LncRNASNHG15通过靶向miR-942-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG15对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响及其分子机制。方法LPS处理A549细胞,构建新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)细胞损伤模型;将A549细胞分为对照(Control)组、模型(LPS)组、转染si-NC和LPS处理(LPS+si-NC)组、转染si-lncRNASNHG15和LPS处理(LPS+si-lncRNASNHG15)组、转染miR-NC和LPS处理(LPS+miR-NC)组、转染miR-942-5p和LPS处理(LPS+miR-942-5p)组、转染si-lncRNASNHG15、anti-miR-NC和LPS处理(LPS+si-lncRNASNHG15+anti-miR-NC)组和转染si-lncRNA SNHG15、anti-miR-942-5p和LPS处理(LPS+si-lncRNA SNHG15+anti-miR-942-5p)组;实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测分子表达;流式细胞术和Westernblot检测细胞凋亡;ELISA检测白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果与Control组比较,LPS组lncRNASNHG15表达、细胞凋亡率、Bax、IL-6、IL-1β、TNF-α水平上调(均P<0.05),而miR-942-5p表达、Bcl-2水平下调(均P<0.05)。沉默lncRNASNHG15或过表达miR-942-5p降低了LPS作用下的A549细胞凋亡率、Bax、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,而升高了Bcl-2水平(均P<0.05)。lncRNASNHG15靶向miR-942-5p,且下调miR-942-5p逆转了沉默lncRNASNHG15对LPS诱导A549细胞损伤的影响(均P<0.05)。结论沉默lncRNASNHG15通过靶向上调miR-942-5p减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

lncRNA SNHG7通过miR-122-5p/CCND1轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(lncRNA SNHG)7通过miR-122-5p/细胞周期蛋白(CCN)D1轴对胃癌细胞的增殖、凋亡及肿瘤免疫逃逸的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测体外培养的人胃癌细胞株NCI-N87、SNU-1、MKN-45和人胃癌组织源细胞、人胃黏膜上皮细胞中lncRNA SNHG7、miR-122-5p与CCND1表达。体外培养的人胃癌细胞MKN-45,随机分为对照组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)组、lncRNA SNHG7 siRNA阴性对照(si-NC)组、lncRNA SNHG7 siRNA(si-lncRNA SNHG7)+miR-122-5p inhibitor组,分组转染后,检测各组MKN-45细胞增殖、凋亡、活化CD8+T细胞杀伤率、miR-122-5p及CCND1、细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡蛋白〔B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3〕表达,并检测lncRNA SNHG7对MKN-45细胞miR-122-5p的靶向调节作用。结果与胃黏膜上皮细胞相比,胃癌组织源和MKN-45、SNU-1、NCI-N87细胞lncRNA SNHG7、CCND1 mRNA表达明显升高,miR-122-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,si-lncRNA SNHG7组细胞活力、EdU阳性率、细胞CCND1、PCNA蛋白表达明显降低,凋亡率、活化CD8+T细胞对各组MKN-45细胞的杀伤率、miR-122-5p及Bax、caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05);si-NC组细胞各指标均无显著差异(P>0.05);lncRNA SNHG7 siRNA和miR-122-5p inhibitor联合可逆转lncRNA SNHG7 siRNA对细胞各指标的作用。lncRNA SNHG7可靶向下调MKN-45细胞miR-122-5p表达。结论下调lncRNA SNHG7可通过上调miR-122-5p而降低CCND1表达,进而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡,并减轻其免疫逃逸。

lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。

胶质瘤患者LncRNA SNHG25、miR-497-5p水平及其与临床病理特征和预后的相关性研究

目的:探讨胶质瘤组织LncRNA SNHG25、miR-497-5p表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:选取本院2018-01-2020-03收治的84例胶质瘤患者为观察组,并同期选取84例因颅脑损伤并接受手术治疗的患者为对照组。分别手术切除胶质瘤组织和正常脑组织后,比较两组LncRNA SNHG25、miR-497-5p水平。比较观察组中不同临床特征患者LncRNA SNHG25、miR-497-5p水平的差异。采用Pearson相关法分析两组患者LncRNA SNHG25水平与miR-497-5p水平相关性。对观察组患者随访3年,根据是否死亡分为死亡组和存活组,比较两组LncRNA SNHG25、miR-497-5p水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA SNHG25、miR-497-5p水平对胶质瘤患者预后预测的临床价值。结果:与对照组比较,观察组LncRNA SNHG25水平升高,miR-497-5p水平降低(P<0.05)。在胶质瘤患者中,与肿瘤直径<4cm、WHO分级为Ⅰ-Ⅱ级的患者比较,肿瘤直径≥4cm、WHO分级为Ⅲ-Ⅳ级患者LncRNA SNHG25水平升高,miR-497-5p水平降低(P<0.05);相关性分析结果显示,胶质瘤患者LncRNA SNHG25水平与miR-497-5p水平呈负相关(r=-0.369,P<0.01),ROC曲线结果显示,当LncRNA SNHG25截断值为1.83时,预测胶质瘤患者预后的AUC为0.86;当miR-497-5p截断值为0.91时,预测胶质瘤患者预后的AUC为0.91。结论:胶质瘤患者LncRNA SNHG25和miR-497-5p水平与肿瘤直径、分期有关,二者对辅助评估预后具有一定临床价值。

长链非编码RNA SNHG15通过miR-141-3p/KLF9机制调控鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的:探究长链非编码RNA SNHG15在鼻咽癌中的表达情况,并进一步分析其下游miRNA调控通路,为研究鼻咽癌的分子生物学行为及潜在治疗靶点提供参考。方法:采用PCR检测SNHG15在鼻咽癌临床组织标本及鼻咽癌细胞系中的表达水平。根据临床资料分析SNHG15表达与鼻咽癌患者预后的相关性。采用CCK-8实验、克隆形成实验以及流式细胞仪检测SNHG15对鼻咽癌细胞增殖能力与凋亡情况的影响。通过双荧光素酶实验、Western blot检测SNHG15、与SNHG15结合的miRNA以及潜在下游靶基因Krüppel样因子9(KLF9)之间的调控关系。结果:SNHG15在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达上调,而SNHG15的相对表达量增高也预示着鼻咽癌患者的不良预后。在鼻咽癌细胞系中抑制SNHG15的表达能够显著抑制细胞的增殖能力,并促进鼻咽癌细胞的凋亡。双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR以及Western blot结果显示,在鼻咽癌细胞中SNHG15能够吸附并抑制miR-141-3p,并可能进一步调控转录因子KLF9的功能,从而促进鼻咽癌细胞的增殖。结论:在鼻咽癌中,SNHG15可能通过影响miR-141-3p/KLF9通路促进鼻咽癌细胞的增殖,参与疾病的发生与发展。

LncRNA SNHG15通过miR-483-3p/DDIT4轴调节非小细胞肺癌细胞的顺铂敏感性和上皮间质转化

目的 探究LncRNA SNHG15对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性和上皮间质转化的影响以及miR-483-3p/DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)轴在其中发挥的作用。方法 体外培养NSCLC细胞(A549)、NSCLC耐药细胞(A549/DDP),检测两种细胞对DDP的IC50及LncRNA SNHG15、miR-483-3p、DDIT4 mRNA与蛋白表达,将A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组、si NC组、si SNHG15组、si SNHG15+inhibitor NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组;蛋白印迹分析法检测各组细胞E-cad、N-cad、DDIT4蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-483-3p与LncRNA SNHG15、DDIT4的靶向关系。结果 与A549细胞相比,A549/DDP细胞对DDP的IC50、LncRNA SNHG15、DDIT4 mRNA与蛋白升高,miR-483-3p水平降低(P <0.05);A549/DDP组细胞间黏附明显被破坏;si SNHG15组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组细胞排列相对紧密,呈现上皮细胞特性;si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组较si SNHG15组细胞排列松散、扩散细胞多;与A549/DDP组相比,si SNHG15组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达升高,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达降低(P <0.05);与si SNHG15组相比,si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达降低,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达升高(P <0.05)。结论沉默A549/DDP细胞中SNHG15表达可通过调控miR-483-3p/DDIT4,抑制A549/DDP细胞增殖、侵袭、迁移、EMT,并降低A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

LncRNA SNHG12通过miR-129-5p/GTPBP4对肝细胞癌进展的促进作用

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核仁小RNA宿主基因12(small nucleolar RNA host gene 12, SNHG12)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)发展的调控机制。方法通过RT-qPCR检测长链非编码RNA(long noncoding RNA, LncRNA) SNHG12在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平;分析肝癌组织中LncRNA SNHG12的表达水平与HCC患者临床病理参数的关系;运用MTT实验、细胞集落形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验、裸鼠成瘤实验检测LncRNA SNHG12、miR-129-5p、GTPBP4在肝癌细胞活性、增殖、迁移、侵袭中的作用;采用荧光素酶报告基因、RT-qPCR、Western blot实验来评估LncRNA SNHG12、miR-129-5p、GTPBP4之间的互相作用。结果 LncRNA SNHG12在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调(P<0.05);LncRNA SNHG12表达水平较高的HCC患者相比其表达水平较低的患者预后更差(P<0.05);LncRNA SNHG12表达水平与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移存在正相关的关系;LncRNA SNHG12可促进HCC的细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05);miR-129-5p在肝癌组织中表达下调,其可抑制肝癌细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05);LncRNA SNHG12可通过与miR-129-5p进行竞争性结合,从而促进GTPBP4的表达(P<0.05);GTPBP4在HCC组织中表达上调,其可促进肝癌细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。结论 LncRNA SNHG12可通过调控miR-129-5p/GTPBP4轴从而促进HCC的进展。

CCND1基因3'-UTR区miR-15a-5p和miR-16-5p结合位点的荧光素酶报告载体构建及分析

目的:构建miR-15a-5p和miR-16-5p的荧光素酶报告载体,利用此载体分析并验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因3'-UTR区域的确切结合位点,探讨miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的相互作用关系。方法:通过Pubmed和miRBase数据库分别寻找到CCND1基因3'-UTR区域碱基序列和miR-15a-5p、miR-16-5p的碱基序列。找出理论结合位点后,构建荧光素酶报告载体,并用荧光素酶报告基因方法验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因之间的作用关系。结果:通过基因测序表明,本实验成功构建了CCND1a/Ma和CCND1b/Mb荧光素酶报告基因表达载体。将上述载体应用于荧光素酶报告基因实验,结果发现CCND1 b组的荧光素酶表达强度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的3'-UTR区域存在结合位点,其具体结合位置在CCND1b区。这在理论上意味着miR-15a-5p和miR-16-5p可以抑制CCND1基因的表达。

长链非编码RNA SNHG3通过靶向调节miR-186-5p调控WNT5A对黑色素瘤增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA SNHG3、miR-186-5p和WNT5A对黑色素瘤增殖和侵袭的影响情况及相关机制。方法qPCR检测黑色素瘤组织和癌旁组织、黑色素瘤细胞系和人永生化表皮细胞系中SNHG3、miR-186-5p和WNT5A的表达情况;采用starBase数据库预测并用双荧光素酶报告基因验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p和WNT5A的靶向关系;采用SNHG3-siRNA和miR-186-5p抑制剂分别构建SNHG3和miR-186-5p低表达模型,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭,qPCR和Western blotting检测干扰SNHG3或miR-186-5p后WNT5A的mRNA和蛋白表达情况。结果与癌旁组织或人永生化表皮细胞相比,黑色素瘤组织或细胞中SNHG3表达明显增高(P<0.05);miR-186-5p表达明显降低(P<0.05),二者表达水平呈负相关;荧光素酶活性实验进一步证实SNHG3和miR-186-5p存在靶向关系;功能实验证实,敲低SNHG3抑制了黑色素瘤细胞的增殖和侵袭,而低表达miR-186-5p具有相反的效应。进一步探究miR-186-5p的下游机制表明,WNT5A是其下游的重要靶点。结论SNHG3在黑色素瘤发生发展过程中起重要作用,SNHG3可以调节miR-186-5p/WNT5A轴调控黑色素瘤细胞的增殖和侵袭能力。

LncRNA SNHG1下调miR-195-5p改善软骨细胞凋亡和炎症微环境

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)和miR-195-5p在OA凋亡和炎症微环境中的作用及相关性。方法先检测OA患者与大鼠模型软骨组织和正常软骨组织中SNHG1和miR-195-5p的表达情况。再对体外软骨细胞进行培养,转染,建立OA细胞模型。建立大鼠OA模型,将大鼠分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、模型组+SNHG 1干预(SNHG 1,n=10)、模型组+inhibitor干预(inhibitor,n=10)。最后收集软骨组织进行一系列细胞功能实验,研究SNHG1、miR-195-5p对OA软骨细胞凋亡、炎症、增殖的影响,并与体外实验比较。研究SNHG1和miR-195-5p的关系。注射SNHG1过表达质粒、miR-195-5p抑制剂探究对OA大鼠模型的体内影响。结果在OA组织中SNHG1的表达下调,而miR-195-5p的表达上调(P<0.001)。调高SNHG1或敲低miR-195-5p的表达可降低OA细胞凋亡率,改善炎性微环境,恢复细胞增殖能力(P<0.05)。得出SNHG1可充当miR-195-5p的分子海绵。SNHG1促进剂、miR-195-5p抑制剂能够减弱OA大鼠模型的凋亡与炎症反应。结论通过调节SNHG1-miR-195-5p轴,调高SNHG1或敲低miR-195-5p有利于改善软骨细胞的凋亡与炎症微环境,为OA进展机理提供了新见解。

miR-590-5p介导lncRNA SNHG1信号影响卵巢癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达情况以及其对卵巢癌细胞增殖的影响及作用机制。方法:Real-time PCR和双荧光素酶实验确定miR-590-5p与lncRNA SNHG1之间的调控作用。Real-time PCR检测卵巢癌、癌旁组织以及卵巢癌细胞中miR-590-5p的表达。分别采用NC mimic或者miR-590-5p mimic转染两株卵巢癌细胞,CCK-8检测各组细胞的增殖情况。此外,Real-time PCR检测两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结果:Real-time PCR结果显示下调SNHG1后miR-590-5p的表达显著升高。双荧光素酶结果显示转染miR-590-5p mimic和野生型SNHG1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低。此外,Real-time PCR结果显示miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织。CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达水平明显低于其他卵巢癌细胞。转染miR-590-5p mimic显著上调了CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达并且抑制了这两株细胞的增殖,同时抑制了两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结论:miR-590-5p的低表达与卵巢癌的进展密切相关,miR-590-5p能够介导SNHG1信号并且通过对其下游靶基因的调控抑制卵巢癌细胞的增殖。

绞股蓝皂苷A调控lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及机制

目的探讨绞股蓝皂苷A(GpA)对骨关节炎软骨细胞损伤的影响及其对lncRNA TTTY15/miR-335-5p通路的调控作用。方法采用白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞建立骨关节炎软骨细胞损伤模型,用不同剂量的GpA处理细胞,pcDNA、pcDNA-TTTY15分别转染入软骨细胞后用GpA与IL-1β共同处理细胞;qRT-PCR法检测TTTY15、miR-335-5p的表达量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平;用试剂盒检测SOD、MDA的水平;CCK-8实验、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测TTTY15与miR-335-5p的靶向关系;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平升高(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平升高(P<0.05),TTTY15的表达水平升高(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-335-5p的表达水平降低(P<0.05);随着GpA浓度的升高IL-1β诱导的软骨细胞中TNF-α、IL-6、MDA的水平降低(P<0.05),凋亡率与Bax蛋白水平降低(P<0.05),TTTY15的表达水平降低(P<0.05),而SOD的活性与细胞存活率升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),miR-335-5p的表达水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;TTTY15可靶向调控miR-335-5p;TTTY15过表达可通过降低miR-335-5p的表达而逆转GpA对IL-1β诱导的软骨细胞炎性因子、氧化应激、细胞存活率及凋亡的作用。结论绞股蓝皂苷A可通过调控TTTY15/miR-335-5p通路而抑制炎性反应、氧化应激、凋亡及促进细胞增殖进而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

lncRNA SNHG14靶向miR-149-5p调控MIA诱导的骨关节炎模型细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA SNHG14(lncRNA SNHG14)对碘乙酸钠(MIA)诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法4μmol/L MIA诱导软骨细胞损伤模型,将其分为对照组、MIA组、MIA+si-NC组、MIA+si-SNHG14组、MIA+miR-NC组、MIA+miR-149-5p组、MIA+si-SNHG14+anti-miR-NC组、MIA+si-SNHG14+anti-miR-149-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA SNHG14和miR-149-5p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG14和miR-149-5p的靶向关系。结果与对照组相比,经MIA诱导的软骨细胞损伤中,lncRNA SNHG14表达水平升高,miR-149-5p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平与SOD和CAT活性降低,Bax和MDA表达水平升高(P<0.05)。抑制lncRNA SNHG14和过表达miR-149-5p均降低细胞凋亡率,提高Bcl-2表达水平与SOD和CAT活性,降低Bax和MDA表达水平(P<0.05)。lncRNA SNHG14靶向调控miR-149-5p表达,且下调miR-149-5p能逆转抑制lncRNA SNHG14表达对细胞凋亡及氧化应激反应的影响(P<0.05)。结论抑制lncRNA SNHG14通过靶向上调miR-149-5p减轻MIA诱导的软骨细胞损伤。

LncRNA SNHG15靶向miR-370-3p调控ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(Small nucleolar RNA host gene 15,SNHG15)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞损伤的影响及其分子机制。方法100 mg/L ox-LDL处理HUVECs细胞24 h,记为ox-LDL组,未经ox-LDL处理的HUVECs细胞记为Con组。将si-NC、si-SNHG15、miR-NC、miR-370-3p分别转染至ox-LDL组,记为ox-LDL+si-NC、ox-LDL+si-SNHG15、ox-LDL+miR-NC和ox-LDL+miR-370-3p组;将si-SNHG15分别与anti-miR-NC、anti-miR-370-3p共转染至ox-LDL组,记为ox-LDL+si-SNHG15+anti-miR-NC和ox-LDL+si-SNHG15+anti-miR-370-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA SNHG15和miR-370-3p的表达量;流式细胞术和蛋白质印迹(Western blot)法分别检测细胞凋亡和蛋白表达;酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG15和miR-370-3p的靶向关系。结果与Con组比较,经ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤中,lncRNA SNHG15和miR-370-3p的表达水平分别显著升高和降低(P<0.05)。抑制lncRNA SNHG15和过表达miR-370-3p均显著抑制细胞凋亡以及炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达(P<0.05)。lncRNA SNHG15靶向调控miR-370-3p表达,下调miR-370-3p逆转了抑制lncRNA SNHG15对ox-LDL引发凋亡以及炎性细胞因子的影响(P<0.05)。结论抑制lncRNA SNHG15通过靶向上调miR-370-3p缓解ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤。

循环miR-338-5p、miR-15b-5p和miR-21-5p作为肝细胞癌的潜在肿瘤标记物

目的筛查血浆中能作为肝细胞癌肿瘤标记物的miRNA。方法分为4个阶段：1miRNA芯片筛查肝细胞癌组织中异常表达的miRNA,并根据文献和miRNA芯片结果确定候选miRNA。213对术前和术后7~10 d肝细胞癌患者血浆用定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR）检测候选miRNA的表达水平,术后表达水平下降的miRNA定为目的miRNA。339例肝细胞癌患者、32例肝硬化患者、25例健康人员血浆进行qRT-PCR,验证目的miRNA在3组人群中的表达差异。4分析目的 miRNA作为肝细胞癌肿瘤标记物的诊断价值,绘制受试者工作曲线并分析其与临床参数的相关性。结果癌组织中40种miRNA表达量增加（〉2倍）,52种miRNA表达量明显下降（〈0.5倍）。结合文献,选取miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p作为候选miRNA。术后3种miRNA表达水平下降,定为目的 miRNA。3组人群测量结果显示miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p在肝细胞癌患者血浆中表达水平明显高于肝硬化患者和健康对照人群。其中miR-338-5p在肝细胞癌与肝硬化、健康人群鉴别时,曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.762 4（灵敏度：64.10%,特异度：87.50%）和0.906 4（灵敏度：89.74%,特异度：84.00%）。miR-21-5p和miR-338-5p进行联合诊断,特异度可达92.98%。即使在甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）判定为阴性的肝细胞癌患者,3种miRNA判定为肝细胞癌的灵敏度都比较高。相关性分析结果显示,血浆miR-338-5p水平与AFP水平呈负相关（r=-0.344,P=0.032）。结论循环miR-338-5p、miR-15b-5p、miR-21-5p具有作为肝细胞癌的肿瘤标记物的潜力。

lncRNA SNHG8调控miR-335-5p表达影响膀胱癌增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因8(SNHG8)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:用脂质体将si-con、si-SNHG8、pcDNA、pcDNA-SNHG8、miR-con、miR-335-5p模拟物、si-SNHG8+anti-miR-con、si-SNHG8+anti-miR-335-5p分别转染至膀胱癌细胞SW780;qRT-PCR法检测细胞中SNHG8、miR-335-5p表达。噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测分析细胞存活率、迁移和侵袭能力以及细胞凋亡。Western blot检测Ki-67、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达。双荧光素酶报告实验和qRT-PCR验证SNHG8和miR-335-5p靶向关系。结果:与膀胱移行上皮细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞SW780、5637、T24、HT-1197中SNHG8显著升高,miR-335-5p显著降低(P<0.05)。沉默SNHG8或过表达miR-335-5p能明显抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡。miR-335-5p与SNHG8序列直接结合。过表达或沉默SNHG8分别降低或升高miR-335-5p表达水平。抑制miR-335-5p能够部分逆转沉默SNHG8对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结论:长链非编码RNA SNHG8可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,其机制与靶向miR-335-5p相关,可为膀胱癌的治疗提供新的靶点。

LncRNA SNHG12调控miR-138-5p/HIF-1α轴改善缺氧/复氧人血管内皮细胞损伤的研究

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)调控miR-138-5p/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)轴改善缺氧/复氧(H/R)人血管内皮细胞损伤的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、H/R模型组、H/R+LncRNA SNHG12过表达组、H/R+miR-138-5p mimics组、H/R+共转染组、H/R+共转染阴性对照组,各转染组分别进行转染处理,除对照组外,其余各组给予5 h缺氧,再进行复氧1 h处理,诱导细胞模型,然后通过CCK-8实验检测各组细胞活力情况;通过流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况,比较各组细胞凋亡率;通过试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子IL-6、IL-17、IL-18水平;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验测定各组细胞miR-138-5p及HIF-1αmRNA表达;通过免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α蛋白表达。结果:与对照组相比,H/R模型组细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞HIF-1αmRNA和蛋白水平、细胞caspase-9、Bax及HIF-1α蛋白水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-138-5p水平降低(P<0.05)。与H/R模型组、H/R+共转染组相比,H/R+LncRNA SNHG12过表达组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞caspase-9与Bax蛋白水平、miR-138-5p水平降低(P<0.05);H/R+miR-138-5p mimics组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞cas⁃pase-9与Bax蛋白水平升高(P<0.05)。与H/R模型组相比,H/R+共转染阴性对照组、H/R+共转染组细胞各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA SNHG12可通过下调miR-138-5p表达,上调HIF-1α表达,抑制H/R诱导的HUVECs炎症与氧化应激,减轻细胞损伤及凋亡。

lncRNA ZNF674-AS1通过miR-510-5p/REPS2轴调控宫颈癌细胞HCC94的增殖和迁移

目的:探讨lncRNA ZNF674-AS1在宫颈癌中的作用及其分子机制。方法:用qPCR法检测ZNF674-AS1在31例2019年1月至2020年7月在武汉儿童医院接受手术治疗患者的宫颈癌组织和对应的癌旁组织、宫颈癌细胞系(SiHa、HeLa、C33A和HCC94)和永生化子宫颈上皮细胞系中的表达。转染过表达ZNF674-AS1质粒及其阴性对照质粒至ZNF674-AS1表达最少的HCC94细胞,CCK-8法和Transwell实验检测过表达ZNF674-AS1对HCC94细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验验证ZNF674-AS1和miR-510-5p、REPS2三者间的互补结合关系。qPCR检测过表达ZNF674-AS1对miR-510-5p与REPS2表达的影响,WB法检测过表达ZNF674-AS对细胞增殖和迁移相关因子表达的影响。结果:与癌旁组织相比,ZNF674-AS1在宫颈癌组织中呈明显低表达(P<0.01);与永生化子宫上皮细胞相比,ZNF674-AS1在宫颈癌细胞系中也呈明显低表达(P<0.05或P<0.01),以HCC94细胞中表达最低(P<0.01)。过表达ZNF674-AS1能明显抑制HCC94细胞的增殖(P<0.05)和迁移(P<0.01)。与ZNF674-AS1相互作用的miRNA是miR-510-5p,与miR-510-5p相互作用的基因是REPS2。过表达ZNF674-AS1导致HCC94细胞中miR-510-5p的表达水平降低(P<0.01)而REPS2基因的表达水平升高(P<0.01),同时引起细胞增殖和迁移相关的多种因子(CDK2、cyclin D3、vimentin和twist)上调或下调。结论:lncRNA ZNF674-AS1在宫颈癌组织和细胞中呈低表达,可能通过竞争性结合miR-510-5p而上调REPS2的表达,从而抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和迁移。

LncRNA SNHG16通过调控miR-195-5p/MYB促进胃癌细胞增殖及迁移

目的探讨lncRNA SNHG16(SNHG16)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其分子调控机制。方法基于在线数据库检索SNHG16在胃癌组织中的表达情况并筛选SNHG16的下游靶基因。通过生物信息学方法分析、双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16与miR-195-5p间相互作用关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG16、miR-195-5p和MYB在胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)中的表达情况;敲低SNHG16检测miR-195-5p或MYB表达;过表达miR-195-5p检测MYB表达;蛋白质印迹分析(Western blot)检测各组中MYB的蛋白表达水平。敲低SNHG16或过表达miR-195-5p,通过细胞增殖及划痕实验分别检测胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)增殖及迁移能力。结果LncRNA SNHG16在胃癌组织及胃癌细胞(HGC-27、MKN-28、MKN-45、NCI-N87)中表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将psiCHECK2-SNHG16-WT和miR-195-5p mimic同时转染进HGC-27中,显著抑制了HGC-27细胞的荧光素酶活性。qRT-PCR及WB实验结果显示:敲低HGC-27、MKN-28细胞中SNHG16可上调miR-195-5p并抑制MYB在转录及翻译水平的表达;过表达HGC-27、MKN-28细胞中miR-195-5p可抑制MYB表达。CCK8增殖实验及细胞划痕实验结果表明:敲低SNHG16或过表达miR-195-5p均可抑制HGC-27、MKN-28细胞的增殖和迁移。结论LncRNA SNHG16可通过miR-195-5p调节MYB在胃癌细胞中的表达,SNHG16高表达可促进胃癌细胞增殖和迁移。

miR-155-5p靶向SEP15基因在H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤中的作用

目的探讨miR-155-5p靶向SEP15基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及潜在机制。方法用含100μmol·L^-1 H2O2的培养液培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3建立H2O2损伤模型,根据处理和转染情况分为对照组、H2O2组、H2O2+anti-miR-NC组、H2O2+anti-miR-155-5p组、H2O2+pcDNA组、H2O2+pcDNA-SEP15组、miR-NC组、miR-155-5p组、H2O2+anti-miR-155-5p+si-NC组、H2O2+anti-miR-155-5p+si-SEP15组,Real-time PCR检测HLE-B3细胞中miR-155-5p和SEP15 mRNA的表达,Western blot测定SEP15、Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase-3蛋白的表达,ELISA测定H2O2诱导后HLE-B3中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,流式细胞术测定细胞凋亡率,Targetscan预测miR-155-5p与SEP15的结合关系,双荧光素酶检测验证miR-155-5p与SEP15的调控关系。结果H2O2组HLE-B3细胞中miR-155-5p、SEP15 mRNA、SEP15蛋白、MDA、SOD、GSH-Px含量及凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H2O2+anti-miR-155-5p组和H2O2+anti-pcDNA-SEP15组的细胞凋亡率分别为(12.69±1.28)%和(14.67±1.52)%,分别与H2O2+anti-miR-NC组的(25.68±2.34)%和H2O2+pcDNA组的(23.65±2.17)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Targetscan预测miR-155-5p与SEP15存在结合位点,双荧光素酶检测结果显示,miR-155-5p组野生型WT-SEP-15的萤火虫荧光素酶相对活性为0.39±0.03,较miR-NC组的1.02±0.09显著降低(P=0.000)。与H2O2+anti-miR-155-5p-si-NC组相比,H2O2+anti-miR-155-5p+si-SEP15组的SEP-15蛋白、Bcl-2蛋白、SOD活性和GSP-Px含量均显著降低,Bax蛋白、MDA含量及细胞凋亡率均显著升高(均为P<0.05)。结论miR-155-5p通过靶向SEP15基因以减轻H2O2对人晶状体上皮细胞HLE-B3的损伤并抑制细胞凋亡。