miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡

目的探究miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡的机制。方法纳入肝细胞癌(HCC)患者42例,实时荧光定量PCR检测肝癌组织、癌旁组织、人正常肝细胞(LO2、QSG-7701)和人肝癌细胞系(HepG2、Huh-7、Li-7、SK-Hep-1)中COL11A1 mRNA和miR-580-3p表达水平。过表达和敲低miR-580-3p后,CCK8法检测肝癌细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞的凋亡水平和细胞周期。免疫印迹分析肝癌关键通路Akt/PI3K在miR-580-3p中的作用。结果与癌旁组织比较,肝癌组织COL11A1 mRNA表达升高,miR-580-3p表达降低;与人正常肝细胞系比较,人肝癌细胞系miR-580-3p表达降低、COL11A1 mRNA表达升高(P<0.05)。COL11A1mRNA与miR-580-3p表达呈负相关(P<0.05)。miR-580-3p过表达后,人肝癌细胞的增殖水平、COL11A1 mRNA降低,凋亡率升高;miR-580-3p敲低后上述趋势反之,细胞周期停滞在G1/S期。人肝癌细胞凋亡率COL11A1过表达后降低,敲低后升高。p-Akt、p-PI3K表达在敲低COL11A1或过表达miR-580-3p后降低,过表达COL11A1或敲低miR-580-3p后升高。结论肝癌细胞和肝癌组织miR-580-3p表达水平降低,miR-580-3p/COL11A1轴可能通过调控PI3K/Akt通路影响肝癌细胞凋亡。

miR-580对乳腺癌细胞系中Twist1的调节作用

目的:探讨miR-580在MCF-10A细胞系中对于Twistl的调节。方法:本实验利用生物信息学方法预测Twistl的靶miRNA是miR-580。首先,采用qPCR法检测在MCF-10A系列细胞系中Twist1及miR-580的表达。然后,在MCF-10A细胞系中分别转染miR-580类似物和miR-580抑制物后,利用RT-PCR、Western blot、t检验分析Twistl的表达及细胞迁移能力的变化。最后利用荧光素酶实验验证miR-580通过结合在Twistl的3'UTR调节其表达。结果:1)在MCF-10A细胞系中Twist1与miR-580的表达呈负相关;2)在MCF-10A细胞系中转染miR-580类似物后,Twist1的表达下调;在MCF-10A细胞系中转染miR-580抑制物后Twistl的表达上调;3)在MCF-10A细胞系中引人miR-580类似物后细胞迁移能力降低;4)miR-580直接结合在Twistl的3'UTR。结论:miRNA-580在MCF-10A细胞系中通过结合在Twistl的3'UTR负向调节Twist1的表达从而克制细胞的迁移。