miR-645靶向STING调控结直肠癌转移作用机制的研究

目的本研究旨在探索miR-645能否通过靶向SING来影响结直肠癌转移,进一步探索其作用机制。方法采用细胞实验和动物模型来研究miR-645在结直肠癌中的功能。我们使用实时定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测了miR-645在结直肠癌细胞系和组织样本中的表达水平。结果发现miR-645在结直肠癌组织中高度表达,并与肿瘤的恶性特征相关。miR-645过表达显著促进了结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力,而miR-645沉默则具有相反的效果。进一步的研究揭示了miR-645通过抑制STING蛋白的表达来促进结直肠癌的转移过程。结论本研究结果表明,miR-645通过靶向STING调控结直肠癌转移。miR-645的上调与结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力增强相关,同时也与肿瘤的恶性程度有关。这一研究结果有助于深入了解结直肠癌转移的分子机制,并为miR-645作为潜在治疗靶点提供了依据。

miR-645靶向EDN3调控肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探究微小RNA-645(miR-645)是否通过靶向调控内皮素(EDN)3影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法qRT-PCR法与Western印迹法分别检测miR-645及EDN3 mRNA在不同肝癌细胞及正常肝细胞中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-645对EDN3转录活性的影响;噻唑蓝(MTT)实验检测miR-645与EDN3表达对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-645与EDN3表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白〔细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9〕表达水平。结果与正常肝细胞L02相比,不同肝癌HepG2、SMMC-7721、BEL-7402细胞中miR-645表达水平显著升高(P<0.05),而EDN3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示EDN3是miR-645的靶基因;干扰miR-645表达后,肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力明显降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显下调,p21蛋白表达明显上调(P<0.05);抑制EDN3表达后,肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力明显升高,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显上调,而p21蛋白表达下调(P<0.05)。结论miR-645可靶向调控EDN3表达进而促进肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

miR-645对骨肉瘤U2OS细胞生物学功能的影响

目的构建hsa-miR-645 inhibitor真核表达载体,观察miR-645在人骨肉瘤U2OS细胞中的表达及对细胞增殖、侵袭和对靶基因TNFR2表达的影响,并初步分析miR-645影响骨肉瘤细胞的可能机制。方法将hsa-miRNA-645 inhibitor基因克隆到真核表达载体pEZX AM02-U6 pur中,构建成pEZX AM02 645 inhibitor重组表达载体,将表达载体瞬时转染骨肉瘤U2OS细胞,RT-PCR法检测miR-645在转录水平的表达,MTT法检测细胞的增殖情况,Transwell法检测细胞的侵袭情况,生物信息学的方法预测miR-645的靶基因,并进行基因功能初步分析,化学发光法检测细胞中TNFR2表达的情况。结果真核表达载体pEZX AM02 645 inhibitor成功转染U2OS细胞,并经RT-PCR检测可有效表达,MTT法结果显示hsa-miR-645 inhibitor能明显抑制细胞增殖,Transwell法结果显示hsa-miR-645 inhibitor能降低细胞侵袭能力,报告基因检测结果显示TNFR2为miR-645在U2OS细胞中的作用靶点之一。结论构建了真核表达载体pEZX AM02 645 inhibitor,转染骨肉瘤U2OS细胞后能有效表达,并以TNFR2基因作为作用靶点。

miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。