miR-143和miR-520d-5p在胃癌组织中的异常表达

目的应用MicroRNAs(miRNAs)芯片技术筛选胃癌组织中差异表达的miRNAs,研究与胃癌相关的miRNAs。方法从3对手术切除的胃和相配对的正常胃组织中提取总RNA,miRNA芯片检测miRNA表达情况,然后在47例配对的胃癌和正常胃组织中,用Real-time RT-PCR(Taqman)对部分差异表达miRNA进行验证。结果芯片结果显示:与配对的正常胃组织相比,有62个miRNAs在胃癌中异常表达,其中42个miRNA高表达,20个miRNA低表达。用Real-time RT-PCR(Taqman)验证显示:miR-143在胃癌组织中表达显著降低(P=0.002 9);miR-520d-5p在胃癌组织中表达显著提高(P=0.032)。结论miR-143和miR-520d-5p可能参与了胃癌的发生过程。

过表达miR-520d通过抑制自噬蛋白Beclin1逆转三阴性乳腺癌细胞化疗耐药性

目的:探讨miR-520d通过调控自噬逆转三阴性乳腺癌(TNBC)细胞化疗耐药的作用及分子机制。方法:以人TNBC细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468为亲本株细胞构建多西他赛(Doc)耐药细胞株MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-468/Doc,实验分为空白组(亲本细胞)、对照组(耐药细胞组)和过表达miR-520d组。用qPCR检测空白组和耐药细胞组细胞中miR-520d的表达水平,MTT实验检测过表达miR-520d的耐药细胞对Doc的敏感性,MDC染色后荧光显微镜观察细胞中自噬小体的发生情况、共聚焦显微镜观察过表达miR-520d的耐药细胞中自噬相关蛋白LC3阳性的细胞数。用荧光素酶报告基因实验验证miR-520d与Beclin1的靶向关系。用WB实验检测过表达miR-520对细胞中自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅰ、LC3Ⅱ表达的影响。结果:TNBC耐药细胞中miR-520d的表达水平明显低于空白组细胞(P<0.01)。过表达miR-520d的耐药细胞对Doc的敏感性显著提高(P<0.01)、细胞的自噬活性明显降低(P<0.01)。荧光素酶报告基因实验证明Beclin1是miR-520d可能的靶分子。Doc与miR-520dmimics联合使用可降低TNBC耐药细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和自噬蛋白Beclin1的表达水平(均P<0.05)。结论:通过调控miR-520d水平可能改变自噬蛋白Beclin1表达,从而逆转TNBC细胞Doc化疗耐药性。

血清miR-520d-3p和miR-627检测在创伤性脑损伤诊断及预后监测中的临床价值

目的检测创伤性脑损伤(TBI)患者血清miR-520d-3p和miR-627的表达水平,探讨其作为TBI诊断及预后判断指标的价值。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测67例轻度创伤性脑损伤(mTBI)患者(mTBI组)、67例重度创伤性脑损伤(sTBI)患者(sTBI组)及67例健康对照者(健康对照组)血清miR-520d-3p和miR-627表达水平。采用格拉斯哥预后等级评分(GOS)进行预后评价,将GOS≤3分者纳入预后差组,GOS>3分者纳入预后好组。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-520d-3p和miR-627对TBI的诊断效能。结果与健康对照组相比,mTBI组和sTBI组患者血清miR-520d-3p和miR-627表达水平明显升高(P<0.05),且sTBI组患者血清miR-520d-3p和miR-627表达水平明显高于mTBI组(P<0.05);TBI患者治疗后,miR-520d-3p和miR-627表达水平有所下降,差异有统计学意义(P<0.05);预后差组的miR-520d-3p和miR-627表达水平明显高于预后好组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-520d-3p和miR-627区分mTBI患者与健康对照者的曲线下面积(AUC)分别为0.866(95%CI:0.800~0.933,P<0.05)和0.832(95%CI:0.763~0.903,P<0.05),区分sTBI患者与健康对照者的AUC分别为0.913(95%CI:0.813~0.965,P<0.05)和0.890(95%CI:0.839~0.946,P<0.05),区分mTBI患者与sTBI患者的AUC分别为0.622(95%CI:0.527~0.718,P<0.05)和0.651(95%CI:0.558~0.743,P<0.05)。结论血清miR-520d-3p和miR-627对诊断TBI具有一定的临床应用价值,有望成为新的潜在标志物。

苍耳亭通过调控LOXL1-AS1miR-520d-5p轴对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨苍耳亭对白血病细胞的抗癌作用及其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)和微小RNA(miR)-520d-5p表达有关。方法 按转染细胞分组:对照组、苍耳亭6μmol/L组、苍耳亭20μmol/L组、苍耳亭60μmol/L组、si-NC组、si-LOXL1-AS1组、苍耳亭+pcDNA-LOXL1-AS1组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。实时定量PCR(RT-qPCR)检测LOXL1-AS1和miR-520d-5p表达;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达。分别转染LOXL1-AS1小干扰RNA、LOXL1-AS1过表达载体至K-562细胞中,通过CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分析干扰LOXL1-AS1表达或过表达LOXL1-AS1联合苍耳亭对K-562细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。双荧光素酶报告实验分析LOXL1-AS1和miR-520d-5p相互作用。结果 苍耳亭处理后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达、LOXL1-AS1表达显著降低(均P<0.05)。干扰LOXL1-AS1表达后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。过表达LOXL1-AS1明显减弱苍耳亭处理对K-562细胞细胞增殖、凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。LOXL1-AS1与miR-520d-5p直接结合。结论 苍耳亭可抑制白血病细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴有关。

复方斑蝥通过miR-520d/Beclin1信号轴逆转三阴乳腺癌化疗耐药的机制研究

目的探讨复方斑蝥注射液(Compound Cantharis Injection,CCI)通过miR-520d/Beclin1信号轴逆转三阴乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)化疗耐药的机制研究。方法构建人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,MDA-MB-468的耐药模型MDA-MB-231/Doc,MDA-MB-468/Doc。MTT法检测亲本株和耐药株细胞活性;Western blot检测自噬相关蛋白表达;miRNA芯片检测复方斑蝥处理前后的TNBC耐药细胞;实时定量PCR(RealtimePCR)检验miRNA表达以验证芯片检测结果;荧光素酶实验验证miRNA和BECN1/Beclin1的结合位点。结果MTT结果显示,CCI能够显著提高TNBC耐药细胞株化疗敏感性。WB结果表明,CCI能够浓度依赖性的抑制TNBC耐药细胞的自噬水平;miRNA芯片检测发现复方斑蝥能够显著上调miR-520d水平,RealtimePCR验证了这一结果。荧光素酶实验表明miR-520d通过作用于Beclin1/BECN13′UTR区域抑制其表达;最后,WB检测证明miR-520d mimics能够明显抑制TNBC耐药细胞株中Beclin1/BECN1的蛋白表达,MTT法结果显示miR-520d mimics与TNBC耐药性细胞对多西他赛的敏感性成正相关。结论CCI通过调控miR-520d/BECN1/Beclin1信号轴逆转三阴性乳腺癌化疗耐药。

MSC-AS1对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)MSC-AS1在宫颈癌细胞生物行为中的作用和机制。方法qRT-PCR和Western blotting检测MSC-AS1、miR-520d-3p和三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在宫颈癌组织和SiHa细胞中的表达。SiHa细胞分为si-NC组、si-MSC-AS1组、vector组、pc3.1-MSC-AS1组、miR-NC组、miR-520d-3p组、si-NC+anti-miR-NC组、si-MSC-AS1+anti-miR-NC组、si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3p组。流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞凋亡、迁移和侵袭水平的变化。软件预测结合双荧光素酶活性实验分析MSC-AS1、miR-520d-3p、ATAD2之间的靶向调控关系。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织MSC-AS1、ATAD2表达上调,miR-520d-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、miR-520d-3p表达水平在沉默MSC-AS1后si-MSC-AS1组高于si-NC组,过表达MSC-AS1后pc3.1-MSC-AS1组低于vector组;沉默MSC-AS1同时抑制miR-520d-3p后si-NC+anti-miR-NC组<si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3组<si-MSC-AS1+anti-miR-NC组(P<0.05)。MSC-AS1靶向miR-520d-3p,且miR-520d-3p靶向ATAD2,miR-520d-3p组SiHa细胞凋亡率高于miR-NC组(P<0.05)。SiHa细胞ATAD2蛋白的表达、迁移和侵袭细胞数si-MSC-AS1组低于si-NC组,pc3.1-MSC-AS1组高于vector组,miR-520d-3p组低于miR-NC组,si-NC+anti-miR-NC组>si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3p组>si-MSC-AS1+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论沉默MSC-AS1可能通过miR-520d-3p靶向ATAD2,抑制宫颈癌细胞的生长和转移,并促进凋亡。

CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究

目的:探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。方法:采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织(P<0.001),基因CTHRC1的表达趋势相反(P<0.001),且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织(P=0.003)。结论:miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。