LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应分析胃黏膜上皮细胞GES-1、亲本细胞HGC-27、顺铂耐药细胞HGC-27/DDP中LHFPL3-AS1和miR-515-5p表达。将HGC-27/DDP细胞分为对照(Con)组、si-NC组、si-LHFPL3-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p mimic组、si-LHFPL3-AS1+miR-515-5pinhibitor组。双荧光素酶报告实验确定LHFPL3-AS1和miR-515-5p的靶向关系。CCK-8法检测细胞存活率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数,蛋白质印迹法检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果随着顺铂浓度的增加,HGC-27和HGC-27/DDP细胞的存活率逐渐降低,HGC-27/DDP细胞的IC50(236.20μmol/L)高于HGC-27细胞(5.83μmol/L)。与GES-1细胞比较,HGC-27和HGC-27/DDP细胞中LHFPL3-AS1相对水平显著升高,miR-515-5p相对水平显著降低(P<0.05)。LHFPL3-AS1和miR-515-5p直接特异性结合。与Con组、si-NC组比较,si-LHFPL3-AS1组HGC-27/DDP细胞miR-515-5p相对水平、E-cadherin蛋白表达显著升高,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-515-5pmimic组HGC-27/DDP细胞E-cadherin蛋白表达显著升高,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);与si-LHFPL3-AS1组比较,si-LHFPL3-AS1+miR-515-5p inhibitor组HGC-27/DDP细胞E-cadherin蛋白表达显著降低,克隆形成数、迁移数、侵袭数、细胞存活率、N-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论干扰LHFPL3-AS1通过上调miR-515-5p可抑制胃癌细胞HGC-27/DDP增殖、迁移和侵袭。

miR-515-5p促进喉癌细胞增殖、迁移和顺铂耐药

目的:探讨miR-515-5p对喉癌细胞增殖、迁移和顺铂耐药的影响并预测其潜在的靶基因。方法:在喉癌细胞FD-LSC-1和AMC-HN-8中:采用逆转录定量PCR(quantitative revserse transcription PCR,RT-qPCR)法检测miR-515-5p的表达量,敲低和过表达miR-515-5p后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK8)和克隆形成实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,并通过CCK8法检测细胞对顺铂的敏感性。构建裸鼠移植瘤模型,通过小动物活体成像、称量瘤重和免疫组化实验检测敲低miR-515-5p对裸鼠移植瘤生长的影响。采用4个miRNA靶基因数据库、喉鳞状细胞癌芯片数据集和RT-qPCR实验预测miR-515-5p潜在的靶基因。结果:在FD-LSC-1和AMC-HN-8细胞中,miR-515-5p的表达水平显著升高(P<0.001)。敲低miR-515-5p后,FD-LSC-1和AMC-HN-8细胞的增殖能力、克隆形成数目、细胞迁移数目以及顺铂处理后的细胞活力均显著下降(P<0.05);裸鼠移植瘤的光子强度和肿瘤重量也明显降低(P<0.05),增殖标记物Ki-67的表达减少。而过表达miR-515-5p可明显促进喉癌细胞的增殖、迁移和顺铂耐药(P均<0.05)。miR-515-5p与聚(A)结合蛋白相互作用蛋白2B[poly(A)binding protein interacting protein 2B,PAIP2B]具有负调控关系(P<0.05)。结论:miR-515-5p可能通过调控靶基因PAIP2B的表达来促进喉癌细胞增殖、迁移和顺铂耐药,在喉癌靶向治疗联合顺铂化疗中发挥重要的作用。

溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p、肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法将肺癌A549细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579组。CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率。qRT-PCR检测circ_0091579和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0091579和miR-515-5p相互作用。结果溪黄草显著降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调及circ_0091579下调,且呈质量浓度依赖性。下调circ_0091579可降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调。上调circ_0091579可逆转溪黄草对A549细胞的增殖抑制和凋亡促进功能。circ_0091579和miR-515-5p直接特异性结合。结论溪黄草可抑制肺癌细胞A549增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关。

芝麻素通过lncRNA WEE2-AS1/miR-515-5p通路影响高糖诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的:探讨芝麻素对高糖诱导的血管内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法:高糖诱导HUVEC建立细胞损伤模型,用不同浓度的芝麻素处理细胞;qRT-PCR法检测LncRNA WEE2-AS1与miR-515-5p的表达量;sh-NC、sh-WEE2-AS1转染至HUVEC后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+sh-NC组、HG+sh-WEE2-AS1组);构建WEE2-AS1稳定过表达HUVEC细胞,用30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+WEE2-AS1-LV组),用40μmol/L芝麻素与30 mmol/L葡萄糖共同处理细胞(HG+SES+WEE2-AS1-LV组);MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的水平;双荧光素酶报告基因实验检测WEE2-AS1与miR-515-5p的靶向关系;Western blotting法检测cleaved-caspase3蛋白表达量。结果:芝麻素可降低高糖诱导的HUVEC中WEE2-AS1的表达量(P<0.05),可降低凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05),并可降低LDH的活性和MDA的水平,还可促进miR-515-5p的表达以及增强细胞活力和SOD的活性(P<0.05),呈剂量依赖性;与HG+sh-NC组比较,HG+sh-WEE2-AS1组miR-515-5p的表达量升高,细胞活力和SOD的活性升高,凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平降低,LDH的活性和MDA的水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);WEE2-AS1可靶向调控miR-515-5p;与HG+SES组比较,HG+SES+WEE2-AS1-LV组miR-515-5p的表达量降低,细胞活力和SOD的活性降低,凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平升高,LDH的活性和MDA的水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:芝麻素可通过调控WEE2-AS1/miR-515-5p而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、氧化应激进而减轻高糖诱导的血管内皮细胞损伤。

lncRNA GATA3-AS1靶向miR-515-5p对儿童急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)GATA3反义RNA1(GATA3-AS1)靶向mi R-515-5p对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-q PCR检测对照者和ALL患儿血浆中GATA3-AS1和mi R-515-5p的表达水平。将人ALL细胞Jurkat分为si-GATA3-AS1、si-NC、mi R-NC、mi R-515-5p、si-GATA3-AS1+anti-mi R-NC和si-GATA3-AS1+anti-mi R-515-5p共6组。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,双荧光素酶报告实验用于确定GATA3-AS1和mi R-515-5p的靶向关系。结果:ALL患儿血浆中GATA3-AS1表达水平显著高于对照者(P<0.001),mi R-515-5p表达水平显著低于对照者(P<0.001)。与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组细胞抑制率、凋亡率、mi R-515-5p表达水平显著升高(P<0.001)。与mi R-NC组比较,mi R-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著升高(P<0.001)。GATA3-AS1与mi R-515-5p直接特异性结合。与si-GATA3-AS1+anti-mi R-NC组比较,si-GATA3-AS1+anti-mi R-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著降低(P<0.001)。结论:下调GATA3-AS1可通过靶向上调mi R-515-5p的表达抑制儿童ALL细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

上皮性卵巢癌组织中miR-515-5p、CSPG4的表达及临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织中微小RNA-515-5p(miR-515-5p)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的表达及临床意义。方法选取84例EOC患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-515-5p、CSPG4mRNA表达。采用Pearson相关系数分析EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达的相关性。根据EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达均值分为高、低表达者,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达EOC患者的生存曲线。结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中miR-515-5p表达低,CSPG4 mRNA表达高(P均<0.05)。经TargetScan数据库预测miR-515-5p与CSPG4的3’-非翻译区210~216处存在结合位点,Pearson相关系数分析显示,EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达呈负相关(r=-0.710,P<0.05)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,84例EOC患者3年累积生存率为57.14%(48/84)。K-M生存曲线分析显示,miR-515-5p高表达者累积生存率高于低表达者,CSPG4 mRNA高表达者累积生存率低于低表达者(P均<0.05)。结论EOC组织中miR-515-5p低表达和CSPG4 mRNA高表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关;检测二者表达有助于判断EOC患者病情和预后评估。

miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响

探究miR-515-5p对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。方法 选取我院2021年5月到2023年5月收治的卵巢癌患者,总计40例,取其癌灶组织及癌旁组织。通过对miR-515-5p的靶基因进行检测,观察其在细胞系A2780细胞增殖和转移情况。结果 miR-515-5p经qRT-PCR检测验证发现,A2780与正常细胞系的IOSE-80的表达明显更低(P<0.05);经过CCK-8测试结果表示,miR-515-5p可抑制卵巢癌细胞增殖活性,且在72h时间点对比mimics NC组体现差异性(P<0.05);miR-515-5p对癌细胞迁移和转移方面,miR-515-5p mimics组可对癌细胞迁移转移能力明显抑制,对比mimics NC组有差异(P<0.05),且miR-515-5p inbitor组和inhibitor NC组对比,其具备较强的促迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-515-5p可有效抑制卵巢癌细胞的增殖转移,具备一定的抑癌效果。

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力(OD值),TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组miR-515-5p相对表达量均高于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组CBX4 mRNA相对表达量及培养48、72 h的OD值均低于miR-515-5p NC组,且miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组降低更明显(P均<0.05)。培养12 h,各组细胞OD值比较P>0.05。培养24 h,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组OD值均低于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。与miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组比较,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组细胞凋亡率均升高,CBX4蛋白相对表达量及侵袭细胞数均降低(P均<0.05)。结论过表达miR-515-5p能够抑制视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50的增殖、侵袭能力并促进其凋亡,其机制可能与抑制CBX4表达有关。

毛兰素通过调控lncRNA LINC01354/miR-515-5p对前列腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭的影响

目的 考察毛兰素是否通过LINC01354/miR-515-5p影响前列腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭。方法 采用试剂盒检测不同剂量毛兰素(20、40、80 nmol/L)作用于前列腺癌DU145细胞后的葡萄糖消耗、乳酸水平,MTT法测定细胞增殖,Transwell评估细胞迁移和侵袭,Western blot法检测细胞cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-qPCR法检测LINC01354、miR-515-5p表达。LncBase Predicted预测与荧光素酶报告基因检测分析LINC01354对miR-515-5p的靶向调控。在DU145细胞中转染si-LINC01354,或转染pcDNA-LINC01354并使用80 nmol/L毛兰素处理,并对细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭进行检测。结果 不同剂量毛兰素降低DU145细胞的葡萄糖消耗,乳酸水平,迁移和侵袭细胞数,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白和LINC01354 mRNA表达(P<0.05),提高细胞增殖抑制率、p21蛋白和miR-515-5p mRNA表达,且呈剂量依赖性(P<0.05)。LINC01354能靶向调控miR-515-5p的表达。抑制LINC01354表达可增加miR-515-5p mRNA表达、细胞增殖抑制率和p21蛋白表达(P<0.05),减少葡萄糖消耗,乳酸水平,迁移和侵袭细胞数,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。LINC01354过表达后,毛兰素抑制DU145细胞葡萄糖消耗,乳酸水平,细胞增殖、迁移、侵袭,cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的作用,以及促进p21蛋白表达的作用均被逆转。结论 毛兰素可能通过下调LINC01354表达升高miR-515-5p表达,进而抑制前列腺癌细胞的糖酵解、增殖、迁移和侵袭。

右美托咪定通过调控LncRNA HOXA11-AS/miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨右美托咪定(Dex)通过调控长链非编码RNA HOXA11-AS(LncRNA HOXA11-AS)/微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法采用不同浓度(25、50、100、200 ng/ml)的Dex处理膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测Dex对T24细胞凋亡率的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Dex对HOXA11-AS、miR-515-5p表达水平的影响。利用脂质体方法分别将si-HOXA11-AS及阴性对照(si-NC)、miR-515-5p模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)转染至T24细胞,通过MTT、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡能力变化。双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS与miR-515-5p的靶向关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(C-caspase)-3表达量。结果Dex可明显提高细胞凋亡率及C-caspase-3、miR-515-5p的表达水平(P<0.05),明显降低HOXA11-AS的表达水平(P<0.05);抑制HOXA11-AS表达与miR-515-5p过表达后,细胞存活率及CyclinD1的表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及C-caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明HOXA11-AS可靶向结合miR-515-5p;HOXA11-AS过表达可逆转Dex对T24细胞增殖和凋亡的影响;miR-515-5p过表达可逆转HOXA11-AS过表达对Dex处理的T24细胞增殖和凋亡的影响。结论Dex通过下调HOXA11-AS及上调miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

LncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p调控胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA ZFPM2反义RNA1(ZFPM2-AS1)对miR-515-5p的靶向调控作用以及对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic和3种胆管癌细胞(RBE、HuCCT1、TFK1)中ZFPM2-AS1和miR-515-5p的表达。将ZFPM2-AS小干扰RNA(si-ZFPM2-AS1)、miR-515-5p模拟物(miR-515-5p mimics)分别转染胆管癌细胞RBE,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、Transwell实验检测干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9蛋白的表达变化。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证ZFPM2-AS1对miR-515-5p的调控作用。将si-ZFPM2-AS1与miR-515-5p抑制物(anti-miR-515-5p)共转染RBE细胞,采用上述方法检测RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。Western blot检测干扰ZFPM2-AS1表达对β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达的影响。结果与HIBEpic细胞比较,3种胆管癌细胞ZFPM2-AS1的表达显著升高,miR-515-5p的表达显著降低(P<0.05)。干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p并负调控其表达。干扰ZFPM2-AS1可抑制β-catenin蛋白表达(P<0.05)。抑制miR-515-5p表达可减弱干扰ZFPM2-AS1对RBE细胞增殖、迁移、侵袭以及β-catenin蛋白的影响(P<0.05)。结论干扰ZFPM2-AS1通过靶向miR-515-5p可抑制胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的:探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用q PCR法检测食管癌组织和细胞中miR-515-5p的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,q PCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果:miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低(均P<0.01)。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),而敲低miR-515-5p表达则可增强食管癌TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。q PCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 m RNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

circ-LRP6调控miR-515-5p/IL-6通路影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白6(circ-LRP6)对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法选取44例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,培养正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780,采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织和细胞中circ-LRP6、微小RNA-515-5p(miR-515-5p)的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与circ-LRP6之间的靶向关系;将circ-LRP6干扰表达载体、miR-515-5p过表达载体、miR-515-5p抑制表达载体与circ-LRP6干扰表达载体转染至卵巢癌细胞SKOV3中,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、白细胞介素6受体(IL-6R)蛋白的表达;CCK-8法检测SKOV3细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果与癌旁组织及HUM-CELL-0088细胞相比,卵巢癌组织和SKOV3、OVCAR3、A2780细胞系中circ-LRP6表达水平显著升高,miR-515-5p表达水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实circ-LRP6可靶向负调控miR-515-5p的表达。低表达circ-LRP6或过表达miR-515-5p均可抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,降低细胞活性,抑制细胞迁移和侵袭(P<0.05)。同时,抑制circ-LRP6和miR-515-5p表达可上调SKOV3细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,增强细胞活性,促进细胞迁移和侵袭(P<0.05)。结论抑制circ-LRP6表达可能通过上调miR-515-5p抑制IL-6,从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-515-5p通过靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的MiR-515-5p是一种抑癌基因,其在结直肠癌(CRC)中的作用及机制有待于研究。文章探讨miR-515-5p过表达对CRCHT-29细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用qRT-PCR法检测81例CRC癌组织和癌旁组织以及结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(SW620、HCT116、HT-29和SW480)中miR-515-5p的表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-515-5p和三结构域蛋白31(TRIM31)的靶向关系。将miR-515-5p mimic及其阴性对照(mimic NC)和TRIM31过表达质粒载体(pcDNA3.1-TRIM31)及其空白载体(Vector)转染至HT-29细胞中,分为blank组(未转染质粒)、mimic NC+Vector组(共转染mimic NC和Vector质粒)、miR-515-5p mimic组(转染miR-515-5p mimic)、pcDNA3.1-TRIM31组(转染过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31)和mimic+pcDNA3.1-TRIM31组(共转染miR-515-5p mimic和过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31);qRT-PCR检测细胞中miR-515-5p与TRIM31 mRNA表达水平;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞中TRIM31、PI3K(p110α)、p-AKT(Ser473)和AKT等蛋白表达水平。结果CRC癌组织及细胞系中miR-515-5p的表达水平显著低于CRC癌旁组织和结肠上皮细胞(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,TRIM31是miR-515-5p靶基因。过表达miR-515-5p可明显上调HT-29细胞中miR-515-5p表达水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,并下调TRIM31 mRNA及TRIM31、PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。而过表达TRIM31可显著上调HT-29细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达,促进细胞增殖、迁移和侵袭,并上调PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01)。平板克隆形成实验结果显示,与blank组细胞克隆数[(126.67±8.08)个/孔]或mimic NC+Vector组细胞克隆数[(123.33±6.51)个/孔]比较,mimic组HT-29细胞克隆数[(50.00±11.53)个/孔]明显降低(P<0.01),而pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(197.33±20.21)个/孔]明显增加(P<0.01);与mimic组比较,mimic+pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(152.33±7.64)个/孔]又明显增加(P<0.01)。此外,过表达TRIM31可显著逆转miR-515-5p mimic对HT-29细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.01)。结论miR-515-5p在人CRC癌组织和细胞系中低表达,过表达miR-515-5p可抑制HT-29细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路有关。

miR-515-5p通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭

目的旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制。方法通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况。将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系。采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况。荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系。结果miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调。过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力。结论miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭。

circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的恶性生物学行为及其分子机制

目的:探讨circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭及其分子机制。方法:收集2020年4月至2020年6月间在苏州市中西医结合医院手术切除的41例膀胱癌组织及其癌旁组织,采用qPCR法检测circFBXL5、miR-515-5p的表达;双荧光素酶报告实验验证circFBXL5与miR-515-5p之间的靶向关系,体外培养人膀胱癌T24细胞,实验分为si-NC组、si-circFBXL5组、anti-miR-NC+si-circFBXL5组和si-circFBXL5+anti-miR-515-5p组;MTT法、细胞克隆形成实验、FCM、Transwell实验和WB法分别检测转染后T24细胞的增殖、细胞克隆形成、迁移、侵袭和凋亡及BAX、Bcl-2蛋白水平。结果:膀胱癌组织中circFBXL5呈高表达,miR-515-5p呈低表达(均P<0.05);circFBXL5靶向且负向调控miR-515-5p的表达;敲减circFBXL5后T24细胞的增殖抑制率、凋亡率和BAX蛋白水平均显著增高(均P<0.05),细胞克隆形成数和迁移、侵袭细胞数均显著减少(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);同时敲减circFBXL5和miR-515-5p可部分逆转敲减circFBXL5对T24细胞增殖的抑制作用。结论:circFBXL5通过调控miR-515-5p表达影响膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭,circFBXL5和miR-515-5p可能膀胱癌治疗的潜在分子靶标。

MiR-515-5p通过调控硫酸软骨素蛋白聚糖4表达对卵巢癌A2780细胞增殖和转移的影响及其机制

目的探讨miR-515-5p对硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的靶向调控作用,以及对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。方法通过生物信息学工具预测miR-515-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blotting法检测65例卵巢癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-515-5p和CSPG4的表达。将A2780细胞分为miR-NC组、miR-515-5p组、si-NC组、si-CSPG4组、miR-515-5p+pcDNA组和miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组。MTT法检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-515-5p对CSPG4基因的调控作用。结果生物信息学分析显示,CSPG4是miR-515-5p的潜在靶基因之一。与癌旁组织相比,卵巢癌组织miR-515-5p的表达较低,CSPG4的表达较高(P<0.05)。与miR-NC组、miR-515-5p组相比,A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低,P21蛋白的表达较高,细胞活力较低,细胞迁移和侵袭数较少(P<0.05)。与si-NC组相比,si-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低,P21蛋白的表达较高,细胞活力较低,细胞迁移和侵袭数较少(P<0.05)。与miR-515-5p+pcDNA组相比,miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较高,P21蛋白的表达较低,细胞活力较高,细胞迁移和侵袭数较多(P<0.05)。MiR-515-5p靶向并负性调控CSPG4表达。结论MiR-515-5p通过靶向CSPG4可抑制卵巢癌细胞A2780增殖和转移。

miR-515-5p靶向Toll样受体4调控髓样分化因子88/NF-κB通路抑制骨关节炎软骨细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的探究miR-515-5p抑制骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡、缓解炎症反应的分子机制。方法体外培养人软骨细胞系C28/I2,使用10 ng/mL IL-1β处理细胞24 h构建体外OA模型;另外,分别采用miR mimics、mimics阴性对照(negative control,NC)、过表达(over expression,oe)-NC和oe-Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)转染C28/I2细胞后,使用10 ng/mL IL-1β处理各组细胞24 h构建OA模型。采用细胞计数试剂盒8和EdU检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma 2 protion,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-Caspase-3)、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)、p65及磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR检测miR-515-5p、TLR4mRNA表达水平,ELISA检测细胞上清液中促炎因子前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、TNF-α、IL-6的水平。通过BiBiServ2数据库预测miR-515-5p和TLR4之间的潜在结合位点,并采用双荧光素酶报告实验验证miR-515-5p和TLR4的靶向关系。结果采用IL-1β处理C28/I2细胞后,miR-515-5p、Bcl-2蛋白的表达及细胞增殖能力均显著降低,Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达水平、细胞上清液中促炎因子(PGE2、TNF-α、IL-6)水平及细胞凋亡率均显著增加;此外,S期和G2期细胞比例显著降低,G1期细胞比例显著增加,提示IL-1β处理后细胞周期受到阻滞。而转染miR mimics后,细胞中miR-515-5p表达水平显著上调,部分逆转了IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡,缓解了OA软骨细胞的周期阻滞和炎症反应。采用IL-1β处理C28/I2细胞后,TLR4的mRNA和蛋白水平均显著升高;过表达miR-515-5p后,靶向抑制了TLR4的表达并且阻断了MyD88/NF-κB通路的激活。而过表达TLR4可部分逆转miR mimics对IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡及炎症的改善作用。结论miR-515-5p靶向负调控TLR4的表达,抑制了MyD88/NF-κB通路激活以及OA软骨细胞凋亡,并有效缓解了细胞炎症反应。

老年慢性阻塞性肺疾病患者不同时期血清lncRNA MIAT和miR-515-5p的表达水平及临床意义

目的探究老年慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者不同时期血清长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(long noncoding RNA myocardial infarction associated transcript,lncRNA MIAT)、微小RNA-515-5p(microRNA-515-5p,miR-515-5p)的表达水平及临床意义。方法选取2021年4月—2023年6月在淮北市人民医院就诊的老年慢阻肺急性加重期患者90例作为慢阻肺急性加重组,老年慢阻肺稳定期患者88例作为慢阻肺稳定组,以及体检健康老年人90例作为对照组。检测所有受试者患者白细胞计数(white blood cell count,WBC)和血清lncRNA MIAT和miR-515-5p表达水平,慢阻肺患者血气分析及肺功能指标[氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、第1秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(forced expiratory volume in the first second/forced vital capacity,FEV_(1)/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)as a percentage of predicted value,FEV_(1)%pred)]。分析老年慢阻肺急性加重期患者血清lncRNA MIAT、miR-515-5p与吸烟、WBC、血气分析及肺功能指标间的相关性,老年慢阻肺患者急性加重发生的影响因素,以及血清lncRNA MIAT、miR-515-5p预测老年慢阻肺患者急性加重发生的价值。结果对照组、慢阻肺稳定组、慢阻肺急性加重组吸烟比例、WBC、血清lncRNA MIAT表达水平依次升高,血清miR-515-5p表达水平依次降低(P<0.05)。与慢阻肺稳定组比较,慢阻肺急性加重组PaCO_(2)显著升高,PaO_(2)/FiO_(2)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%pred显著降低(P<0.05)。老年慢阻肺急性加重期患者血清lncRNA MIAT与吸烟、WBC、PaCO_(2)呈正相关(P<0.05),与PaO_(2)/FiO_(2)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%pred、miR-515-5p呈负相关(P<0.05);血清miR-515-5p与吸烟、WBC、PaCO_(2)呈负相关(P<0.05),与PaO_(2)/FiO_(2)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%pred呈正相关(P<0.05)。吸烟、WBC、PaCO_(2)、lncRNA MIAT是影响老年慢阻肺患者急性加重发生的危险因素,PaO_(2)/FiO_(2)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%pred、miR-515-5p是影响老年慢阻肺患者急性加重发生的保护因素(P<0.05)。血清lncRNA MIAT、miR-515-5p以及两者联合预测老年慢阻肺患者急性加重发生的受试者操作特征曲线下面积(area under ROC curve,AUC)分别为0.823、0.862、0.919,高于血清lncRNA MIAT、miR-515-5p各自单独预测的AUC(P<0.05)。结论老年慢阻肺患者血清lncRNA MIAT呈高表达,血清miR-515-5p呈低表达,且急性加重期患者二者变化更明显。二者与急性加重期患者血气分析指标及肺功能相关,对预测老年慢阻肺患者急性加重发生有较高价值。

miR-515-5p靶向ITLN2对子宫内膜基质细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-515-5p(miR-515-5p)是否可靶向内凝集素2(lectin 2,ITLN2)影响子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)的增殖、迁移和侵袭。方法收集2020年12月至2021年12月期间在济宁医学院附属医院生殖医学科就诊治疗的24例EMT患者的在位内膜和异位内膜组织及18例行腹腔镜手术的非EMT患者的正常内膜组织。RT-qPCR检测内膜组织miR-515-5p、ITLN2 mRNA相对表达量;Western blotting法检测内膜组织中ITLN2蛋白表达量。原代分离、培养EMT患者的ESCs,利用Lipofectamine 2000试剂转染ESCs,并将其分为空白组、miR-515-5p抑制剂组、miR-515-5p抑制剂阴性对照(negative control,NC)组,CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕愈合和Transwell实验分别评估细胞迁移、侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-515-5p和ITLN2的靶向关系;RT-qPCR技术检测各组细胞miR-515-5p、ITLN2 mRNA相对表达量;Western blotting技术检测ITLN2、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)蛋白相对表达量。结果EMT患者在位和异位子宫内膜组织miR-515-5p相对表达量显著高于正常子宫内膜组织(均P<0.001),ITLN2 mRNA相对表达量显著低于正常子宫内膜组织,异位子宫内膜组织ITLN2 mRNA相对表达量显著低于在位子宫内膜组织(均P<0.001),EMT患者异位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于EMT在位和正常子宫内膜组织(均P<0.001),EMT患者在位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于正常子宫内膜组织(P<0.001)。miR-515-5p抑制剂组细胞存活率[(54.71±2.78)%]、划痕愈合率[(38.31±3.78)%]及侵袭数[(286.67±25.15)个]、miR-515-5p相对表达量、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量均显著低于空白组[(100.00±0.00)%,P<0.001;(84.08±5.14)%,P<0.001;(515.67±22.19)个,P<0.001;P<0.001;P=0.012;P=0.010;P<0.001],ITLN2 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于空白组(P<0.001;P<0.001)。经生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测,ITLN2为miR-515-5p的潜在靶基因。结论降低miR-515-5p水平可抑制EMT患者ESCs增殖、迁移和侵袭,这可能与靶向提高ITLN2表达进而降低炎症因子水平有关。