LncRNA H19和miR-625-5p在消化性溃疡合并幽门螺杆菌感染患儿血清中的表达及意义

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)H19和微小RNA-625-5p(miR-625-5p)在消化性溃疡(PU)合并幽门螺杆菌(HP)感染患儿血清中的表达水平及意义。方法选取2021年2月至2023年2月在泉州市儿童医院治疗的160例PU患儿,其中90例患儿合并HP感染(阳性组),70例未合并HP感染(阴性组),另收集同期160例体检健康儿童为健康人对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组LncRNA H19和miR-625-5p的相对表达水平;Pearson法分析PU合并HP感染患儿LncRNA H19和miR-625-5p的相关性;Logistic回归分析LncRNA H19、miR-625-5p与PU患儿HP感染的关联;ROC曲线分析LncRNA H19和miR-625-5p表达对PU患儿HP感染的诊断价值。结果与健康人对照组相比,HP阴性组、阳性组PU患儿血清LncRNA H19水平依次显著升高(P<0.05),miR-625-5p水平依次显著降低(P<0.05);与HP感染Ⅰ型相比,HP感染Ⅱ型PU患儿血清LncRNA H19水平显著降低(P<0.05),miR-625-5p水平显著升高(P<0.05);LncRNA H19与miR-625-5p间存在结合位点,且PU合并HP感染患儿血清LncRNA H19与miR-625-5p水平呈显著负相关(r=-0.536,P<0.05)。Logistic回归分析发现,LncRNA H19是影响PU患儿HP感染的危险因素(P<0.05),miR-625-5p是PU患儿HP感染的保护因素(P<0.05);LncRNA H19、miR-625-5p诊断PU患儿HP感染的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.870和0.895,二者联合诊断的AUC ROC为0.935,优于其各自单独诊断(Z二者联合-LncRNA H19=1.991,P=0.023;Z二者联合-miR-625-5P=1.707,P=0.044)。结论PU合并HP感染患儿血清LncRNA H19水平升高,miR-625-5p水平降低,二者对PU合并HP感染具有一定的诊断价值。

癌相关成纤维细胞来源的外泌体miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌的外泌体(exos)miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法选取2021年5月至12月于衡水市人民医院接受手术的卵巢癌患者的癌组织和邻近的非癌组织(5对)。从卵巢癌组织和相邻的正常组织中分离出CAFs和正常成纤维细胞(NFs)。采用Western blot评估NFs和CAFs中α-SMA和vimentin的蛋白表达,利用外泌体提取试剂盒从NFs和CAFs培养基中获得NFs-/CAFs-exos。通过透射电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot评估NFs-/CAFs-exos的形状、粒径以及表面marker表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测CFAs、CAFs-exos和SKOV3中miR-625-3p和癌细胞侵袭抑制因子(SCAI)的表达。Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验确定miR-625-3p和SCAI的相互作用。最后,通过功能挽救实验确定SCAI对SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果Western blot结果显示,α-SMA和vimentin在NFs和CFAs中阳性表达。TEM观察下,NFs-/CAFs-exos均呈杯状形态,粒径大约100 nm,且CD63、HSP70、CD81在NFs-/CAFs-exos中阳性表达。与NFs相比,CAFs中α-SMA高表达(P<0.05)。与NFs-exo相比,CAFs-exo能够上调SKOV3细胞中miR-625-3p表达并且在功能上促进细胞迁移和侵袭(P<0.05)。然而,抑制CAFs-exos miR-625-3p表达能够显著降低SKOV3细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。报告基因显示,miR-625-3p能够直接靶向SCAI mRNA的3′-UTR区。挽救实验显示,过表达SCAI可有效逆转CAFs-exo miR-625-3p对卵巢癌细胞迁移能力的影响。结论CAF-exos miR-625-3p能够通过抑制SCAI表达促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

miR-625-3p基因沉默对结直肠癌小鼠的抑瘤作用及对肠道菌群的影响

目的基于16s rRNA测序分析微小RNA-625-3p(miR-625-3p)基因沉默对结直肠癌小鼠的肿瘤抑制作用及对肠道菌群的影响。方法制备、获取miR-625-3p基因沉默(Si)和沉默阴性对照(SiNe)外泌体。BALB/C小鼠腹腔注射SW620细胞(5×10^(6)),随机分为模型(A)组,奥沙利铂(Oxaliplatin,B)组,Oxaliplatin+exo-miR-625-3p-Si(C)组和Oxaliplatin+exo-miR-625-3p-SiNe(D)组,每组3只。观察miR-625-3p基因沉默对结直肠癌小鼠肿瘤体积、肿瘤细胞凋亡、肠道内容物菌群丰度及多样性的影响。结果成功分离出miR-625-3p-Si和miR-625-3p-SiNe外泌体并鉴定。外泌体干预后,与D组比较,C组miR-625-3p表达降低(t=-4.057,P<0.05),肿瘤体积减小(t=-2.331,P=0.08),凋亡增加(t=2.945,P<0.05);OTUs数量降低;门水平上,Bacteroidetes丰度升高(t=3.590,P<0.05),Firmicutes丰度降低(t=-3.608,P<0.05);筛选出C、D两组间存在显著差异菌种29种。结论MiR-625-3p基因沉默能抑制结直肠癌的发展,促进结直肠癌细胞凋亡,其机制可能与改善小鼠肠道微生态环境有关。

miR-625通过负向调控Resistin的表达抑制非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为及其机制

目的:探究miR-625和Resistin对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移及裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的机制。方法:qPCR实验检测80例NSCLC及癌旁组织(标本收集自2018年3月至2019年10月于新疆维吾尔自治区人民医院手术治疗的NSCLC患者)和4种细胞系中miR-625与Resistin的表达,生物信息学预测两者的靶向关系并用双荧光素酶基因报告实验进行验证;通过脂质体转染技术在NSCLC细胞中过表达或抑制miR-625及Resistin表达,实验分为miR-625 mimic组、miR-625 inhibitor组、si-Resisitin组、miR-625 inhibitor+si-Resisitin组和NC组,利用CCK-8、Transwell及划痕实验检测miR-625与Resistin对NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移的影响,Western blotting实验检测两者对NSCLC细胞中EMT相关的PI3K/AKT/Snail通路蛋白表达的影响,裸鼠成瘤实验观察两者对A549细胞移植瘤生长的影响。结果:miR-625在NSCLC组织和4种细胞系中呈低表达、Resistin呈高表达(均P<0.01),两者表达水平呈负相关(r=-0.7183,P<0.01),且Resistin的表达与NSCLC分化程度、临床分期及淋巴结转移相关。Resistin是miR-625的靶基因。在NSCLC细胞系A549和H226的增殖、侵袭、迁移能力及裸鼠移植瘤的生长方面,与Blank组和NC组相比,miR-625 mimic组与si-Resistin组能力均显著降低(均P<0.05),miR-625 inhibitor组显著提高(均P<0.05);miR-625 inhibitor+si-Resistin组显著低于miR-625 inhibitor组(均P<0.05);NC组与miR-625 inhibitor+si-Resistin组之间无显著差异(均P>0.05);p-AKT、p-PI3K、Snail、Twist1、Vimentin等蛋白表达变化也有相同的趋势(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达则发生相反的改变(P<0.05)。结论:miR-625在NSCLC组织和细胞中均呈低表达,其能负向调控Resistin表达从而抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移及裸鼠移植瘤生长,其机制可能与PI3K/AKT/Snail信号通路有关。

circ_0016760调控miR-625对乳腺癌细胞生物行为的影响

目的探讨circ_0016760对乳腺癌细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR法检测乳腺癌组织与癌旁组织中circ_0016760、miR-625的表达量;体外培养人乳腺癌细胞T-47D,si-NC、si-circ_0016760、miR-NC、miR-625 mimics、anti-miR-NC、anti-miR-625、si-circ_0016760与anti-miR-625分别转染至T-47D细胞;双荧光素酶报告实验检测circ_0016760和miR-625的靶向关系;MTT法与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验与Transwell小室实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测cleaved-caspase3蛋白表达量。结果乳腺癌组织中circ_0016760的表达量高于癌旁组织(P<0.05),miR-625的表达量低于癌旁组织(P<0.05);circ_0016760可靶向调节miR-625的表达;转染si-circ_0016760或转染miR-625 mimics后细胞活力和划痕愈合率降低(P<0.05),集落形成数和迁移细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平升高(P<0.05);转染anti-miR-625后细胞活力和划痕愈合率升高(P<0.05),集落形成数和迁移细胞数增多(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平降低(P<0.05);共转染si-circ_0016760与anti-miR-625能够逆转转染si-circ_0016760对T-47D细胞增殖、集落形成、迁移及凋亡的作用。结论干扰circ_0016760表达可通过上调miR-625表达而抑制乳腺癌细胞增殖、集落形成、迁移及促进细胞凋亡。

miR-625-5p通过靶向调控PRKACA促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭

背景与目的:肺腺癌是非小细胞肺癌的一种亚型,虽在诊断和治疗方面已经取得了很大进展,但晚期肺腺癌临床预后和总生存仍较差。近年来多项研究表明,miRNA在多种癌症中发挥作用,并在细胞增殖、转移、炎症等生物学过程中发挥重要作用。探究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制,旨在为后续肺腺癌的诊断和治疗提供新的思路。方法:利用GEO数据库查找肺腺癌组织中差异表达的miRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-625-5p在各肺腺癌细胞系中的表达情况,采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验研究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;通过生物信息学预测miR-625-5p靶向结合的关键基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测对蛋白激酶cAMP激活催化亚基α(protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha,PRKACA)在肺腺癌细胞中的表达情况进行验证,采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot分析miR-625-5p与PRKACA之间的靶向关系。Western blot检测共转染敲低PRKACA质粒和敲低miR-625-5p质粒后各组细胞PRKACA的表达情况。采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验检测共转染以后各组肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的改变。结果:miR-625-5p在肺腺癌组织(P<0.0001)和各组肺腺癌细胞(P<0.0001)中表达上调。EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验结果显示,miR-625-5p能够促进肺腺癌细胞的增殖(P=0.0023)和侵袭(P=0.0003)能力。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-625-5p能与PRKACA靶向结合(P=0.0008)。在肺腺癌细胞中,miR-625-5p与PRKACA的表达呈负相关(P<0.0001)。miR-625-5p下调能够逆转敲低PRKACA对A549细胞增殖(P=0.0119)和侵袭(P=0.0015)能力的促进作用。结论:miR-625-5p在肺腺癌组织和细胞中表达上调,并通过负向调控PRKACA促进肺腺癌细胞增殖和侵袭。

黄芩素上调miR-625-5p表达 干预支气管哮喘小鼠的机制研究

目的:探讨黄芩素调控miR-625-5p表达对支气管哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及炎性因子的影响。方法:培养小鼠原代ASMCs细胞,作为对照组,重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖,作为PDGF组;分别采用10、20、40μmol/L的黄芩素处理PDGF诱导ASMCs细胞。将miR-NC、miR-625-5p转染至PDGF诱导的ASMCs细胞,作为PDGF+miR-NC、PDGF+miR-625-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-625-5p转染至PDGF诱导ASMCs细胞,以40μmol/L的黄芩素处理,作为PDGF+anti-miR-NC+40μmol/L组、PDGF+anti-miR-625-5p+40μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附实验检测细胞IL-4、IL-6、IL-8水平;实时荧光定量PCR检测细胞miR-625-5p表达水平。结果:与对照组比较,PDGF组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05);与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,PDGF组细胞miR-625-5p表达显著降低(P<0.05);与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞miR-625-5p表达显著升高(均P<0.05)。与PDGF+miR-NC组比较,PDGF+miR-625-5p组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与PDGF+anti-miR-NC+40μmol/L组比较,PDGF+anti-miR-625-5p+40μmol/L组细胞miR-625-5p表达水平显著降低,细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-625-5p表达抑制支气管哮喘小鼠的细胞增殖率、迁移率以及炎性因子水平。

miR-625-3p在卵巢浆液性癌中的表达及意义

目的观察miR-625-3p在卵巢浆液性癌中的表达,分析其与炎性细胞因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、间质巨噬细胞的数量及增殖指数的关系。方法选取67例卵巢浆液性癌患者作为观察组,60例卵巢浆液性囊腺瘤患者作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测miR-625-3p的表达,应用免疫组化方法检测石蜡包埋组织中MCP-1和巨噬细胞标记物CD163的表达,应用Western blotting法检测新鲜标本中MCP-1和CD163的表达。结果2组比较,miR-625-3p表达、MCP-1阳性率、巨噬细胞数量、MCP-1和CD163半定量表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组中,miR-625-3p的表达量、MCP-1和CD163的半定量表达在不同肿瘤最大径、病变级别、脉管癌栓、淋巴结转移、TNM分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中miR-625-3p的表达与增殖指数、MCP-1、CD163的表达呈正相关。生存分析显示,miR-625-3p的表达与预后有关。结论卵巢浆液性癌中miR-625-3p高表达,对促进病变的形成有一定作用,miR-625-3p可能对调控细胞增殖、巨噬细胞形成及炎性细胞因子生成有一定影响。术后检测miR-625-3p的表达,可能对判断预后有一定价值。

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P<0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P<0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P<0.05)。miR-625与HMGA13'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P<0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P<0.05)。结论miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。

circ_0000285靶向miR-625对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨环状RNA 0000285(circ_0000285)对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响,并分析其机制是否与调控miR-625表达有关。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2构建缺氧/复氧(H/R)细胞损伤模型。将H9C2细胞随机分为对照(Con)组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-circ_0000285组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-625组、H/R+si-circ_0000285+anti-miR-NC组、H/R+si-circ_0000285+anti-miR-625组。实时定量PCR检测circ_0000285和miR-625表达量。流式细胞术检测H9C2细胞凋亡。免疫印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达量。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。双荧光素酶实验确定circ_0000285对miR-625的靶向作用。结果H/R处理显著减低H9C2细胞中miR-625、Bcl-2表达量以及SOD和GSH-Px活性(P<0.05),增加circ_0000285和Bax表达量、MDA含量和细胞凋亡凋亡率(P<0.05)。抑制circ_0000285表达或过表达miR-625显著增加H/R处理H9C2细胞中Bcl-2表达量以及SOD和GSH-Px活性(P<0.05),降低Bax表达量、MDA含量和细胞凋亡凋亡率(P<0.05)。circ_0000285与miR-625直接结合,且circ_0000285负性调控miR-625表达(P<0.05)。抑制miR-625表达可逆转抑制circ_0000285对H/R处理H9C2细胞氧化损伤和凋亡的保护作用(P<0.05)。结论干扰circ_0000285通过负调控miR-625表达能够减弱H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤。

hsa_circ_0005692吸附miR-625-5p调节CXXC4的表达而抑制胃癌的转移

目的探讨hsa吸附miR-625-5p调节CXXC4的表达而抑制胃癌的转移及其作用机制。方法培养胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞系BGC-803、SNU-1、NCI-N87、HS-746T,qRT-PCR检测hsa_circ_0005692、miR-625-5p和CXXC4 mRNA的表达;双荧光素酶实验验证hsa_circ_0005692和miR-625-5p结合,miR-625-5p靶向调控CXXC4;RIP验证hsa_circ_0005692和AGO2结合;RNA pull down结果证明hsa_circ_0005692和miR-625-5p结合;MTT检测细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;细胞流式术检测细胞凋亡率;Western blot检测CXXC4和迁移侵袭相关因子N-cadherin和MMP-9蛋白的表达。结果在胃癌细胞中,hsa_circ_0005692和CXXC4呈低表达,而miR-625-5p呈高表达。双荧光素酶实验验证miR-625-5p能与hsa_circ_0005692和CXXC4结合,RIP实验验证AGO2蛋白与hsa_circ_0005692结合,RNA pull down实验证明hsa_circ_0005692与miR-625-5p特异性结合。过表达hsa_circ_0005692或沉默miR-625-5p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡,迁移侵袭相关因子N-cadherin和MMP9表达下降,而过表达miR-625-5p或沉默CXXC4可逆转hsa_circ_0005692过表达对胃癌细胞生物学活性的抑制作用。结论hsa_circ_0005692可能通过吸附miR-625-5p,从而上调CXXC4基因,进而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。

miR-625在胃癌患者血清中的表达及与胃蛋白酶原水平的相关性

目的:探究胃癌患者血清中miR-625与胃蛋白酶原(PG)表达水平相关性及其在胃癌进展中的意义。方法:选取本院2016年2月至2019年2月收治的胃部疾病患者246例,按不同的疾病种类分为胃癌组84例,慢性萎缩性胃炎组73例,慢性非萎缩性胃炎组89例。另选取同期体检健康者89例为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-625表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ(PGR)水平;采用Pearson法进行相关性分析,logistic回归模型进行多因素分析,ROC曲线进行诊断价值分析。结果:胃癌组、慢性萎缩性胃炎组、慢性非萎缩性胃炎组、健康对照组血清miR-625、PGⅠ及PGR水平均依次升高(均P<0.05)。miR-625、PGⅠ、PGR水平升高与肿瘤分化、TNM分期、淋巴结转移相关(均P<0.05)。胃癌患者血清中miR-625与PGⅠ、PGR水平呈正相关关系(P<0.05)。有淋巴结转移、PGⅠ低水平、PGR低水平及miR-625低水平是影响胃癌发生独立危险因素(均P<0.05),miR-625、PGⅠ、PGR三者联合检测敏感度比三者单独检测时高。结论:胃癌患者血清中miR-625表达水平与PG水平关系密切,miR-625及PG低水平是胃癌发生的独立危险因素。血清miR-625、PGⅠ及PGR联合检测对胃癌有一定诊断价值。

lncRNA PVT1靶向调控miR-625-5p对高糖诱导心肌细胞损伤的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)靶向调控miR-625-5p对高糖诱导心肌细胞损伤的影响及其机制。方法 将心肌H9c2细胞分为NG组、HG组分别用5.5、30.0 mmol/L葡萄糖干预,再将30.0 mmol/L葡萄糖干预的心肌H9c2细胞分别转染si-NC、si-PVT1、miR-NC、miR-625-5p、si-PVT1+anti-miR-NC、si-PVT1+anti-miR-625-5p,记为HG+si-NC组、HG+si-PVT1组、HG+miR-NC组、HG+miR-625-5p组、HG+si-PVT1+anti-miR-NC组、HG+si-PVT1+anti-miR-625-5p组。qRT-PCR检测PVT1、miR-625-5p表达量;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Cleaved-caspase3、Bax蛋白表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;双荧光素酶报告实验验证PVT1与miR-625-5p的靶向关系。结果 与NG组比较,HG组PVT1表达量、凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平升高,miR-625-5p表达量降低(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-PVT1组PVT1表达量、凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平降低,miR-625-5p表达量升高(P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-625-5p组miR-625-5p表达量升高,Cleaved-caspase3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平降低(P<0.05)。与HG+si-PVT1+anti-miR-NC组比较,HG+si-PVT1+anti-miR-625-5p组miR-625-5p表达量降低,凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白、Bax蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平升高(P<0.05)。结论 PVT1可通过靶向负调控miR-625-5p减轻高糖诱导的心肌细胞凋亡和炎症反应损伤。

组蛋白去乙酰化酶3通过调节miR-625/ASF1B轴抑制乳腺癌细胞焦亡

目的探讨组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)调节miR-625/组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(anti-silencing function 1B,ASF1B)轴对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞焦亡的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR法检测HDAC3、miR-625和ASF1B在乳腺癌(breast cancer,BC)组织和癌旁正常组织、BC细胞系(T47D、MCF7和MDA-MB-231)和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达水平。采用Western blot实验检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1和GSDMD的表达水平。ELISA法检测焦亡相关炎性因子IL-18和IL-1β的表达水平。ChIP实验用于测定HDAC3与miR-625的互作用关系。双荧光素酶报告实验验证miR-625和ASF1B的靶向关系。结果与癌旁正常组织和MCF-10A细胞比较,BC组织和细胞中的HDAC3和ASF1B表达升高,miR-625表达降低(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-HDAC3组细胞NLRP3、Caspase-1和GSDMD的蛋白表达水平升高,细胞培养上清液中IL-18和IL-1β的浓度升高(均P<0.05)。HDAC3通过结合miR-625的启动子区域抑制其表达(P<0.05)。与si-HDAC3+miR-NC组比较,si-HDAC3+miR-625 inhibitor组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β的表达减少(均P<0.05)。ASF1B被证实为miR-625的靶基因,si-HDAC3+pcDNA3.1-ASF1B组细胞中的焦亡相关因子水平显著低于si-HDAC3+pcDNA3.1-NC组。结论HDAC3通过抑制miR-625上调ASF1B的表达,进而抑制BC细胞焦亡。

MicroRNA-625在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨micro RNA-625(mi R-625)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其与临床参数的相关性,探究mi R-625对ESCC细胞系KYSE70迁移和增殖的影响。方法:实时荧光定量(real-time polymerase chain reaction,PCR)检测2014年2月至2015年4月郑州大学第一附属医院手术切除的86例ESCC及癌旁正常组织、ESCC细胞系和正常永生化食管上皮细胞系中mi R-625的表达,统计学分析其表达水平与ESCC患者临床病理参数及预后的相关性。Transwell实验检测mi R-625对细胞迁移能力的影响,细胞计数Kit-8(CCK-8)法检测mi R-625对细胞增殖的影响。结果:ESCC组织中mi R-625的表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05),ESCC细胞系中mi R-625表达水平与正常永生化食管上皮细胞相比,显著下调(P<0.05)。mi R-625的表达与肿瘤直径、分化程度及淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。随访数据提示mi R-625低表达组患者预后更差(P<0.05)。mi R-625能够抑制ESCC的迁移和增殖(P<0.05)。结论:mi R-625作为抑癌基因参与ESCC的发生发展,提示mi R-625可能作为一个ESCC治疗靶点和预后判断的分子标志物。

结直肠癌中microRNA-625表达的临床意义

目的:了解microRNA-625(miR-625)在结直肠癌组织中的表达情况及其与肿瘤临床病理参数及生存率的相关性.方法:应用定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测78对结直肠癌及癌旁正常组织以及结直肠癌细胞系中miR-625的表达,统计学分析其表达水平与肿瘤临床病理参数及生存率的关系.结果:结直肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miR-625表达水平分别为0.769±0.372和2.748±0.923,癌组织中表达显著下调,P=0.021.结直肠癌细胞系HCT、SW480中miR-625表达水平分别为0.634和0.941,表达水平与低转移潜能细胞系Caco-2中表达水平具显著差异,P<0.05.miR-625的低表达与晚期淋巴结转移,肝转移密切相关,P值均<0.05.随访数据提示miR-625低表达结直肠癌患者5年生存率较低.结论:结直肠癌组织及肿瘤细胞系中miR-625低表达,其低表达与结直肠癌侵袭转移密切相关,且提示较差的预后.

LncRNA PVT1调控呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞凋亡的机制

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人胚肺成纤维(HELF)细胞损伤的影响。方法本研究纳入于2020年1月一2023年5月在常州市第一人民医院确诊并住院治疗的RSV感染的哮喘患者38例和健康志愿者38名。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNAPVT1和miR-625-5p表达情况。将HELF细胞分为NC组(未感染)、RSV组(RSV感染)、si-NC+RSV组(转染si-NC+RSV感染)、si-lncRNAPVT1+RSV组(转染si-lncRNAPVT1+RSV感染)、miR-NC+RSV组(转染miR-NC+RSV感染)、miR-625-5p+RSV组(转染miR-625-5p模拟物+RSV感染)、anti-miR-NC+si-lncRNAPVT1+RSV组(共转染anti-miR-NC与si-lncRNAPVT1+RSV感染)、anti-miR-625-5p+si-lncRNA PVT1+RSV组(共转染anti-miR-625-5p与si-lncRNAPVT1+RSV感染)。采用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白表达,酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量。双荧光素酶报告实验分析lncRNAPVT1与miR-625-5p的靶向关系。结果RSV感染的患者血清和HELF细胞中lncRNAPVT1表达量比健康人血清或对照NC增加(均P<0.05)。RSV感染HELF增加Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6含量、凋亡率(均P<0.05);而这些影响在lncRNAPVT1沉默或miR-625-5p过表达后得到缓解(均P<0.05)。lncRNAPVT1靶向调控miR-625-5p的表达。anti-miR-625-5p+si-lncRNAPVT1+RSV组HELF细胞的Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6含量和细胞凋亡率均高于anti-miR-NC+si-lncRNAPVT1+RSV组(均P<0.05)。结论lncRNAPVT1低表达通过靶向miR-625-5p,抑制RSV感染的HELF细胞凋亡和炎症反应。