乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果BC组织中lncRNA CASC2表达水平低于癌旁正常组织,miR-532-3p表达水平高于癌旁正常组织(t/P=38.239/<0.001,49.406/<0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例lncRNA CASC2低表达组高于高表达组,而miR-532-3p低表达组低于高表达组(lncRNA CASC2:χ^(2)/P=17.361/<0.001、17.052/<0.001、14.694/<0.001、13.173/<0.001;miR-532-3p:χ^(2)/P=10.733/0.001、9.813/0.002、10.134/0.001、7.444/0.006);127例BC患者术后随访5年,生存99例(生存组),死亡28例(死亡组),肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例及miR-532-3p表达水平死亡组高于生存组,而lncRNA CASC2表达水平死亡组低于生存组[χ^(2)(t)/P=5.211/0.022、27.149/<0.001、27.990/<0.001、4.590/0.032、19.155/<0.001、10.818/<0.001];BC组织中lncRNA CASC2与miR-532-3p表达呈负相关(r/P=-0.561/<0.001);lncRNA CASC2高表达组BC患者术后5年内总生存率为89.23%(58/65),高于lncRNA CASC2低表达组66.13%(41/62)(χ^(2)/P=9.854/0.002);miR-532-3p高表达组BC患者术后5年内总生存率为65.57%(40/61),低于miR-532-3p低表达组89.39%(59/66)(χ^(2)/P=10.466/0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、lncRNA CASC2低表达、miR-532-3p高表达均是影响BC患者术后5年内生存的独立危险因素[HR(95%CI)=2.255(1.192~4.263)、2.143(1.252~3.666)、3.089(1.386~6.887)、2.219(1.223~4.026)、2.606(1.174~5.788)、2.855(1.592~5.120)];lncRNA CASC2、miR-532-3p及二者联合预测BC患者术后5年内生存的AUC分别为0.840、0.852、0.908,二者联合预测的AUC大于lncRNA CASC2、miR-532-3p各自单独预测的AUC(Z/P=2.246/0.025、2.033/0.042)。结论BC组织中lncRNA CASC2表达下调,miR-532-3p表达上调,且术后5年内死亡的BC患者较存活患者变化更显著,二者表达与临床病理特征相关,对预测BC患者术后5年内生存情况价值较高。

褪黑素通过调控miR-532-3p/β-catenin通路增强结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 探讨褪黑素(melatonin,MLT)增强结直肠癌(colorectal cancer,CRC)对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的作用及其分子机制。方法 采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1.0或2.0 mmol/L)的MLT和不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)的5-FU处理CRC细胞株SW480和HCT116 48 h。根据对细胞活性的抑制率,选择MLT浓度1 mmol/L进行后续实验。将SW480和HCT116细胞分为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、MLT组和5-FU组,分别用DMSO、1 mmol/L MLT和15μmol/L 5-FU处理48 h。转染50 nmol/L miR-532-3p模拟物、miR-532-3p抑制物及其阴性对照于SW480和HCT116细胞,分别为miR-532-3p模拟物组、miR-532-3p抑制物组、模拟物对照组和抑制物对照组。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞活性。采用transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-532-3p的表达。采用Western blot法检测β-catenin蛋白的表达。结果 1 mmol/L MLT处理细胞48 h抑制SW480和HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的能力,并促进细胞凋亡(均P<0.01)。采用不同浓度的(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)5-FU处理,与单独5-FU处理比较,1 mmol/L MLT与5-FU共同处理的SW480和HCT116细胞的细胞活性被抑制程度均增强(均P<0.05)。根据SW480和HCT116细胞中5-FU的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,选择15μmol/L 5-FU进行后续实验。RT-qPCR检测显示,miR-532-3p在SW480和HCT116细胞中低表达。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p的表达均升高(均P<0.01)。经1 mmol/L MLT和不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)的5-FU共同处理48 h后,miR-532-3p抑制物组SW480和HCT116细胞较抑制物对照组的细胞活性被抑制程度均下降(均P<0.05),5-FU的IC50值也均升高(均P<0.01)。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p抑制物组较抑制物对照组细胞凋亡率均降低(均P<0.01)。Western blot结果显示,与DMSO组比较,MLT组SW480和HCT116细胞中β-catenin的表达均降低(均P<0.01)。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p抑制物组较抑制物对照组β-catenin的表达均升高(均P<0.01)。结论 MLT通过调控miR-532-3p/β-catenin通路增强CRC细胞对5-FU的敏感性,抑制肿瘤生长。

螺旋断层调强放疗联合顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌的效果及对miR-532-3p、MAPK表达的影响

目的:探讨与分析螺旋断层调强放疗联合顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC的效果及对微小RNA-532-3p(micro RNA-532-3p,miR-532-3p)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)表达的影响。方法:选择2017年5月—2022年4月于天水市第二人民医院诊治的60例中晚期NSCLC患者作为研究对象,根据1∶1随机数表法分组原则将患者分为断层组30例与对照组30例。对照组给予顺铂化疗治疗,断层组在对照组治疗基础上给予螺旋断层调强放疗,比较两组疗效、毒副反应及治疗前后外周血CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞相对含量、血液miR-532-3p、MAPK相对表达水平。结果:断层组总有效率为90.0%,高于对照组的60.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。断层组治疗期间胃肠道反应、血液学毒性、肝肾功能损害、神经系统毒性等毒副反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组外周血CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞相对含量高于治疗前,且断层组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血液miR-532-3p、MAPK相对表达水平低于治疗前,且断层组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:螺旋断层调强放疗联合顺铂治疗中晚期NSCLC患者能提高临床效果,不会增加毒副反应发生率,还可提高外周血CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞相对含量,降低血液miR-532-3p、MAPK相对表达水平。

敲减lncRNA RP11-626G11.3通过调控miR-532-3p抑制人肾癌细胞系的增殖和迁移

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-626G11.3在肾癌组织和细胞系中的表达,探究敲减RP11-626G11.3对肾癌细胞生物学行为的影响。方法用GEPIA数据库分析RP11-626G11.3在肾癌组织和癌旁组织中的表达情况,用TCGA数据库分析RP11-626G11.3表达水平与肾癌患者生存期的关系。QPCR检测RP11-626G11.3在多种肾癌细胞系中的表达。选择RP11-626G11.3表达最高的肾癌细胞系,分别转染对照质粒(si-NC组)和RP11-626G11.3沉默质粒(si-RP11-626G11.3组)。MTT法和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移。通过生物信息学方法找到与RP11-626G11.3结合的微小RNA(miRNA),并用双荧光素酶报告实验进行验证。QPCR检测两组细胞中miR-532-3p的表达。Western blot检测两组细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,肾癌组织中RP11-626G11.3表达量上调(P<0.01)。与RP11-626G11.3高表达的患者相比,RP11-626G11.3低表达的患者生存期较长(P<0.01)。与永生化肾小管上皮细胞相比,肾癌细胞系中RP11-626G11.3表达量均上调(P<0.01),OS-RC-2细胞中RP11-626G11.3的表达量最高(P<0.01)。与si-NC组相比,si-RP11-626G11.3组OS-RC-2细胞活力明显降低(P<0.05),细胞迁移率明显降低(P<0.01)。RP11-626G11.3靶向结合miR-532-3p(P<0.01)。相比si-NC组,si-RP11-626G11.3组OS-RC-2细胞中miR-532-3p表达明显上调(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Axin2、C-myc、cyclin D1、MMP7表达水平下降。结论RP11-626G11.3在肾癌组织和细胞系中表达量升高,敲减RP11-626G11.3通过调控miR-532-3p表达抑制肾癌细胞系的增殖和迁移。

LINC00491靶向调控miR-532-3p对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨LINC00491对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:qRT-PCR检测LINC00491、miR-532-3p的表达量;Pearson法分析前列腺癌组织中LINC00491与miR-532-3p表达量的相关性;体外培养人前列腺癌细胞22RV1,采用脂质体转染法将si-NC、si-LINC00491、miR-NC、miR-532-3p mimics、si-LINC00491与anti-miR-NC(共转染)、si-LINC00491与anti-miR-532-3p(共转染)分别转染至22RV1细胞;CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell检测细胞的迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验与qRT-PCR验证LINC00491与miR-532-3p的靶向调控作用;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果:前列腺癌组织中LINC00491的表达量高于癌旁组织(P<0.05),而miR-532-3p的表达量低于癌旁组织(P<0.05);LINC00491与miR-532-3p呈负相关(r=-0.858 2,P<0.001);分别转染si-LINC00491与miR-532-3p mimics后细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高(P<0.05);LINC00491可靶向调节miR-532-3p表达;共转染si-LINC00491与anti-miR-532-3p可恢复si-LINC00491对细胞生物学行为的作用。结论:干扰LINC00491表达可通过上调miR-532-3p表达抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

circ_0013958靶向miR-532-3p调控结直肠癌细胞增殖迁移侵袭

目的探讨circ_0013958靶向miR-532-3p在结直肠癌进展中的作用。方法RT-qPCR分析circ_0013958和miR-532-3p在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达。用脂质体转染法分别将si-NC、si-circ_0013958、pcDNA、pcDNA-circ_0013958、miR-NC、mi R-532-3p mimics、si-circ_0013958+anti-miR-NC、si-circ_0013958+anti-miR-532-3p转染SW620细胞,通过CCK-8法和平板克隆实验评估细胞活力和克隆能力,通过划痕愈合和Transwell侵袭实验估细胞迁移和侵袭能力。利用Circular RNA Interactome网站预测circ_0013958与miR-532-3p的关系,并通过双荧光素酶报告基因法进一步验证。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中circ_0013958表达上调,miR-532-3p表达下调。转染si-circ_0013958可上调miR-532-3p表达,降低细胞活力和划痕愈合率,并减少克隆形成数和侵袭力。转染pcDNA-circ_0013958可下调miR-532-3p表达;转染miR-532-3p mimics可降低细胞活力和划痕愈合率,并减少克隆形成数和侵袭力。circ_0013958和miR-532-3p直接结合。转染anti-miR-532-3p可显著减弱转染si-circ_0013958对SW620细胞活力、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数的影响。结论干扰circ_0013958通过促进miR-532-3p表达来抑制结直肠癌细胞增殖、迁移侵袭,从而抑制结直肠癌进展。

miR-532-3p靶向SERPINE1调控细胞外基质受体互作通路抑制结肠腺癌细胞增殖和迁移

目的本研究旨在明确miR-532-3p/SERPINE1在结肠腺癌中的具体调控机制。方法利用TCGA数据库筛选差异表达的mRNA,随后通过mirDIP、miRWalk数据库分析并确定上游调控基因miRNA。GSEA数据库进行富集通路的分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验、划痕愈合、Transwell、蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)研究SERPINE1及上游基因对结肠腺癌增殖、迁移、侵袭的调控机制。结果SERPINE1在结肠腺癌细胞和组织中显著高表达,而miR-532-3p呈显著低表达。SERPINE1与结肠腺癌患者的预后不良有关,能促进结肠腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。SERPINE1显著富集在细胞外基质受体互作通路。miR-532-3p靶向负调控SERPINE1的表达,回复实验表明miR-532-3p/SERPINE1调控细胞外基质受体互作通路影响结肠腺癌细胞的恶性进展。结论miR-532-3p作为SERPINE1的上游调控基因,通过调控细胞外基质受体互作通路抑制结肠腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响。方法回顾性收集2017年6月至2018年6月于同济大学附属第一妇婴保健院收治并行手术治疗的子宫内膜癌患者的手术标本59例纳入研究,另选取同期20例行子宫肌瘤切除术患者的正常子宫内膜组织作为对照。RT-qPCR检测miR-210-3p和miR-532-3p的相对表达量,分析miR-210-3p和miR-532-3p表达与临床病理和预后的关系,并采用CoX回归模型分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果子宫内膜癌组织中miR-210-3p的水平为1.93±0.37,明显高于正常子宫内膜组织(0.49±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织中miR-532-3p的水平为0.64±0.16,明显低于正常子宫内膜组织(1.42±0.39),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中miR-210-3p和miR-532-3p表达与FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结有无转移、分化程度有关(P<0.001);miR-210-3p低表达患者5年的生存率为77.78%,明显高于miR-210-3p高表达患者(52.17%),差异有统计学意义(P<0.05);miR-532-3p低表达患者5年的生存率为53.57%,明显低于miR-532-3p高表达患者(80.65%),差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、分化程度、组织学类型、miR-210-3p和miR-532-3p是影响子宫内膜癌患者预后独立的危险因素(P<0.05)。结论miR-210-3p在子宫内膜癌组织中高表达,miR-532-3p在子宫内膜癌组织中低表达,miR-210-3p和miR-532-3p的表达与子宫内膜癌患者的预后具有一定的相关性,可为预后判断提供一定的参考。

miR-532-3p、MAPK在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性分析

目的 探究微小RNA-532-3p (miR-532-3p)、有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在非小细胞肺癌患者靶向治疗耐药中的表达及其相关性。方法 选取2013年6月至2016年1月榆林市第一医院肿瘤诊疗中心收治的表皮生长因子受体(EGFR)基因突变非小细胞肺癌EGFR酪氨酸澈酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药患者30例作为耐药组,非耐药患者32例为非耐药组。血清中miR-532-3p、MAPK水平分别采用实时荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法检测;χ^(2)检验分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析血清miR-532-3p、MAPK表达水平与5年生存期的关系;采用Cox回归模型分析影响非小细胞肺癌患者预后不良的因素。结果 耐药组患者的血清miR-532-3p水平为2.09±0.24,明显高于非耐药组的1.05±0.16,MAPK水平为(1.04±0.57) mg/L,明显低于非耐药组的(7.63±3.28) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);化疗3个周期后,miR-532-3p低表达患者治疗有效率为62.50%,明显高于miR-532-3p高表达患者的33.33%,而MAPK低表达患者的治疗有效率为25.81%,明显低于MAPK高表达患者的70.97%,差异均有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,血清miR-532-3p低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为84.4%,明显高于血清miR-532-3p高表达者的50.0%,差异有统计学意义(P<0.05);血清MAPK低表达非小细胞肺癌患者5年累积生存率为61.3%,略低于血清MAPK高表达者的74.2%,差异无统计学意义(P>0.05);经多因素Cox回归模型分析结果显示,miR-532-3p高表达、MAPK低表达是非小细胞肺癌患者发生靶向治疗耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论 miR-532-3p、MAPK与非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药有关,检测两者表达可能为非小细胞肺癌的治疗提供新思路。

LncRNA MIAT靶向调节miR-532-3p对心力衰竭小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(lncRNA-MIAT)靶向调节miR-532-3p对心力衰竭(HF)小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:建立HF小鼠模型,将小鼠分为Control组、Sham组、HF组、sh-NC组、sh-MIAT组、sh-MIAT+anti-NC组、sh-MIAT+anti-miR-532-3p组,每组10只,除Control组、Sham组、HF组尾静脉注射生理盐水外,其余各组尾静脉注射相应的质粒。心脏彩超检查小鼠心脏功能,HE染色和Masson染色观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织LncRNA MIAT、miR-532-3p表达;Western blot检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)表达;双荧光素酶报告基因检测LncRNA MIAT与miR-532-3p的相互关系。结果:造模后HF组小鼠左心室射血分数(LVEF)<60%,提示造模成功;与Sham组比较,HF组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤加重,心肌纤维化及心肌细胞凋亡增加,LncRNA MIAT、Caspase-3、collagenⅠ和collagenⅢ蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-MIAT组小鼠心功能改善,心肌组织损伤减轻、心肌纤维化及心肌细胞凋亡减少,LncRNA MIAT、Caspase-3、collagenⅠ和collagenⅢ蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与sh-MIAT组比较,sh-MIAT+anti-miR-532-3p组小鼠心功能降低,心肌组织病理损伤加重,心肌纤维化及心肌细胞凋亡率增加,Caspase-3、collagenⅠ和collagenⅢ蛋白表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示,LncRNA MIAT靶向负调控miR-532-3p表达。结论:HF小鼠心肌组织LncRNA MIAT表达水平升高,抑制LncRNA MIAT表达可通过靶向上调miR-532-3p改善HF引起的小鼠心肌损伤与心肌细胞凋亡。

lncRNA MALAT1靶向miR-532-3p对脑出血继发脑损伤大鼠脑微血管内皮细胞模型凋亡和氧化损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺癌转移相关转录本1(MALAT1)靶向miR-532-3p对脑出血(ICH)继发脑损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(RCMECs)凋亡和氧化损伤的影响。方法采用双重荧光素酶报告基因实验和实时定量PCR(RT-qPCR)确定MALAT1和miR-532-3p的靶向调控关系。首先将细胞分为对照组(正常培养的RCMECs)与模型(H_(2)O_(2))组(RCMECs氧化损伤模型),采用RT-qPCR分析并对比两组MALAT1和miR-532-3p的表达量。随后将细胞分为H_(2)O_(2)-si-NC组、H_(2)O_(2)-si-MALAT1组、H_(2)O_(2)-miR-mimics-NC组、H_(2)O_(2)-miR-532-3p mimics组、H_(2)O_(2)-si-MALAT1+miR-inhibitor-NC组、H_(2)O_(2)-si-MALAT1+miR-532-3p inhibitor组,分别转染si-NC、si-MALAT1、miR-mimics-NC、miR-532-3p mimics、共转染si-MALAT1与miR-inhibitor-NC、共转染si-MALAT1与miR-532-3p inhibitor后,构建RCMECs氧化损伤模型,然后采用流式细胞术分析RCMECs凋亡情况,采用试剂盒测定丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,采用蛋白质印迹法(Wes-tern blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl相关x蛋白(Bax)表达量,并比较组间差异。结果MALAT1可与miR-532-3p特异性结合并负调控miR-532-3p表达(P<0.05)。与对照组比较,H_(2)O_(2)组中MALAT1的表达量显著升高,miR-532-3p的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与H_(2)O_(2)-si-NC组比,H_(2)O_(2)-si-MALAT1组沉默MALAT1可显著减弱H_(2)O_(2)诱导的RCMECs凋亡,并降低MDA含量、升高SOD和CAT活性、降低Bax蛋白相对表达量、升高Bcl-2蛋白相对表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。与H_(2)O_(2)-miR-mimics-NC组比,H_(2)O_(2)-miR-532-3p mimics组过表达miR-532-3p可显著减弱H_(2)O_(2)诱导的RCMECs凋亡,并降低MDA含量、升高SOD和CAT活性、降低Bax蛋白相对表达量、升高Bcl-2蛋白相对表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。与H_(2)O_(2)-si-MALAT1+miR-inhibitor-NC组比,H_(2)O_(2)-si-MALAT1+miR-532-3p inhibitor组沉默MALAT1同时抑制miR-532-3p表达,可显著增加H_(2)O_(2)诱导的RCMECs凋亡,并升高MDA含量、降低SOD和CAT活性、升高Bax蛋白相对表达量、降低Bcl-2蛋白相对表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沉默MALAT1通过负调控miR-532-3p能够减弱H_(2)O_(2)诱导的RCMECs凋亡和氧化损伤。

lncRNA SNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的:探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。方法:收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞(SW480、SW620、HT-29和LoVo)及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。结果:SNHG10在结直肠癌组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.01),其表达水平与TNM分期和远处转移有关(均P<0.05);miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05或P<0.01),SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.225,P=0.048)。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调SNHG10或上调miR-532-3p的表达后,SW620细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低(均P<0.05)。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P<0.05)。结论:lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNA SNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。

lnc RNA MAFG-AS1调控miR-532-3p表达对肺癌A549细胞糖酵解的影响

目的:探讨lncRNA MAFG反义RNA1(MAFG-AS1)调控miR-532-3p表达对肺癌A549细胞糖酵解的影响。方法:用qPCR法检测人肺癌A549细胞和正常肺上皮细胞BEAS-2B中MAFG-AS1和miR-532-3p的表达水平。利用脂质体介导转染技术,分别构建MAFG-AS1表达下调和miR-532-3p过表达的A549细胞,用分光光度法检测细胞培养上清中葡萄糖消耗量与乳酸含量,qPCR和WB法分别检测细胞中M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)mRNA和蛋白的表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证MAFG-AS1与miR-532-3p的靶向关系,观察MAFG-AS1和miR-532-3p同时低表达对A549细胞葡萄糖及乳酸含量和PKM2、HK2表达的影响。结果:与BEAS-2B细胞比较,A549细胞中MAFG-AS1表达上调而miR-532-3p表达下调(均P<0.01)。下调MAFG-AS1或miR-532-3p过表达均可降低A549细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量,并抑制PKM2、HK2 mRNA和蛋白的表达(均P<0.01)。miR-532-3p可与MAFG-AS1靶向结合抑制野生型MAFG-AS1细胞的荧光素酶活性(P<0.01),下调MAFG-AS1可使A549细胞中miR-532-3p表达升高(P<0.01)。miR-532-3p低表达可逆转MAFG-AS1表达下调对细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量和PKM2、HK2表达的影响(均P<0.01)。结论:下调MAFG-AS可通过促进miR-532-3p表达而抑制肺癌A549细胞糖酵解。

circ_0072088通过调控miR-532-3p/WEE1轴促进甲状腺癌IHH4细胞的恶性生物学行为

目的:探讨circ_0072088对甲状腺癌IHH4细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制。方法:选取2015年4月至2019年3月于青海大学附属医院就诊的确诊为甲状腺癌后接受切除手术且术前未进行任何治疗的48例甲状腺癌患者的甲状腺癌组织及其对应癌旁组织。根据GEO数据集(GSE93522)分析鉴定甲状腺乳头状癌中差异表达的circRNA。用qPCR法检测circ_0072088在甲状腺癌组织和细胞中的表达水平。采用CCK-8法和Transwell法检测circ_0072088和miR-532-3p过表达对甲状腺癌IHH4细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证甲状腺癌细胞中circ_0072088与miR-532-3p、miR-532-3p和WEE1基因之间的关系。结果:circ_0072088在甲状腺癌组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.01)。circ_0072088过表达促进了甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01),而转染miR-532-3p模拟物能够减弱这种作用(P<0.05或P<0.01)。此外,机制研究表明,circ_0072088可以与miR-532-3p靶向结合,且WEE1是miR-532-3p的下游靶基因。结论:circ_0072088通过调控miR-532-3p/WEE1轴促进IHH4细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-532-3p对子宫内膜异位症基质细胞增殖、侵袭和AKT3表达的影响

目的探究子宫内膜异位症(EM)组织中miR-532-3p的表达及其对子宫内膜异位症基质细胞(ESCs)增殖、侵袭和AKT3表达的影响机制。方法选取2019年11月至2020年3月在廊坊市人民医院行腹腔镜及刮宫术的10例EM患者的异位子宫内膜组织和10例非EM患者的正常子宫内膜组织作为研究对象。从EM患者的异位子宫内膜组织中分离出ESCs,从非EM患者的正常子宫内膜组织中分离出正常子宫内膜间质细胞(NESCs),ESCs中分别转染miR-532-3p-mimic、miR-532-3p-inhibitor及对应的阴性对照进行分组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验、Transwell实验测定细胞的增殖、侵袭能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-532-3p、AKT3的相对表达水平;采用Western blot检测AKT3的表达;采用双荧光素酶报告基因检测miR-532-3p与AKT3的关系。结果qRT-PCR结果显示,与正常子宫内膜组织及NESCs相比,异位子宫内膜组织及ESCs中miR-532-3p表达下调(P<0.05)。转染miR-532-3p-mimic的ESCs中miR-532-3p表达明显上调,转染miR-532-3p-inhibitor的ESCs中miR-532-3p表达明显下调(P<0.05)。CCK-8及Transwell实验结果显示,转染miR-532-3p-mimic的ESCs增殖、侵袭能力明显减弱,转染miR-532-3p-inhibitor的ESCs增殖、侵袭能力明显增强(P<0.05)。Starbase网站及双荧光素酶实验发现,miR-532-3p与AKT3具有靶向关系,且miR-532-3p可调控AKT3的表达。结论EM组织中miR-532-3p表达下调,上调miR-532-3p的表达可抑制ESCs的增殖和侵袭,降低AKT3的表达。miR-532-3p可能通过靶向调控AKT3的表达抑制ESCs增殖和侵袭,从而抑制EM的发展。

MiR-532-3p抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖的机制研究

目的:研究miR-532-3p和脂蟾毒甙元(RES)通过调节Wnt/β-catenin信号对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞活性的作用机制。方法:收集2019年10月至2021年10月兰州市兰州大学第一医院DLBCL患者的癌组织样本及癌旁组织样本;将SU-DHL-4细胞分为mimics-NC组、miR-532-3pmimics组及对照组、脂蟾毒甙元组(RES组)。采用RT-qPCR法检测miR-532-3p的表达水平;Western blot检测β-catenin的蛋白含量;MTT法检测SUDHL-4细胞的增殖活性。结果:相比于癌旁淋巴组织,淋巴癌组织中的miR-532-3p表达明显降低(P<0.001);淋巴瘤细胞中的miR-532-3p的含量显著低于正常淋巴细胞(P<0.001)。过表达miR-532-3p后,SU-DHL-4细胞的增殖活性明显下降(P<0.01),而β-catenin的表达亦显著减少(P<0.05)。相比于对照组,RES抑制了SU-DHL-4细胞的增殖,同时降低了细胞中β-catenin的表达。结论:过表达miR-532-3p降低Wnt/β-catenin信号,并抑制淋巴瘤细胞的增殖;RES可通过抑制Wnt/β-catenin的表达,降低淋巴瘤细胞的增殖活性。

苦参碱调控circ_0013958/miR-532-3p轴对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨苦参碱调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法培养人卵巢癌细胞A2780,分别给予0.0、0.4、0.8、1.2 g/L苦参碱处理,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中circ_0013958和miR-532-3p表达,细胞转染pcDNA(+)空载体、pcDNA-circ_0013958、miRNA mimics、miR-532-3p mimics,利用平板克隆实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡率,双荧光素酶实验验证circ_0013958和miR-532-3p的靶向关系。结果circ_0013958在卵巢癌细胞中显著高表达,miR-532-3p在卵巢癌细胞中显著低表达(P<0.05);苦参碱处理能够显著下调卵巢癌A2780细胞中circ_0013958的表达,而显著上调miR-532-3p表达(P<0.05);苦参碱能够抑制A2780细胞克隆形成,阻止G1/G0期细胞进入S期,并促进细胞凋亡(P<0.05),而过表达circ_0013958能够逆转苦参碱对A2780细胞克隆、周期和凋亡的影响(P<0.05);A2780细胞中circ_0013958靶向负调控miR-532-3p的表达;过表达miR-532-3p逆转了过表达circ_0013958对苦参碱作用的影响(P<0.05)。结论苦参碱能够抑制卵巢癌A2780细胞增殖,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控细胞中circ_0013958/miR-532-3p轴表达有关。

miR-532-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响

目的了解miR-532-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响。方法回顾性选取2019年10月至2020年5月入上海东方肝胆外科医院行胃癌根治性/姑息性手术切除标本80例,每例标本对应肿瘤组织和癌旁组织。qRT-PCR检测组织中miR-532-3p的表达,分析miR-532-3p与临床病理的相关性,MTT检测胃癌细胞增殖,Transwell检测胃癌细胞侵袭,伤口愈合实验检测胃癌细胞迁移,双荧光素酶报告实验验证miR-532-3p是否存在直接靶向RAD51作用,蛋白质印迹法检测RAD51蛋白的表达。结果胃癌组织中miR-532-3p的相对表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃腺癌细胞系AGS、SGC7901、MKN28、MKN45、GC9811-P中miR-532-3p的相对表达显著低于人胃黏膜上皮细胞系GES,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-532-3p与性别、年龄无关(P>0.05),与肿瘤直径、分化程度、TNM分期具有相关性(P<0.05)。miR-532-3p mimic组胃癌SGC7901细胞侵袭和迁移能力明显低于miR-ctrl组,miR-532-3p inhibitor组胃癌SGC7901细胞侵袭和迁移能力显著高于miR-ctrl组和miR-532-3p mimic组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-532-3p显著下调了RAD51-WT报告基因的荧光素酶活性(P<0.05)。miR-532-3p mimic组中RAD51蛋白表达显著低于miR-ctrl组,miR-532-3p inhibitor组中RAD51蛋白表达明显高于miR-ctrl组和miR-532-3p mimic组,差异均有统计学意义(P<0.05)。RAD51组的细胞侵袭和迁移能力明显高于pc DNA3.1组,RAD51组的细胞侵袭和迁移能力显著低于miR-532-3p mimic组,miR-532-3p mimic+RAD51组的细胞侵袭和迁移能力明显低于RAD51组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-532-3p在胃癌组织和胃癌细胞中低表达,且过表达能够抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能通过降低RAD51靶基因实现的,进而在肿瘤中发挥抑癌的作用。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

lncRNA SLC16A1-AS1调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA溶质载体家族16成员1反义RNA 1(lncRNA SLC16A1-AS1)调节微小RNA-532-3p(miR-532-3p)/肌动蛋白结合蛋白2(TAGLN2)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞中lncRNA SLC16A1-AS1表达水平,筛选最佳干预细胞系;通过荧光原位杂交实验、下拉实验、双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SLC16A1-AS1、TAGLN2与miR-532-3p的靶向调控关系。①将U251细胞分为小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-SLC16A1-AS1组、si-SLC16A1-AS1+NC inhibitor组、si-SLC16A1-AS1+miR-532-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-532-3p mimics组、miR-532-3p mimics+pcDNA组、miR-532-3p mimics+TAGLN2组:检测U251细胞的增殖、迁移和侵袭变化;Western blot检测TAGLN2、E-钙黏附蛋白、波形蛋白表达水平。②小鼠体内肿瘤形成实验:验证lncRNA SLC16A1-AS1对胶质瘤生长的影响。结果lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平升高(P<0.05);U251细胞FISH实验、下拉实验、双荧光素酶基因实验证实lncRNA SLC16A1-AS1,TAGLN2与miR-532-3p存在靶向调控关系;抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p可显著抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(P<0.05);抑制miR-532-3p表达或过表达TAGLN2可逆转抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p对U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用(P<0.05)。小鼠体内实验显示,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可显著抑制移植瘤的生长(P<0.05)。结论lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平上调,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可通过调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路,进而抑制胶质瘤的恶性进展。