncRNA NEAT1低表达发挥的抗增殖、抗侵袭、促凋亡作用(P<0.05)。miR-506-5p inhibitor可减弱lncRNA NEAT1低表达发挥的抗移植瘤增长作用(P<0.05);过表达CFL2可减弱miR-506-5p过表达的抗移植瘤增长作用(P<0.05)。结论:LncRNA NEAT1可通过靶向调控miR-506-5p/CFL2轴,来影响人胃癌细胞的增殖、侵袭、凋亡等生物学行为。